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PROCEDIMIENTO GENERAL PARA LA TINCIN DE GRAM

1. DESPUES DE AISLAR LA COLONIA DE INTERES EN UN PORTAOBJETOS COLOCAR 1 GOTA


DE SOLUCION SALINA ISOTONICA
2. TOMAR UNA COLONIA CON EL ASA ESTERIL
3. SUSPENDER LA COLONIA EN LA GOTA DE SOLUCION SALINA Y EXTENDERLA POR EL
ORTAOBJETOS COMO SE MUESTRA ACONTINUACION.

4. FIJAR EN EL MECHERO HASTA LA EVAPORACION TOTAL DE LA SOLUCION SALINA
5. SEGUIR EL PROCEDIMIENTO DE TINCION DEL SIGUIENTE ESQUEMA


















6. DEJAR SECAR EL PORTAOBJETOS CON AYUDA DE UNA SANITA
7. COLOCAR UNA GOTA DE ACEITE DE INMERSION Y OBSERVAR AL MICROSCOPIO A 100 X
8. RESULTADOS:
A. REPORTAR LAS DIFERENTES MORFOLOGIAS OBSERVADAS: COCOS, BACILOS,
COCO-BACILOS, ETC.
B. REPORTAR SEGN EL COLOR:
I. ROJOS: GRAM NEGATIVOS
II. VIOLETAS: GRAM POSITIVOS
PROTOCOLO GENERAL PARA LA TINCION DE ZIEHL-NELSEN
1. DEPENDIENDO DE LA NATURALEZA DE LA MUESTRA SEGUIR CUALQUIERA DE LOS
SIGUIENTES PROTOCOLOS SE REALIZARAN EN SERIA DE 3 MUESTRAS COMO MINIMO
PARA UNA MAYOR CONFIABILIDAD DEL ENSAYO.
a. PARA MUESTRAS DE ORINA: CENTRIFUGAR 3-5 mL DE ORINA A 3000 RPM
DURANTE 5 MIN DECANTAR EL SOBRENADANTE Y DEPOSITAR EL SEDIMENTO EN
UN PORTAOBJETOS CON AYUDA DE UN ASA ESTERIL EXTENDER LA MUESTRA Y
FIJAR EN MECHERO.
b. PARA MUESTRAS DE ESPUTO: REALIZAR UN FROTIS DIRECTO EN EL
PORTAOBJETOS Y POR OTRO LADO HOMOGENIZAR 3-5 mL (O ELVOLUMEN
RESTANTE EN EL MISMO RECIPIENTE) DE LA MUESTRA CON UN VOLUMEN IGUAL
DE NaOH AL 4 %, AGITAR DURANTE 15 MIN, CENTRIFUGAR A 3000 RPM DURANTE
15 MIN DECANTAR EL SOBRENADANTE; RESUSPENDER EL SEDIMENTO Y
ADICIONAR 1 GOTA DE FENOFTALEINA (INDICADOR) LA SOLUCION SE PONDRA
COLOR ROSA PALIDO; ADICIONAR GOTA A GOTA HCl 4 % HASTA QUE LA
SUSPENCION VIRE A TRASPARENTE (NEUTRA). COLOCAR UNA GOTA DE ESTA
SUSPENCION EN UN PORTAOBJETOS Y EXTENDER CON LA AYUDA DE UNA ASA
ESTERIL, FIJAR CON AYUDA DE UN MECHERO.
2. UNA VEZ FIJADO EL FROTIS CUBRIR EL PORTAOBJETOS CON FUCCINA FENICADA DE
KINYOU (DILUIDA 1:1 EN EL CASO DE LA MARCA HYCEL CAT. 64293) SE CALIENTA
DURANTE 5 MIN HASTA LA EMISION DE VAPORES SIN DEJAR EVAPORAR POR
COMPLETO.
3. LAVAR CON AGUA CORRIENTE, SACUDIENDO HASTA ELIMINAR LOS RESTOS DE AGUA
4. LAVAR CON ALCOHOL ACIDO ORTH HASTA LA DECOLORACION COMPLETA (EN LOS
CASOS DE MUESTRAS DE ORINA TENER CUIDADO C DE NO LAVAR EXCESIVAMENTE YA
QUE SE PUEDE PERDER LA MUESTRA)
5. LAVAR CON AGUA CORRIENTE SACUDIENDO PARA ELIMINAR LOS RESTOS DE AGUA
6. CUBRIR EL PORTAOBJETOS CON AZUL DE METILENO DURANTE 30-90 SEGUNDOS
7. LAVAR REPETIDAS VECES CON AGUA CORRIENTE HASTA QUE YA NO SE OBSERVEN
RESTOS DE COLORANTE
8. SECAR Y OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON OBJETIVO DE 100 X
9. LOS RESULTADO SE REPORTARAN LOS BACILOS ALCOHOL-ACIDO RESISTENTES (BAAR)
POSITIVOS SE OBSERVARAN DE COLOR ROJO BRILLANTE MIENTRAS QUE LOS BAAR
NEGATIVOS SE OBSERVARAN DE COLOR AZUL
10. REPORTAR DE LA SIGUIENTE MANERA
NUMERO DE BAAR
ENCONTRADOS POR CAMPO
INFORME POR EL METODO ATS
(American Thoracic Society)
0 OBSERVAR COMO MINIMO 100 CAMPOS POR
REPLICA
NEGATIVO PARA BAAR (-)
1-2/300 CAMPOS OBSERVADOS NUMERO OBSERVADO(+/-)
1-9/100 CAMPOS OBSERVADOS No MEDIO /100 CAMPOS (POSITIVO
(+))
1-9/10 CAMPOS OBSERVADOS No MEDIO/10 CAMPOS (POSITIVO(++))
1-9/CAMPO No MEDIO/CAMPO (POSITIVO (+++))
>9/CAMPO >9/CAMPO (POSITIVO (++++))

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