ENZIMAS

Actividad
Gentica
Produccin de
Energa
Transporte y Distribucin
de nutrientes
CASO CLNICO: CREATINA QUINASA
E INFARTO AL MIOCARDIO


Un hombre obeso, de mediana edad, fue llevado a
emergencia de adultos tras sufrir un accidente de
automvil. El paciente comunic haber notado dificultad
para respirar y mareos justo antes del choque. La
exploracin sugera un accidente cerebro vascular o un
infarto de miocardio. Se ingreso al paciente para
observacin y se le hicieron extracciones peridicas de
muestras de sangre para analizar la creatina quinasa
(CQ) y otras enzimas. Su cardilogo, despus de revisar
todos los aspectos del caso decidi administrar
estreptoquinasa (SK) debido a que el diagnstico de
infarto de miocardio se hizo dentro de las cuatro horas
siguientes al comienzo de los sintomas. Se dio de alta
luego de diez das con el consejo de iniciar un rgimen
Para disminuir el colesterol (niveles de ingreso: 450 mg/dL;
VN: 150-220 mg/dL, usando un mtodo enzimtico) y la
glicemia (niveles de ingreso: 375 mg/dL; VN: 70-110
mg/dL, usando un mtodo enzimtico), adems de dejar
de fumar.
PREGUNTAS:
1) Con qu fin se hacen las determinaciones de CQ durante
un perido de tiempo?
2) Qu isoenzima sera importante investigar cuando se
sospecha de infarto del miocardio?
3) Cmo pueden separarse las isoenzimas de la CQ?
4) Qu relacin tiene la actividad CQ en sangre con el dao
tisular? De acuerdo a su presencia en el plasma qu tipo
de enzima es?
5) Qu otras enzimas pueden ser utilizadas para el
diagnstico de infarto al miocardio y por qu?
6) Qu enzimas pueden resultar tiles para evaluar la
evolucin del paciente y por qu?
7) La alteracin de los niveles plasmticos de una enzima
determinada siempre es indicativo de un proceso patolgico
especfico?, en cualquier caso responda por qu
8) Qu accin ejerce la estreptoquinasa? se utiliza para el
diagnstico y pronstico o cual cree Ud. Que sea su uso
clnico?
9) Qu quiere decir la frase: usando un mtodo enzimtico
en la determinacin de colesterol y glicemia?
10) Cmo se puede llevar a cabo la medicin enzimtica de
sustancias importantes en el diagnstico y pronstico clnico?
Utilize como modelo la determinacin de colesterol y glucosa
sangunea
11) Establezca, s la hay, la diferencia en el uso de las enzimas
como herramientas en el diagnstico y pronstico clnico y en
su uso como reactivos de laboratorio clnico.
12) Cite 2 ejemplos en los cuales se utilice las enzimas como
reactivos en el laboratorio clnico
13) Diga como pueden ser utilizadas las enzimas para la
deteccin de antgenos en los ensayos inmunoenzimticos?

ENZIMAS:CATALIZADORES ORGNICOS
A B
VR
VRC >>>>> VR
A+C B+C
VRC
ENZIMAS: CATALIZADORES ORGNICOS
A: REACTANTE
B: PRODUCTOS
RC >>>
RNOC
TIEMPO
Keq:
B
A
Keq = Keq
ENZIMAS: CATALIZADORES ORGNICOS
CATALIZADORES: Dependiendo de su naturaleza
pueden ser:
INORGNICOS: METALES: Pt, Cu, Zn, Hg, Fe

CIDO-BASE: HCl
ORGNICOS: LAS ENZIMAS
HOLOENZIMA: enzimas que son catalticamente
activas debido a la presencia de un cofactor.
a) APOENZIMA: Parte proteca de la holoenzima,
catalticamente inactiva en ausencia del cofactor.

b) COFACTOR: Molculas de pequeo tamao
indispensables para la actividad cataltica de las
holoenzimas. Dependiendo de su naturaleza
qumica pueden ser IONES METLICOS, ejm: Fe
2+

molculas orgnicas, conocidas como COENZIMAS,
ejm: NAD
+
S el cofactor se encuentra unido
covalentemente y permanentemente a la enzima
se denomina GRUPO PROSTTICO.

METALOENZIMA: Enzimas que contienen iones
metlicos unidos fuertemente, la mayora de ellos
son metales como el Fe
2+
, Cu
2+
, Mg
2+
, Zn
2+


Barrera energtica:
Colisin entre reactantes
en una orientacin adecuada.

Ruptura, formacin o
reordenamiento de enlaces.

Formacin de intermediarios
de alta energa.
ENERGA DE ACTIVACIN
ENZIMAS: CATALIZADORES ORGNICOS
ENZIMAS: CATALIZADORES ORGNICOS
ENZIMAS: CARACTERSTICAS
1.- PRESENTAN ALTA CAPACIDAD CATALTICA:
VRC 10
6
A 10
12
VECES MS RPIDA QUE VR
2.- PRESENTAN CONDICIONES ESPECFICAS DE
REACCIN:
A B
E
1

TEMPERATURAS MENORES DE 1OO C Y
pH CERCANOS A LA NEUTRALIDAD
CONDICIONES SUAVES
DE REACCIN
3.- SON ALTAMENTE ESPECFICAS:
ESPECIFICIDAD DE SUSTRATO Y
ESPECIFICIDAD DE REACCIN
A B

D F
E
1

E
2

A B

A G
E
1

E
3

ESPECIFICIDAD
DE SUSTRATO
ESPECIFICIDAD
DE REACCIN
ENZIMAS: CARACTERSTICAS
4.- CAPACIDAD DE REGULACIN: La efectividad
cataltica de las enzimas puede ser regulada.
Efectores alostricos
Modificaciones covalentes
variacin en la sntesis de enzimas.
COMO TRABAJAN LAS ENZIMAS?
S + E ES
P + E
EP
COMPLEJO
ENZIMA PRODUCTO
ENZIMA PRODUCTO
SUSTRATO
SITIO
ACTIVO
COMO TRABAJAN LAS ENZIMAS?
SITIO ACTIVO:
SITIO DE UNIN
Y RECONOCIMIENTO.
SITIO CATALTICO.
GRUPOS ENZIMTICOS:
GRUPOS R DE AA
COENZIMAS
IONES METLICOS
COMO TRABAJAN LAS ENZIMAS?
MODELOS DE INTERACCIN ENZIMA-SUSTRATO:
MODELO
LLAVE-CERRADURA
Fischer 1894
INTERACCIN RIGIDA
ENTRE LA ENZIMA Y EL SUSTRATO
COMPLEJO
ENZIMA PRODUCTO
ENZIMA PRODUCTO
COMO TRABAJAN LAS ENZIMAS?
MODELOS DE INTERACCIN ENZIMA-SUSTRATO:
MODELO DE
AJUSTE INDUCIDO
Koshland 1963
COMO TRABAJAN LAS ENZIMAS?
LA INTERACCIN ENZIMA-SUSTRATO ES MAYOR
EN EL ESTADO DE TRANSICIN
SUSTRATO
ESTADO DE
TRANSICIN
PRODUCTOS
REACCIN NO CATALIZADA:
LA INTERACCIN ENZIMA-SUSTRATO ES MAYOR
EN EL ESTADO DE TRANSICIN
E
ESTADO DE
TRANSICIN
PRODUCTOS
SUSTRATO
SUSTRATO
ESTADO DE
TRANSICIN
PRODUCTOS
REACCIN CATALIZADA
ESTADO DE
TRANSICIN
SUSTRATO
LA INTERACCIN ENZIMA-SUSTRATO ES MAYOR
EN EL ESTADO DE TRANSICIN
POCAS INTERACCIONES INTERACCION MXIMA
UNIN ENZIMAS SUSTRATO:
PROCESOS CATALTICOS FAVORECIDOS
1.- LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO EN
EL SITIO ACTIVO:
VR= K[S ]
AUMENTA
2.- ORIENTA LAS MOLCULAS DE SUSTRATO EN
LA FORMA ADECUADA EVITANDO COLISIONES
UNIN ENZIMAS SUSTRATO:
PROCESOS CATALTICOS FAVORECIDOS
3.- EXPONE EL SUSTRATO A LOS GRUPOS
FUNCIONALES ENZIMTICOS QUE INTERVIENEN
EN LOS PROCESOS DE CATLISIS.
4.- LA UNIN ENZIMA-SUSTRATO PRODUCE UNA
LIBERACIN DE ENERGA CONOCIDA COMO
ENERGA DE UNIN (BINDING ENERGY).
ESTADO DE
TRANSICIN
UNIN ENZIMAS SUSTRATO:
PROCESOS CATALTICOS FAVORECIDOS
ENERGA DE UNIN
(BINDING ENERGY).
ENERGA DE
ACTIVACIN
MECANISMOS DE CATLISIS
1.- CATLISIS CIDO - BASE.
3.- CATLISIS POR IONES METLICOS.
2.- CATLISIS COVALENTE.
4.- CATLISIS ELECTROSTTICA.
5.- CATLISIS POR PROXIMIDAD Y EFECTOS
DE ORIENTACIN.
6.- CATLISIS POR UNIN PREFERENCIAL
AL ESTADO DE TRANSICIN.
A B
VR
S+E P+E
VRE
CINTICA ENZIMTICA
VR= K[S ]
n

pH, Temp. Fuerza Inica,
[E ], [ES], [S], [P], [A], [S ], [I]
ORDEN DE LA REACCIN (n)
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
VR= K[S ]
n
n=1 (PRIMER ORDEN)
n=2 (SEGUNDO ORDEN)
n=0 (ORDEN CERO)
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
CINTICA ENZIMTICA
VR= K[S ]
n
(PRIMER ORDEN)
(ORDEN CERO)
[E ] PERMANECE
CONSTANTE
Vmax DE REACCIN
(PRIMER ORDEN)
CINTICA ENZIMTICA
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
COMPORTAMIENTO HIPERBLICO
E+P S + E ES
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
CINTICA ENZIMTICA
VR= K[S ]
n
Vmax DE REACCIN
(ORDEN CERO)
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
CONSTANTE DE MICHAELIS - MENTEN
Vmax DE REACCIN
VR = Vmax/2
[S]=Km
CINTICA ENZIMTICA: ECUACIN
DE MICHAELIS - MENTEN
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
COMPORTAMIENTO HIPERBLICO
E+P S + E ES
VR=Vmax.[S ]

[S ]+Km
ECUACIN DE MICHAELIS - MENTEN
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
A BAJAS CONCENTRACIONES DE SUSTRATO:
Km >>>>>> [S ]

VR=Vmax.[S ]

[S ]+Km
VR=Vmax.[S ]

Km
ECUACIN DE MICHAELIS - MENTEN
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
A ALTAS CONCENTRACIONES DE SUSTRATO:
[S ] >>>>>> Km

VR=Vmax.[S ]

[S ]+Km
VR=Vmax


CONSTANTE DE MICHAELIS - MENTEN
LINEARIZACI DE LA ECUACIN
DE MICHAELIS-MENTEN
ECUACIN DE
LINEWEAVER Y BURK
ECUACIN DE
MICHAELIS - MENTEN
[S] Vmax.
= VR
Km + [S]

1 Km 1
+ =
Vmax Vmax .[S] VR

ECUACIN DE LINEWEAVER Y BURK
1/Vmax
1/[S]
1/VR
- 1/Km
ACTIVIDAD ENZIMTICA
EXPRESIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA (UNIDADES):

(U) = moles de sustrato /min.
(UE) = moles de sustrato /min x mg de P.
Vmax
Kcat =
[ET]
[ET] K3 =Vmax
Nmero de Recambio o
Constante Cataltica
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
VELOCIDAD DE LA REACCIN ENZIMTICA
TEMPERATURA
[ES]
+H
3
N
COO-
T PTIMA
DESNATURALIZACIN
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
VELOCIDAD DE LA REACCIN ENZIMTICA
EFECTO DEL pH SOBRE LA
VELOCIDAD DE LA REACCIN ENZIMTICA
pH
+H
3
N
COO-
pH PTIMO
+H
3
N
COO-
DESNATURALIZACIN
DESNATURALIZACIN
EFECTO DEL pH SOBRE LA
VELOCIDAD DE LA REACCIN ENZIMTICA
TIEMPO
[P]
[E ]1
[E ]2
[E ]3 [E ]4
VR4 > VR3 > VR2 > VR1
EFECTO DE LA [E ] SOBRE LA
VELOCIDAD DE LA REACCIN ENZIMTICA
[ET] K3 =Vmax
REGULACIN ENZIMTICA
1.- INHIBIDORES
2.- ACTIVACIN PROTEOLTICA (ZIMGENOS):
3.- PROTENAS REGULADORAS
4.- ENZIMAS ALOSTRICAS
5.- ENZIMAS REGULADAS POR
MODIFICACIONES COVALENTES
REVERSIBLES
ENZIMAS
REGULATORIAS
INHIBICIN ENZIMTICA
1.- LOS INHIBIDORES SON SUSTANCIAS MUY IMPORTANTES
EN EL CONTROL DEL METABOLISMO , ASI COMO TAMBIN, EN
LA TERAPIA (QUIMIOTERAPIA, DROGAS, etc.).

2.- LOS INHIBIDORES PUEDEN CLASIFICARSE EN REVERSIBLES
O IRREVERSIBLES DE ACUERDO A SU AFINIDAD Y CAPACIDAD
DE DISOCIARSE DEL COMPLEJO ENZIMA - INHIBIDOR.


EL +P S + EL ES
INHIBICIN ENZIMTICA
INHIBIDORES REVERSIBLES (INHIBICIN REVERSIBLE):
SON SUSTANCIAS QUE SE PUEDEN UNIR DE MANERA
REVERSIBLE A LA ENZIMA LIBRE, AL COMPLEJO ENZIMA-
SUSTRATO O A AMBOS.
1.- INHIBICIN COMPETITIVA
2.- INHIBICIN NO-COMPETITIVA
3.- INHIBICIN ACOMPETITIVA
DOS
SUSTRATOS
INHIBICIN COMPETITIVA: AUMENTA Km, Vmax permanece igual
Inhibicin no competitiva:
Km permanece igual
Disminuye Vmax
INHIBICIN ACOMPETITIVA:
Disminuye Km
Disminuye Vmax
ACTIVACIN PROTEOLTICA (ZIMGENOS):
PROPROTENA
(PROENZIMA)
PROTENA
(ENZIMA)
PROTELISIS

IRREVERSIBLE
ACTIVACIN PROTEOLTICA
(ZIMGENOS):
ENZIMAS REGULATORIAS
A B C D E F
E1 E2 E3 E4 En
VA METABLICA:
V1
SON ENZIMAS QUE MODULAN SU ACTIVIDAD
ENZIMTICA EN RESPUESTA A CIERTAS SEALES
ER
ENZIMAS ALOSTRICAS
S
I
T
I
O


R
E
G
U
L
A
T
O
R
I
O

S
I
T
I
O


R
E
G
U
L
A
T
O
R
I
O

ENZIMAS ALOSTRICAS
CONCENTRACIN
DE SUSTRATO
CINTICA HIPERBLICA
CINTICA SIGMOIDE
ENZIMAS ALOSTRICAS
ENZIMAS INTERCONVERTIBLES
MODIFICACIONES COVALENTES:
FOSFORILACIN:
ENZIMA ENZIMA
ATP
ADP
- PO
3
-2

Tir, Ser, Tre, His
FOSFORILACIN:
ENZIMAS INTERCONVERTIBLES
MODIFICACIONES COVALENTES:
ADENILACIN:
ENZIMA ENZIMA
ATP
PPi
- AMP
URIDILACIN:
ENZIMA ENZIMA
UTP
PPi
- UMP
Tir
Tir
MODIFICACIONES COVALENTES:
ADP RIBOSILACIN:
ENZIMA ENZIMA
NAD
N
- ADP- RIBOSA
METILACIN:
ENZIMA ENZIMA
SAM
SAH
-CH
3

ENZIMAS INTERCONVERTIBLES
Arg, Cys, Gln, His
Glu
MODIFICACIONES
COVALENTES
REVERSIBLES:
ISOENZIMAS
A B
E1
A B
E2
A B
E2
GRUPOS(IUBMB):
ENZIMAS GENTICAMENTE INDEPENDIENTES:
MALATO DESHIDROGENASA
CITOSLICA

MITOCONDRIAL

VARIANTES GENTICAS:
GLUCOSA - 6 - FOSFATO DESHIDROGENASA
GRUPOS(IUBMB):
HETEROPOLMEROS: Dos o ms subunidades
diferentes
ISOENZIMAS
PROTENAS
OLIGOMRICAS
CREATINA QUINASA
(CK)
LACTATO DESHIDROGENASA
(LDH)
MM (MSCULO ESQUELTICO)
MB (MIOCARDIO)
BB (CEREBRO)
HHHH (CORAZN)
HHHM (RIN)
HHMM (PULMN)
HMMM (PULMN)
MMMM (MSCULO E
HGADO)
ENZIMOLOGA CLNICA
1.- CLAVES PARA EL ESTUDIO DE ERRORES INNATOS DEL
METABOLISMO.
2.- INTERVIENEN EN REACCIONES DE DETOXIFICACIN.
3.- BLANCOS PARA QUIMIOTERAPIA
4.-ESENCIALES PARA EL DISEO RACIONAL DE TRATAMIENTOS
5.-INSTRUMENTOS INPORTANTES EN EL DIAGNSTICO Y
MONITOREO CLNICO