Objetivo

Identificar los diferentes equipos del Laboratorio de Microbiologa, aprender sobre su

funcionamiento, operacin, y aplicaciones en las futuras prcticas a realizar.
Conocer los mtodos y equipos ms usuales de esterilizacin de material
Aprender el correcto manejo y principio de funcionamiento del Autoclave Estndar.

1. EQUIPO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Microscopio
El microscopio es indispensable en el Laboratorio de
Microbiologa para el estudio de la morfologa y
estructura de los microorganismos, as como su reaccin
a diferentes colorantes, lo cual junto con otros criterios,
permitir su identificacin, por lo tanto, es importante
conocer su adecuado manejo.
La perfeccin del moderno microscopio compuesto
facilita intensamente el estudio de la morfologa de
microorganismos y por lo menos de algunas de las
grandes estructuras de la clula bacteriana.
A finales del siglo XIX surgieron avances importantes en Microscopa, perodo de gran progreso en
Microbiologa.
MICROSCOPIO OPTICO
Se usa para aumentar el tamao de la imagen aparente de los objetos, lo cual permite observar los
detalles estructurales de los microorganismos.
El microscopio ptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es un
microscopio compuesto, el cual est provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora de luz
que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificacin de la
imagen.
A travs de la refraccin o reflexin de los rayos luminosos mediante el sistema de lentes del
microscopio, se forma la imagen del objeto, que es ms grande que el objeto mismo, permitiendo el
examen de sus estructuras en detalle.
MICROSCOPIO COMPUESTO
Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento. Aparato ptico hecho para
agrandar objetos, consiste en un nmero de lentes formando la imagen por lentes o una
combinacin de lentes posicionados cerca del objeto, proyectndolo hacia los lentes oculares u el
ocular. El microscopio compuesto es el tipo de microscopio ms utilizado.
Existe adems el Microscopio electrnico, que debido a sus posibilidades para obtener imgenes
claras de los objetos ms diminutos, ha hecho contribuciones de la mayor importancia, sobre todo
en el estudio de la constitucin y ciclos vitales de los virus filtrables.

PARTES DEL MICROSCOPIO Y SU FUNCIN
Base, soporte y brazo: Sirven para mantener en posicin las partes pticas esenciales. La
base y el brazo son fuertes, para disminuir la vibracin.
Tubo intercambiable: Su funcin es ajustar la longitud mecnica del tubo, es decir, la
distancia entre la lente del ocular que est arriba y la unin del objetivo al revlver, que est
abajo.
Tornillos macromtrico y micromtrico: Sirven para enfocar, logrando que la muestra se vea
ntida y clara, ya que permiten subir y bajar todo el cuerpo del tubo junto con sus lentes y en
microscopios modernos, junto con la platina. El tornillo micromtrico permite subir o bajar
muy ligeramente.
Platina: Parte del microscopio donde se coloca la muestra que va a ser examinada.
Pinzas de la Platina: Estas sirven para sujetar la muestra a examinar.
Tornillos para desplazar la Platina: Estos sirven para mover la muestra que est sobre la
platina, hacia arriba, abajo, derecha izquierda, hasta enfocar el campo adecuado.
Fuente de Luz: Se encuentra colocada debajo del objeto; sta emite la luz que pasa por el
condensador, para despus iluminar la preparacin.
Condensador: Antes de que la luz alcance la muestra en la platina, se condensa y enfoca a
travs de una gran lente condensadora que se halla bajo la platina.
Diafragma: Sirve para controlar la luz a travs del condensador.
Objetivos: La funcin de stos es delimitar el tamao de la imagen:
Oculares: Son tubos cortos, cada uno con dos lentes. La funcin de stos es amplificar la
imagen del objeto formado por el objetivo. Los oculares estn marcados 5X, 10X, etc.
indicando que amplan la imagen del objetivo 5 veces, 10 veces, etc. Cuando se utiliza el
ocular 10X con el objetivo de pequeo aumento da una amplificacin final de 100 veces. El de
50X dar una amplificacin final de 500 veces y el de 100X una amplificacin final de 1000
veces.

CUIDADO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
1. Para transportar el microscopio a la mesa de trabajo deber tomarse del brazo con la mano
derecha y de la base con la mano izquierda y en posicin vertical.
2. Antes de usarlo, limpiar perfectamente la fuente de luz del microscopio, parte superior del
condensador, oculares y objetivos con vaho y frotando suavemente con hisopos.
3. No encender la fuente de luz, sino hasta que se vaya a usar.
4. Colocar la muestra sobre la platina y girar el objetivo que se va a usar colocndolo en la posicin
correcta mientras que se observa el material.
5. Ver por el ocular y controlar la cantidad de luz adecuada, moviendo el condensador y diafragma.
6. Para enfocar, bajar el objetivo que se va a usar con el uso del tornillo macromtrico hasta donde
tope, sin forzarlo, luego enfocar primero con el tornillo macromtrico y una vez que se ha localizado
el campo, usar el tornillo micromtrico para enfocar adecuadamente.
7. Con respecto al objetivo de inmersin, hay que tener mucho cuidado, ya que la distancia focal es
muy corta y habr que emplear nicamente el tornillo micromtrico y no el macromtrico debido a
que se puede daar la preparacin y la lente del objetivo, para su utilizacin es recomendable:
a) Levantar el tubo ptico del microscopio, antes de poner el objetivo en posicin.
b) Colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin. No usar aceite en exceso, ya que
daa el cemento de las lentes.
c) Viendo por fuera del microscopio, como ya se insisti anteriormente, bajar el objetivo con el
macromtrico hasta que toque la gota de aceite. A partir de ese momento el objetivo estar
prcticamente dentro de su distancia focal. Enfocar la preparacin con movimientos del tornillo
micromtrico.
8. Evitar girar el revlver de los objetivos sin antes levantar el tubo ptico del microscopio.
9. Recordar que el objetivo 45X es ms largo que el de 10X y ms todava que el de inmersin, por lo
que deber tenerse cuidado, pues si llegan a rozar, la platina los inutiliza permanentemente.
10. Cuando se vaya a utilizar el objetivo seco fuerte (45X), hacer primero el enfoque de la preparacin
con el objetivo seco dbil, luego, girar el revlver de tal manera que el siguiente objetivo sea el seco
fuerte, cuidando que la lente no tope con la preparacin.
11. Ajustar el enfoque usando el tornillo micromtrico.
12. Mantener el microscopio retirado de la orilla de la mesa.
Estufa Incubadora
Caja de triple pared con forma de prisma rectangular o
cuadrangular y una puerta de cierre hermtico. Son elctricas.
Posee un termmetro que indica la temperatura interior y un
termorregulador para evitar que las oscilaciones trmicas sean
superiores a medio grado. En su interior hay estantes que
permiten ubicar cajas, tubos o una jarra para anaerobiosis. En el
laboratorio se utiliza para brindar a los microorganismos las
temperaturas necesarias para su desarrollo (incubacin).

Autoclave
La autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios de Microbiologa.
Es un sistema cerrado donde se forma vapor de agua que se somete a una
presin elevada, una atmsfera, lo que hace que el agua alcance una
temperatura de 121C causando la desnaturalizacin de enzimas lo que
conlleva a la muerte de los microorganismos y la destruccin de las esporas.
Habitualmente, se esteriliza a 121C durante 20 minutos.
Centrfuga
Aparato electrnico que consta de un recipiente generalmente cncavo con tapa. En su interior hay
un eje vertical en el cual se insertan porta tubos metlicos en nmero de 6, 8 0
ms. Dentro de esas camisas se colocan los tubos para centrifuga. Algunos
soportes especiales para policubetas u otro tipo de recipientes.
Las velocidades varan segn los modelos, las ms comunes son de 1.000 a 5.000
revoluciones por minuto (rpm), aunque existen ultracentrfugas con velocidades
mayores. Se emplea para separar las partculas en suspensin de los lquidos.
Asas de siembra
Se utilizan para inoculacin o transferencia de cultivos, pueden
ser un alambre de platino, recto en forma de asa, un extremo de
ese alambre se interna en un mando cilndrico que permite
su manejo, termina o en un aro de 5 mm o en punta.
Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen que
contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo tambin llamada solucin
madre al medio de cultivo (slido o lquido) o de un medio a otro (resiembra). Tambin sirve para la
realizacin de frotis.
Porta-Objetos
El portaobjetos es una lmina rectangular de vidrio muy delgada (sus
dimensiones tpicas son de 75 mm x 25 mm), donde se colocan objetos de
mnimo tamao o preparaciones de baja escala, las cuales pueden ser
observadas en el microscopio.
Cubre-Objetos
Es una fina hoja de material transparente de planta cuadrada (normalmente 20mm x 20mm) o
rectangular (de 20 mm x 40 mm habitualmente). Se coloca sobre un objeto que va a ser observado
bajo microscopio, el cual se suele encontrar sobre un portaobjetos. Sirve para: cubrir los objetos que
estn en el portaobjetos que a su vez est en un objeto llamado
microscopio.
Cajas Petri
Consiste en dos cristalizadores de vidrio de 10 cm de dimetro y 2 cm de
altura, uno de los cuales es ligeramente ms grande y sirve de tapa. Se
utiliza para el cultivo y asilamiento de microorganismos en medios
slidos. Ofrece como ventaja una amplia superficie aprovechable con
poco gasto de material.
Hisopos
El hisopo o escobilln se utiliza para la toma de muestras de origen biolgico. Aplicaciones (entre
otras):
- Preparacin de frotis, que una vez coloreados se visualizarn al
microscopio.
- Aislamientos en medios de cultivo.
- Siembra de placas mediante la tcnica de diseminacin en
superficie, como en el caso de los antibiogramas.
- Limpieza en preoperatorios o en toma de muestras biolgicas.
Pipetas
Son tubos largos y angostos con uno de los extremos afilado, se utilizan en las maniobras
tcnicas que requieran: una medicin exacta, el traspaso de lquidos, la siembra, el
trasplante o la toma de material.
Pipeta graduada: posee una escala numerada que determina el volumen de su capacidad.
Las que se usan comnmente estn calibradas 1/10,1/100 o 1/1.000 ml. Su capacidad total
vara desde 0,1 ml a 25 ml.
Pipeta Pasteur: es u tubo cilndrico que disminuye paulatinamente de dimetro hasta
terminar en un pequeo tubo capilar cerrado, que se abre cortndolo en el momento de
su utilizacin. Su longitud es de 30 cm. Se usa para siembre, trasplante o toma de
material.
Matraz
Tiene forma esfrica, cuello cilndrico largo y un fondo plano que le permite mantenerse en posicin
vertical. Puede ser liso o aforado; este ltimo posee una marca en su cuello que indica el volumen de
lquido contenido hasta ese nivel. Se utiliza para la preparacin y la conservacin de
medios de cultivo.
Matraz Erlenmeyer: tiene forma cnica, cuello corto y una base amplia para asegurar
la sustentacin. Tiene la misma utilidad que los matraces.
Matraz Kitazato: la forma es similar a la del Erlenmeyer, del que difiere por poseer
una tubuladura lateral que se emplea para la filtracin al vacio por lo que sus paredes
deben ser ms gruesas y resistentes.
Tubos de ensaye
Los hay de distintos tipos y medidas segn el uso. Los ms comunes son de 18 mm de dimetro por
160 mm de longitud. Para que un tubo sea considerado de buena calidad debe ser de vidrio trmico,
incoloro y transparente. Se utilizan como recipiente para contener medios de cultivos con la
finalidad de realizar siembras y obtener el desarrollo de microorganismos.
Probeta
Recipiente cilndrico con base ensanchada para asegurar sus sustentacin; la parte
superior termina en pico de jara, lo que facilita el transvase. Esta graduada y se la
utiliza para la medicin exacta de lquidos.


Vaso de precipitados
Recipiente cilndrico cuya parte superior termina en pico de jarra. Puede ser
graduado y se utiliza para la mezcla y medicin de lquidos.

Esptula Drigalsky
Se prepara a partir de una varilla de vidrio de 25 cm de largo, la que se acomoda al calor sobre
la llama de un mechero Bunsen. Se emplea para la siembra por diseminacin en caja petri.
Mortero y Piln
Recipiente de vidrio o porcelana con paredes gruesas. Su interior es spero y su borde posee un pico
vertedor. Se emplea, entre otros fines, para triturar sustancias o muestras
de biopsia, con el auxilio de una masa o piln.





Mechero Bunsen
Consta de un tubo metlico unido a una base pesada que lo mantiene en posicin vertical y cuya
parte inferior posee orificios que permiten regular la entrada de aire. Utiliza como fuente de calor la
combustin de gas.

Trpode
Es un soporte de hierro formado por un anillo sostenido por tres vstagos o
patas. Se le utiliza para mantener recipientes que sern
calentados por medio de un mechero Bunsen, el que se sita por
debajo, entre los vstagos.


Soporte de Tubos
Tambin llamado gradilla, puede ser de alambre, madera, platico o metal. Sirve para mantener los
tubos en posicin vertical.