UNAH | FACULTAD DE CIENCIAS | ESCUELA DE MICROBIOLOGA

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AGENTES
NEMATFAGOS
EVALUADOS
Duddingtonia flagrans
Arthrobotrys oligospora, Arthrobotrys superba,
Arthrobotrys dactyloides, Arthrobotrys botryospora,
Arthrobotrys scaphoides, Monacrosporium gephyropagum

NEMTODOS UTILIZADOS
Haemonchus contortus

FORMAS DE CULTIVO & AISLAMIENTO (CONDICIONES Y RESULTADOS)
A. OBTENCIN DE HONGOS NEMATFAGOS DEL SUELO

TCNICA DE ROCO MODIFICADA (Larsen, et al. 1991)

MEDIO: AGAR AGUA [2%] [0.02 % clorhidrato de tetraciclina]

MUESTRA: Suelo, heces fecales animales, desechos de hojas (hojarasca) y abono (mantillo)

FORMA DE SIEMBRA

Se roci una mezcla homognea de la muestra compuesta en la placa de cultivo con el medio sealado en forma de cruz. Fue dejado en
oscuridad y humedad hasta el crecimiento visible de colonias con micelio. Se preparo una suspensin acuosa de los hongos encontrados
para su posterior utilizacin.

B. INFECCIN DE LARVAS (NEMTODOS: Haemonchus contortus)

Se utiliz la suspensin preparada en la seccin anterior y se colocaron larvas de Haemonchus contortus, se le dejo reposar para
permitir accin nematofgica por parte de los hongos. Se mantuvo dicha solucin como cultivo estril.

C. EVALUACIN DE LARVAS & HONGOS NEMATFAGOS

C.1 SIEMBRA DE LARVAS Y SUSPENSIN DE HONGOS

Se utiliz 3mL de cultivo acuoso de larvas y solucin estril de hongos descrita en la seccin B. Esta solucin fue sembrada en placas de
AGAR AGUA [2%] [0.02 % clorhidrato de tetraciclina] a 26C. Dichas placas fueron cebadas con solucin de la seccin A al menos 2 veces
por semana durante 3 semanas.

C.2 EVALUACIN DE LARVAS E IDENTIFICACIN DE HONGOS NEMATFAGOS

3,500 larvas de Haemonchus contortus fueron examinadas cada 2 o 3 das, buscando signos visibles de actividad nematofgica por parte
de los hongos aun no identificados.

Las conidias y clamidosporas presentes fueron fotografiadas, escaneadas y en algunos casos cuidadosamente dibujadas para facilitar su
identificacin.





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C.3 CRITERIOS DE IDENTIFICACIN PARA LOS HONGOS NEMATFAGOS

1. Microfotografia
2. Uso de claves (De Hoog 1985; Rubner 1996)
a. Tamao de conidias y clamidosporas
b. Formas
c. Nmero y configuracin de conidias
d. Presencia o ausencia de clamidosporas
e. Tipo de estructura con actividad nematfaga y forma de accin.

C.4 EVALUACIN DE CONIDIAS

Las conidias obtenidas del cultivo fueron resembradas en medios de Agar-Maiz y enviadas a laboratorios de referencia para su
identificacin. En algunos casos fue necesario el uso de microscopia electrnica de barrido (SEM) para su observacin e identificacin
basados en criterios ampliamente discutidos en bibliografas consultadas. Conidias y clamidosporas de Duddingtonia flagrans fueron
montadas en cubos de 1 cm
2
, secados por 12 horas y luego colocados en placas de aluminio con receptculos de oro. Se utiliz un
microscopio electrnico Phillips XL20. Las fotografas de los hallazgos se encuentran disponibles en la seccin multimedia del presente
documento.

C.5 RESULTADOS

Las especies identificadas de los hongos nematfagos son las siguientes: Duddingtonia flagrans, Arthrobotrys oligospora, Arthrobotrys
superba, Arthrobotrys dactyloides, Arthrobotrys botryospora, Arthrobotrys scaphoides, Monacrosporium gephyropagum.

Se realizaron 384 cultivos con muestras de suelo y otros sustratos descritos en la seccin A. 5 aislamientos de D. flagrans y 73
aislamientos de los otros hongos nematfagos previamente listados. Se encontraron ciertas variaciones genticas muy puntuales pero
sin repercusin real.

Se utilizo una tcnica descrita por (Grnvold, Wolstrup, Nansen, Henriksen, Larsen & Bresciani 1993) para cuantificar la cantidad de
clamidosporas presentes en un solo grano de cebada, el resultado fue de aproximadamente 250,000 clamidosporas.

SECCIN MORFOLOGA CELULAR & COLONIAL


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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Durand D, et. al.. Survey of nematophagous fungi in South Africa. Onderstepoort Journal of Veterinary
Research. 2005;(72).

2. Meyling N. Methods for isolation of entomopathogenic fungi from the soil environment: Laboratory
Manual. 1st ed. Frederiksberg C, Denmark: Department of Ecology, Faculty of Life Sciences, University
of Copenhagen; 2007.