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-

UniTest


2008

57.01
30.16
24
- 2007 .
20072010 . .
:
;
-

24

. 1.0 [ ] : . . / . : . . , . . , . . ,
. . . . . (2 ). : , 2008.
( : 143-2007 / . .
. . ). 1 . . (DVD). . : Intel
Pentium ( ) 1 ; 512
; 2 ; DVD ;
Microsoft Windows 2000 SP 4 / XP SP 2 / Vista (32 ) ;
Adobe Reader 7.0 ( pdf).
ISBN 978-5-7638-1075-2 ()
. 0320802394
01.01.0001 . ()
- , , , , - . , . .

3- .
020200.62
020000 .
, 2008

-
. .

: - ;

. . , , .

. 22.09.2008
2
: , 660041, , . , 79


........................................................... 5
1.
.................................................. 6
1.1.
....................................... 6
1.2. ..................................... 10
1.3.
......................................................................... 14
2.
................................................... 18
2.1. .............................. 18
2.2.
.................................... 20
2.3. : , ............... 22
2.4.
..................................................................... 27
2.5.

..................................................................... 30
2.6.
............................................................... 34
2.7.
( , ).............................................................. 39
2.8. (,
) ........................................... 42
3. ........ 46
3.1.
( ) .......................................................... 47
3.2. ......... 50
4.

............. 55
5.
........................ 56
. .

-3-

5.1. ............................... 56
5.2. .

- ..................... 59
6.
............................... 64
6.1. E. coli xli-Blue
pGLO .......................................................................................... 68
6.2. ,
.
E.coli ................................................................ 70
7.
.................................................... 73
7.1.
.
............................................................... 74
8.
................................ 78
........................................... 79

. .

-4-


,

,
,
.
, ,
: ; , , .

, , , .
:
;
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.

. .

-5-

1.

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:
-
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.
: , .

1.1.

:
, .

.
, .
,
.
X
.
, . ,
.
:

. .

-6-

1.

1.1.


( )





X1, 2 X3.
Y .

:
1. R. eutrophus B-5786;
2. ;
3. , , ;
4. , , , , , ;
5. .
:
1.
N = 2n, n X1, X2, X3.
2. . 1.1.

. .

-7-

1.

1.1.

1.1

1
2
3
4
5
6
7
8

X1
+
+
+
+
-

X2
+
+
+
+
-

X3
+
+
+
+
-

3. () :

X10 = 28 0C, h = 2;

X20 = 8 /, h = 4;

X30 = 80 , h = 20.
4. , . 1.1, :
;
(12 / 4 /);
0,5
2,5 , 1,5 , 2
( 1 100 );
200 ;
300 , ( );

( 100 60 );
;
;
( )
;
.
5. 15 30 ,
, Y, -1.
6. . 1.2.

. .

-8-

1.

1.1.

1.2

X1

X2

X3

Yi

7. (. 1.3) .
1.3

1
2
3
4
5
6
7
8

x0

x1

x2

x3

+1
+1
+1
+1
+1
+1
+1
+1

+1
-1
+1
-1
+1
-1
+1
-1

+1
+1
-1
-1
+1
+1
-1
-1

+1
+1
+1
+1
-1
-1
-1
-1

8. :

Y = 0 + B1x1+ B2x2+ B3x3


Bi =

1
N

x y
i =1

N .
9.
S i2 =

1 m
( yi ycp ) 2 ,
m 1 i =1

i ; m .
10.
(Gp < G)
Gp =

S i2max
N

Si2

=1

2
i max

11.
S y2 =

1
N

S
i =1

2
i

. .

-9-

1.

1.1.

12. :
S ki2 =

S y2
N

13. :

t ip =

Bi
,
S ki2

Bi :
tst tip < tst.
14. :
2

2
ad

m N
=
(ycp y *) ,
N m i =1

; y* , .
15. :
c
Fp= S2ad/S2y;
F .
16. .
:
1. ?
2. ?
3. ?
4. .

1.2.
:
Ralstonia eutropha.

, -

. .

-10-

1.

1.3.

. ,
.
, ,
,
. ,

, , .

, .

,
- .

, (. 1.1).

. 1.1.


. Ralstonia eutropha , :
Na2HPO4H2O 9,1; KH2PO4 1,5; MgSO4H2O 0,2; Fe3C6H5O77H2O 0,025
(/). 3 1 . : H3BO3
0,288; CoCl26H2O 0,030; CuSO45H2O 0,08; MnCl24H2O 0,008;
ZnSO47H2O 0,176; NaMoO42H2O 0,050; NiCl2 0,008 (/).
.

, . . .

-11-

1.

1.3.

:
S2

S1+N S1N S1S2N 2N+P ;

(1)

S1+N S1N X+P


S2+X S2X 2N+P,
(2)
S1 S2 ; N ;
X , ; P .
(1) ( ). (2)
, , , (--).
(2) :
=

m
,
K1 K 2
+
1+
S1
S2

(3)

K1 K2
S1 S2.
(1)

=

m
K
K K
1+ 2 + 1 2
S2
S1 S 2

(4)

(3) (4).

= f( S1;S2) (. 1.2).

. .

-12-

1.

1.3.
, -1
0.25
0.2

0.15
-1
-2
-3
-4

0.1
0.05
0
0

8
S1 , /3

.1.2.
S1. (14):
1 S2 = 1,2 /3; 2 0,6; 3 0,4; 4 0,2

(. 1.31.4)
K1 K2.
1/,
-1
-2
-3

10

tg =

K K

m X

2
0

5 1/X, 3/

. 1.3.
. (1 3, .1.2):
1 X = 1/3; 2 2,5; 3 8. (1 3): 1 X = 1/3; 2 2,5; 3 8

1/m,

4.5

4
m = 1/3.6 ; K = m tg = 0.2770.18 = 0.05
3.5
0

5 1/X,3/

. 1.4. 1/m 1/X

:
1. R. eutrophus B-5786;
2. ;
. .

-13-

1.

1.3.

3. , , ;
4. , , , , , ;
5. .
:
1. 4
(0,2; 0,4; 0,6 1,2 /3) (1; 2; 4; 8 /3).
2. :
0,5
2,5 , 1,5 , 2
( 1 100 );
200 ;
300 , ( );
100 ;
;
;
( )
;
.
3. 15 30 ( )

, , -1.
4. (.1.2).
5. 1/ = f (1/S1) 1/ = f (1/S2)
, (3) (4).
6. .
:
1. ?
2. .
3. .

1.3.

: .

. .

-14-

1.

1.3.


. (. 1.5)
.
-, . . , ,
, , .

1.5. : I -;
II ; III ;
IV ; V ; VI


, , , , . .
, .
. ,
. , . ,
. .
.
,
- .

. .

-15-

1.

1.3.


.
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, . , , . , ,
.
- . . .
: , , , ,
. ,
. .
, ,

. .
, , ,
.
:
1. R. eutrophus B-5786;
2. ;
3. , , ;
4. , , , , , ;
5. .
:
1. :
0,5 (
) 2,5
, 1,5 , 2
( 1 100 ); ( 10 / );
10 100 (10
), ;
. .

-16-

1.

1.3.

- ;
(, 1, 1, 1 . .);
.
2. .
3.
. , , 12, 24 36
( 10 /).
4. . 1.4.
1.4
R.eutropha

1. ,

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1
2
3
4
5

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5.
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1.
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-17-

2.

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2.1.
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.

. 2.1.
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-18-

2.
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1
3
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2

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1
2

9
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7
1

4
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8
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5
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1

0
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6
1

1
1
8

2
1

3
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7
6
5
4

3
2

. 2.1. :
1 , 2 , 3
, 4 ,
5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16
, 17 , 18 , 19
, 20 , 21 , 22 , 23
, , ,
, . .
: ,
, , , ,
,

. .

-19-

2.
2.1.

:
1. - ;
2. Bio- Flo;
3. .
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2.2.

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-20-

2.

2.2.

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6

1
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5
2

11
10
12
13

. 2.2.
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3 -; 4 -; 5 ; 6 ; 7 ; 8 ;
9 ; 10 ; 11 ;
12 ; 13

:
1. R. eutrophus B-5786;
2. ;
3. , , ;
4. , , , , , ;
5. , , ,
(, , ).
:
1. : 0,5 ( ) 2,5
, 1,5 , 2
( 1
100 ); ( 10 / ).
2. 100 (
5 ), .
3. ;
4. (, 1, 1, 1 ..);
. .

-21-

2.

2.2.

5. ;
6. ;
7. 5 12, 24
36 (
1-2 / );
8.
.
9. . 2.1.
2.1

R. eutropha

1
,

2 ( )
,

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, /

1
2
3
4
5
1
2
3
4
5

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1. ?
2.
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3. ?

2.3. :
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.
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-22-

2.
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:
.
, , . (. 2.3).
0
0 + S0 + P
S0

. 2.3. : s r
; i ;
s 1 ; : ,
2 ;

, . , ,
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. ,
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.
. , .


:
=D ,
, D
( ). .
(. 2.4).

. .

-23-

2.
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1

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4

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1 , 2 , 3 , 4 , 5 ,
6


.
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.
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. .
.

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. D,
.
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. .

-24-

2.
2.3. : ,

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; 2)
; 3) (. 2.4, ).
,
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.
, .
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( ,
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()
. 2.5.

. .

-25-

2.
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12
9

10
21 11

15

2 0

8
28

27

21

4
1
2

30
7
6

23

16

26

18

10

13

22

24
25

22
5
18

29
19

20
17

14

15

. 2.5. -: 1 ; 2 ;
3 ; 4 ; 5 ;
6 ; 7 ; 8 ;
9 ; 10 ; 11 ; 12 ;
13 ; 14 ; 15 ;
16 ; 17 ; 18 ;
19 ; 20 - ; 22 24, 26 ;
25 ; 27 ; 28 ; 29 ; 30

:
1. Bio-Flo;
2. ;
3. ( );
4. ;
5. , , , , .
:
1. ( -)
1 ;
2. -
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3. -,
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6. ;
7. () ;
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-26-

2.
2.3. : ,

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( ) -
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11. ;
12. steady-state ( , / );
13. , steady-state, (
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1. ?
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3. ?
4. ?

2.4.

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-27-

2.
2.4.

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( C/N), - ,
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1. R. eutrophus B5786;
2. ;
3. , , ;
4. , , , , , ;
5. ( -).

. .

-28-

2.
2.4.

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0,5 ( -) 2,5 ,
1,5 , 2
( 1 100 );
( 5 10 / );
200 ;
300 ,
( );
100 ( ), ;
- ;
(, 1, 1, 1);
( )
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2. 34

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3. . 2.3.
2.3
R. eutropha

,
2

,
3

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4

T, 0C

, /

. .

-29-

2.
2.4.

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1. ?
2.
?
3.
?

2.5.


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, .
( ) :
dX/d t= X,
(1)
dX/dt , , ( );
(, 0,1 1,
10 % ). , ,

lnX = lnX0 + t,
(2)
0 t.
lnX
.
( ) v
:
v=dX/dt.
(3)

. .

-30-

2.

2.5. .

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() S,
( )
(. 2.6, ). , ,
(. 2.6, ).

. 2.6.
: S ( );
I ( )


, .
: , ,
:
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(4)
qs ( ),
Yp/s ( ), X , P , S .
Y ( ) , :
Y = X/S S,
(5)
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, .
. .

-31-

2.

2.5. .

,
, , .

.
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Ks, Ki, max .


t2 t1
(2).
, . , max Ks
1/ 1/S, (. 2.7).

. 2.7. max Ks (
): S: 1/max 1/Ks

(Ki),
.
, : max Ki
(. 2.8).

. .

-32-

2.

2.5. .

. 2.8. max Ki (
): I: 1/max 1/ Ki

:
.

:
1. , () ( .1),
. . 2.4.
2.4
NH4Cl R. utropha
NH4Cl, (
- /
) - -

R.eutropha , R.eutropha
/

Y, /

2.
R.eutropha NH4Cl .
, 1/

NH4Cl, /
3.

.

. .

-33-

2.

2.5. .

1/,

1/S NH4Cl, /
4. Ks R. eutropha.
:
1.
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2. max ?
3. ?

2.6.

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-34-

2.
2.6.

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2) ;
3) .
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-35-

2.
2.6.

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, , , .
, , . .

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1. (. 2.9) , , , (NH4+), (SO3-2), .
, .
, . . 2+ Mg2+.
2.

. 2.9. (:
): ,

2. , -, -.
. .

-36-

2.
2.6.

, . , , , (. 2.10).

. 2.10. (,
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,

3. ,
,
(. 2.11).

. 2.11. (
,
. ,
):
,

,
. , , .

. .

-37-

2.
2.6.


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, , , .

, . , .
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, . : ) , , : , ; )
, ; ) ,
:
,
.

. , , , , . , . , ( 1 ), .
. .
,
,
.
. ,
, ,

. , . , , . ,
, ,
. .

-38-

2.
2.6.

. , ,
,
, , , , , (,
, ).
.

- ,
.
:
1. , R. eutrophus B-5786;
2.

-
;
3. .
:
1. 0,1 % ;
2. 0,1 % ;
3. ;
4. ;
5. 10
;
6.
;
7. ;
8.
.
:
1. ?
.
2. ?
3. ?
4. -?

2.7.
( , )
: ( R. eutrophus B-5786).

. .

-39-

2.
2.7. ( , )

.
,
. .
. . ,
. .
16 %, ,
, . , ,
.
:
- R. eutrophus B-5786, ;
- ;
- ;
- 2 20
40 ;
- ;
- ;
- 1 , 100 50 ;
- ;
- H2SO4 ;
- 30 %-;
- 50 %- ;
- , ;
- .
:
1. 40 2 , 20 40 ( ).
2. 3 0,5 30 %-
, .
400 . 1 0,5 . .

. .

-40-

2.
2.7. ( , )

3. 1520
.
10 .
4. 10 %- NaOH.
, .
5. , 1 50 %-
2 .
. .
6. ,
. .

.
7. . , NH4CI . 0,382
(..) NH4C1 1 0,1
1 .
0,01 1 . (
50 ): 0,01; 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25.
. 40 . ,
2,5. .
2.5
, %

40


% . -

% .
-

1
2
3
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:
1. ?
2. ?
3. ?

. .

-41-

2.
2.7. ( , )

4. , ?

2.8. (, )

: () - ().
() . , - .
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.

.
:
1. (0,2 %- (200 100 3 H 2 SO 4 );
2. 3 %- HCl;
3. ;
4. ;
5. ;
6. 100 ;
7. 1, 5, 10 ;
8. ;
9. .
:
1. 100 .
2. 20 3 %
3 .
3. 3 9
.
4. 100 ,
,
.
5.
1 .
6. 1 5 ( -

. .

-42-

2.

2.8. (, )

) 15 .
7.
. : 1 5
.
8. .
. 100 1 . 10 100 1 .

= a x v x 100/,
, ;
; .
. 2.6.
2.6
, %

100

%
. -

1
2
3
4

() () -. ()

.

, .
(Alcaligenes, Azotobacter, Pseudomonas). , , - , oA. : ; .

. .

-43-

2.

2.8. (, )

:
1. H2SO4 ;
2. ;
3. (0,5 /);
4. ;
5. ;
6. ;
7. ;
8. ;
9. ;
10. - ;
11. - 99,999 %.
:
1. 45
. (45 ) .
2. 1 , 0,85 0,15 .
3. , , ,
, 90 0. 140 .
4. , , , 0,5 ,
.
.
5. - (GCD Plus, Hewlett Packard, USA).
1
. : , 1 /; 220 0 ;
80 0,
230 0 8 0 ; 250 0; -FFAP, 30 , 0,25 . , ,
.
6.
(0,5 ) , . () . 5,85 6,3. ,
, :
0,5 ;
, = 0,5/ ().
. .

-44-

2.

2.8. (, )

% :
%;
100 %, % = 100/.
. 2.7.
2.7
, %

1
2
3

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1. ?
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3. ?
4. ?
5. - ? .

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-45-

3.

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, , , ,
. - , : ) ; ) , ; ) .
: , , , ,
, , ,
. .
.
- ,

( ) .
. , , .

. , .

( , ), .

. .

-46-

3.

3.1.
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:
;
(GFP) E.oli.
. (, ). ,
.

, , .
, , , , ,
. , . ( , ), , ,
(, ). .
, ,
,
.
. , , . ,
,
;
, . .
, , , . , ,
. .
. 3.1.

. .

-47-

3.
3.1. ( )
3.1

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% .

,
.
E.coli
50 % . , , - , -.
- : ) ; ) , ; )
. - -
. ,
- (. . ,
). , . , , S-S .

, ,
. ,
,
.
, . ,
.
.
. (Ni2+, Co2+, Zn2+ .)
, . , , ()
,
. .

-48-

3.
3.1. ( )

(- ). , - N- . ( ?).
-
-His
. ,
(45). -His ,
, . - .
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Qiagen.
(GFP).
:
1. E. coli;
2. -:
) 20 -HCl, 7,0 100 ;
) 0,9 % NaCl ) 20 ;
) 0,1 % Triton X-100 ) 20 ;
) 5 CaCl2 ) 20 ;
) 6 , 20 -HCl, 7,0, 5 CaCl2 20 ;
( .)
3. ;
4. ;
5. ;
6. .
:
1. 20
-HCl, 7,0 (/) -
(520 ).
2. (4-5 . ./, 20 ).
, .
3. ,
) .

. .

-49-

3.
3.1. ( )

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5. )
4 .
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1. ( - ).
2. ?
3. -?
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4. - )-)?
5. - ?
6. ( ) . , GFP ?
7.
- Clontech Qiagen?

3.2.
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, , , (,
) .
.
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. . ,
,
. , , .
, . ,
. .

-50-

3.
3.2.

. ( ), ( CO2) ..
,
:
, . . , ,
, , . , , . , ( ).
340 , . , ( ) .
.
,
. ,
. , , .
, .
.
.
,
. , . , (,
- 490 , 5-
450 ..). , .
.
: ) ) 2+ .

. .

-51-

3.
3.2.

, . , .

.
O2N

O
O
- P
O
O-

+ H2O

O2N

OH

O
HO P OO-

- ,
- (400420
). .
2+
- .
, .
) :
1. ( 0,05
10, 510-4 MgSO4) . ( );
2. 0,005 - 0,05
10, 510-4 MgSO4 ( );
3. 0,02 NaOH;
4. ;
5. ;
6. ;
7. ;
8. ;
9. .
:
1. 4,5

(30 ) 510 ( ). 4 9 0,02


NaOH. 2, 5, 10, 15 .
2. 0,5 ,

(30 ).

. .

-52-

3.
3.2.

3. 2, 5, 10, 15 1
.
. (D400)

1 .
( , .. 0,5 4,5 0,02 NaOH).
4.
.
V ,
- 400 , 15,2103:

V = 10

D1400 / t1 ,

15,2103

10
.
) :
1. ;
2. (50 HCl pH 8,8,
10 );
3. CaCl2 (100 , 50 HCl pH 8,8);
4. ;
5. ;
6. (1,5 );
7. .
:
1. 500 .
2. 5 ,
.
3. 250 CaCl2 .
4. ,
.
5.
( /), : 1 = 107 /; 1 = 6,6 1015 /.
. , .

. .

-53-

3.
3.2.

:
1. ?
?
2.
?
3.
?
4.
?
5. , , , ?
6. () ?

. .

-54-

4.

. .

-55-

5.



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:
1.
;
2.
.

5.1.
: ( ).

(, ) ,
, , .
.
, ,
,
. , .

, , , , .
:
,
, (. 5.1).

. .

-56-

5.

5.1.

. 5.1. : ;
; ; ;


(, , , , , , , ) (, , , , , ).
.

. .
;
. (, , , )
.

( ). : , , , , , , . . ,
.
.
,
, , , ..
(), (N, N1). .
, .
- ,
.
. .

. .

-57-

5.

5.1.

, , Ca2+ Ba2+ (
) Al3+, Fe3+, K+ Mo2+ ( ), .

. , , , . . , .
(, ), ,
, .
,
, , , . .
:
1. - Seliberia carboxydohydrogena;
2. , - ( );
3. , MgSO4,
(),
, ;
4. -, -3;
5. 1 , , , , ;
6. ( );
7. , : = 80:20 %;
8. (CO, N2, O2).
:
1. : : 0,2
- 7,0.
2. 7 % .
3. 0,1; 0,2; 0,4 0,6 / (
) 1 0.
4.
2 30 .
5. , ,
2 x 2 x 2 .

. .

-58-

5.

5.1.

6. .
7. :
(0,5 /).
8. 0,1 -HCl
7,0 0,01 CaCl 2.
9. , ,

( CaCl 2).
2,02,5 .
10. .
:
1.
?
2. ,
?
3. ?

5.2.
.
-
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.
. . . , , , , , .
( , -, -, - ) ( , , , ,
, ).
. .

-59-

5.
5.2. .

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, .
, ,
.
, . , ,
, .

.


, 2 2.
:
, .
. . ,
. , ,
, , , .
,
. , ,
.
510
.
. , , . .
( ).
. , ,
, 90 % 10 000 1.
,
.
. .

-60-

5.
5.2. .

, ,

, , .
. , , - (),
.
.
:
1. - ;
2. 1 , , ;
6. -3, -;
7. , : = 80:20 %.;
8. (CO, N2, O2).
:
1.

.
2. (. 5.2, ): 2,5 1 100150 0,1
-HCl 7,0;
10 .
3. (. 5.2, ):
64 , 190 , 150
3 250 .
4. ,
, (, . 2, . 3,
), , , ,
.

. .

-61-

5.
5.2. .

. 5.2.

5.
.
6. , .
5.
.
7. .
8. . 5.1.
9. , .

5.1
,

N2

, %
O2
CO

CO2

:
1. ?
2.
?
3.
, , ?
. .

-62-

5.
5.2. .

4. ,
.

. .

-63-

6.

.
:
1. .
2.
.
3. , .
, , . . . , , , . , . in vivo ( )
.
( ) .

. : 1)
, ; 2)
3) . .
:
1) ; 2)
(), ; 3) , , -; 4) ( ) , ().
, , .

. .

-64-

6.

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.

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A
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T A
A
A T
G T

CT

T A
A

A A
T T
C
G

G A A T T C

C T T A A G

in vitro
(. 6.1):
1) ;
2) ,
();
3) , , -;
4) () , .

T
T
A
A

A
A
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T

AA T T
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AA TT
T T AA

AA TT
T T AA

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AT A
A
A
T
T

T
AT A
A
A
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T

. 6.1. E. coli
. E.coli
( ).
, , ( ). ( ) . E. coli, , .

: ,
- .
, , (47 ). ; .
.
, .
.

. .

-65-

6.

( ), . ,
. , ,
, .
- ,
, . .
, , .
() , 816-.

() .
,
, , .
, , () , ().
()
- . , 3- ; . 1979 . ().

, . .
.
, , , . .

, .
, , , . , .
.
in vitro , , . .

-66-

6.

,
. . - .
.
,
.
; , , .
310
. ,
.

.
.
, , (
).
.
.
,
.
.
, ,
.
, -.
, , .
, .
.
, .
, . ,
-. :
1) -
2) , -.
, , ,
, . .
(
);
. .

-67-

6.

. . , -. ,
, -.

6.1. E. coli xli-Blue pGLO


: . E. oli,
E. coli (XL1-Blue)
,
(GFP, green fluorescent protein),
Aequorea victoria. , GFP,
.

, . , .
pGLO,
, (GFP); , - (bla), ; (araC), .
:
1. E. coli (XL1-Blue);
2. (pGLO);
3. ;
4. LB-;
5. , - 200 /;
6. , 20 % ;
7. ;
8. , ;
9. Eppendorf;
10. ;
11. ;
. .

-68-

6.
6.1. E. coli xli-Blue pGLO

12. , (42 ), (37 );


13. ;
14. UV-.
:
1. + .
2. 100
. .
3. + 1 . .
20 .
4. : LB-,
LB/mp-, LB/mp+, LB/amp/ara-, LB/amp/ara+.
5. , .
6.
(0,25 , . 200 / (0,25 , .
0,2 %). ( 25 ), UV-.
7. . (42 ) 25 (!),
. 2-3 .
8. , 500 LB-
(!) 37 30 .
9. .
100 . ,
, (37 ) .
:
1.
.
. 6.1, :
- ()?
- ?
- ?
6.1
+DNA,
LB/amp
+DNA,
LB/amp/ara
-DNA,
LB/amp
. .

-69-

6.
6.1. E. coli xli-Blue pGLO
-DNA, LB

2. ,
. ?
3.
. . = / -
()
1. , (+DNA, LB/amp)
(+DNA, LB/amp/ara).
2.
, . .
:
1. ?
2. ? ?
3.
E.coli? ?
4. ?
? +DNA, LB/amp , ?
5. , ,
+DNA, LB/amp?

6.2. ,
.
E.coli
: E.coli
BL21(DE3) : ( -OL8) proZZObe ( pTZZO2).
E.coli BL21(DE3). ,

-.
:
1. ;

. .

-70-

6.
6.2. , .

2. LB ;
3. 100 2 .; 1 2 .;
4. (- , 200 /);
5. ( -D-);
6. ;
7. ;
8. () ;
9. ;
10. ;
11. .
:
1. Obe proZZ-Obe.
2. 100 20
LB-, 200 / 23
.
37 590 = 0,50,6.
4560 . .
4. . -23 (34 .
/,
5 , 15 ).
5. 1 200 LB-
200 /.
, LB-.
6. 37 .
, 590
.
7. 590 = 0,60,8 1 .
20 . .
( 100 /).
8. ,
. 3. ,
, ,
. 4.
9. 590 .
10. , .1.
11. , (0,9 % NaCl),
. .
:
1. ?

. .

-71-

6.
6.2. , .

2. ?
3. .coli
7. -,
?
4. .coli BL21(DE3),
?
5. , .11.
.
6. ?
?
7. .coli BL21(DE3)?

. .

-72-

7.

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:
, ,
.

.

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, ; 2)
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, () ,
, ,
.

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.

, . -, , , , , , , , , . . ,
. , , . , ,
, /-. .
, . . .

-73-

7.

,
, , .
.
.
,
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). ,
, . Bacillus megaterium , .
.
- -,
/-.
,
.

7.1.
.

: (,
); .


,
. (, .) . ,
. .
, . ,
,
. .

-74-

7.
7.1. .

. , ,
.
. . . , , , .
. , .
, ,

/ .

, .
, ,
:
, , , (
)
; , ,
.
:
1. ;
2. ( );
3. ;
4. ;
5. ;
6. ;
7. ;
8. ;
9. ;
10. .
:
1. (5 ) .
2. 10
20 .
. .

-75-

7.
7.1. .

3. 10 (NH4Cl) 20 .
4. .
5.
- .
6. .
7. .
8. 100
.
9. .
10. ( ) (25 0).
11. .
12. () 3 ( ,
), .
13. . 6.1.
14.
(. 6.1),
(. 6.2) :
V = M/1 23 . .,
V (/), , 1 . . .
6.1

,
/

. .

-76-

7.
7.1. .

. 7.1.

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. 7.2.

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1. ?
2.
?
3.
?

. .

-77-

8.

. .

-78-


1
1. : 8 / . . , . .
. : , 1987.
2. : / . . ,
. . . . : , 1988.
3. , . . : : . . . . /
. . , . . . . : , 1990.
4. , . . / . . . :
- , 2004.
5. , . . / . . . : -
, 2002.
6. , . . / .. , . . . 3- .
. : - , 1992.
7. , . . /
. . . . : , 1978.
8. , . . / . . . . :
, 1984.
2
1. : 8 / . . . .
. : , 1987.
2. : / . . ,
. . . . : , 1988.
3. , . . : : . . . . /
. . , . . . . : , 1990.
4. , . . / . . . : -
, 2002.
5. , . . / . . . . : ,
1981. 240 .
6. , . . / . . , . . . 3- .
. : - , 2001.
7. . . : , 1972.
8. , . . /
. . . . : , 1978.
9. , . . / . . .
. : , 1976.
10. , . / . . . : , 1985.

. .

-79-

11. , . . /
. . , . . . : , 1988. 278 .
3
1. : 8 / . . . .
. : , 1987.
2. () / .
. . . : , 1988.
3. / . . . ,
. . , . . . : - , 1976.
4. , . / . . . : , 1985.
5. / . . . , . .
. : - , 1983. 278 .
4
1. , . . / .. , . . ,
. . . . : , 1987.
2. , . . /
. , . . . : , 2002.
3. () / . . . . : , 1988.
4. , . / . . . : , 1985.
5. Maxam, A. M. A new method of sequencing DNA / A. M. Maxam,
W. Gilbert // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V. 74. P. 560564.
6. Sanger, F. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors / F. Sanger,
S. Niclein, A.R. Coulson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1977. V. 74.
P. 54635467.
5
1. , . . : . / . . . : , 1997. 141 .
2. , . . / . . . : -
, 1999. 252 .
3. , . . / . . ,
. . . . : , 2006.
4. / . . . .
. : , 1990.

6
1. , . . : . / . . . : , 1997. 141 .
. .

-80-

2. , . . / . . . : -
, 1999. 252 .
3. -
: . / . . . ,
. . , . . , . . , . . ,
. . , . . ; . . ..
. . : - , 1991.
4. , . . /
. . , . . , . . , . . . . : , 1990.

. .

-81-