REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE AMINOCIDOS Y

PROTENAS


Las protenas son compuestos orgnicos de elevado peso molecular. Ej.:
insulina bovina PM= 5733, seroalbmina humana PM=68500. Las composicin
elemental de la mayora de las protenas es muy parecida, los porcentajes
2aproximados son: C = 50 55; H = 6 8; O = 20 23; N = 15 - 18 y S = 0 -
4.

Las protenas estn constituidas por un nmero variable de molculas ms
pequeas llamadas aminocidos.

Los aminocidos son cidos carboxlicos en que uno de sus hidrgenos ha sido
reemplazado por un grupo amino, su frmula general es:

R

NH
2
CH COOH


Desde las protenas se aslan alrededor de 20 aminocidos y todos
corresponden a aminocidos, que son aquellos en que el grupo amino
reemplaza a un hidrgeno perteneciente al carbono , es decir, el carbono
adyacente al grupo carboxilo.

Los aminocidos naturales pueden clasificarse en subclases de acuerdo con la
naturaleza qumica (aliftica, aromtica, heterocclica) de sus grupos R.
Tambin hay otra clasificacin que se basa en la polaridad del grupo R, en este
caso los veinte aminocidos que por lo comn se obtienen de las protenas se
clasifican de la manera siguiente:




1. Aminocidos con grupos R no polares o hidrofbicos

Este grupo contiene aminocidos con residuos alifticos: alanina, valina,
leucina, isoleucina y metionina. Tambin, aminocidos con residuos
aromticos: fenilalanina y triptfano que son hidrofbicos. Adems, en este
grupo est la prolina, cuyo tomo de nitrgeno aparece en forma de amina
secundaria en vez de la amina primaria usual.









2. Aminocidos con grupos R polares pero sin carga elctrica.

La mayora de estos aminocidos contienen residuos R polares. Algunos de
ellos poseen un grupo hidroxlico: serina, treonina y tirosina o bien grupos
sulfhidrilo: cistena. Se incluyen en este grupo a la glicina ya que, an cuando
carece de grupo R, presenta una naturaleza polar, esto se debe a que los
grupos amino y carboxilos cargados constituyen una gran parte de la masa de
la molcula. Tambin se incluyen en esta divisin a los compuestos como:
tirosina. (asparagina y glutamina).


3. Aminocidos con grupos R cargados positivamente

Aqu se incluyen tres aminocidos; lisina, que posee un segundo grupo amino
en la posicin de la cadena aliftica; arginina, que tiene un grupo quanidinio
cargado positivamente y la histina, que tiene la funcin imidazol, dbilmente
bsica.


4. Aminocidos con grupos R cargados negativamente.


En esta divisin se incluye a los dos aminocidos dicarboxlicos: cido
asprtico y cido glutmico.

Los aminocidos pueden condensarse entre s, unindose por el carbono de su
grupo carboxilo al nitrgeno del grupo amino de otro aminocido lo que se
denomina enlace peptdico.

R
1
R
2
R
1
R
2



NH
3
+
-CH-COO
-
+ NH
3
+
-CH-COO
-
NH
3
+
-CH-CO-NH-CH-COO
-


+H
2
O


Los pptidos se forman por uniones de aminocidos a travs de los enlaces
peptdicos, segn el nmero de aminocidos que componen el pptido
existen: dipptidos, tripptidos, etc.
Si un pptido posee menos de 10 aminocidos se conoce como oligopptido;
los que exceden de este tamao son polipptidos. Una unidad de aminocido
en un pptido se denomina residuo Las cadenas peptdicas tienen direccin
ya que sus extremos son diferentes amino terminal y carboxilo terminal. Por
convencin, el inicio de cadena corresponde al extremo amino, de modo que la
secuencia de aminocidos se escribe comenzando con el residuo amino
terminal. As por ejemplo en el tripptido: Ala Gly Trp (AGW), alanina es el
residuo amino terminal y el triptfano es el residuo carboxilo terminal.

Las protenas estn constituidas por largas cadenas polipeptdicas, en donde
los aminocidos estn ubicados en una determinada secuencia y esto
corresponde a la estructura primaria de una protena.

La estructura secundaria se refiere a la distribucin espacial de los residuos
de aminocidos que constituyen la cadena polipeptdica. Algunas de estas
relaciones estricas son de tipo regular, dando origen a una estructura
peridica, como es el caso de -hlice y estructura en hoja plegada.

La estructura terciaria se refiere al modo como la cadena se curva para
formar la estructura estrechamente plegada y compacta de las protenas
globulares, la estabilizacin de esta estructura se atribuye a las diferentes
reactividades asociadas a los grupos R de los residuos de aminocidos tales
como: interaccin electrosttica; enlaces de hidrgeno; interaccin hidrofbica;
unin disulfuro.

Las protenas que poseen ms de una cadena polipeptdica (cada cadena se
denomina subunidad), presentan un nivel adicional de organizacin estructural
que se denomina estructura cuaternaria que pone de manifiesto como se
disponen en el espacio las cadenas polipeptdicas individuales. Ej.: la enzima
fosforilasa contiene dos subunidades idnticas que por separado son
catalticamente inactivas, pero que cuando se unen para formar un dmero,
constituyen la enzima activa.

Estudios ms recientemente de conformacin y funcin de protenas han
revelado la importancia de niveles adicionales de organizacin como: la
estructura sper-secundaria que se refiere a agrupaciones de estructura
secundaria, tales como la unidad alfa alfa, la unidad beta beta y la unidad
beta alfa beta. Otro nivel adicional corresponde a los dominios que
corresponde a regiones globulares compactas (2 o ms) unidas por segmentos
flexibles de cadena polipeptdica.






















Reacciones para el reconocimiento de aminocidos y protenas

I Reaccin de la ninhidrina: Sirve para reconocer y valorar cuantitativamente
a los aminocidos. Los aminocidos reaccionan con ninhidrina (hidrato de
tricetohidrindeno) formando un compuesto coloreado, que generalmente es
azul-violeta, excepto con los aminocidos prolina e hidroxiprolina en que se
obtiene una coloracin amarilla.

El grupo amino de los aminocidos se oxida por accin de la ninhidrina
formando amonaco ms CO
2
y el aldehido (se obtiene por prdida de un
carbono del aminocido original).


O

R OH
RCHO + NH
3
+ CO
2
+
NH
2
- CH COOH + OH

O
NINHIDRINA OXIDADA
O

OH

H

O
NINHIDRINA REDUCIDA

Luego un segundo equivalente de ninhidrina reacciona con la ninhidrina
reducida y el amonaco, formndose un producto muy coloreado que tiene la
siguiente estructura:

O O

C OH OH C
C
C +NH
3

C OH H C

O O
O O

C C

C N = C + 3H
2
O
C C

O O


La reaccin de la ninhidrina es positiva con todos los compuestos que
contienen un grupo amino primario. La coloracin de la ninhidrina con las
protenas es muy dbil, debido a la escasa presencia de NH
2
libres, por lo cual
se le considera negativa.

Las reacciones de coloracin para el reconocimiento de protenas se basan en
muchos casos en la identificacin de grupos estructurales de algunos de sus
aminocidos.

a) Reaccin de Biuret: El test de Biuret (sulfato cprico en medio alcalino)
es positivo para todos los compuestos que contengan dos o ms uniones
peptdicas. La coloracin prpura de una reaccin positiva se debe a un
complejo de coordinacin entre el Cu
2+
y cuatro tomos de nitrgeno que
provienen de cadenas peptdicas adyacentes.


H
2
O
O = C C = O



NH NH





R - CH CH - R

Cu
2+


O =C C = O




NH NH




R - CH H
2
O CH R







b) Reaccin xantoproteica o reaccin del cido ntrico: En esta reaccin
se obtiene una coloracin amarilla (griego xanthos = amarillo). El ensayo
es positivo para las protenas con aminocidos que llevan el anillo
bencnico (aromtico) como tirosina, triptfano y fenilalanina. El color
amarillo se debe a la formacin de un compuesto aromtico nitrado. Esta
reaccin explica la aparicin de una coloracin amarilla al caer gotas cido
ntrico sobre la piel.

c) Reaccin de Millon: El reactivo de Millon es una mezcla de nitrato y nitrito
mercrico, que se obtiene al disolver mercurio en cido ntrico.

Al agregar el reactivo a una solucin de protena, esta precipita y al calentar el
precipitado toma una coloracin rojiza. Este color desarrollado en la reaccin
positiva se debe a los grupos fenlicos en el aminocido tirosina.

d) Reaccin de los aminocidos azufrados: El azufre de la cistena, cistina y
metionina, pueden ser mineralizados por calentamiento en medio alcalino. En
estas condiciones se les reconoce agregando una sal de plomo con la que
reacciona para formar PbS precipitado de color negro.

R - SH + 2 NaOH Na
2
S + ROH

Na
2
S + (CH
3
COO)
2
Pb 2 CH
3
COONa + PbS
pp. Negro

























PARTE EXPERIMENTAL

Ponga a hervir aproximadamente 300 mL de agua en un vaso de pp de 500 mL
y mantngalo hirviendo hasta que realice todas las experiencias.

1. Identificacin de aminocidos con ninhidrina y su diferenciacin
con protenas

Esquema de trabajo:

Tubos 1 2 3 4
Solucin aa. glicina (mL) 5 - - -
Solucin aa. prolina (mL) - 5 - -
Solucin protena (mL) - - 5 -
Agua destilada (mL) - - - 5
Sol. Ninhidrina en alcohol
(mL)
0,5 0,5 0,5 0,5

Ponga los tubos en bao Mara hirviente por 2 minutos y deje enfriar, se
desarrolla un color azul o azul violeta.

Anote los resultados obtenidos, para las soluciones de aminocidos, protena y
blanco.

2. Reaccin Xantoproteica

Esquema de trabajo:

Tubos 1 2 3 4
Solucin protena (mL) 2 - - -
Solucin aa. tirosina (mL) - 2 - -
Solucin aa. glicina (mL) - - 2 -
Agua destilada (mL) - - - 2
cido ntrico concentrado
(mL)
1 1 1 1

Agite los tubos
Caliente los tubos suavemente hasta ebullicin en bao Mara.
Anote los resultados obtenidos para cada tubo.











2. Reaccin de Biuret

Esquema de trabajo:

Tubos 1 2 3
Solucin de aminocidos
(mL)
3 - -
Solucin protena (mL) - 3 -
Agua destilada (mL) - - 3
Reactivo de Biuret (mL) 1 1 1

Si no hay reaccin a t ambiente, ponga los tubos a 37C por 2 minutos

Observe la coloracin.

4. Reaccin de Millon

Esquema de trabajo:

Tubos 1 2 3 4
Solucin protena (mL) 2 - - -
Solucin aa. tirosina (mL) - 2 - -
Solucin aa. glicina (mL) - - 2 -
Agua destilada (mL) - - - 2
Reactivo de Millon (mL) 1 1 1 1

Calentar a bao Mara hirviente, hasta aparicin de color


5. Reaccin aminocidos azufrados

Esquema de trabajo:

Tubos 1 2
AA. cistena Punta
esptula
-
Agua destilada (mL) - 2
Hidrxido de sodio (mL) 2 2
Acetato de plomo 10 %
(mL)
1 1

Calentar suavemente hasta ebullicin.








CUESTIONARIO

1. Qu mtodos se utilizan para romper un enlace peptdico?

2. Qu reaccin qumica permite reconocer los enlaces peptdicos?


3. Qu significa que la unin peptdica o grupo amida - CO - NH - sea
coplanar?

4. Qu efecto tiene un agente oxidante como cido perfrmico sobre los
enlaces disulfuro de las cadenas polipeptdicas de una protena?


5. Cul es el nmero mnimo de aminocidos que necesita tener un pptido
para dar la reaccin de Biuret?