HIDRLISIS CIDA DE LA MELAZA

La sacarosa es un carbohidrato compuesto de glucosa y fructuosa por lo cual, la hidrlisis cida

consiste en romper el enlace glucosdico por medio de HCl, una vez obtenida la glucosa se
puede determinar los azcares reductores por mtodo DNS entre otros. La reaccin que
describe la hidrlisis es:

Materiales y Equipos
Tubos de ensayo Erlenmeyer de 125 ml
Pipeta de 5 ml Gradilla
Esptula Vidrio de reloj
Probeta de 25 ml Pipeta 1 ml
Placa calefactora o estufa Pinzas con nuez
Vianda Pinzas para tubo de ensayo
Espectrofotmetro (540 nm) Beacker 400 ml
Agitador magntico Celdas para espectrofotmetro

Reactivos
Sln HCl 37% (v/v)
Fenolftalena
Sln NaOH 25% (p/v)
Sln HCl 5% (v/v)
Sln sacarosa

1. PROCEDIMIENTO DE REACTIVOS
1.1 SLN DE NAOH 25%
- Pesar 25,46 g NaOH y disolver en 100 ml de agua destilada.
- Mezclar
- Almacenar
1.2 SLN HCL 37%
- Medir 37 ml de HCl puro y disolver en 63 ml de agua destilada.
- Mezclar
- Almacenar
1.3 SLN HCL 5%
- Medir 5 ml de HCl puro y disolver en 100 ml de agua destilada.
- Mezclar
- Almacenar
1.4 PREPARACIN DE LA CURVA PATRN PARA LA SACAROSA EN LA MELAZA
- Preparar diferentes concentraciones de sacarosa de acuerdo a la siguiente tabla:
Concentracin de sacarosa (g/L) Absorbancia a 540 nm
1.3
2.0
2.8
3.6
4.0
4.4
5.6
6.0

- Ubicar las muestras en celdas e introducirlas en el espectrofotmetro a 540 nm de
onda.
- Tomar datos
- Hacer regresin y obtener la curva patrn.
2. PROCEDIMIENTO DE LA HIDRLISIS CIDA CON HCl
- Una vez determinada la curva patrn para la sacarosa, se procede a tomar una muestra de 2
ml de las concentraciones de sacarosa.
- Se adicionan 2ml de HCl al 37% (v/v) con dilucin . Agitar los tubos y calentarlos a 92C
durante 10 min.
- Frenar la reaccin en hielo si es posible
- Adicionar 3 gotas de fenolftalena a cada una de las muestras.
- Adicionar NaOH 25% (p/v) (2.02 ml aprox) hasta obtener un tono ligeramente rosado.
- Adicionar HCl al 5% (v/v) y agitar nuevamente.
NOTA: Se recomiendo utilizar tcnicas ms exactas como cromatrografa lquida de alta
resolucin HPLC para la determinacin del contenido de azcares totales en la melaza de
caa, ya que por mtodos convencionales como la hidrlisis de la sacarosa se puede ver
afectado por el color del medio y por la manipulacin de las muestras.