La betalactamasa (a veces usado con el guion: beta-lactamasa) es una enzima (EC
3.5.2.6) producida por algunas bacterias y es responsable por la resistencia que stas exhiben ante la accin de antibiticos betalactmicos como las penicilinas, las cefalosporinas, monobactamicos y carbapenmicos (carbapenemasas). Todos estos antibiticos tienen un elemento en comn dentro de su estructura molecular denominado anillo betalactmico, un anillo qumico de cuatro tomos. Las lactamasas rompen el anillo, desactivando las propiedades antimicrobianas de la molcula. Las betalactamasas por lo general son producidas por bacterias Gram negativas en forma secretada. Por lo general, las cepas resistentes a la penicilina se relaciona directamente con el porcentaje de cepas productoras de betalactamasa
Se han descrito ms de 200 -lactamasas diferentes. Algunas son especficas para penicilinas (es decir, penicilinasas) o cefalosporinas (es decir, cefalosporinasas), mientras que otras tienen un espectro amplio de actividad, incluyendo algunas que son capaces de inactivar la mayora de antibiticos - lactmicos. Este ltimo grupo de -lactamasas (- lactamasas de espectro ampliado [BLEAs]) es problemtico porque con frecuencia estn codificadas en plsmidos y pueden transferirse de un organismo a otro.
Las -lactamasas se clasifican segn los sustratos sobre los que actan, las sustancias capaces de inhibirlas y la similitud en sus secuencias de aminocidos. Las clasificaciones ms utilizadas son las de Ambler y la de Bush-Jacoby-Medeiros. La clasificacin de Ambler distingue cuatro clases de -lactamasas en funcin de sus secuencias aminoacdicas. Las de las clases A, C y D son serina -lactamasas y las de clase B metalobetalactamasas dependientes de zinc. Por su parte, la clasificacin de Bush- Jacoby-Medeiros separa las -lactamasas en funcin de su perfil hidroltico y de sus inhibidores y distingue cuatro categoras y mltiples subgrupos. Dentro del grupo 2 (penicilinasas sensibles al cido clavulnico) se encuentra el subgrupo 2be, que engloba a ms de 200 -lactamasas de espectro extendido (BLEE) derivadas de TEM, de SHV o del tipo CTX-M, que se caracterizan por generar un distinto nivel de resistencia a cefalosporinas de tercera generacin, recuperable en presencia del cido clavulnico. En agosto de 2009 las -lactamasas derivadas de TEM alcanzaban ya la TEM-174 (segn numeracin consecutiva desde la TEM-1) y, en el caso de las derivadas de SHV, la ltima reflejada era la SHV-127. Entre todas ellas se encuentran -lactamasas de los subgrupos 2b (de amplio espectro), 2be (BLEE) y 2br (resistentes a inhibidores)
Tcnicas de deteccin de las -lactamasas. El fundamento de la deteccin de las -lactamasas es el de enfrentar la bacteria en estudio con los preparados betalactmicos para poner en evidencia la estabilidad (mayor o menor) de stos frente a las enzimas -lactamasas producidas por dichas bacterias. Los mtodos utilizados varan de acuerdo a la especie bacteriana a ser estudiada, el antibitico a ensayar y el tipo de enzima a detectar Hay diferentes tipos de tcnicas de deteccin entre ellas tenemos: 1.- las bioqumicas, subdivididas en las yodomtricas, cromognicas, y las tcnicas de tipo 2.- microbiolgicas
Tcnicas bioqumicas. a. Acidimtrica: Son poco especficas, se basa en que los grupos carboxilo formados por hidrlisis, acidifica el medio. b. Yodomtricas: Se basan en las propiedades reductoras que poseen los productos de hidrlisis del anillo -lactmico hacia una mezcla de yodo - almidn. Esta tcnica es til para detectar penicilinasas. c. Cromognicas: La hidrlisis de determinados preparados -lactmicos da lugar a la formacin de productos, con un espectro de absorcin en la regin visible, diferente a la del compuesto inicial. El compuesto ms utilizado es la nitrocefina la cual cambia de color amarillo al rojo oscuro al ser hidrolizado. Esta tcnica es de gran sensibilidad (detecta cantidades muy pequeas de enzima) y se utiliza frecuentemente.
Tcnicas Microbiolgicas. Se basan en la prdida de actividad animicrobiana de los antibiticos al ser hidrolizados por la -lactamasa de la bacteria en estudio. Se utiliza una cepa control denominada S (sensible) y una cepa problema denominada R (resistente). Si la resistencia es enzimtica la cepa R problema, destruye al antibitico de su entorno, permitiendo crecer a la cepa reveladora (S) (4,6, 10). Esta tcnica requiere ms tiempo que la tcnica bioqumica, sin embargo es de mayor utilidad. Entre estas tcnicas podemos citar la ms utilizada como screening para deteccin de resistencia, la tcnica disco-placa (10). Otra tcnica utilizada frecuentemente es la sinergia en doble disco (10, 11). Se utiliza para la deteccin de enzimas de espectro ampliado y se basa en la propiedad del cido clavulnico de inhibir estas enzimas. En esta tcnica se inocula una placa con agar Mueller Hinton con la cepa problema a probar y se coloca un disco de amoxicilina- clavulnico en el centro de la placa y discos de cefotaxime, ceftazidina, ceftriaxone y aztreonam a su alrededor y a 30 mm exactos, del disco central. La prueba se considera positiva cuando hay disminucin hacia alguno de los preparados cuando se combina con sinergia para el cido clavulnico. Para la deteccin de -lactamasas de bacterias Gram negativo como H. influenzae, Neisseria y Bacteroides son tiles todas las tcnicas ya que las enzimas que se producen son extracelulares. Para las bacterias Gram negativo, las -lactamasas tienen sustratos fciles de obtener, por lo que la tcnica cromognica es la ms utilizada. En el caso de bacterias Gram negativo en que la membrana externa dificulta el acceso del sustrato al espacio periplsmico es necesario recurrir a la ruptura mecnica o qumica de la clula bacteriana (9). Las tcnicas que se utilizan para la caracterizacin de las -lactamasas son (4): 1.- Espectro de hidrlisis. 2.- Inhibicin de la actividad hidroltica hacia diferentes sustancias. 3.- Peso Molecular. 4.- Punto isoelctrico. 5.- Hiperproduccin de enzimas. 6.- Secuencia de aminocidos. 7.- Secuencia de nucletidos. 8.- Hibridacin de ADN-ADN. El papel del laboratorio de microbiologa es crucial en el reconocimiento de resistencia por enzimas -lactamasas en las diferentes infecciones, por lo que debe de estar alerta ante la presencia de un fenotipo poco habitual e iniciar un plan racional para.el control de las infecciones que pudieran producirse. Sin embargo, no existe una metodologa que rena sensibilidad, especificidad y sencillez para la deteccin de las -lactamasas de amplio espectro y de sus variantes, por lo qu es importante el criterio profesional del microbilogo a la hora de seleccionar las pruebas ms convenientes al utilizar en cada caso.
Otros aspectos importantes en la deteccin de -lactamasas
E. coli, Shigella, Salmonella y P mirabilis.
Producen generalmente niveles insignificantes de -lactamasa cromosmica AmpC no. inducible que no causa resistencia a los preparados -lactmicos, aunque en casos ocasionales E. coli podra producirlo por mutaciones a nivel del locus del promotor, o del atenuador o ambos, en este caso se producen cantidades importantes de enzima-cepas hiperproductoras, estas cepas suponen menos del 2%.
La resistencia en estos casos va siempre ligada a plsmidos en el 50% de las E. coli siendo la enzima ms frecuente la TEM- 1 en el 90% de los casos. Algunas E. coli son resistentes al cido clavulnico con hiperproduccin de enzima TEM, o hiperproduccin por mecanismos cromosmicos. Tambin se han encontrado enzimas resistentes a otros inhibidores sobre todo tipo OXA.
Conclusiones La escasa eficacia de las medidas instauradas en las ltimas dcadas para combatir la aparicin de cepas bacterianas insensibles o poco sensibles a los antibiticos convencionales, indica que este fenmeno de la resistencia bacteriana es inevitable. Sin embargo, s es posible modificar la velocidad con que se desarrolla la resistencia, por medio de diversas medidas como lo es el uso racional de estos medicamentos y la educacin de los pacientes, dirigida a evitar la automedicacin y hacia el cumplimiento exacto de los esquemas de antibioterapia ordenados por el mdico. Otra estrategia importante es la seleccin adecuada del rgimen antibitico, para lo cual es importante conocer la clase de flora microbiana predominante y la prevalencia de cepas resistentes a un determinado antibitico, en la comunidad o en la institucin de salud correspondiente. "La resistencia bacteriana es un problema constante, desde los- primeros aos de la era antibitico y uno de los factores que ms preocupacin genera, es que cada vez es menor el intervalo entre la introduccin de un nuevo antibitico y la aparicin de cepas resistentes. La presin selectiva ejercida sobre el ecosistema de las bacterias y la utilizacin abusiva e incontrolado de los antibiticos, permite la seleccin de grmenes con mecanismos de resistencia ms refinados y complejos, de manera que la aparicin de "superbacterias", es una posibilidad cada vez ms cercana y no es descabellado augurar un futuro sombro, en que los antibacterianos perdern una gran parte de su utilidad actual" Ello ha promovido la investigacin de novedosas alternativas para combatir las bacterias, entre ellas el uso de las molculas naturales de defensa (cecropinas, magaminas, melitinas, etctera), producidas por varias especies de organismos superiores, as como el diseo de pptidos cannicos sintticos. Los primeros resultados promisorios indican que en este campo est la base para el desarrollo de los antimicrobianos del futuro.