1

1
Muestreo
Muestreo aleatorio o al azar:
Localiza los puntos de muestreo mediante la utilizacin de tcnicas que
definen posiciones aleatorias en toda la superficie a muestrear. No
permite obtener informacin adicional a la del muestreo.
2
Muestreo
Muestreo estratificado o zonificado:
En un mtodo en el que se utiliza la informacin previa de la poblacin
de muestras para determinar grupos (denominados estratos) que son
muestreados independientemente. Lo ms comn es la determinacin
de estratos geogrficos.
3
Muestreo
Muestreo sistemtico:
Tambin llamado muestreo regular, se basa en el seguimiento de un
patrn geomtrico especfico donde las muestras son tomadas a
intervalos regulares a lo largo de ese patrn. til para cubrir en forma
fcil y uniforme un sitio, de forma que toda la poblacin de muestras
est representada en la muestra segn patrn asignado. Es til para
estimar con precisin zonas crticas, caractersticas estadsticas del
sitio, patrones espaciales en dos o tres dimensiones y tendencias.
zig-zag cuadrcula diagonales
4
Muestreo
5
Muestreo de suelos
6
Muestreo de aguas
Simple: Cuando la fuente es razonablemente
constante en el espacio y en el tiempo (algunos
suministros de agua, pocas aguas residuales). Si hay
cambios en el tiempo, pueden observarse fcilmente
tales variaciones. Tambin se utilizan para flujos
discontinuos o si el parmetro cambia mucho durante el
perodo de muestreo. Para analizar OD, cloro, T, pH,
acidez, coliformes y grasas.
2
7
Muestreo de aguas
Compuesta: unin de muestras simples de igual
volumen recolectadas en el mismo punto a distintos
tiempos (compuesta en el tiempo). Hay otras donde el
volumen de cada muestra es proporcional al flujo
instantneo y el intervalo de tiempo es constante (usual
= 1 hora). Tiempo total = 24 horas.
Se utilizan para encontrar concentraciones promedio.
8
Muestreador con Refrigeracin
(Global Water Instrumentation Inc.)
Muestreo de aguas
9 10
11
Sin concentracin del gas o vapor
Con concentracin
Muestreo de aire
12
3
13
Con concentracin Pasivos
Silica Gel alumina carbon activado tenax - carboxenos
Existen en el mercado mas de 250 tipos de adsorbente
especficos y tambien nuevos tipos colorimetricos
14
Proceso mediante el cual se
establece que el mtodo analtico
cumple con los requisitos mnimos
para su aplicacin.
VALIDACIN DE MTODOS
ANALTICOS
15
Definicin segn BPM:
Pruebas documentadas que aportan un alto grado de seguridad, para que
procesos planificados se efecten de manera uniforme en conformidad
con los resultados previstos especificados.
Definicin analtica:
Evidencia documental de que un procedimiento analtico, aporta un alto
grado de seguridad, para obtener resultados precisos y exactos dentro de
las especificaciones y atributos de calidad previamente establecidos.
VALIDACIN DE MTODOS
ANALTICOS
16
Para cumplir con requisitos de las normas internacionales:
BPM (Industria Farmacutica)
Norma ISO 17025 (Acreditacin de Laboratorios de Ensayo y de
Calibracin)
Para emitir resultados exactos y precisos, que sean reproducibles
para generar la confianza en nuestros clientes.
Para qu valido un mtodo analtico?
17
Mtodos Normalizados:
Mtodo analtico desarrollado por un organismo de normalizacin u otro
organismo reconocido cuyos mtodos son generalmente aceptados por
el sector tcnico correspondiente.
Mtodos No Normalizados:
Mtodo analtico desarrollado por un tercero o que ha sido adaptado
por el laboratorio a partir de un mtodo normalizado.
Mtodos Desarrollados por el Laboratorio:
Mtodo analtico que no se encuentra en normas u otras colecciones
de mtodos, ni en publicaciones de terceros, habiendo sido
desarrollado por el propio laboratorio.
Cules son los tipos de mtodos?
18
Etapas para desarrollar un mtodo analtico
Bsqueda
Bibliogrfica
Oficiales
Publicaciones
Definir las
Condiciones
Equipo
Reactivos
Muestreo
Estandarizar el
mtodo
Encontrar
condiciones
optimas
Practicidad
Tcnica
Analtica
1 2 3
VALIDAR
4
4
19
La validacin de un mtodo proporciona:
Alto grado de confianza en el mtodo...CALIDAD
de los resultados
Conocimiento profundo del funcionamiento del
mtodo
Disminucin en el nmero de fallos y
repeticiones
20
Rango lineal
Concentraciones lmite
Precisin
Sensibilidad
Robustez
Exactitud (Especificidad)
VALIDACIN DE MTODOS
ANALTICOS
21
Qu hacer si se quiere utilizar
un mtodo ya validado?
Se verifican los parmetros analticos (rango
lineal, precisin, etc.)
Si se modifica al menos un paso del mtodo
deber ser REVALIDADO
22
Especificidad
Capacidad de un mtodo para medir identificar
simultneamente los analitos de inters de manera
inequvoca en presencia de otras sustancias como:
impurezas y compuestos de degradacin
provenientes del analito su proceso de obtencin
Componentes de la matriz
23
100
) (
%

=
A
MSF MF
C
C C
R
Porcentaje de recuperacin
Es la fraccin de la sustancia agregada a la muestra (muestra fortificada)
antes del anlisis, al ser analizadas muestras fortificadas y sin fortificar. La
recuperacin permite ver el rendimiento de un mtodo analtico en cuanto al
proceso de extraccin y la cantidad del analito existente en la muestra
original. Por lo cual, la recuperacin esta intrnsecamente relacionada a las
caractersticas de la matriz de la muestra.
R = Recuperacin
C
MF
= es la concentracin de analito medida en la muestra fortificada.
C
MSF
= es la concentracin de analito medida en la muestra sin fortificar.
C
A
= es la concentracin de analito adicionado a la muestra fortificada.
24
Unidad
Recuperacin
estimada (%)
100 % 98-102
10 % 98-102
1 % 97-103
0,1 % 95-105
100 ppm 90-107
10 ppm 80-110
1 ppm 80-110
100 ppb 80-110
10 ppb 60-115
1 ppb 40-120
s
n x
t
calc

=
(n 1) grados de libertad t
crtico
Criterio de aceptacin
5
25
Ejemplo de Ejercicio de Recuperacin:
Se fortific una muestra de carne de marisco a una concentracin 15 mg/Kg de Cadmio
y se analizo por fotometra de absorcin atmica.
Desviacin estndar del % R, S
%R
= 7,90 Usar Prueba t
26
Capacidad de un mtodo para medir resultados
que son directamente proporcionales a la
concentracin del analito dentro de un rango
establecido (rango: lmite superior e inferior de la
concentracin del analito donde se ha validado).
Rango Lineal
27
Rango Lineal
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 5 10 15 20 25
S
e

a
l

(
m
V
)
Fenol (ppm)
28
i
i
i
x
a y
=
Factor de Respuesta
y
i
= seal analitica
a = intercepto
x
i
= concentracin analito
s
n b
t
calc
0
=
(n 2) grados de libertad
80
90
100
110
120
0 5 10 15 20 25
F
a
c
t
o
r
d
e
R
e
s
p
u
e
s
t
a
Fenol (ppm)
29
PRECISION
Capacidad de un mtodo para dar resultados prximos entre si, puede ser:
Repetibilidad:
Evala la precisin del mtodo (precisin intraensayo).
Precisin intermedia:
Evala la precisin del mtodo frente a variaciones de analista, equipo y da
(precisin intralaboratorio nterensayo).
Reproducibilidad:
Evala la precisin del mtodo entre laboratorios
(precisin nter laboratorio)
30
Repetibilidad
Misma muestra, mismo laboratorio (mismo analista, mismo equipo,
mismos reactivos, mismas condiciones, es decir, en el curso de la
misma serie de anlisis (t pequeo, corto plazo)) - 10 repeticiones
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
160
0 2 4 6 8 10 12
F
e
n
o
l

(
p
p
m
)
Determinacin
6
31
Reproducibilidad
Misma muestra, diferentes laboratorios (analista, equipo,
reactivos, condiciones) Buscar el mximo de
repeticiones posibles
70
80
90
100
110
120
130
1 2 3 4 5 6
F
e
n
o
l

(
p
p
m
)
laboratorio
32
Precisin intermedia
Misma muestra, mismo laboratorio (diferentes analistas o
equipos o reactivos (t mayor, largo plazo)) 9-10 repeticiones
70
80
90
100
110
120
130
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
F
e
n
o
l

(
p
p
m
)
Dia
33
Criterio de Aceptacin:
%RSD < 2,0% para macrocomponentes
%RSD < 10,0% para componentes menores
%RSD < 3,0% para mtodos empleados en disolucin
%RSD < 10% para muestras biolgicas
Generalmente
Coeficiente de Variacion de Horwitz (CV h):
34
ECUACIN DE HORWITZ
Donde C (valor nominal del analito):
esta dada en g/g o en g/mL
Para la repetibilidad CVr% obtenido debe ser < 1/2(CVh%)
Para la reproducibilidad CVR% <CVh%
Para Precisin intermedia CVR% <2/3(CVh%)
35
Ejemplo:
Se realizo la medicin simultanea (mismo da) de 10 muestras para el analito
(organofosforados) de un material de referencia de tomate de 1,2 mg/Kg, obtenindose
los siguientes resultados:
Promedio obtenido X= 0,95 mg/Kg
La desviacin estndar obtenida es de Sr = 0,097 mg/Kg
El coeficiente de variacin porcentual obtenido es CV% =10,21% 1/2CV
h
% =7,72
36
Sensibilidad
La sensibilidad es el cociente entre el cambio en la indicacin de un sistema de medicin y el
cambio correspondiente en el valor de la cantidad objeto de la medicin.
El valor de sensibilidad obtenido [m] debe permitir una adecuada discriminacin de los
valores de concentracin en base a la lectura.
un mtodo es sensible cuando una
pequea variacin de concentracin
determina una gran variacin de
respuesta. La sensibilidad permite
observar la capacidad de respuesta
instrumental frente a una
determinada cantidad de analito.
7
37
Robustez
La robustez es una medida de la capacidad de un procedimiento analtico de no ser
afectado por variaciones pequeas pero deliberadas de los parmetros del mtodo.
proporciona una indicacin de la fiabilidad del procedimiento en un uso normal. En este
sentido el objetivo de la prueba de robustez es optimizar el mtodo analtico desarrollado o
implementado por el laboratorio, y describir bajo que condiciones analticas ( incluidas sus
tolerancias), se pueden obtener resultados confiables.
Un mtodo de ensayo es mas robusto entre menos se vean afectados sus
resultados frente a una modificacin de las condiciones analticas.
condiciones analticas que pueden afectar a un mtodo:
Analistas Equipos Reactivos
pH temperatura Tiempo de reaccin
Estabilidad de la muestra Otros.
38
Test de Youden y Steiner
Este procedimiento permite evaluar el efecto de siete variables con solo ocho anlisis de
una muestra.
39
Criterio de Aceptacin:

20,1 20,7 22,0 21,3
4
21,025
22,3 22,2 20,6 21,1
4
21,55
0,525
40
Por lo tanto, no debern modificarse las variables que se establecieron como
sensibles en el estudio de robustez, y se deber mantener el valor nominal
establecido en el mtodo, para dicha condicin.
41