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INTRODUCCIN
El colesterol es una biomolecula ampliamente distribuida en el organismo,
presente en todos los tejidos y sangre perifrica en forma libre o combinado con
un acido graso de cadena larga en forma de ester de colesterilo. Se presenta en
altas concentraciones en el hgado, medula espinal, pncreas y cerebro. El cuerpo
necesita determinada cantidad de colesterol para funcionar adecuadamente, pero
el exceso en la sangre, combinado con otras sustancias, puede adherirse a las
paredes de las arterias. Esto se denomina placa. Las placas pueden estrechar las
arterias o incluso obstruirlas.
Los niveles altos de colesterol aumentan el riesgo de enfermedades cardiacas.
Los niveles tienden a aumentar con la edad. El aumento no tiene sntomas ni
signos, pero puede detectarse con anlisis de sangre. Tiene que ver mucho si hay
antecedentes familiares, sobrepeso o consumo de comidas grasosas.
FUNDAMENTO
Ester de colesterol + H
2
O
colesterol esterasa
colesterol +acidos grasos
Colesterol + O
2
colesterol oxidasa
colesten-3.ona+H
2
O
2H
2
O
2
+fenol+4-aminoantipirina
peroxidasa
quinoneimina+H
2
O
OBJETIVO
Los estudiantes del curso de bioqumica II aprendern a cuantificar la
concentracin de colesterol de una muestra problema (suero humano) utilizando el
mtodo colorimtrico enzimtico (CHOP-PAP) para colesterol de RANDOX.
MUESTRA
Suero, plasma hepariniado, o plasma-EDTA
EQUIPO Y MATEIALES
Colormetro Celdas de plstico de 1cm
Micropipetas de 0.01 a 100 L,
de 100 a 1000 L y puntas
Un vaso de precipitados de 250
mL
1 pipeta serolgica de 1Ml 4 tubos de 13 x 100
Gradilla para tubos Mezclador (vortex
2
REACTIVOS Y MUESTRAS PROBLEMAS
1. Reactivo enzima: peroxidasa > mL, colesterol esterasa > 0.15 U/mL,
colesterol oxidasa > 0.1 U/mL, 4-aminofenazona 0.30 mmol/L y fenol 6
mmol/L, en amortiguador de pipes 80 mmol/L, pH 6.8. contiene azida de
sodio 0.02%
2. Solucin patrn de colesterol 200 mg/dL (5.17 mmol/L)
3. Suero problema
METODO
1. Etiquete un tubo de ensaye con el nombre "problema" y otro con "patrn"
2. Agregue 1 mL del reactivo de enzima a los dos tubos de ensaye
3. Aplique 0.01 mL de la muestra problema y patrn a cada tubo
correspondiente, mezcle e incube durante 5 minutos a 37
4. Determine la OD
500
del tubo problema y del tubo patrn, contra el blanco de
reactivo antes de que transcurran 60 min y estime la concentracin de
colesterol en la muestra problema con las siguiente ecuaciones
Concentracin de colesterol =
x concentracin de patrn(mg/dL)
RESULTADOS
la OD
500
del tubo problema = 183
la OD
500
del tubo patrn= 248
Concentracin de colesterol =