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Centre Hospitalo-Universitaire Dr Benbadis

Constantine
Laboratoire de Toxicologie
Cours de 1
e
anne rsidanat 2013/2014

La toxicit aigue

Ralis et prsent par : Khaoula KOULOUGHLI
Le 19 Novembre 2013

Plan :


Introduction la toxicologie ;
Toxicit aigue ;
Conclusion ;
Bibliographie.

INTRODUCTION
A LA
TOXICOLOGIE

Le mot toxicologie a t cr au XVII sicle. A une origine
grec : Toxikon : flche empoisonne.
Logos : science => La science des poisons.
=> Au dbut il sagissait de lart de confectionner des poisons.

Certains dveloppaient lart de se prmunir contre les effet
des poisons : Le roi romain Mithridate consommait
rgulirement des dcoctions contenant un mlange de 36
poisons, afin de se protger contre les attentats des ses
ennemis. Il fut emprisonn par ses ennemis et choua se
suicider par des poisons ! (1)
1. Historique de la toxicologie, de lart
la science :

1. Historique de la toxicologie de lart la
science:
Lart sest dvelopp en une science :
Paracelse (1493-1541) le pre de la toxicologie tait le
premier reprsentant de la pense scientifique.
Il dveloppa le paradigme valable en allopathie :
seule la dose fait le poison .

Durant les annes 1850 : la dcouverte des ATB et des
anesthsiques, a donn naissance la toxicologie tel quon
la connat aujourdhui, vue les nombreux incidents
dempoisonnement par les mdicaments. (2)

Entre 1890 1900 : Suite la dcouverte des vitamines et
de la radioactivit , la toxicologie a trouv sa place pour les
tester et conclure sils taient nocifs ou bnfiques pour la
sant par des essais sur les animaux. (2)

2. La toxicologie moderne :
Science multidisciplinaire qui tudie les toxiques :
leur origine, leur proprits physiques, chimiques et
biologiques, leurs biotransformations, leurs
modalits et mcanismes d'action sur les systmes
vivants, leur dtection et leur quantification, les
moyens de combattre leurs actions nocives par la
mise en uvre de procds thrapeutiques
appropris et de mesures de prvention.

Lvaluation du risque reprsente un lment
important dans la protection de la sant des
individus, et un objectif particulier de la toxicologie.

La toxicologie a une histoire varie et
intressante. Cest peut tre une science qui
a grandit et qui a prospr par des emprunts
auprs des autres disciplines. Une science
qui a souffert de labsence dun seul but Il
en a rsult un domaine passionnant,
innovant et diversifi qui sert la science et la
communaut.

Michael A. Gallo, History and scope of Toxicology.

3. Domaine de la toxicologie :
Toxicologie mdico-lgale.
Toxicologie professionnelle (Industrie, Agriculture).
Hygine alimentaire (additifs et rsidus).
Hygine sociale (toxicomanie).
Ecotoxicologie: toxicologie environnementale.
Toxicologie rglementaire (limite et interdiction
demploi de substances ventuellement toxiques).
Biotoxicologie (toxicologie exprimentale,
descriptive et clinique).

4. Dfinitions:

A. Toxique :

un poison, ou toxique est toute substance qui, aprs
pntration dans lorganisme, par quelque voie que ce soit,
une dose relativement leve en une ou plusieurs fois trs
rapproches ou par petites doses longtemps rptes,
provoque, de faon passagre ou durable, des troubles dune
ou plusieurs fonctions ou des lsions, troubles pouvant aller
jusqu lannihilation complte et mme provoquer la mort
(Fabre et Truhaut).

Cette dfinition permet dj de distinguer des phnomne
de toxicit aigu ou subaigu et des effets de toxicit long
terme dite chronique. (3)

Classification des toxiques :
Les toxiques peuvent tre classs en fonction de plusieurs
critres :
Chimique : mtaux, hydrocarbure aromatique;
Physique ;
Biologique : mycotoxine,
Organes cibles : cardiotoxique, nphrologique
Effets biochimiques : inhibition enzymatique;
Effets sur lorganisme : cancrognes, mutagnse.
B. Toxicit et Intoxication :
Toxicit : caractre dun toxique.
On distingue trois types de toxicits : aigue, subaigu et
chronique. (3)
La toxicit dune substance peut tre influencs par
plusieurs facteurs : facteurs lis la substance, lis
lorganisme, environnementaux
Par le terme dintoxication on dsigne lintensit de la
souffrance cellulaire par action du toxique sur elle. Elle
reprsente non seulement labsorption dun toxique, mais
aussi la mise en vidence clinique dun empoisonnement.(4)
C. Etiologie des intoxications :
Suicide ou tentative de suicide ( par des mdicaments,
CO, pesticides, produits domestiques);
Empoisonnement criminel (par arsenic, cuivre, cyanure) ;
Empoisonnement accidentel (eau de javel);
Intoxication alimentaire (champignon toxique);
Intoxication professionnelle (en milieu industriel ou
agricole);
Intoxication due la pollution.
E. Forme dintoxication (4):
Intoxication Dose Dure
dexposition
Exemple Etat final
Toxicit aigue Une fois 24H-14jrs Test DL50
Test de
Draize
Mort
Etat
dirritation
Toxicit
subaigu
Plusieurs
fois
< un mois / Dommag
e aux
organes
Toxicit
subchronique
Plusieurs
fois

< 10%
esprance de
vie
No observed
effect level
NOEL
/
Toxicit
chronique
Plusieurs
fois

>10%
esprance de
vie
Test
concernant
le pouvoir
cancrigne
Noplasi
es
F. Exposition et effet :
Effet :
Modification biochimique, cellulaire ou
physiologique, dcoulant de lexposition une
substance chimique (1).

Exposition :
Lexposition prcde les intoxications.
Peut avec lexpression dose dexposition,
dsigner la dose dun toxique dans le sens anglo-
saxon : intake (1).

Effet
Aigu Chronique
Aigue -Effet court terme
- Exposition court
terme
- (ex. : irritation
cutane cause par
le contact avec une
solution trs dilue
dacide sulfurique)
-Effet long terme
- Exposition court terme
- (Ex : trouble respiratoire
persistant la suite dune
courte inhalation dune
forte concentration de
chlore).
chroniqu
e
-Effet court terme
- Exposition long
terme
- (ex. :
sensibilisation
cutane lthylne
diamine la suite
dun contact pendant
plusieurs annes)
-Effet long terme
- Exposition long terme
- (ex. : cancer du foie, du
poumon, du cerveau et du
systme hmatopotique
caus par lexposition
des doses leves de
chlorure de vinyle
pendant plusieurs
annes)

En pratique, en raison de lutilisation
des mots aigu et chronique
conjointement avec exposition ou
avec intoxication, certains auteurs
recommandent den rserver lusage
pour dcrire la nature des effets
rsultants dune intoxication. (Winder
et al. 1997; Lipnial-Gawlik, 1998) (1).
J. Relation dose-rponse:
Seule la dose fait le poison.
Dfinition de la dose :
Dsigne la quantit absolue de toxique laquelle un
organisme est expos.
Selon le contexte il dsigne aussi la quantit absolue
dun toxique auquel un organisme est expos par unit
de masse corporelle et par unit de temps (1).

J. Relation dose-rponse:
Dfinition de la rponse :

Nombre dindividus ou proportion dune
population prsentant un effet donn la suite
dune exposition une substance chimique (2).
J. Relation dose-rponse:
La courbe dose-rponse :
La courbe entre la dose dune substance introduite
dans un organisme et la rponse quelle dtermine
se matrialise habituellement par une courbe en S
(3).
En gnral, plus la dose augmente, plus la rponse
augmente soit par sa svrit, soit par le
pourcentage des individus affects.


J. Relation dose-rponse:
J. Relation dose-rponse:

LA TOXICITE
AIGUE
I. Toxicit aigue :

Dfinition :

Dsigne les effets nocifs (aigus) rsultant de
l'exposition une seule forte dose d'un produit ou de
multiples doses sur une priode ne dpassant pas 24
heures.

cest la consquence dun blocage immdiat des
fonctions des organes vitaux.
En gnral lintoxication volue rapidement vers la
gurison ou peut aboutir la mort.


II. Evaluation de la toxicit aigue :
Base sur des tudes qualitative et quantitative :

1. Etudes exprimentales in vivo;
2. Etudes exprimentales in vitro;
3. Etudes pidmiologiques;
4. Etudes thoriques (par modlisation).
1. Etudes exprimentales in vivo :


La pluspart des tudes sur la toxicit aigue
(o la manifestation finale typique est la
mort(4)) sont programmes pour
dterminer la DL50 du toxique.
1. Evaluation de la toxicit aigue
(in vivo) :
A. Dtermination de la DMM :
Cest la dose minimal de substance capable de
tuer un animal par administration intraveineuse
lente.
La mort est dfinie par larrt cardiaque.
Intret :
La DMM aide lexprimentateur choisir les
doses tester pour la dtermination de la DL50.

Etudes exprimentales in vivo :
B. La DL50 :
Estimation statique dune dose unique de produit
suppose tuer 50% des animaux, exprime en mg de
substance/kg de poids tout en mentionnant lanimal et la
voie dadministration .
Remarques :
Dans certains cas, particulirement pour les produits
faiblement toxiques, il nest pas toujours ncessaire de
dterminer la DL50 avec prcision : des valeurs
approches suffisent (5).
Quand lexposition se fait par inhalation, la valeur retenue
est soit la concentration ltale 50 (CL50) pour une dure
dexposition dtermine.
Soit le temps ltal (TL50) pour une concentration
dtermine du toxique dans lair.
Dispositif exprimental pour
dtermination de la DL50 :
La substance :

Avant de procder l'essai, le laboratoire doit rassembler
toutes les informations disponibles sur la substance
d'essai :
Son identit ;
Sa structure chimiques;
Ses proprits physico-chimiques;
Les rsultats de tous les autres essais de toxicit in vitro
et in vivo;
Les donnes toxicologiques sur des analogues de
structure ou des mlanges semblables (6).
Dispositif exprimental pour
dtermination de la DL50 :
Slection de lespce animale :
=> Gnralement deux spces:
(variabilit dune espce une autre).
Exemple : Benzene : la CL50 est de 13 700ppm pour
une exposition de 4H pour le rat. 10 400ppm pour la
souris pour une exposition de 7H. (7)

=> Des deux sexes, jeunes et ags (diffrence de
sensibilit).
Exemple : Influence de lge : Benzne : La DL50 du
benzene par voie orale chez les rongeurs se situe aux
alentours de 5000mg/kg. Les jeunes rat sont plus
sensibles : DL50 = 3400mg/kg chez les rats ags de 14
jours.

Dispositif exprimental :
Voie dadministration :

- Celle de lexposition humaine:
Ladministration orale par gavage est la plus frquente.
- cutane et respiratoire sont de plus en plus utilises (non
seulement pour les produits administrs par cette voie,
mais aussi pour les substance causant des problmes de
toxicologie professionnelle).

On utilise galement une administration parentrale:
pour dterminer la vitesse et limportance de labsorption
par les voies cutanes et orales (5).
Dispositif exprimental :

La dose :

Pour dterminer correctement la DL50, il est
important de slectionner :
* Une dose qui tuera environ la moiti des animaux ;
* Une dose qui en tuera plus de la moiti, mais de
prfrence moins de 90% ;
* Une dose qui en tuera moins de la moiti, mais de
prfrence plus de 10%.
Dispositif exprimental :
Le nombre des animaux :
Lessai est paratiqu sur 5 6 lots. Tout les animaux
du mme lot reoivent la mme dose (dose unique)
(Alain Viala).

La prcision de la DL50 est amliore en
augmentant le nombre danimaux par dose et en
diminuant le rapport entre deux doses succssives.

La plupart des exprimentateurs utilisent 40 50
animaux et des rapports allant de 1,2 et 1,5 (5).

Dispositif exprimental :
Facteurs environnementaux :
Le conditionnement peut influencer la DL50 :
Il a t prouv (Balazs, 1976), que les rats vivants dans
des cages individuelles avaient une DL50 pour
lisoprotrenol (DL50=50mg/kg) beaucoup plus infrieure
celle enregistre chez les rats vivants en groupe
(800mg/kg).
La temprature peut modifier la toxicit :
La toxicit de latropine, strychnine, nicotine, est
augmente chez lanimal expos au froid.
Certains organophosphors voient leur toxicit augmente
par lhypothermie (malathion, sarin). Chez dautres la
toxicit sera rduite dans ces conditions (parathion).
Lhumidit relative pourrait augmenter la toxicit.


Dispositif exprimental :
Examens :

Aprs ladministration, les animaux sont observs
pendant 14 jours au cours desquels les examens
cliniques sont frquents (3).

Les animaux demeurs vivants la fin de lessai
sont sacrifis.
Tous les animaux (morts en cours dessai et sacrifis
en fin dessai) font lobjet dune autopsie (3).
Protocole exprimental :
On peut remarquer certaine variabilit des protocoles
dans la rgmentation de chaque pays :
Tableau : y Kathryn Chapman, NC3Rs; Sally Robinson,
AstraZeneca. Challenging the regulatory requirement for acute
toxicity studies in the development of new medicines. Worksho
report, May 2007.

EEC USA Japan
Espce 2 2 ( 1 non
rongeur)
2 (1 non
rongeur)
Voie
dadministration
2 2 1
Jours
dobservation
7-14 14 14
Mthodes de dtermination
de la DL50 :


1. Mthode de Trvan ;
2. Mthode Bliss ;
3. Mthode Lietchfield et Wilcoxon ;
4. Mthode Miller et Tainter;
5. Mthode Kraber et Berhens;
6. Autre mthode.

1. Mthode de Trvan (1927) :

Principe :

Administration de doses croissantes de la substance
tester chez tout les animaux du lot tout en notant le
pourcentage de mortalit.
=> Obtension dune courbe sgmoide.
Courbe de Trevan :
% de mortali = f(dose)
Courbe de Trvan :

Inconvnients de la mthode de
Trvan :
Elle prsente deux inconvenients :

1. Une grande partie de la courbe nest pas
exploitable (DL05 et DL95).

2. Le nombre danimaux utiliss est trs elev.
Selon Trvan un nombre de 30 animaux constitue
un minimum.
2. Mthode de Bliss (1938) :

Principe :

Linarisation de la courbe de Trvan.
=> Les pourcentages de mortalit sont remplacs
par les probits .
=> La dose est remplac par le logarythme dcimal
de la dose.

Bliss : Probits = f(LogDose)
Mthode de Bliss :
Probits
Log dose
5
Log (dl50)
Les units probits :
Se sont des cart-types rguliers au tour de la
moyenne. La moyenne est fixe zro.
Pour viter les valeurs ngatives les units probits
sont obtenues en ajoutant 5, de sorte que le
systme stablit ainsi (5) :

Ecarts probits % de
rponse
-3
-2
-1
0
1
2
3
2
3
4
5
6
7
8
0.1
2.3
15.9
50.0
84.1
97.7
99.9
Avantages et inconvnients de la
mthode de Bliss :
Avantage :
Suffisemment prcise et peut tre utilise
avantageusement en premire analyse.
Inconvnient :
Le trac de la droite de rgression entraine des
erreurs parfois notables (il est ncessaire de
dfinir la position de cette droite par des calculs
laborieux).
3. La mthode Litchfeild
et Wilcoxon (1943):

Principe :
Tracer le graphique : probit en fonction du Log de la
concentration. Une mthode semi-graphique.
Determine : DL16, DL50, DL84.
Le calcul de la pente du graphique (S) :
permet de dfinir lintervalle de confiance. Ensuite on
dtermine le facteur de correction (f DL50).
3. La mthode Litchfeild
et Wilcoxon (1943):
3. Mthode de Litchfeild et
Wilcoxon :
Calculs :
La pente (S) :

Facteur de correction fDL50 :

N : est le nombre danimaux qui ont t utilis pour obtenir les points situs entre
DL16 - DL84.
Limite de confiance de la DL50 :


u: DL50 de rfrence
4. Mthode de Miller
et Tainter (1944):
Principe :

Cest une mthode graphique.



Avec correction des valeurs 100% et 00% l o le
probit tend vers linfini.
Cest une mthode : pratique, simple et rapide.

Sur un papier logarythme probit:
% mortalit (probit) = f(LogDose).

4. Miller et tainter correction
des 0 et 100% :

Correction du 0% :
Y(0) = 50/N.
Correction du 100% :
Y(100) = (100N-50)/N.

N : cest le nombre des animaux des lots qui ont donn les pourcentage de
mortalit 0 et 100%.
4. Miller et Tainter calculs :
Calcul de lcart type de la DL50 :
S = (dl84% - dl16%)/2
Lcart la moyenne :
E = 2S/ 2N
N : nombre totale danimaux dans les groupes qui ont donn le
pourcentage de mortalit [7,2 , 93%].
Lintervalle de confiance :
dl50 ] u E, u+ E [
U : DL50 de rfrence.
5. Mthode de Kraber et Behens :
Principe :
Cest une mthode arythmtique.
Base sur lapproximation par calcul rapproch de la
DL50.



A=la diffrence entre 2 doses successives ;
B=moyenne de morts entre 2 doses successives ;
N=nombre moyen danimaux par lot.
=> Cette mthode manque de prcision.




DL50= (DL100-AB) N
6. Exemple dautres Mthodes :
Lorcke (1983) (8):
Offre la possibilit d'obtenir avec 13 animaux
exprimentaux des informations adquates sur la
toxicit aigu et sur la DL50.

Elle se ralise en deux phases (9) :

Phase I : =>Trois groupes de trois souris.
=>Chaque groupe reois une dose.
Observation pendant 24H pour mortalit et modification
du comportament.
Phase II : 3 4 groupes dune souris
Administration de doses en fonction des rsultats de la
premire phase.

6. Mthode de Lorcke (1983):
La moyenne gomtrique entre la dose minimale qui
tue les souris et la dose maximale qui ne tue pas les
souris reprsente la DL50.

Avantage : sacrifie peu danimaux (13 animaux au
maximum).

Inconvnients : lexactitude, la reproductibilit, la
fiabilit sont remises en questions.

Comparaison des mthodes
lvaluation de la DL50 :
Tableau : Deora Paramveer S., et al, Effective alternative
methods of LD50 help to save number of experimental animals.
J. Chem. Pharm. Res., 2010, 2(6):450-453 (10) :



Kraber Miller et
Tainter
Lorcke
Nombre de
Rongeurs
important Important Appropri
Dpenses Eleve Eleve Moyenne
Exactitude des
rsultats
Inexacte Inexacte Douteuse
Exemple de dtermination de la DL50 pour le
sulfate de Zinc par la mthode de Karber :


5 animaux dans chaque groupe : des
souris ages de 10 12 semaines.


Exemple de DL50 de quelques
toxiques chez le rat par voie orale:
Vitamine C : 11 900 mg/kg;
Bisphnol A : 3250 mg/kg;
sel de table : 3 000 mg/kg;
THC : 1270 mg/kg;
cafine : 192 mg/kg;
Digitaline : de 5 10 mg/kg;
Strychnine : 1 mg/kg;
cyanure : de 0,5 3,0 mg/kg;
dioxine : 0,02 mg/kg;
toxine botulique : 1 ng/kg.

Intret de la DL50 :
Classification des substances selon leurs
toxicit, chelle de Glossin Smith et Hodge :




Dose orale
probablement
mortelle (humain)

Indice ou classe de
toxicit

Moins de 5mg/kg Ultra-toxique
5-50 mg/kg Extrmement toxique
50-500 mg/kg Trs toxique
0.5-5g/kg Moyennement toxique
5-15g/kg Lgrement toxique
Plus de 15g/kg Non toxique
Intret de la DL50 :
La dtermination de la DL50 est une opportunit
pour derterminer leffet toxique spcifique au
produit, lorgane cible, et fournis des donnes
pour dterminer les doses utilises dans les
tudes long terme;
Programmation des essais thrapeutiques chez
lhomme ;
Evaluation du danger en cas de surdosage;
Contrle de qualit ;
Mdicaments: calcul d'un index
thrapeutique .


Intret de la DL50 :
Pour evaluer lutilit des donnes fournies par
les essais de toxicit aigue, un groupe dexperts
coordonn par NC3R comprenant 15 socits
pharmaceutiques et des organisations de
recherche a t tablit.

Des questionnaires ont t remplis par les
membres du groupe de travail afin de dterminer
les raisons de la conduite tudes de toxicit
aigu.

Intret de la DL50 :
y Kathryn Chapman, NC3Rs; Sally Robinson, AstraZeneca. Challenging the
regulatory requirement for acute toxicity studies in the development of new
medicines. Worksho report, May 2007. (11)

Limites de la DL50 :
Ne concerne que la mortalit et ne donne aucune
information sur les mcanismes et la nature des
lesions ;

Rsultats obtenus ne prjugent pas forcement de ce
qui pourrait tre observer aprs administration chez
lhomme (diffrence de ractivit biologique entre
lhomme et lanimal) ;

Apprciation grossire et prliminaire, influence par
plusieurs facteurs (espce animale, sexe, ge)


Limite de la DL50:

La DL50 est critique sur le plan thique vu la
souffrance et le nombre de mortalit importante
quelle engendre aux animaux de laboratoire.

Le FRAME (Fonds pour remplacement des
animaux en exprimentation mdicale) estime
que la DL50 est un test inutil, cruel et
scientifiquement invalide (www.frame.org.uk).
C. Mthodes alternatives aux
mthodes conventionnelles:
LOCDE a fait de la DL
50
un test officiel (ligne
directrice pour les essais 401) en 1981.
En 1987, elle a rduit 20 au lieu de 30 le
nombre minimal d'animaux que doit contenir
l'chantillon test.
En 2001, elle a approuv trois nouvelles
mthodes, destines remplacer la DL
50
et
occasionner une moindre souffrance animale.
La ligne directrice 401 a finalement t abroge
par l'OCDE, le 17 dcembre 2002.

C. Mthodes alternatives (6) :

OCDE dcrit trois tests alternatifs :

1) Mthode de la dose prdtermine (ligne
directrice 420, 2001).
2) Mthode de classe de toxicit aigue (___ 423,
2001).
3) Mthode ajustement de doses (____ 425,
2008).
C. Mthodes alternatives
Espce animale et conditions de lessai :
Le rat est lespce prfr.
Femelles nullipares, non gravide, age de 8 12
semaines.
T = 22 C + ou 3C.
HR = 50 60%.
Un clairage artificiel est utilis :12 heures de lumire
et 12 heures d'obscurit.
Le nombre d'animaux par cage ne doit pas faire
obstacle une observation prcise de chaque animal.
Mthodes alternatives:
1) Mthode de la dose prdtermine :
La mort nest pas leffet observ.
Mthode squentielle, s'appuit sur l'observation de
signes manifestes de toxicit apparaissant aprs
traitement une dose prdtermine.

La dose initiale est choisie sur la base dune tude
d'orientation.
Les autres groupes danimaux reoivent des doses
plus fortes ou moins fortes en fonction de labsence
ou de la prsence deffets toxiques.



Mthodes alternatives /dose
prdtermine :
Avantages :
Reproductible;
Utilise moins danimaux;
Occasionnant moins de souffrance, que les
mthodes traditionnelles.
Permet de classer des substances par ordre de
toxicit.
Inconvnients:
Ne permet pas de dfinir une valeur prcise de la
DL50.
Mthodes alternatives :
2) mthodes par classe de toxicit aigue :
Ce test se ralise de faon squentielle.
Lots de 3 animaux par substance.
Administration dune dose dorientation : son effet
dterminera le choix de la dose associe la
posologie ultrieure.
Si mortalit < 2 animaux : la dose X 10 ltape
suivante;
Si mortalit >2 animaux la dose est rduite.

Avantage : reproductible, utilise peu danimaux (de 7
8 animaux suffisent), permet de classer les
substances par ordre de toxicit.

Mthodes alternatives :
3) Mthode dajustement de dose :

Il existe plusieurs variantes du mode opratoire de
la mthode de lajustement des doses permettant
d'estimer la DL50.

Celui de lOCDE est bas sur lutilisation dun
minimum d'animaux. Et applique une progression
de doses uniques sur les animaux, un par un, des
intervalles d'au moins 48 heures.

Mthodes alternatives/ Ajustement
de doses :
La mthode permet d'estimer la DL50 avec un
intervalle de confiance.
Ses rsultats autorisent le classement qualitatif et
quantitatif de la substance dans le Systme gnral
harmonis (SGH) de classification des produits
chimiques entranant une toxicit aigu.

Remarque :
Cette mthode s'applique le plus facilement aux
substances entranant la mort en l'espace d'un ou deux
jours.
Elle se prte mal aux cas o la mort est suppose
survenir dans un dlai nettement plus long (au moins
cinq jours).

D. Test de Draize :

Test dvaluation de la toxicit aigue par voie locale.
Son but est de dterminer les produits irritants par
leur application sur la peau ou la muqueuse
conjonctivale de lanimal.

Peau :
Epiderme de lapin intact et scarifi maintenu par un
bandage adhsif. La lecture seffectue aprs 24-
72H.
Des tables dvaluation permettent de dterminer
les scores, chaque score correspond une intensit
de la raction.
D. Test de Draize :

Lindex dirritation correspond la somme des
scores obtenus pour : la corne, liris, les
conjonctives palpbrales et bulbaires.

Le test de Draize est trs ciriqu sur le plan thique.
E. Toxicit aigue par inhalation :

Concerne les gaz, vapeur, darosol ou une
forme mixte:
Animal entier est plac dans une chambre ou
nez seul .
Exposition durant un temps dtermin (4H
selon OCDE) concentration prdfinie.

Problme de transposition des
rsultats des tudes in vivo :
Les diffrences dans le systme ADME entre
lhomme et lanimal ;
Diffrences anatomiques ;
Les suceptibilits individuelles qui conduisent
des rponses diffrentes.
Certains effets ne peuvent tre mis en vidence
chez lanimal par exp: Cphales, vertiges,
nauses.

Relation de transposition :
Concentration Equivalente en Toxicit Humaine
CETH:

CETH=DL50 /(Vd*1000) (mg/l)

Vd : volume de distribution du toxique dans
lorganisme.

Lextrapolation reste approximative car le sujet
idal pour des tudes relatives lhomme cest
lhomme lui-mme.

B. Etudes exprimentales in vitro :
les tests de culture de cellules humaines :
Sont plus prcis que les DL50 chez les animaux.

Les systmes de culture cellulaire peuvent tre amliors
mais ce nest pas le cas de lexprimentation animal.

Cellules humaines donc viter les diffrences despces.

Elles peuvent tre prleves partir dun tissu susceptible
dtre affect par une substance particulire.

Elles permettent dtudier le mcanisme de toxicit
molculaire.
Elles permettent dviter de faire souffrir et de tuer des
animaux.




Les tests alternatifs aux tests de
Draize:
1. Eyetex:
Mesure lirritation oculaire par une protine vgtale
extraite du pois sabre.
Comme la corne ce gel protinique clair devient vitreux
lorsquil est en contact avec une substance irritante.
Avantage:
Sur animal on doit estimer quelle partie de lil du lapin
est rouge et gonfle pas trs prcis.
Avec le test Eyetex, le degr dopacit (dgts) peut
tre mesur par un spectrophotomtre bien plus fiable
que le test de DRAIZE.

Tests alternatifs au test de Draize/
2. Epiderme humain reconstitu :
Couches de peau humaine cultives en laboratoire
pour les tests dirritation cutane. Commercialiss
sous les noms de Skin Squared ou Episkin .

Evaluation:
Examiner les cellules au microscope
=> observer les dgts au niveau des membranes
(extraction des enzymes)
=> dterminer une inflammation ( libration
dinterleukine) .

Avantage:
Mesure du rsultat avec prcision. (dans les tudes
animales on estime les dgts en observant la
rougeur ou lenflure).

Tests alternatifs au test de Draize/
3. Test de fixation du rouge :
Les cellules normales absorbent et retiennent
le rouge neutre.

Si la membrane cellulaire ou les lysosomes
sont endommags par une substance chimique
irritante, la teinture schappe par les
membranes permables.

Un spectrophotomtre mesure la quantit de
teinture chappe.
Tests alternatifs au test de Draize/
4. Les tudes humaines :
En cosmtologie:
Utilisation de volontaires humains pour tester les
nouvelles formulations.

Cest le test le plus fiable.

Grce un patch. On place les substances sur
des petites zones en haut du dos (2 jours).


C. Etude pidmiologiques :
Lpidmiologie est ltude de lvolution des
maladies ou les dcs au sein des populations.
Avantages:
Conditions d'exposition ralistes;
Effets mesurs chez l'homme.

Inconvnients:
Essais coteux, et de longue dure;
tudes rtrospectives;
Effets difficiles quantifier.


D. Modlisation informatique :


Les systmes informatiques professionnels
prvoient la toxicit de nouvelles substances
partir dune banque de donnes de molcules
dont le profil toxicologique est dj dtermin.
Ces systmes se basent sur la relation structure
activit.
CONCLUSION :
Les tudes exprimentales in vivo reste la
mthode la plus utilise, malgr :
_ le problme thique,
_ le problme de transposition.

Les mthodes informatiques et de cultures
cellulaires peuvent tre plus largement pratiqus
en raison de leur simplicit et leur fiabilit.
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