PIPETAS

Definicin

Tipos

Tecnicas de pipeteo

Pipeteadores
MICROPIPETAS

Introduccin histrica

Funcionamiento de la micropipeta

Eleccion de las puntas

Pautas y tcnicas de pipeteo

Consejos de pipeteo para diferentes compuestos

Evitar la contaminacin

Enfermedades laborales

Calibracin de las micropipetas

- Exactitud
- Precision

Tipos de micropipetas, segn:

- Mecanismo interno de funcionamiento
- Regulacin de volumen
- N de canales
- Modo de funcionamiento


PIPETAS
Definicin
Tipos
Tecnicas de pipeteo
Pipeteadores

Definicin

Aparato volumtrico para transferir volmenes predeterminados de lquidos. Se
diferencia de un dispensador en que la pipeta no tiene una unin fija a un recipiente de
reserva.

Las primeras herramientas que se usaron para el manejo preciso de lquidos fueron
tubos cilndricos de cristal con uno de los extremos mas estrecho, llamados pipetas.

En estas pipetas se aspira el lquido, al principio con la boca, y se dispensa por gravedad
Tipos de Pipetas

Actualmente las hay de cristal y de plstico y son bsicamente de dos tipos:
- Aforadas o volumtricas: Pipetas de alta precisin. Tienen una ampolla calibrada
para un volumen nico. El volumen que contiene la ampolla (hasta la marca de
enrase) es el volumen que mide la pipeta. Los volmenes tpicos que pueden medir
son 10, 25 y 50 mL. Pueden tener una o dos marcas de enrase.

- Graduadas: Son rectas y estn calibradas. Pueden medir volmenes intermedios
entre sus volmenes mximo y mnimo aunque con menos precisin que las pipetas
aforadas.

A su vez la pipetas graduadas pueden ser de dos tipos:
Mohr: Las marcas de la calibracin se extienden solo a lo largo del cilindro sin
incluir la punta o estrechamiento del extremo
Serolgicas: Las marcas de la calibracin se extienden a lo largo de toda la pipeta
incluyendo la punta

* Pipetas de soplado "Blow out". Se necesita soplar despus de pipetear para
dispensar el liquido restante, ya que forma parte del volumen a dispensar



- Hay otros tipos de pipetas que se utilizan para transferencia de lquidos de forma no
precisa:

Pipetas Pasteur o de transferencia

Pipeta sin calibracin para transferir pequeos volmenes. Se usa junto con una
pequea ampolla


Pipetas de aspiracin

Pipetas sin calibracin que se usan para aspirar lquidos mediante sistemas de
vacio
PIPETAS - Tcnicas de pipeteo

Pipetas Volumtricas y Graduadas
Colocar el pipeteador en la boca de la pipeta
Colocar el otro extremo de la pipeta en el lquido que se quiere transferir. Hacerlo
subir lentamente por el interior de la pipeta aplicando la presin negativa necesaria a
travs del pipeteador que estemos usando
Subir el lquido por encima del nivel deseado
Dejar caer el lquido hasta que el fondo del menisco se alinee con el nivel deseado
en la pipeta
Tocar con la punta de la pipeta el interior del recipiente de partida para dejar
cualquier gota adherida al exterior de la pipeta
Transferir el lquido al segundo recipiente tocando con la punta las paredes del
mismo para facilitar la salida del lquido
En las pipetas aforadas
No soplar para sacar el lquido restante de la pipeta. Salvo en pipetas de soplado
"blow out"

Pipetas Pasteur o de transferencia
Colocar la ampolla en la boca de la pipeta, si no es de plstico.
Presionar la ampolla y colocar el otro extremo de la pipeta en el lquido que se
quiere transferir. Hacerlo subir lentamente por el interior de la pipeta aplicando la
presin negativa necesaria soltando lentamente la ampolla hasta alcanzar
aproximadamente el volumen dispensado
Transferir el volumen de lquido al segundo recipiente el volumen de lquido
deseado presionando de nuevo la ampolla de la pipeta
PIPETAS - Pipeteadores

Como norma general y bsica se recomienda no usar la boca para pipetear. De esta
forma se evitan accidentes con sustancias peligrosas.

Por este motivo se han usado diferentes tipos de aparatos que permiten manejar la pipeta
sin tener contacto con el lquido que hay en su interior

Pipeteadores manuales:
- Pera de goma



La pipeta se une al aparato a traves del ajuste de la parte inferior (I)
Consta de 3(tres) guas, y en cada una se encuentra una vlvula la que al presionar se
abre y al soltar se cierra. La vlvula de la parte superior de la pera permite hacer un
vaco y deformar la pera de goma (A), la vlvula que se encuentra en la base de la
pera, permite comunicar el vaco a la pipeta y de esta forma se puede aspira el
lquido (S)y la vlvula que se encuentra en la ramificacin lateral permite la entrada
del aire y la descarga del lquido que sostiene la pipeta (E)
- Pipeteadores de plstico con rueda manual y vlvula de vaciado



La pipeta se une al aparato a travs de un ajuste de goma en la parte inferior (G).
Una rueda en la parte superior crea vaco que se transmite a travs del ajuste de
goma a la pipeta, permitiendo aspirar el lquido (R)
Una vlvula de vaciado colocada en el lateral de la pipeta permite la entrada de ire y
la descarga del lquido (V)

Pipeteadores automticos

En los pipeteadores automticos, la aspiracin y dispensacin de lquidos se realiza de
automticamente, pulsando un botn.

De esta forma se consigue agilizar todo el proceso de pipeteado y disminuir la carga de
trabajo.

La pipeta se une al aparato a travs de un
ajuste de silicona. En este ajuste se inserta un
filtro hidrofobico para evitar que un accidente
en el pipeteo dae el aparato

La aspiracin y el vaciado de la pipeta se consiguen presionando
los botones situados en la parte anterior del mango

En la mayora de los modelos podemos ajustar la potencia de
aspiracin y vaciado, lo que nos permite un pipeteo mas preciso y
rpido

La energa elctrica necesaria para su funcionamiento se toman de
bateras recargables

El bajo peso del aparato es fundamental para un pipeteo cmodo
con estos aparatos
MICROPIPETAS
Introduccin histrica
Funcionamiento de la micropipeta
Eleccion de las puntas
Pautas y tcnicas de pipeteo
Consejos de pipeteo de diferentes compuestos
Evitar la contaminacin
Enfermedades laborales
Calibracin de las micropipetas

- Exactitud
- Precision
Tipos de micropipetas, segn:

- Mecanismo interno de funcionamiento
- Regulacin de volumen
- N de canales
- Modo de funcionamiento


MICROPIPETAS - Introduccin histrica

El desarrollo de la investigacin biolgica, sobre todo en Biologa Molecular hizo
necesario el manejo de volmenes muy pequeos de reactivos, del orden de microlitros.
El pipeteado de microlitros era un proceso incmodo y engorroso en el que se utilizaban
varios tipos de capilares de vidrio y succin con la boca. Un pipeteado preciso requera
experiencia y dependa del usuario y de la estructura de la pipeta. Las roturas, la
imprecisin, el peligro de aspiracin, la esterilidad y la limpieza eran un problema.

En 1956, un joven mdico, Heinrich Schnitger, se
incorpor al grupo de Theodor Bcher en el Instituto de
Bioqumica de la Universidad de Marburgo, en
Alemania. Schnitger empez inmediatamente a
encontrar pegas al micropipeteado. Acab
desapareciendo del laboratorio un par de das y regres
con una jeringuilla de cristal modificada que iba
equipada con un pistn accionado por resortes y un tope
regulable para establecer el volumen de fluido. La aguja
de la jeringuilla fue sustituida por una punta de plstico
extrable, obtenida de tuberas de ese material. Un
amortiguador de aire separaba el fluido del pistn de la
jeringuilla que confinaba el fluido a la punta de plstico.
Para pipetear otra solucin, slo haba que sustituir la
punta fcilmente extrable por otra, evitando as el
lavado y las contaminaciones. Esta funcin fue una gran
innovacin que acabara catapultando a la micropipeta
como instrumento de uso mundial. En los meses
siguientes, Schnitger desarroll el dispositivo
experimental y lo convirti en un prototipo de
micropipeta. Se adoptaron medidas para garantizar el
movimiento hermtico del pistn y se aadi un segundo
resorte coaxial, que permita empujar el pistn con
mayor resistencia y rebasar as el punto de salida para
expulsar el fluido residual de la punta. De este modo se
asegur un pipeteado preciso y fcilmente reproducible
de pequeos volmenes.
Con el nuevo instrumento, el personal poco experimentado poda manejar microlitros de
soluciones con facilidad y exactitud.

En 1957, slo seis meses despus de haber fabricado el primer prototipo, Schnitger
solicit una patente alemana titulada: Dispositivo para un pipeteado rpido y preciso de
pequeos volmenes lquidos, que se concedi formalmente en 1961. La patente
describa la funcin esencial al completo, que todava se encuentra en versiones
recientes de la micropipeta. La patente fue concedida en exclusiva a la empresa de
equipos de laboratorio Eppendorf, de Hamburgo, que modific la obra original de
Schnitger para su fabricacin en masa. Fue de especial importancia la mejora de la
punta de plstico extrable, que fue el elemento ms revolucionario de la micropipeta.
En una primera fase, Schnitger diseo las puntas para que se hicieran de tefln;
presentaban una menor retencin de lquidos y permitan un pipeteado muy preciso,
pero haban de ser limpiadas y reutilizadas debido a su coste. En los aos sesenta, con la
llegada del polipropileno traslcido, Eppendorf present la punta de polipropileno
(PEP). Era barata y desechable, poda codificarse por colores para diferentes rangos de
volumen, y no tard en convertirse en la punta estndar. Como adicin importante,
Eppendorf cre las cubetas de centrfuga de PEP de 1,5 mililitros y 0,75 mililitros con
tapn a presin como recipientes apropiados para transferir fluidos con la micropipeta
(tubos "eppendorf"), lo cual impresion rpidamente a laboratorios de todo el mundo.

Aunque el invento de Schnitger elimin la succin con la boca de micro cantidades,
varios problemas quedaban sin resolver. El principal es que los cientficos tenan que
usar pipetas separadas para cada volumen.

Fig: Micropipetas de las primeras series de produccin en 1957-1960
Aprovechando esta laguna, Warren Gilson con la ayuda de otros inventores (Eric
Marteau d'Autry) dise en 1972 la pipeta ajustable que revolucion el campo de las
ciencias de la vida (Patente U.S.A 3827305, 1974).

En realidad, la modificacin que dio lugar a este nuevo dispositivo, se bas en un
aparato previo realizado por la compaa de Warren Gilson (Gilson Medical
Electronics), el respirmetro de Warburg modificado. Una mquina utilizada para medir
volmenes respiratorios que utilizaba un control digital que fue adaptado para usarse en
la nueva pipeta

Referencias:
- When a common problem meets an ingenious mind. Martin Klingenberg (EMBO
J.,6: 797-800).
Traducido en: EL PAS, mircoles 21 de marzo de 2007
The Art of the Pipet. Jay A. Martin (BioMedNet: Posted April 13, 2001 Issue 100)

MICROPIPETAS - Funcionamiento de la micropipeta

La micropipeta puede ser de dos tipos segn su funcionamiento:
- De desplazamiento de aire.

La pipeta estndar. El pistn no est en contacto con el liquido, sino que queda una
cmara de aire entre el pistn y el liquido

AccuTel Laboratories
Fig: Esquema del interior de una pipeta de desplazamiento de aire donde entre
otros se distingue claramente el pistn y la cmara de aire.

Fig: Esquema del funcionamiento de una pipeta de desplazamiento de aire
1: Para aspirar lquido se baja el pistn a su posicin ms baja y se introduce la
punta de la pipeta en el lquido que se quiera aspirar
2 y 3: Se sube el pistn hasta la posicin determinada para la cantidad a pipetear.
Detrs de la cmara de aire el lquido sube en la misma proporcin que ha subido
el pistn.
4: Se dispensa en el recipiente de dispensacin volviendo a bajar el pistn, con lo
cual se desplaza la cmara de aire y a su vez se hace salir el liquido aspirado
anteriormente
- De desplazamiento positivo:

Para lquidos viscosos o voltiles. El pistn contacta directamente con el lquido


Fig: Esquema del funcionamiento de una pipeta de desplazamiento positivo
1: Para aspirar lquido se baja el pistn a su posicin ms baja. Al bajar el pistn
de la pipeta, bajamos el pistn de la punta. Se introduce la punta de la pipeta en el
lquido que se quiera aspirar
2 y 3: Se sube el pistn hasta la posicin determinada para la cantidad a pipetear.
Detrs del pistn de la punta el lquido sube en la misma proporcin que ha
subido el pistn y en contacto con l.
4: Se dispensa en el recipiente de dispensacin volviendo a bajar el pistn de la
pipeta, con lo cual se baja el pistn de la punta y a su vez se hace salir el liquido
aspirado anteriormente
MICROPIPETAS - Eleccin de la punta

La punta es el accesorio imprescindible y fundamental de la micropipeta tal como
hemos visto en la introduccin histrica. Micropipeta y punta forman el sistema
completo.

La eleccin de la punta es por tanto crucial para obtener una media exacta y precisa con
la pipeta.

A la hora de elegir una punta no podemos quedarnos con las apariencias. Defectos como
deformaciones, araazos, burbujas de aire, curvaturas, impurezas pueden influir en los
resultados del pipeteo. Por ejemplo, usar una punta curvada puede provocar por si solo
un error del 10% en la exactitud del pipeteo. Si el orificio de la punta no est bien
centrado, la dispensacin del lquido puede verse afectado significativamente. Si no se
usa polipropileno puro de grado Premium o el molde y el procesamiento no cumplen
con los mas altos estndares, parte del lquido queda retenido en la punta como gotitas,
con lo que se originan errores en los resultados del pipeteo.

Gua para la seleccin de puntas:
- Ajuste perfecto a la base de la micropipeta
- Fabricadas con polipropileno virgen de alta calidad
- Libre de impurezas o partculas
- Uniformes en tamao y forma
- Orificio centrado
- Libre de metales, como cadmio
- Libre de defectos o deformaciones
- Resistentes a productos qumicos
- Estables trmicamente
- Autoclavables
- Trazables. N de lote e identificacin del molde en cada punta
- Compuestos a pipetear
MICROPIPETAS - Pautas generales y Tcnicas de pipeteo

Pautas generales
- Revisar la pipeta al inicio del da de trabajo para retirar suciedad y polvo
- Ajustar el volumen en el rango especificado para la pipeta
- Sujetar la pipeta de forma que el reposamanos de la pipeta descanse sobre el dedo
ndice
- Para maximizar exactitud, la pipeta, la punta y el lquido deben estar a la misma
temperatura
- Comprobar que las puntas son las adecuadas para la pipeta
- Usar las puntas una sola vez
- Enjuagar la punta varias veces en el liquido a pipetear antes del pipeteo para mejorar
la exactitud
- No volver la pipeta del revs, de forma que el liquido de la punta afecte al interior de
la pipeta
- Evitar contaminaciones de las puntas usando el eyector y los guantes
- Guardar las pipetas hacia arriba
- Calibrar las pipetas de forma regular, al menos una vez al ao
Tcnicas de pipeteo
- Pipeteo Normal (forward pipetting)

Recomendada para soluciones acuosas como tampones, cidos diluidos y bases

1. Regular el volumen y presionar el mbolo hasta el primer tope

Introducir verticalmente la punta en el lquido. Ver la profundidad adecuada en
la siguiente tabla
Volumen (L) Profundidad ptima de inmersin (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2 - 3
101 - 1000 2 - 4
1001 - 10000 3 - 6
2. Soltar lentamente el mbolo hasta su posicin inicial. Sacar la punta del lquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de lquido del exterior
de la punta
3. Dispensar el lquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope
y despus hasta el segundo. De esta forma vaciamos totalmente la punta
4. Sacamos la punta del recipiente tocando las paredes del mismo y dejamos el
mbolo en su posicin inicial
- Pipeteo Reverso (reverse pipetting)

Esta tcnica se usa para pipetear soluciones con una gran viscosidad o tendencia a
formar espuma. Slo se puede realizar con pipetas de desplazamiento de aire

1. Regular el volumen y presionar el mbolo hasta el segundo tope

Introducir verticalmente la punta en el lquido. Ver la profundidad adecuada en
la siguiente tabla
Volumen (L) Profundidad ptima de inmersin (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2 - 3
101 - 1000 2 - 4
1001 - 10000 3 - 6
2. Soltar lentamente el mbolo hasta su posicin inicial. Sacar la punta del lquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de lquido
3. Dispensar el lquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope.
Este volumen es el volumen ajustado. Mantener el mbolo fijo en esta posicin.
Quedar algn liquido en la punta que no se debe dispensar.
4. El lquido restante en la punta se puede devolver al contenedor inicial o tirarlo
junto con la punta.
5. Dejamos el mbolo en su posicin inicial
- Pipeteo Repetitivo (Repetitive Pipetting)

Esta tcnica est especialmente indicada para pipeteo repetido del mismo volumen.

1. Regular el volumen y presionar el mbolo hasta el segundo tope

Introducir verticalmente la punta en el lquido. Ver la profundidad adecuada en
la siguiente tabla
Volumen (L) Profundidad ptima de inmersin (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2 - 3
101 - 1000 2 - 4
1001 - 10000 3 - 6
2. Soltar lentamente el mbolo hasta su posicin inicial. Sacar la punta del lquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de lquido
3. Dispensar el lquido en el recipiente presionando el mbolo hasta el primer tope.
Este volumen es el volumen ajustado. Mantener el mbolo fijo en esta posicin.
Quedar algn liquido en la punta que no se debe dispensar. Este lquido se
puede echar en el recipiente original o desechar con la punta.
4. Repetimos los pasos 2 y 3
- Pipeteo de muestras heterogneas

Esta tcnica est especialmente indicada para pipeteo de muestras viscosas en las
que no se puede lavar previamente la punta con la muestra y se necesita pipetear el
volumen total disponible. Por ejemplo, sangre o suero

1. Regular el volumen y presionar el mbolo hasta el primer tope

Introducir verticalmente la punta en el lquido. Ver la profundidad adecuada
en la siguiente tabla
Volumen (L) Profundidad ptima de inmersin (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2 - 3
101 - 1000 2 - 4
1001 - 10000 3 - 6
2. Soltar lentamente el mbolo hasta su posicin inicial
3+4 No sacar la punta del lquido. Volver a presionar el mbolo hasta el primer
tope y dejar que vuelva a su posicin inicial. Sacar la punta del lquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de lquido
5. Dispensar el lquido en el recipiente presionando el mbolo hasta el segundo
tope vaciando completamente la punta
6. Dejamos el mbolo en su posicin inicial
MICROPIPETAS - Consejos de pipeteo para diferentes compuestos
Solucin/Compuest
o
Muestras Pipeta Punta
Tcnica
de
pipeteo
Comentario
s
Solucin acuosa
Tampones,
soluciones
salinas
diluidas
Desplazamient
o de aire
Estndar Normal

Solucin viscosa Soluciones Desplazamient Estndar de Revers Pipetear
de
protenas y
cidos
nucleicos,
glicerol,
Tween
20/40/60/8
0
o de aire
Desplazamient
o positivo
orificio ancho
Desplazamient
o positivo
o despacio
para evitar
la
formacin
de burbujas
Compuestos
voltiles
Metanol,
hexano
Desplazamient
o de aire
Desplazamient
o positivo
Con filtro
Desplazamient
o positivo
Normal
Pipetear
rpido para
evitar la
evaporacin
.
Puntas con
filtros de
carbono
evitan que
el vapor
entre en las
pipetas
Soluciones de
nucletidos
ADN
genmico,
productos
de PCR
Desplazamient
o de aire
Desplazamient
o positivo
Con filtro o de
orificio ancho
Desplazamient
o positivo
Normal
Para ADN
genmico
puntas de
orificio
ancho se
pueden usar
para
evitar
roturas por
presin
mecnica
MICROPIPETAS - Evitar la contaminacin
- De la pipeta a la muestra

Una pipeta contaminada o puntas contaminadas pueden causar la contaminacin de
las muestras.

Prevencin:
Usar puntas o puntas con filtro esterilizadas. Si es posible autoclavar la pipeta
Cambiar la punta despus de pipetear cada muestra

- De la muestra a la pipeta

Las muestras o los aerosoles de las muestras pueden contaminar la base de puntas
de la pipeta.

Prevencin:
Mantenerla pipeta en posicin vertical mientras se pipetea para evitar que el
lquido entre en el cuerpo de la pipeta.
Soltar el mbolo lentamente
Para evitar contaminacin por aerosoles, usar puntas con filtro o pipeta y puntas
de desplazamiento positivo
Guardar la pipeta en posicin vertical

- De muestra a muestra (contaminacin cruzada)

Las restos de la muestra A se pueden mezclar con la siguiente muestra en ser
pipeteada y dar lugar a falsos resultados.Prevencin:
Cambiar la punta despus de cada muestra
Si se sospecha que la pipeta est contaminada, autoclavar o limpiar la pipeta
MICROPIPETAS - Enfermedades laborales

En aquellas personas que pipetean manualmente de forma habitual aparecen con cierta
frecuencia dolores en brazos y manos. Estos dolores est ocasionados
fundamentalmente por dos patologas: el sndrome del tnel carpiano y tendovaginitis:
- Sndrome del tnel carpiano:

Durante el pipeteo se usan diversos msculos para de los dedos, mano y antebrazo
para mover el mbolo y el eyector de puntas. Estos msculos trasmiten el
movimiento a travs de tendones que corren a travs de un estrecho tnel, el tnel
carpiano. Por este tunel accedn a la mano, ademas de los tendones que mueven los
dedos, vasos sanguneos y nervios. Los tendones se pueden inflamar debido a un
exceso de trabajo con la mano o a un trabajo realizado de forma inadecuada. De esta
forma presionan al nervio contra el ligamnento, provocando dolor en los dedos,
especialmente en el pulgar.

Esta es una patologa muy seria, ya que est muy extendida entre los trabajadores de
los laboratorios con un coste en tratamiento medico de aproximadamente 25.000$
por persona y ao.


2009 Nucleus Medical Art, In
- Tendovaginitis

Es una enfermedad con sntomas parecida a los del sndrome del tnel carpiano.
Pero en este caso la inflamacin es del tendn y de la vaina que lo protege.
- Molestias en el hombro y en las vrtebras lumbares

Son ocasionadas por una mala posicin durante el pipeteo que provoca posiciones
forzadas


Medidas preventivas
- Utilizar una pipeta adecuada

Ligera
Con Funcionamiento muy suave, que no necesite excesiva presin en el embolo
ni en el eyector de puntas para funcionar
Ergonmica
Mango diseado para permitir que los dedos mantengan una disposicin curva
y flexible, permaneciendo relajados
Apoyo suave y cmodo de la pipeta sobre el dedo ndice que permite relajar la
mano en los momentos que no se est pipeteando
- Organizar el puesto de trabajo

Altura de la silla adecuada frente a la superficie de trabajo que permita trabajar
con el codo apoyado en la mesa
Procurar que la mano siempre trabaje por debajo de los hombros
Colocar los utensilios de forma que el movimiento que se necesite hacer sea el
mnimo posible

- Alternar el pipeteo con otros trabajos
- Tomar descansos breves que permitan relajar las manos y brazos
MICROPIPETAS - Calibracin de las micropipetas

General
- Equilibrar la temperatura de la pipeta con la temperatura de la sala de calibracin
dos horas antes de calibrar
- Calibrar en el volumen mximo y en el volumen mnimo o en un volumen 10%
menor que el mximo
- Realizar 10 pipeteos con ambos volmenes.
- Calcular la exactitud y la precisin usando las formulas apropiadas
- Comprobar que los resultados estn entre los lmites dados por el fabricante de la
pipeta
Pipetas multicanales
- Realizar los 10 pipeteos con los dos canales de los extremos

Frmulas para analizar los resultados de las medidas
Conversin de masa a volumen

V= ( w + e ) x Z

V= volumen (mL)
w=peso (weight) (mg)
e= perdida por evaporacin (mg)
z= factor de conversin para mg/mL
Nota: La prdida por evaporacin puede ser significante con pequeos volmenes.
Para determinar la prdida de masa, dispensar agua en el recipiente de pesado, tomar
nota de la lectura y empezar a tomar el tiempo con un cronmetro. Comprobar
cuanto decrece la lectura en 30 segundos. Comparar esto con el tiempo de pipeteo.
Normalmente, la duracin de un pipeteo son 10 segundos y las masa perdida 2 g. Si
se usa una trampa de evaporacin o una tapa, no es necesario realizar la correccin
de evaporacin
Exactitud: Error Sistemtico

La exactitud es la diferencia entre el volumen dispensado y el seleccionado en una
pipeta

A= - V
S

A= Exactitud (accuracy)
=Volumen medio
V
s
=volumen seleccionado
En un certificado de calibracin la exactitud se expresa como un valor relativo
ACC%= 100% x A/V
s

Precisin: Error Aleatorio
La precisin se refiere a la repetitibilidad de los pipeteos. Se expresa como
desviacin estndar (s) o coeficiente de variacin (cv). Adems de por la propia
pipeta, la prctica en el laboratorio, y la experiencia del usuario son tambin factores
importantes que afectan a la precisin.


Tablas de conversin



Precision y exactitud



Exacto, pero no preciso: El volumen medio se corresponde con el valor esperado,
pero los diferentes pipeteos varan mucho entre s.

Preciso, pero no exacto: El volumen medio difiere del esperado, pero los diferentes
pipeteos tienen poca variacin entre s

Exacto y preciso: El volumen medio se corresponde con el valor esperado y los
diferentes pipeteos no varan entre s
MICROPIPETAS - Tipos de micropipetas

Segn mecanismo interno de funcionamiento:
- Pipetas de desplazamiento de aire
- Pipetas de desplazamiento positivo
Segn la posibilidad de regulacin del volumen
- Pipetas de volumen fijo: Solamente pueden dispensar un volumen determinado
- Pipetas de volumen variable: Se puede ajustar el volumen a dispensar
Nota: Las micropipetas pueden dispensar un intervalo de volmenes de 0,1mL a 5,0mL.
Este rango se suele dividir en al menos 4 intervalos. Para cada uno de esos intervalos se
utiliza una micropipeta:

0,5-10 uL
10-100 uL
100-1000 uL
1-5mL

Segn el nmero de canales de dispensacin:
- Pipetas de volumen fijo: Solamente pueden dispensar un volumen determinado
- Pipetas de volumen variable: Se puede ajustar el volumen a dispensar

8 canales: para trabajar con placas de 96 pocillos
12 canales: para trabajar con placas de 384 pocillos
16 canales: para trabajar con placas de 1536 pocillos
48 canales (16x3): para trabajar con placas de 1536 pocillos, microarrays
64 canales (16x4): para trabajar con placas de 1536 pocillos, microarrays
Segn el modo de funcionamiento:
- Manual: El ajuste del volumen, la aspiracin y la dispensacin se hacen
manualmente
- Electrnicas: El ajuste del volumen, la aspiracin y la dispensacin se hacen de
forma electrnica

Permiten realizar todas las tcnicas de pipeteo, incluido el repetitivo de forma
cmoda y precisa
La fuerza necesaria para el manejo es mnima
Los errores de pipeteo disminuyen