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El documento describe el procedimiento general para realizar una tinción de Gram y una tinción de Ziehl-Neelsen. El procedimiento de tinción de Gram incluye aislar una colonia bacteriana, suspenderla en solución salina e incubarla antes de teñirla y observarla al microscopio para identificar la morfología y el color de la bacteria. El procedimiento de tinción de Ziehl-Neelsen se usa para detectar bacterias ácido-alcohol resistentes y también implica teñir una muestra fijada, lavarla con ácido y az
El documento describe el procedimiento general para realizar una tinción de Gram y una tinción de Ziehl-Neelsen. El procedimiento de tinción de Gram incluye aislar una colonia bacteriana, suspenderla en solución salina e incubarla antes de teñirla y observarla al microscopio para identificar la morfología y el color de la bacteria. El procedimiento de tinción de Ziehl-Neelsen se usa para detectar bacterias ácido-alcohol resistentes y también implica teñir una muestra fijada, lavarla con ácido y az
El documento describe el procedimiento general para realizar una tinción de Gram y una tinción de Ziehl-Neelsen. El procedimiento de tinción de Gram incluye aislar una colonia bacteriana, suspenderla en solución salina e incubarla antes de teñirla y observarla al microscopio para identificar la morfología y el color de la bacteria. El procedimiento de tinción de Ziehl-Neelsen se usa para detectar bacterias ácido-alcohol resistentes y también implica teñir una muestra fijada, lavarla con ácido y az
1. DESPUES DE AISLAR LA COLONIA DE INTERES EN UN PORTAOBJETOS COLOCAR 1 GOTA
DE SOLUCION SALINA ISOTONICA 2. TOMAR UNA COLONIA CON EL ASA ESTERIL 3. SUSPENDER LA COLONIA EN LA GOTA DE SOLUCION SALINA Y EXTENDERLA POR EL ORTAOBJETOS COMO SE MUESTRA ACONTINUACION.
4. FIJAR EN EL MECHERO HASTA LA EVAPORACION TOTAL DE LA SOLUCION SALINA 5. SEGUIR EL PROCEDIMIENTO DE TINCION DEL SIGUIENTE ESQUEMA
6. DEJAR SECAR EL PORTAOBJETOS CON AYUDA DE UNA SANITA 7. COLOCAR UNA GOTA DE ACEITE DE INMERSION Y OBSERVAR AL MICROSCOPIO A 100 X 8. RESULTADOS: A. REPORTAR LAS DIFERENTES MORFOLOGIAS OBSERVADAS: COCOS, BACILOS, COCO-BACILOS, ETC. B. REPORTAR SEGN EL COLOR: I. ROJOS: GRAM NEGATIVOS II. VIOLETAS: GRAM POSITIVOS PROTOCOLO GENERAL PARA LA TINCION DE ZIEHL-NELSEN 1. DEPENDIENDO DE LA NATURALEZA DE LA MUESTRA SEGUIR CUALQUIERA DE LOS SIGUIENTES PROTOCOLOS SE REALIZARAN EN SERIA DE 3 MUESTRAS COMO MINIMO PARA UNA MAYOR CONFIABILIDAD DEL ENSAYO. a. PARA MUESTRAS DE ORINA: CENTRIFUGAR 3-5 mL DE ORINA A 3000 RPM DURANTE 5 MIN DECANTAR EL SOBRENADANTE Y DEPOSITAR EL SEDIMENTO EN UN PORTAOBJETOS CON AYUDA DE UN ASA ESTERIL EXTENDER LA MUESTRA Y FIJAR EN MECHERO. b. PARA MUESTRAS DE ESPUTO: REALIZAR UN FROTIS DIRECTO EN EL PORTAOBJETOS Y POR OTRO LADO HOMOGENIZAR 3-5 mL (O ELVOLUMEN RESTANTE EN EL MISMO RECIPIENTE) DE LA MUESTRA CON UN VOLUMEN IGUAL DE NaOH AL 4 %, AGITAR DURANTE 15 MIN, CENTRIFUGAR A 3000 RPM DURANTE 15 MIN DECANTAR EL SOBRENADANTE; RESUSPENDER EL SEDIMENTO Y ADICIONAR 1 GOTA DE FENOFTALEINA (INDICADOR) LA SOLUCION SE PONDRA COLOR ROSA PALIDO; ADICIONAR GOTA A GOTA HCl 4 % HASTA QUE LA SUSPENCION VIRE A TRASPARENTE (NEUTRA). COLOCAR UNA GOTA DE ESTA SUSPENCION EN UN PORTAOBJETOS Y EXTENDER CON LA AYUDA DE UNA ASA ESTERIL, FIJAR CON AYUDA DE UN MECHERO. 2. UNA VEZ FIJADO EL FROTIS CUBRIR EL PORTAOBJETOS CON FUCCINA FENICADA DE KINYOU (DILUIDA 1:1 EN EL CASO DE LA MARCA HYCEL CAT. 64293) SE CALIENTA DURANTE 5 MIN HASTA LA EMISION DE VAPORES SIN DEJAR EVAPORAR POR COMPLETO. 3. LAVAR CON AGUA CORRIENTE, SACUDIENDO HASTA ELIMINAR LOS RESTOS DE AGUA 4. LAVAR CON ALCOHOL ACIDO ORTH HASTA LA DECOLORACION COMPLETA (EN LOS CASOS DE MUESTRAS DE ORINA TENER CUIDADO C DE NO LAVAR EXCESIVAMENTE YA QUE SE PUEDE PERDER LA MUESTRA) 5. LAVAR CON AGUA CORRIENTE SACUDIENDO PARA ELIMINAR LOS RESTOS DE AGUA 6. CUBRIR EL PORTAOBJETOS CON AZUL DE METILENO DURANTE 30-90 SEGUNDOS 7. LAVAR REPETIDAS VECES CON AGUA CORRIENTE HASTA QUE YA NO SE OBSERVEN RESTOS DE COLORANTE 8. SECAR Y OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON OBJETIVO DE 100 X 9. LOS RESULTADO SE REPORTARAN LOS BACILOS ALCOHOL-ACIDO RESISTENTES (BAAR) POSITIVOS SE OBSERVARAN DE COLOR ROJO BRILLANTE MIENTRAS QUE LOS BAAR NEGATIVOS SE OBSERVARAN DE COLOR AZUL 10. REPORTAR DE LA SIGUIENTE MANERA NUMERO DE BAAR ENCONTRADOS POR CAMPO INFORME POR EL METODO ATS (American Thoracic Society) 0 OBSERVAR COMO MINIMO 100 CAMPOS POR REPLICA NEGATIVO PARA BAAR (-) 1-2/300 CAMPOS OBSERVADOS NUMERO OBSERVADO(+/-) 1-9/100 CAMPOS OBSERVADOS No MEDIO /100 CAMPOS (POSITIVO (+)) 1-9/10 CAMPOS OBSERVADOS No MEDIO/10 CAMPOS (POSITIVO(++)) 1-9/CAMPO No MEDIO/CAMPO (POSITIVO (+++)) >9/CAMPO >9/CAMPO (POSITIVO (++++))