Prctica 11

Permeabilidad de la membrana celular

Fenmenos de difusin, smosis y presin osmtica
1. Objetivos
- Comprobar el proceso de smosis en un osmmetro
- Comprobar la dilisis
- Determinar el efecto de factores ambientales sobre la permeabilidad de la membrana
celular.
- Observar el efecto de la concentracin del medio sobre las clulas.
- Calcular la presin osmtica en clulas vegetales mediante el mtodo plasmoltico.
2. Introduccin
2.1. embranas celulares ! factores "ue afectan la permeabilidad.
#oda clula posee un sistema complejo de membranas cu!a funcin general es el
intercambio de materiales entre la clula ! el medio acuoso e$terno o fluido e$tracelular
%&'C( ! entre los organelos ! el citoplasma de la clula. )as membranas de los organelos
sirven igualmente para separar en*imas ! metabolitos celulares.
'n una clula vegetal se encuentran+
a(
3. Materiales
,.1 -ara cada grupo de trabajo+
- -lantas de 'lodea. .emolac/as frescas0 partidas en blo"ues congelados. 1ana/oria
- icroscopio0 mec/ero0 termmetro0 %2( #ubos de ensa!o
,.2. .eactivos
- 3gua destilada
- )ugol
- 4olucin 3g5O, 6.2
- 4olucin 75O, 8
- 4olucin de almidn al 269
- 4olucin de sacarosa al 269
- e*cla de almidn ! sal al 169
- 4oluciones de sacarosa ! sal+ 6.10 6.20 6.,0 6.: ! 6.2
- 'sperma o vaselina para sellar.
,.,. Otros
- &rascos de vidrio0lminas0 laminillas0 pipetas0 embudos0 papel celofn0 taladra-corc/os0
tapones de corc/o0 tubos de vidrio delgados0 bandas de cauc/o.
4. Procedimiento
:.1. Observacin del proceso de smosis en un osmmetro vegetal.
.ealice el montaje del osmmetro
- -ara ello perfore la parte superior de la *ana/oria con a!uda del taladra-corc/os o
sacabocado apro$imadamente ; de su longitud
- .emueva la parte central /oradada ! llene la cavidad con una solucin de
sacarosa al 169
- Colo"ue el corc/o "ue soporta el tubo delgado ! "ue se adapte en forma ajustada
al dimetro de su cavidad. #enga cuidado "ue no "ueden escapes ! "ue el l"uido de la
solucin asome un poco por el tubo.
- -uede ser necesario impermeabili*ar con esperma.
- &ija a/ora la *ana/oria a un soporte universal o colcala en posicin vertical
dentro de un frasco angosto.
- Deje funcionando el sistema ! realice tres mediciones como mnimo en el tubo
cada ,6 minutos.
- .egistre los cambios observados ! e$pli"ue el proceso.
- .ealice otro montaje pero utilice una solucin de almidn al 269.
:.2. Dilisis
4e reali* el montaje+
- 'n el interior de un embudo de vidrio0 "ue lleva asegurada una membrana
celulsica de celofn0 previamente lavada en agua caliente0 se viert una me*cla de
soluciones de almidn ! sal al 169. 4e evit los escapes de las soluciones a travs de las
membranas.
- )uego se introdujo el embudo en vaso de precipitado con agua destilada.
- 4e Dej el sistema en funcionamiento ! a la media /ora se tomaron dos muestras
de 2 ml del l"uido e$terno a la membrana ! transfirieron a tubos de ensa!o para detectar
la presencia de almidn ! sal.
- -ara la prueba de sal. 4e tiene en consideracin0 "ue el reconocimiento "umico
de la sal se reali*a revelando la presencia de iones Cl. -ara ello se le agreg 1ml de
75O,0 se /irvi el contenido del tubo durante dos minutos ! una ve* se enfro se agreg
< gotas de 3g5O, 6.2. =n precipitado blanco es prueba positiva.
- -ara la prueba de almidn se agregaron < gotas de lugol0 para ver el cambio en
la coloracin0 "ue da positivo cuando cuando del color a*ul pasa a violota.
Determin las sustancias "ue pasaron al e$terior de la membrana.
:.,. 'fecto de los factores ambientales sobre la permeabilidad celular.
- Corte varios tro*os de remolac/a %>eta vulgaris( de apro$imadamente de 1 cc0
lvelos en un vaso con agua para remover el pigmento de las clulas da?adas en
el corte. .ealice varios lavados /asta "ue deje de salir pigmento ! proceda as+
- ar"ue tres tubos de ensa!o+ 10 2 ! ,
- 'n el tubo 5o. 1 colocamos cuatro blo"uecitos de remolac/a0 ! adicionamos 2ml
de agua destilada /asta cubrirlos ! se calent controlando la temperatura con un
termmetro /asta el momento en "ue comen* a salir el pigmento.
- 'n el tubo 5o. 2 se colocaron igual cantidad de remolac/a congelada ! se cubri
con 2 ml de agua destilada.
'n el tubo 5o., se dejaron los blo"ues de remolac/a en 2ml de agua destilada al
medio ambiente.
Despus de 16 minutos se registr los cambios observados en cada tubo. %tabla (
:.:. Determinacin de la concentracin osmtica celular ! clculo de la presin
osmtica mediante el mtodo plasmoltico.
4e Colocaron al lado de una lmpara portaobjetos una gota de solucin de
sacarosa al 6.1 ! sobre esta una /oja de 'lodea. )uego se cubri el montaje con
una laminilla. 3l lado derec/o de la misma lmina se colocaron una gota de agua
de acuario ! otra /oja de 'lodea de tama?o semejante a la utili*ada en el
tratamiento anterior. 4e evit la des/idratacin de los montajes mediante la
adicin de agua cuando fue necesario.
4e observ al microscopio 26 clulas0 ubicadas en el pice de la /oja0 se
determin si algunas de ellas presentaban plasmlisis0 adicional al n@mero de
clulas plasmoli*adas se registr el tiempo transcurrido entre el montaje ! la
preparacin ! la iniciacin de la plasmlisis.
-ara efectos prcticos se considera "ue una solucin de determinada
concentracin produce plasmlisis0 cuando el 269 de las clulas estn
plasmoli*adas %des/idratadas(.
4e .epiti el procedimiento con las concentraciones restantes de sacarosa %6.20
6., 06.: 06.2( ! se intercambiaron los datos registrados asignados a cada grupo.
'n la tabla ,. 4e registr las concentraciones /iposmtica0 /iperosmtica e iso-
osmtica ! se /all la concentracin osmtica donde el 269 de las clulas estn
plasmoli*adas0 una ve* determinada la concentracin calculamos la presin
osmtica.
5. esultados y discusin
5.1. Asmosis+ se puede notar como la solucin de almidn tiene una ma!or
difusin a travs de la membrana %tabla 1 ! grfica 1(0 en las dos tratamientos el
osmmetro absorbi las soluciones0 lo cual se evidencia con una disminucin en el
volumen0 desde , /asta 2 para la solucin de sacarosa 19 de concentracin ! de
,0< /asta 102 para la solucin de almidn 269 de concentracin. 'stos resultados
indican "ue la *ana/oria al tener una concentracin menor tanto de la sacarosa
como almidn /a! movimiento neto de las molculas desde las respectivas
soluciones /acia la *ana/oria
#abla 1. Osmomtro con dos diferentes soluciones %sacarosa ! almidn(

Sacarosa
1%
Almidn
20%
30 min 3 3,7
60 min 2,5 3,3
90 min 2,5 1
120 min 2 1,2
2.2. Dilisis. 'n la dilisis /a! una separacin entre las molculas pe"ue?as ! las
macromolculas. )a membrana celulsica de celofn permite el transporte pasivo
de molculas de agua ! molculas de bajo peso molecular0 en el embudo tenemos
la me*cla de sal ! almidn0 despus de media /ora se comprob la transporte de
molculas de sal /acia el vaso de precipitados mediante el reconocimiento
"umico de la presencia de iones Cl
-
en una muestra de l"uido tomada en un
vaso de precipitados0 a la cual se le agreg 75O, se /irvi ! se le agrego 3g5O,
6.2 ! se obtuvo el precipitado blanco %B( "ue confirma "ue si /ubo transporte de
sal. 'l almidn pudo transportado al otro lado de la membrana0 esto se comprob
al dar la prueba de lugol %-( !a "ue no /ubo el cambio de coloracin esperado de
a*ul-violeta. Con estos resultados se observa "ue la sal por ser una molcula de
pe"ue?o tama?o pasa de forma fcil0 mientras "ue el almidn es una molcula
grande formada por varias unidades de glucosa unidas por enlaces C%1-:(
%4tr!er0 >erg0 D #!moc*Eo0 266F( ! por su tama?o "ueda retenido en el embudo.
2.,. 'fectos de los factores ambientales sobre la permeabilidad celular
ediante los tro*os de remolac/a colocados en los , tubos de ensa!o
observamos lo siguiente+
Tubo 1.
remolacha
calenada
sol el !i"meno a los 15 minuos, es el de ma#or
inensidad, se caleno hasa $$%&, se !i"meno a los
15 se"undos
Tubo 2.
remolacha
con"elada
sol el !i"meno demorandose casi los 10 minuos ,
la inensidad de coloracin es menor 'ue en el ubo
1, em!eraura 0%&.
Tubo 3.
remolacha
ambiene
al i"ual 'ue el ubo dos el !i"meno se demora en
solarse, la inensidad es ma#or 'ue la con"elada #
menor 'ue la calenada, em!eraura 1$%&
)a funcin de la membrana "ue es afectada con los tratamientos de
calentamiento ! congelacin es la permeabilidad de la membrana celular0 esto lo
podemos notar tanto en la velocidad de pigmentacin del agua como la intensidad
del color. 'l proceso fsico "ue se presenta cuando se pigmenta el agua por la
remolac/a es la difusin pasiva o simple0 !a "ue /a! transporte del pigmento
desde una *ona con ma!or concentracin del pigmento %tro*o de remolac/a( /acia
el agua donde no /a! ninguna concentracin de pigmento.
De los resultados del osmmetro0 dilisis0 permeabilidad vemos factores de la
como la concentracin de las soluciones0 la naturale*a de los solutos0 la
temperatura0 el tama?o de las molculas determinan el paso de las sustancias a
travs de las membranas celulares.
2.:. -lasmlisis
g( 3 partir de cul concentracin de sacarosa ! de sal se observ plasmlisis en
las clulas de 'lodeaG '$pli"ue su respuesta.
/( Hue concentracin de sacarosa es iso-osmtica con respecto a la
concentracin celular de la 'lodeaG
i( Hue -.O. .egistro para las clulas de elodea ! cual concentracin utili*o para su
determinacinG
m(Hu fuer*a contrarresta la presin osmtica en el interior del osmmetro ! en
"ue momento cesa la osmosisG
!. "onclusiones
#. "uestionario de consulta
a( Describa con la a!uda de un diagrama de modelo estructural de membrana
celular.
Imagen tomada de+ /ttp+JJmembranascelulares.blogspot.comJ2611J6:Jestructura./tml
b( '$pli"ue por "u las /eladas afectan los cultivosG
4e considera la ocurrencia de /eladas cuando la temperatura del aire0 registrada en el
abrigo meteorolgico %es decir a 1026 metros sobre el nivel del suelo(0es de 6KC. 'sta
forma de definir el fenmeno fue acordada por los meteorlogos ! climatlogos0 si bien
muc/as veces0 la temperatura de la superficie del suelo puede llegar a ser , a :KC menor
"ue la registrada en el abrigo meteorolgico.
Desde el punto de vista de la climatologa agrcola0 no se puede considerar /elada a la
ocurrencia de una determinada temperatura0 !a "ue e$isten vegetales "ue sufren las
consecuencias de las bajas temperaturas sin "ue sta llegue a cero grados %por ejemplo+
el caf0 el cacao ! otros vegetales tropicales(.
Como consecuencia de las temperaturas bajas0 en la planta se suceden los siguientes
pasos+
4e produce un debilitamiento de la actividad funcional reducindose entre
otras cosas las acciones en*imticas0 la intensidad respiratoria0 la actividad
fotosinttica ! la velocidad de absorcin del agua
'$iste un despla*amiento de los e"uilibrios biolgicos frenndose la
respiracin0 fotosntesis0 transpiracin0 absorcin de agua ! circulacin
ascendente.
&inalmente se produce la muerte celular ! la destruccin de los tejidos
%/ttp+JJLLL.tutiempo.netJsilviaMlaroccaJ#emasJ/eladas./tm (
c( Indi"ue la temperatura crtica de calentamiento de una planta $eroftica ! en una
mesoftica.
)as plantas $erfitas estn especialmente adaptadas a climas secos0 pudiendo
llegar a /abitar en lugares en los "ue se dan entre :6 ! 26 KC. -or otra parte0 las
mesfitas pueden vivir en rangos de temperatura medios.
3un as0 estos trminos se utili*an para definir las condiciones de /umedad "ue
necesitan las plantas para su desarrollo.
d( Hue se entiende por organismos osmoflicosG De un ejemplo
)os organismos osmoflicos deben tener una concentracin interna de solutos
elevados para poder retener agua. Como por ejemplo0 algunas especies de
3spergillus encontradas en el odo e$terno.
e( Indi"ue algunos procesos biolgicos en plantas ! animales relacionados con la
smosis.
)a membrana celular semipermeable sin gasto de energa por tanto se /abla de
transporte pasivo. )a nutricin0 la circulacin0 la respiracin0 la e$crecin. 'n los
vegetales el agua se encuentra a ma!or concentracin fuera de ellos "ue en su
interior ! las molculas de agua por smosis ingresan a la planta.
f( 'scriba tres mecanismos "ue permitan el transporte e intercambio de sustancias
a travs de la membrana.
Difusin facilitada+ es similar a la difusin simple donde las molculas se mueven
en una direccin determinada por las concentraciones relativas dentro ! fuera de
la clula. 5o interviene ninguna fuente de energa0 el flujo de las molculas se da
por los gradientes de concentracin de las molculas0 a diferencia de la difusin
simple la difusin facilitada las molculas no se disuelven en la bicapa
fosfolipdica. 'n su lugar0 el transporte viene determinado por protenas "ue
permiten el paso de las molculas sin interactuar con el medio /idrofbico de la
membrana. -or lo tanto0 la difusin facilitada permite el paso de las molculas
cargadas ! a las polares como los carbo/idratos atravesar la membrana
plasmtica. %Cooper D 7ausman0 2616(
Canales inicos+ %acuaporinas( son protenas "ue forman poros abiertos en la
membrana0 permitiendo el paso de molculas de pe"ue?o tama?o ! carga
apropiada pasar libremente a travs de la bicapa lipdica0 en el caso de las
acuaporinas molculas de agua. 'n las clulas vegetales las acuaporinas
transportan el agua de manera ascendente de las races a los tallos ! tambin
regulan la transpiracin en las /ojas. %Cooper D 7ausman0 2616(
'ndocitosis+ en este proceso la membrana introduce partculas grandes mediante
la invaginacin0 donde el material "ue va a ser ingerido es rodeado por una
porcin de la membrana generando una vesicula "ue es transportada /acia el
interior de la clula.
g( Compare el proceso de transporte activo con la difusin simple.
#ransporte activo Difusin simple
.e"uiere de la energa de 3#-0 el
transporte se da en una direccin
energticamente desfavorable a travs
de una membrana0 en contra de un
's un mecanismo donde una molcula
difunde a travs de la membrana sin la
intervencin de protenas de membrana0
el transporte est determinado por las
gradiente de concentracin0 adems
para las molculas "ue van a ser
transportadas re"uieren de una protena
transportadora.
concentraciones relativas dentro ! fuera
de la clula0 el flujo neto de las
molculas se produce a favor de un
gradiente de concentracin. Desde un
compartimiento con una concentracin
elevada a otro de menor concentracin.
#omado de+ %Cooper D 7ausman0 2616(
/( N'n "u consiste la electrodilisisG
)a electrodilisis consiste en aplicar una corriente directa a travs de un reservorio
o corriente de agua0 separado en capas verticales por membranas alternadamente
permeables a los cationes ! aniones. )os cationes miran /acia el ctodo ! los
aniones /acia el nodo. Cationes ! aniones entran ambos en una capa de agua
dejan la capa ad!acente. 3s0 las capas de agua enri"uecidas en sales se alternan
con capas de las cuales se /an eliminado o removido las sales. 'l agua en las
capas enri"uecidas se recircula /asta cierto grado0 para prevenir la acumulacin
e$cesiva de salmuera. %4tanle! '. ana/an0 266<(
i( D un ejemplo de una aplicacin prctica del principio de la dilisis en el
campo de la salud.
Cuando los ri?ones estn sanos0 limpian la sangre. #ambin producen /ormonas
"ue mantienen sus /uesos fuertes ! su sangre sana. Cuando los ri?ones fallan0 es
necesario un tratamiento para sustituir el trabajo "ue ellos /acan. 3 menos "ue se
realice un trasplante de ri?n0 necesitar de un tratamiento llamado dilisis.
'$isten dos tipos principales de dilisis+ /emodilisis ! dilisis peritoneal. 3mbos tipos
filtran la sangre para eliminar los desec/os peligrosos del cuerpo ! el e$ceso de sal !
agua. )a /emodilisis se logra con un aparato. )a dilisis peritoneal usa la membrana "ue
recubre el abdomen0 llamada membrana peritoneal0 para filtrar la sangre. Cada tipo tiene
riesgos ! beneficios. #ambin re"uiere "ue siga una dieta especial. 'l mdico puede
a!udarlo a decidir el mejor tipo de dilisis para su caso. %NIH: Instituto Nacional de la
Diabetes y las Enfermedades Digestivas y Renales (
)iteratura citada
&oo!er , (., ) *ausman, +. ,. -2010.. La Clula -/uinaa ed... 0adrid, ,s!a1a2 0arb3n
4ibros, S.4.
Sr#er, 4., 5er", 6. 0., ) T#moc78o, 6. 4. -200$.. Bioqumica. 5arcelona, ,s!a1a2 +e9ere.
S.A.
%NIH: Instituto Nacional de la Diabetes y las Enfermedades Digestivas y Renales (
%/ttp+JJLLL.tutiempo.netJsilviaMlaroccaJ#emasJ/eladas./tm (