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366

UNIVERSIT CADI AYYAD N dordre : 366


FACULT DES SCIENCES
SEMLALIA - MARRAKECH
**********************


THSE

prsente la Facult des Sciences Semlalia pour obtenir le grade de :
Docteur
UFR : Sciences de lEau
Spcialit : Biochimie & Traitement des Eaux Uses

VALORISATION DES MARGINES PAR ISOLEMENT DES
POLYPHENOLS AVEC DES PROCEDES MEMBRANAIRES DE
SEPARATION

par :
Abdelilah EL ABBASSI
(DESA: Gestion de la Biodiversit Fossile et Actuelle)


Soutenue, le 30 Mars 2013 devant la commission dexamen :

Prsident : Ahmed Benharref P.E.S. Facult des Sciences Semlalia, UCA - Marrakech
Examinateurs : Omar Assobhei P.E.S. Facult des Sciences, UCD - El-Jadida
Abdelrhani Yaacoubi P.E.S. Facult des Sciences Semlalia, UCA - Marrakech
Abdellatif Hafidi P.E.S. Facult des Sciences Semlalia, UCA- Marrakech
Mohamed Khayet P.E.S. Facult des Physiques, UCM Madrid
Mohamed Mountadar P.E.S. Facult des Sciences, UCD - El-Jadida
Naila Ouazzani P.E.S. Facult des Sciences Semlalia, UCA - Marrakech






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REMERCIEMENTS

Le prsent travail naurait pas avoir lieu sans la contribution de plusieurs personnes.
Je tiens exprimer ma profonde gratitude en remerciant tous ceux qui mont aid pour mener
bien ce travail.
Je tiens tout dabord exprimer mes vifs remerciements au Professeur Abdellatif
Hafidi. Si jai pu mener bien ce travail, cest lui que je suis redevable. Il a su me guider
avec une constante bienveillance et ma communiqu sa passion pour la recherche et ma -
sans cesse - fait bnficier de son soutien, de son exprience et de son aide aussi prcieux
quefficace. Quil accepte ici tous mes remerciements et qu'il trouve ici l'expression de ma
profonde gratitude.
Je tiens adresser galement mes sincres remerciements au Professeur Mohamed
Khayet pour son aide renouvele sans cesse.Une partie de ce travail a t ralise au sein de
son laboratoire la Facult des Sciences Physiques (Universit de Complutense Madrid).
La rigueur de ses analyses et la qualit de ses conseils ont t dun soutien considrable pour
la russite de ces recherches.
Que le Professeur Jan Hoinkis, de lUniversit des Sciences Appliques de karlsruhe
(Allemagne) trouve ici lexpression de mes sincres remerciements davoir accept de
maccueillir au sein de son laboratoire pour la ralisation dune partie de ce travail.
Que Messieurs les Professeurs Omar Assobhei et Mohamed Mountadar de la Facult
des Sciences (Universit Chouaib Doukkali El-jadida), Pr. Ahmed Benharref, Pr.
Abdelghani Yaacoubi et Madame Pr. Naila Ouazzani de la Facult des Sciences Semlalia
(Universit Cadi Ayyad Marrakech), trouvent ici lexpression de mes sincres
remerciements pour leur participation au jury de ma soutenance de thse malgr leurs
proccupations et pour lintrt quils portent notre travail.
Je tiens prsenter mes remerciements Messieurs les professeurs Hamid Ajana et
Benichou Mohamed pour leur soutien constant durant toutes ces annes de prparation de
thse.
De nombreuses personnes, de notre Laboratoire de Sciences des Aliments, par leurs
aides, conseils et discussions ont contribu enrichir ce travail. Ainsi jadresse mes sincres
remerciements Mme Sagar Maha et aux Mlles Hanane Moummou, Hajar Kiai, Jihane Raiti
et Thouria Bourhim.


ii
Je ne saurais oublier ici de remercier mes amis Mohamed El Atiqi, Faghir Mustapha,
Abdelhadi Ewague, Moulay Youssef Arjouni, Mounir Chammaa, Sana El Fadeli, Hasna
Soummane, Majida Lahrouni et Nabila Saadaoui pour leur amiti et complicit ainsi que
pour leur soutien durant la priode de la ralisation de ce travail.
Je tiens rendre un grand hommage mes parents pour leurs soutiens moral et
matriel. Leurs efforts considrables et leurs encouragements mont permis de mener terme
ce travail. Quils trouvent ici lexpression de ma haute considration.
Que tous ceux que je nai pas cits et qui ont particip de prs ou de loin la
ralisation de ce travail soient assurs de toute ma reconnaissance et mes remerciements.

iii
AVANT PROPOS

Nom et Prnom de lauteur : Abdelilah EL ABBASSI
Intitul du travail : Traitement et valorisation des margines par des procds de sparation
membranaires.

Encadrant:
Non, prnom et grade : Abdellatif Hafidi, PES
Laboratoire et institution : Laboratoire Sciences des Aliments, Facult des Sciences
Semlalia Universit Cadi Ayyad, Marrakech.

Co-encadrant:
Nom, prnom et grade : Mohamed Khayet, PES
Laboratoire et institution : Dpartement de Physique Applique I, Facult des Sciences
Physiques, Universit Complutense de Madrid, Madrid (Espagne).
Lieux de ralisation des travaux :
Laboratoire Sciences des Aliments, Facult des Sciences Semlalia-Marrakech.
Dpartement de Physique Applique I, Facult des Sciences Physiques, Universit
Complutense de Madrid, Madrid (Espagne).
Universit des Sciences Appliques de Karlsruhe, Allemagne.

Priode de ralisation du travail de thse : Mars 2007- Dcembre 2010

Rapporteurs autres que les encadrants :
A. Benharref P.E.S. Facult des Sciences Semlalia, UCA - Marrakech
M. Mountadar P.E.S. Facult des Sciences, UCD - El-Jadida
N. Ouazzani P.E.S. Facult des Sciences Semlalia, UCA - Marrakech

Cadre de coopration et sources de financement:

1. Action Intgre Maroco-Espagnol numro A/016076/08, intitul Prparation des
membranes pour le traitement des margines marocaines et rcupration des polyphnols par
distillation membranaire osmotique financ par lAECID, Espagne.
2. Action Intgre Maroco-espagnol numro A/6209/06, intitul Traitement et valorisation des
margines par technologies de sparation membranaires financ par lAECID, Espagne.
3. Bourse IFS numro W4749-1, intitul Treatment and Valorisation of olive mill effluents
using micellar enhanced ultrafiltration, financ par la Fondation Internationale de la
Sciences (IFS), Sude.


iv
Publications et communications en rapport avec le prsent travail:

Publications
1. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. 2013. Application of ultrafiltration to the
treatment of olive processing wastewaters. Journal of Cleaner Production, (Accept)
2. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Khayet, M., Treatment of
crude olive mill wastewater by osmotic distillation. Separation and Purification
Technology 104: 327332. (2011 Impact factor: 2.921).
3. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hoinkis, J., Hafidi, A. Removal of phenolic compounds by
micellar enhanced ultrafiltration using an anionic surfactant. Journal of Materials and
Environmental Science. (Soumis)
4. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hoinkis, J., Hafidi, A. Separation of natural monocyclic
phenolic compounds in synthetic wastewaters using a cationic surfactant. Water
Science & Technology. (Soumis)
5. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. Cloud Point Extraction of Phenolic Compounds
from Pretreated Olive Mill Wastewater. Separation and Purification Technology.
(Soumis)
6. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Khayet, M. Integrated
Direct Contact Membrane Distillation of Olive Mill Wastewater. Desalination (2011
Impact factor: 2.590). Sous presse.
7. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Khayet, M. Treatment of
Olive Mill Wastewater by Membrane Distillation using Polytetrafluoroethylene
Membranes. Separation and Purification Technology, 98 (2012) 55 61. (2011
Impact factor: 2.921).
8. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., 2012. Phenolic profile and antioxidant activities
of olive mill wastewater. Food Chemistry 132: 406 412 (2011 Impact factor: 3.655)
9. El-Abbassi, A., Hafidi, A., Khayet, M., 2011. Micellar-Enhanced Ultrafiltration
process for olive mill wastewater treatment. Water Research 45 (15): 4522 4530.
(2011 Impact factor: 4.865)
10. El-Abbassi, A., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Khayet, M. Concentration of olive
mill wastewater by membrane distillation for polyphenols recovery. Desalination
245(1-3) (2009) 670 674. (2011 Impact factor: 2.590)

Publications en prparation

1. El-Abbassi, A., Kiai, H., Riati, J., Hafidi, A., An overview on polyphenol extraction
and recovery methods from olive mill wastewater.
2. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. Antioxidant capacities of phenolic extracts from
residual resources.

Communications dans des congrs nationaux et internationaux

1. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A. Antioxidant capacities of phenolic extracts from
olive processing wastewaters. The 1
st
Morocco-Japan Symposium on Sustainable
Society Through Advanced Sciences, Mars 15-16, 2012, Marrakech, Morocco.
2. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Treatment of olive processing wastewaters using
micellar solubilization. The 1
st
Morocco-Japan Symposium on Sustainable Society
Through Advanced Sciences, Mars 15-16, 2012, Marrakech, Morocco.
3. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garcia-Payo, M.C., Khayet, M., Treatment of
olive mill wastewater by osmotic distillation. 3
me
dition du Congrs International
Eaux, Dchets et Environnement (EDE3) 21- 23 novembre 2011, Fs, Maroc.

v
4. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Vlez-Agudelo, C., Garca-Payo, M.C., Khayet,
M., Direct contact membrane distillation of Moroccan olive mill wastewater.
International Workshop on Membrane Distillation and Related Technologies, October
9 - 12, 2011, Institute on Membrane Technology (ITM-CNR), Ravello, Italy.
5. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Antioxidant capacities of phenolic extracts from
residual resources. The 16
th
International Symposium on Environmental Pollution and
its Impact on Life in the Mediterranean Region (MESEAP), September 24-27, 2011,
Ioannina, Greece.
6. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Antioxidant and radical scavenging activity of
bioactive compounds from agroindustrial by-products. 3
me
dition du congrs
international sur lAmlioration de la Production Agricole (APA3), 17-18 Mars 2011,
Facult des Science et Techniques - Settat, Maroc.
7. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Comparative study on chemical changes in olives
and brine during the fermentation of olives from Moroccan picholine. 3
me
dition du
congrs international sur lAmlioration de la Production Agricole (APA3), 17-18
Mars 2011, Facult des Science et Techniques - Settat, Maroc.
8. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garca-Payo, M.C., Khayet, M., Treatment of
olive mill wastewater by osmotic membrane distillation. Student Exchange Meeting
2011, Society of Chemical Engineers, University of Tsukuba, March 4, 2011, Tsukuba-
Ibaraki, Japan.
9. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Decolorization and detoxification of olive mill
wastewater by ultrafiltration. The First International Seminar on Water, Energy and
Environment -ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers, Algeria.
10. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garca-Payo, M.C., Khayet, M., Treatment of
olive mill wastewater by osmotic membrane distillation. The First International
Seminar on Water, Energy and Environment ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers,
Algeria.
11. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Treatment of Olive Table Wastewaters by
Ultrafiltration. The First International Seminar on Water, Energy and Environment
ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers, Algeria.
12. Khayet, M., El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Garca Payo, M.C., Essalhi, M.,
Direct contact membrane distillation of olive mill wastewater. 2
nd
International
Chemical Engineering Conference, October 12-13, 2010, University of Jordan,
Amman, Jordan.
13. El-Abbassi, A., Kiai, H., Hafidi, A., Khayet, M. Essalhi, M., Garca-Payo, M. C.,
Olive Mill Wastewater Treatment and Concentration by Membrane Distillation using
polytetrafluoroethylene membranes. 5
th
International Conference on Thermal
Engineering, May 10-14, 2010. Marrakech Morocco.
14. El-Abbassi, A., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Khayet, M., Treatment of olive mill
effluents by Osmotic Membrane Distillation. The 2
nd
Maghreb Conference on
Desalination and Water Treatment CMTDE 09, 19-22 December 2009, Hammamet,
Tunisia.
15. Hafidi, A. El-Abbassi, A. and Hoinkis, J., Removal of phenolic compounds from
model solutions using Micellar Enhanced Ultrafiltration. 15
th
International Symposium
on Environmental Pollution and its Impact on Life in the Mediterranean Region,
October 7-11, 2009, Bari, Italy.
16. El-Abbassi, A., Khayet, M., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Application de la
distillation membranaire au traitement des effluents liquides de lindustrie olicole. Les
5
me
Journes Internationales des Gosciences de lEnvironnement. 13-15 Mai 2009.
Fs, Maroc.

vi
17. El-Abbassi, A., Hafidi, A., Traitement des margines par floculation micellaire
adsorptive. 1
re
Rencontre nationale sur la valorisation des sous-produits
agroalimentaires. 20-21 Novembre 2008. Beni Mellal, Maroc.
18. El-Abbassi, A., Khayet, M., Hafidi, A., Garca-Payo, M. C., Recovery of polyphenols
from olive oil mill wastewaters by micellar enhanced ultrafiltration. 1
re
Rencontre
nationale sur la valorisation des sous-produits agroalimentaires. 20-21 Novembre 2008.
Beni Mellal, Maroc.
19. El-Abbassi, A., Garca-payo, M. C., Hafidi, A., khayet, M., Concentration of olive
mill wastewater by membrane distillation for polyphenols recovery. Engineering With
Membrane; Membrane processes: development, monitoring and modeling from the
nano to the macro scale- May 25-28, 2008, Algarve - Portugal.
20. El-Abbassi, A., Hafidi, A., 2007. Application de dialyse au traitement des effluents de
lindustrie olicole, 3
me
Journe Scientifique Nationale : Environnement et Sant, 15
Novembre 2007, Mohammedia, Maroc.

Autres
1. Participation au premier espace euro-mditerranen dinnovation (EMIS) Forum sur le
management de leau et des eaux uses, dans le cadre du Salon de l'innovation, de la
recherche et du partenariat technologique (MED INNOVA 2011) 1-2 Dcembre, 2011
Casablanca/Maroc.
2. Participation la Rencontre Internationale sur la Gestion des Ressources en Eau dans
les Zones Arides. Apport des procdes non conventionnels, les 21-22 Mars 2008 au
Palais des congrs de Layoune, Maroc.

Publications et communications hors sujet de thse:
Publications
1. Khalid, N., El-Abbassi, A., Ahmad, A., Ahmed, A., Moringa Oleifera oil: Nutritive
value and health implications. Journal of Microbiology, Biotechnology and Food
Science. Soumis
2. El-Abbassi, A., Neves, M.A., Kobayashi, I., Hafidi, A. Nakajima M., Preparation and
characterization of highly stable monodisperse argan oil-in-water emulsions. European
Journal of Lipid Science and Technology (2011 Impact factor: 1.733). Accept
3. El-Abbassi, A., Khalid, N., Zbakh, H., Ahmad, A. Physicochemical characteristics,
nutritional properties and health benefits of argan oil: a review. Critical Reviews in
Food Science and Nutrition (2011 Impact factor: 4.789). Sous press
4. Zbakh, H., El-Abbassi, A., Potential use of olive mill wastewater in the preparation of
functional beverages: a review. Journal of Functional Food 4 (2012) 5365. (2011
Impact factor: 2.446)
5. Aourir, M., Znari, M., El-Abbassi, A., Radi, M., Melin, J-M., 2008. Reproductive
Parameters in Captive hand-reared Black-bellied Sandgrouse, Zoo Biology 27 (4): 269
281. (2010 Impact factor: 0.663)
6. El-Abbassi, A., Znari, M., Aourir, M., Ba MHamed, S., 2007. Ontognie du
comportement chez la perdrix gambra, Alectoris barbara (Aves: Galliformes).
Biomatec Echo Review 2 (5): 76 84.


vii
Communications dans des congrs nationaux et internationaux

1. El fadeli, S., Bouhouch, R., El Abbassi, A., Chaik, M., Aboussad, A., Lekouch, N.,
Hurrell,

R.F., Zimmermann, M.B., Sedki. A. Soil, drinking water and plants
contaminated with lead and health risk assessment, from Marrakech area, Morocco. La
4
me
confrence sur: les techniques analytiques nuclaires et conventionnelles et leurs
applications. 22 au 23 Octobre 2012, Rabat-Maroc.
2. El fadeli, S., Bouhouch, R., El Abbassi, A., Chaik, M., Aboussad, A., Lekouch, N.,
Hurrell,

R.F., Zimmermann, M.B., Sedki. A. The risk of environmental contamination
of lead on food chain from Marrakech area, Morocco. 1
er
congrs International de
lAssociation Tunisienne de Physiologie et de Biosurveillance de lEnvironnement .19
au 22 dcembre 2012, Douz Tunisie.
3. El fadeli, S., Bouhouch, R., El Abbassi, A., Chaik, M., Aboussad, A., Lekouch, N.,
Hurrell,

R.F., Zimmermann, M.B., Sedki. A. lead contamination in soil, drinking water
and plants from Marrakech area, Morocco. Istanbul International Solid Waste, Water
and Wastewater Congress (Istanbul3WCongress 2013). May 22-24, 2013 Istanbul-
Turkey.
4. El-Abbassi, A., Neves, M.A., Hafidi, A., Nakajima M., Preparation and
characterization of highly stable monodisperse argan oil-in-water emulsions. The 12
th

Annual Meeting of the Japan Society for Food Engineering, August 5-6, 2011, Kyoto
Terrsa, Kyoto, Japan.
5. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Comparative study on chemical changes in olives
and brine during the fermentation of olives from Moroccan picholine. 3
me
dition du
congrs international sur lAmlioration de la Production Agricole (APA3), 17-18
Mars 2011, Facult des Science et Techniques - Settat, Maroc.
6. Kiai, H., El-Abbassi, A., Hafidi, A., Treatment of Olive Table Wastewaters by
Ultrafiltration. The First International Seminar on Water, Energy and Environment
ISWEE11- March 01-03, 2011 Algiers, Algeria.
7. El-Abbassi, A. and Hafidi, A., Traitement des eaux uses des teintureries par
Ultrafiltration Assiste par Micelle. Les 5me Journes Internationales des
Gosciences de lEnvironnement. 13-15 Mai 2009. Fs, Maroc.
8. El-Abbassi, A., Chammaa, M., Lahrouni, A. & Ghoulam, C., Application des
techniques de contrle du stresse hydrique chez lolivier: effet sur la croissance et le
rendement. 2
me
dition du congrs national sur lAmlioration de la Production
Agricole (APA2), 03-04 Avril 2008, Facult des Science et Techniques - Settat,
Maroc.
9. El-Abbassi, A., Znari, M., Aourir, M., Ba MHamed, S., 2007. Analyse
morphomtrique de la croissance et htrochronie du dveloppement chez la perdrix
gambra, Alectoris barbara. Communication orale, 5
me
Symposium Morphomtrie et
volution des Formes , Musum dHistoire Naturelle, 26 et 27 Mars 2007, Paris.
10. El-Abbassi, A., Znari M., Aourir, M., Radi, M., Ba Mhamed, S., Ontognie du
comportement chez la perdrix gambra (Alectoris barbara, Aves : Phasianidae). 2
nd

Mediterranean Conference of Neurosciences, 13-15 dcembre 2006. Marrakech,
Maroc.

viii
Valorisation des margines par isolement des polyphnols avec des procds
membranaires de sparation
Rsum
Les margines ou eaux rsiduaires des industries dextraction de lhuile dolive sont
responsables de srieux problmes de pollution. Au Maroc, mais galement dans dautres pays
olicoles, les margines sont dans la plupart des cas dverses sans aucun traitement dans le milieu
naturel, soit directement soit travers le rseau public dassainissement. Leur pouvoir polluant est
attribu principalement leur contenu phnolique.
Nos travaux dmontrent les potentialits d'un procd intgr pour la concentration,
l'limination et la rcupration de composs phnoliques des margines. Deux procds membranaires
(Ultrafiltration, UF et microfiltration, MF) ont t tests pour un prtraitement des margines rduisant
leur charge organique. Deux autres procds membranaires diffrents, savoir d'ultrafiltration assiste
par micelles (UFAM) et la distillation membranaire contact directe (DCMD) ont t appliqus avec
succs pour la concentration pralable des margines avant la rcupration des composs phnoliques.
La concentration des composs phnoliques des margines facilitera leur purification ultrieure.
Le traitement des margines par distillation membranaire avec des membranes de tflon (PTFE)
a permis la concentration du contenu phnolique des margines jusqu 1,78 fois aprs 8 heures de
distillation. Le meilleur indice de performance a t obtenu par la membrane TF1000. En plus, leffet
de traitement des margines par tempratures leves sur leur contenu phnolique et leur activit
antioxydante (test de DPPH) a t valu en fonction du temps de traitement. Les rsultats obtenus
montrent quil ny pas deffets indsirables de la temprature leve (jusqu 80C) sur le contenu
phnolique et son activit antioxydant. En distillation osmotique isothermique, les membranes de
PTFE offrent aussi des flux raisonnables (2,9-4,2 L/h.m
2
) avec des facteurs de concentration du
contenu phnolique des margines de lordre de 1,2 aprs 280 min de distillation osmotique 30C.
Nos rsultats dmontrent que lUFAM permet - sous des conditions optimises llimination
de 88% de la couleur sombre des margines et de 95% de la DCO initiale avec un taux de rtention des
composs phnoliques de 70%. Le rejet de composs phnoliques individuels partir des solutions
modles a t tudi en utilisant diffrentes tailles des pores membranaires (20 et 50 KDa) et en
employant diffrents types d'agents tensioactifs (cationique et anionique). Les rtentions ont t trs
leves lors de l'utilisation de 10 fois la concentration micellaire critique (CMC) du chlorure de
ctylpyridinium (CPC) et a atteint 95% pour l'acide p-coumarique. Les taux de retentions se sont
rvls dpendants de la structure molculaire des composs phnoliques. Le tensioactif a t rcupr
efficacement du retentt par prcipitation sous sa temprature de Krafft, surtout 5 C, o le taux de
rcupration a t suprieur 90%. La rcupration du tensioactif (SDS) par prcipitation avec des
lectrolytes a t aussi tudie et a montr son efficacit. Toutefois, la prcipitation physique (par
abaissement de temprature) reste la plus pratique et la plus efficace par rapport la prcipitation
chimique qui ncessite laddition des sels aux solutions. Le recyclage du tensioactif du permat et du
retentt rendra le procd plus cologique et conomique et permettra ainsi de rduire toute pollution
secondaire gnre par des agents tensioactifs.
Le procd dextraction des polyphnols des margines par point de trouble (cloud point)
(CPE) a t appliqu pour la rcupration des composs phnoliques. Les rsultats obtenus montrent la
possibilit d'extraire jusqu' 66,5% de la teneur totale en composs phnoliques des margines en
utilisant un seul cycle dextraction par CPE. Le rendement le plus lev a t obtenu lors de
l'utilisation de 10% de Triton X-100 90 C. Les rsultats montrent que le CPE peut tre une
alternative efficace aux mthodes classiques d'extraction, car elle peut offrir un mlange
d'antioxydants naturels adapts pour des applications pharmaceutiques, cosmtiques ou alimentaires.
Ltude des activits antioxydantes des extraits des margines a rvl un pouvoir antioxydant
comparable certains antioxydants synthtiques largement employs dans lindustrie alimentaire. Vu
leur valeur conomiques, les composs phnoliques rcuprs, constitueront une source de revenues
supplmentaires pour les huileries.
Mots cls : margines ; polyphnols ; activits antioxydantes ; ultrafiltration assiste par micelles ;
distillation membranaire ; extraction par point de trouble.
ix
Valorization of olive mill wastewater by recovering the phenolic content
using membrane separation processes
Abstract
Olive mill wastewaters (OMW) are responsible for serious pollution problems especially in
the Mediterranean basin. In Morocco, like in other olive-growing countries, OMW are in the most of
cases discharged untreated into the natural environment, either directly or through the public sewage
system. Their pollutant power is mainly attributed to their phenolic content.
Our works demonstrate the potential of an integrated process for the concentration, the
removal and the recovery of phenolic compounds from OMW. Two membrane processes
(Ultrafiltation, UF and microfiltration, MF) were tested for the pretreatment of OMW by reducing
their organic load. Two other different membrane processes, namely micellar-enhanced ultrafiltration
(MEUF) and direct contact membrane distillation (DCMD) have been successfully applied for the
preconcentration of OMW prior to the recovery of phenolic compounds. The concenration of the
phenolic compounds allow the economy of chemicals used later for extraction.
OMW treatment by membrane distillation (MD) using polytetrafluoroethylene (PTFE)
membranes, allow the concentration of OMW phenolic content 1.78 times after 8 hours of membrane
distillation process, obtaining the best performance index when using the membrane TF1000 with a
mean pore size 1 m. In addition, the effect of OMW treatment by high temperatures on the phenolic
content and its antioxidant activity (DPPH test) was evaluated against operating time. It was observed
that the treatment of OMW at high temperatures (<80C) has almost no negative effect on the total
phenolic content neither on its antioxidant activity since the antioxidant activity increased by 15%
(IC
50
decreased from 146 to 125 g/ml) and the total phenolic content (TPC) increased by 16%.
Furthermore, PTFE membranes showed reasonable permeate fluxes (2,9-4,2 L/h.m
2
) when used in the
isothermal osmotic distillation (OD) giving concentration factor of OMW phenolics of 1.2 after 280
min of treatment at 30C.
The results demonstrate that MEUF allows in optimal conditions the elimination of 88% of
the OMW dark color and 95% of the initial COD along with a retention rate of phenolic compounds
approaching 70%. The rejection of individual phenolic compounds from model solutions was also
investigated using membranes of different pore sizes (20 and 50 kDa) and using different types of
surfactants (cationic and anionic). Retentions were very high when using 10 times the critical micelle
concentration (CMC) of Cetylpyridinium chloride (CPC) and reached 95% for p-coumaric acid. The
MEUF shows differential retentions depending on the molecular structure of phenolic compounds.
The surfactant was effectively recovered by precipitation from the retentate at temperatures below its
Krafft temperature, especially at 5 C, where the recovery rate was above 90%. The recovery of the
surfactant (SDS) by precipitation with electrolytes was also studied and showed its effectiveness.
However, the physical precipitation (by lowering the temperature) is the most practical and effective
compared to chemical precipitation, which requires the addition of salt to the solutions. Recycling of
surfactant from the permeate and retentate will make the process more ecological and economical and
will thus reduce any secondary pollution generated by surfactants.
Cloud point extraction (CPE) method was applied for the recovery of phenolic compounds
from pretreated OMW by UF. The results show the possibility of extracting up to 66.5% of the total
phenolic content of OMW using a single extraction stage by CPE. The highest yield was obtained
when using 10% of Triton X-100 at 90 C. The results show that the CPE can be an effective
alternative to the classical extraction methods because it can offer a mixture of natural antioxidants
suitable for pharmaceutical, cosmetic or food application. The study of antioxidant activities of OMW
extracts revealed a powerful antioxydant capacity comparable to some synthetic antioxidants widely
used in the food industry. Regarding their economic interests, the recovered phenolic compounds can
be a source of additional incomes for oil mills owners and thereby can participate to the sustainable
development of rural areas.
Keywords : Olive mill wastewater ; polyphenols ; antioxidant activities ; micellar-enhanced
ultrafiltration ; membranaire distillation; cloud point extraction.
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xi

SOMMAIRE
REMERCIEMENTS i
AVANT PROPOS iii
PRINCIPALES PUBLICATIONS ET COMMUNICATIONS iv
RESUME viii
ABSTRACT ix
,( x
SOMMAIRE xi
INTRODUCTION GENERALE 1
CHAPITRE 1. REVUE BIBLIOGRAPHIQUE
5
1. Introduction 5
2. Caractristiques physico-chimiques des margines 6
3. Les problmes environnementaux engendrs par les margines 9
4. Les composs phnoliques 10
4.1. Nature et diversit 10
4.2. Activits antioxydantes et bienfaits des polyphnols des margines 12
4.2.1. Intrts agroalimentaires 13
4.2.2. Intrts pharmaceutiques 15
4.2.3. Intrts cosmtologiques 16
5. Principaux mthodes de traitement et de valorisation des margines 16
5.1. Application directe des margines brutes pour la fertilisation du sol 17
5.2. Traitements physicochimiques 18
5.3. Traitements biologiques 18
5.3.1. Transformation arobie 18
5.3.2. Compostage 19
5.3.3. Digestion anarobie 19
5.4. Autres mthodes de traitement et de valorisation des margines 20
5.5. Extraction de composs haute valeur ajoute 20
6. Les procds de sparation membranaires 21
6.1. Gnralits 21
6.2. Distillation Membranaire 22
6.3. Ultrafiltration Assiste par Micelle 24
6.3.1. Gnralits sur les tensioactifs 25
6.3.2. Traitement des effluents par ultrafiltration assiste par micelle 27
7. Extraction par point de trouble 28
Rfrences bibliographiques 30
CHAPITRE 2. ETUDE DE LACTIVITE ANTIOXYDANTE DES EXTRAITS PHENOLIQUES
DES MARGINES

- Profil phnolique et activits antioxydantes des margines 41
CHAPITRE 3. APPLICATION DE LULTRAFILTRATION ASSISTEE PAR MICELLES POUR
LA SEPARATION DES COMPOSES PHENOLIQUES A PARTIR DES SOLUTIONS MODELES ET
DES MARGINES

- Sparation des composs phnoliques monocycliques naturels par
ultrafiltration assiste par micelles en utilisant un tensioactif cationique
52
- Sparation des composs phnoliques par ultrafiltration assiste par micelles 72

xii
en utilisant un tensioactif anionique
- Application de lultrafiltration assiste par micelles pour le traitement des
margines
92
CHAPITRE 4. TRAITEMENT ET CONCENTRATION DES MARGINES PAR DISTILLATION
MEMBRANAIRE ET OSMOTIQUE

- Concentration des margines par distillation membranaire pour la
rcupration des polyphnols
103
- Distillation membranaire des margines par diffrentes membranes de
polyttrafluorothylne (PTFE)
110
- Traitement intgr des margines par distillation membranaire contact direct 120
- Traitement des margines brutes par distillation osmotique et distillation
membranaire osmotique
130
CHAPITRE 5. EXTRACTION MICELLAIRE DES POLYPHNOLS DES MARGINES
- Extraction par point de trouble des polyphnols partir des margines
prtraites
139
DSCUSSION GENERALE 160
CONCLUSION GENERALE 171





















INTRODUCTION GENERALE

Introduction Gnrale
1
INTRODUCTION GENERALE
L'eau est le principal constituant des tres vivants et l'lment indispensable toute
forme de vie. Sa disponibilit ainsi que son abondance jouent un rle fondamental dans le
dveloppement et l'volution des socits. Bien que leau soit lune des substances les plus
prsentes sur Terre, elle nest constitue qu hauteur de 2,53% deau douce dont les deux
tiers sont immobiliss dans les glaciers, le reste tant constitu essentiellement deau de mer.
Si par le pass, la consommation de leau tait relativement faible comparativement
aux ressources naturelles qui paraissaient inpuisables dans diffrentes rgions du monde, les
modes de vie modernes ont compltement boulevers cette situation. Les conditions socio-
conomiques de l'utilisation de l'eau ont notablement chang depuis le dbut du sicle sous
l'effet de l'volution rapide de la dmographie, de l'amlioration continue des conditions de
vie des populations, de l'urbanisation acclre, de l'introduction de l'irrigation intensive et du
dveloppement de l'industrie. Cette volution socio-conomique rapide a entrain une
pression croissante sur les ressources en eau, et lapparition de disparits rgionales et de
problmes aigus de pollution.
Au Maroc, avec prs de 90%, lirrigation est de loin le principal secteur consommateur
deau, le reste est utilis pour lapprovisionnement des populations en eau potable et pour le
secteur industriel. Lindustrie, tous secteurs confondus, consomme plus de 1,088 milliards de
m
3
deau dont 81% constitus par leau de mer, 14% provient des eaux superficielles, 4% de
leau potable et 1% des eaux souterraines (MINENV, 2002). Les industries agro-alimentaires
rejettent prs de 22 millions de m
3
deaux rsiduaires, constituant 90% de lutilisation deau
de ce secteur (MINENV, 2002).
Du fait de la croissance de la demande en eau et de la raret des ressources, le
traitement et la rutilisation des eaux uses deviennent une ncessit stratgique pour le
Maroc. Pour cela, la rutilisation des eaux uses au Maroc qui reprsentent un volume
denviron 400 10
6
m
3
(MINENV, 2002) contribuerait significativement lallgement de la
pnurie en cette ressource et poserait les bases dun dveloppement durable prservant nos
ressources naturelles en cette substance stratgique.
Au Maroc, comme partout dans tout le bassin Mditerranen, lindustrie olicole
constitue une activit conomique trs importante fournissant de lemploi et des revenus
dexportation dhuile dolive et dolives de table. Cependant, lextraction dhuile dolive
gnre jusqu une tonne deffluents liquides par tonne dolives traites. Ces eaux uses
appels margines sont constitues des eaux de vgtation et des eaux ajoutes lors du procd
Introduction Gnrale

2
dextraction de lhuile. La totalit des effluents gnrs par cette industrie dans le bassin
mditerranen est estime environ 30 millions m
3
annuellement dont environ 500 000
tonnes produites au Maroc. Les margines sont dans la plupart des cas dverses sans aucun
traitement dans le milieu naturel, soit directement soit travers le rseau dgouts public. Ces
effluents sont responsables de srieux problmes de pollution savoir lacidification du
milieu, lmission des odeurs nausabondes, la destruction de la microflore bactrienne du
sol, le dsquilibre de la flore tellurique, la pollution des oueds et barrages, le dsquilibre des
cosystmes aquatiques, etc.
Le traitement biologique, technique largement applique pour la dpollution des eaux
uses domestiques, ne permet pas de traiter tous les types de contaminants, en particulier ceux
des eaux uses industrielles qui contiennent pour la plupart des composs organiques non
biodgradables et/ou bactricides comme cest le cas pour les margines. Llimination de ces
polluants toxiques est ncessaire avant tout recyclage ou traitement dans une station
dpuration. De nombreux procds chimiques ou encore physiques sont en application. La
recherche de mthodes alternatives ou complmentaires pour le traitement des eaux uses a
conduit depuis quelques annes lmergence de nouvelles technologies. Parmi ces
technologies, les procds membranaires sont en plein essor. Il sagit de technologies bases
sur la sparation despces polluantes par des membranes de diffrentes natures et tailles des
pores qui vont permettre un transfert slectif de masse sous un gradient de pression
(ultrafiltration, nanofiltration, etc.), de temprature (distillation membranaire) ou de
concentration (distillation osmotique). Les avantages de ces procds, compars aux
techniques conventionnelles, sont nombreux. Dans la plupart des cas:
- le procd est ralis temprature ambiante ou lgrement leve, ce qui permet la
conservation des produits thermosensibles ;
- le fractionnement se fait sans changement de phase;
- les installations sont modulables et peuvent fonctionner en continu ;
- les installations sont compactes.
Afin de dvelopper un procd intgr de traitement des margines produisant une eau
dpollue tout en en rcuprant des composs haute valeur ajoute, le prsent travail sest
fix pour objectifs :
- La mise au point dune technique de dpollution des margines et de concentration de
leur contenu phnolique afin de minimiser les cots dune extraction subsquente. La
distillation membranaire (thermique et osmotique) et lultrafiltration assiste par
Introduction Gnrale

3
micelles sont appliques aux margines aprs optimisation de leffet des conditions
opratoires sur lefficacit du traitement;
- Le dveloppement dune technique alternative dextraction des polyphnols des
margines en employant des tensioactifs non-toxiques et biodgradables;
- Lvaluation du pouvoir antioxydant des polyphnols des margines et ltude de leur
profil phnolique.

Le prsent manuscrit sarticule autour de cinq grands chapitres : le premier chapitre est
une synthse bibliographique dtaille prtendant relater la majorit des informations
rcemment publies concernant le traitement et la valorisation des effluents de lindustrie de
production dhuile dolive, communment connus sous le nom de margines . Le profil
phnolique des margines a t aussi prsent en rapportant les proprits biologiques de leurs
principaux composs phnoliques;
Dans le 2
me
chapitre nous prsentons une tude du profil phnolique des margines en
association avec son activit antioxydante. Les rsultats de diffrents tests dvaluation de
lactivit antioxydante avec diffrents mcanismes daction y sont exposs et comments.
Dans le 3
me
chapitre, nous prsentons une mthode de traitement et de concentration
des margines combinant une ultrafiltration classique la solubilisation micellaire des
composs organiques, pour la premire fois applique pour le traitement dun tel effluent
charg en matires organiques. La sparation des composs phnoliques monocycliques
naturellement prsents dans les margines dans des solutions modles est aussi prsente en
dmontrant la possibilit de retenir et de concentrer des composs haute valeur ajoute par
lultrafiltration assiste par micelles. Ensuite, le traitement des margines et la concentration de
leur contenu phnolique par ultrafiltration assiste par micelles dun agent tensioactif
anionique (SDS) est prsente.
Dans le 4
me
chapitre, dautres procds de sparation membranaires sont prsents
savoir la distillation membranaire et la distillation osmotique. Ces deux dernires techniques
sont des procds qui ont comme force motrice de transfert de masse, respectivement, la
temprature et la force osmotique. Nous prsentons aussi leffet des conditions opratoires
(temprature, nature de membrane, taille de pores des membranes, etc.) sur la permabilit et
la slectivit des membranes.
Le 5
me
chapitre concerne lapplication dun procd innovant pour lextraction des
polyphnols partir des margines prtraites par ultrafiltration. Ce procd dextraction est
connue sous lappellation de Extraction par Point de Trouble ou encore Extraction
Introduction Gnrale

4
Deux Phases Aqueuses . Il sagit dune technique simple et propre, se basant sur les
proprits de solubilisation micellaire des tensioactifs non-ioniques et de leur habilit
prcipiter au dessus dune temprature dite point de trouble en formant deux phases : une
phase dilue et une phase concentre (coacervat). Ces proprits permettent lextraction des
polyphnols des margines, ce qui pourra constituer une alternative lextraction par solvants
(Extraction Liquide-Liquide) des polyphnols.













CHAPITRE I

REVUE BIBLIOGRAPHIQUE


Chapitre 1 Revue Bibliographique
5

1. Introduction
Les margines ou eaux rsiduaires des industries dextraction de lhuile dolive
comprennent les eaux de vgtation constitutives des olives et les eaux additionnes lors des
procds dextraction de lhuile. Les volumes de ces eaux peuvent reprsenter jusqu 1,5 fois
la masse des olives tritures. La production marocaine moyenne des margines slve ces
dernires annes plus de 600 000 tonnes.
Durant ces dernires dcennies, le Maroc a adopt des stratgies nationales (Plan
Olicole National, Plan Maroc Vert) visant le dveloppement du secteur agricole en gnral et
du secteur olicole en particulier. Laccroissement vis de la production dhuile dolive sera
invitablement sauf dans le cas dun changement dans le procd de trituration -
accompagn dune augmentation des volumes des margines produites. Les systmes
dextraction de lhuile dolive sont essentiellement de trois types :
- Les units de trituration quipes de presses (Fig. 1a), selon la pression exerce, on
distingue ainsi : Les units traditionnelles ou masras dont la pression est de lordre de 100
kg/cm, les units semi-modernes dont la pression est aux environs de 200 kg/cm et les units
modernes quipes en super-presses pouvant dvelopper une pression de 400 kg/cm.
- Les units de trituration quipes dune chane continue trois phases avec deux
centrifugeuses, la premire pour sparer les grignons et le fluide (huiles et margines) et la
deuxime pour sparer les huiles des margines (Fig. 1b).
- Les units de trituration quipes dune chane continue deux phases permettant la
sparation de lhuile des grignons humidifis (alperujo) par les eaux de vgtation provenant
de lolive (Fig. 1c).
Selon un rapport de dveloppement de la rgion du moyen orient et de lAfrique Nord
(MENA), le Maroc est class parmi les pays qui connaissent un stress hydrique, ne pouvant
offrir annuellement plus de 1000 m
3
deau par habitant (World Bank, 2007). Lexploitation
dautres ressources deau non conventionnelles telles les eaux de mer, les eaux saumtres et
les eaux uses deviendra bientt une ncessit de premier ordre. Dans cette perspective, les
margines une fois traites doivent tre recycles soit en agriculture ou en industrie. Elles
peuvent surtout, comme nous le prsentons dans les sections suivantes dune manire
dtaille, constituer une source de composs biologiquement actifs haute valeur ajoute.

Chapitre 1 Revue Bibliographique
6

Figure 1 : Schma des diffrents procds de production dhuile dolive, (a) procd presses, (b) procd
trois phases, (c) procd deux phases.
2. Caractristiques physico-chimiques des margines
Les margines sont caractrises par une forte charge organique incluant diffrentes
substances organiques telles que les sucres, tannins, composs phnoliques, acides organiques
et lipides (Tableau 1). Ces effluents prsentent, en autres, une couleur noire fonce due aux
lignines polymriss avec les composs phnoliques, une acidit moyenne (pH denviron 5),
et une conductivit lectrique leve (Tableau 1). Les margines sont trs riches en composs
phnoliques avec des concentrations pouvant dpasser 10 g/l (Tableau 1). A cot des
composs phnoliques, les margines contiennent dautres composs intressants tels que les
sucres, protines, et le phosphore, etc. (Tableau 1). Il a t aussi rapport que les margines
contiennent des fibres alimentaires solubles spcialement des pectines dune excellente
capacit glifiante (Galanakis et al., 2010a, 2010b).
Le contenu inorganique des margines est prsent dans le Tableau 2. Les margines
contiennent des ions mtalliques importants savoir le magnsium et le calcium rapports
comme minimisant les risques des maladies cardiovasculaire (Anne, 2011). Dautres mtaux,
spcialement les mtaux lourds, tels que le plomb (Pb) et le cadmium (Cd), sont trs connus
Chapitre 1 Revue Bibliographique
7
pour leur toxicit. La contamination par ces mtaux peut avoir lieu aussi bien lors de la
production des olives ou durant la rcolte ou la transformation des olives.
La composition des margines varie largement en fonction de plusieurs paramtres
principalement la varit dolive, la date de rcolte, les conditions climatiques, et la mthode
dextraction de lhuile dolive (Kissi, 2002). Les caractristiques de la matire premire et les
techniques dextraction ont un effet considrable sur la composition en substances
phnoliques. Cette variabilit a t souvent mise en avant pour critiquer toute possibilit
dutilisation de ces extraits phnoliques naturels dans des procds de fabrication industriels
qui prfrerait des antioxydants synthtiques aux proprits standardises. A notre sens, les
scnarios de commercialisation vont dpendre de lutilisation prvue, soit en tant que
composs purs, ou en mlange.
Lutilisation des extraits des margines dans lalimentation humaine sera certainement
gouverne par la qualit et la scurit alimentaire de ces extraits. Certaines prcautions
devraient tre considres durant la production, la rcolte, le transport et le stockage des
olives, et aussi pendant lextraction de lhuile. Lutilisation des pesticides organo-
phosphoriques devrait tre vite dautant plus que des teneurs leves en plomb dans les
fruits dolive taient corrles avec lutilisation de ce genre de pesticides (Dugo et al., 2002).
En outre, le transport et le stockage des olives avant trituration doivent tre contrls pour
minimiser la contamination par des mtaux. Lemploi des cagettes en plastique pour le
stockage doit aussi prendre en considration une ventuelle contamination des olives par les
phthalates qui migrent la surface des plastiques (Dugo et al., 2011). De plus, les eaux de
rinage des olives ne doivent pas tre mlanges avec les margines pour assurer une bonne
qualit des extraits phnoliques.








Chapitre 1 Revue Bibliographique
8
Tableau 1 : Composition physico-chimique des margines (issues du procd de trituration trois phases) selon diffrents auteurs :


Tableau 2: Composition minrale des margines


Paramtre Unit
Steegmans
(1992)
Andreozzi
et al. (1998)
Paredes
et al. (1999)
Vlyssides
et al. (2004)
Ben-Sassi
et al. (2006)
Paraskeva
et al. (2007)
Asses
et al. (2009)
Karpouzas
et al. (2010)
El-Abbassi
et al. (2011)
Intervalle
des valeurs
pH - 5.3 5.1 5.17 4.8 4.85 5.2 5.1 5.7 5.3 4.7-5.7
Conductivit mS/cm - - 5.50 12 13-41 5 - 11 24 5-41
DCO g/L 108.6 121.8 - 93 97-190 16.5 95 48 156 16.5-190
DBO
5
g/L 41.3 - - 46 - - - - - 41.3-46
Rsidu sec g/L 19.2 102.5 71.9 63.5 - 11.5 84.2 - 90 11.5-102.5
Matire organique g/L 16.7 81.6 46.5 - - - - 26 - 16.7-81.6
Lipides g/L 2.33 9.8 3.1 1.64 - - - - 7 1.64-9.8
Polyphnols g/L 0.002 6.2 1.6 10.7 7-11.5 0.8 4.82 8.8 4.1 0.002-11.5
sucres g/L - - 8.79 - - 1.3 - - 4.3 1.3-8.79
Acides organiques g/L 0.78 1 - - - - - - - 0.78-1
Azote total g/L 0.6 0.95 0.63 0.76 - 0.06-0.3 - 0.9 - 0.06-0.95
Elment Unit
Paraskeva
et al. (2007)
Mahmoud
et al. (2010)
Karpouzas
et al. (2010)
Moraetis
et al. (2011)
Danellakis
et al. (2011)
Piotrowska
et al. (2011)
Intervalle des
valeurs
Pb g/l - - - 6.7 10 - 6.7-10
Cd g/l - - - 0.03 1 - 0.03-10
Fe mg/l 0.45-0.6 - 65 - 8.88 20 0.45-20
Zn mg/l 1.7-4 - 3.4 2.94 4.98 - 1.7-4.98
Cu mg/l 0.49-0.84 - 2.4 - 2.96 - 0.49-2.96
Mn mg/l 0.46-1.17 - 0.9 1.61 2.7 20 0.46-20
Mg g/l 0.06-0.09 0.17 0.12 0.11 0.11 0.03 0.03-0.17
Ca g/l 0.05-0.08 0.14 1.1 0.15 0.29 0.03 0.03-0.29
K g/l - 1.05 6.1 4.22 0.73 3.47 0.73-6.1
Cl g/l - 0.76 - - - 1 0.76-1
Na g/l 0.03 0.13 0.07 - 0.15 0.05 0.03-0.13
Chapitre 1 Revue bibliographique
9
3. Les problmes environnementaux engendrs par les margines
Au Maroc, mais galement dans dautres pays olicoles, les margines sont dans la
plupart des cas dverses sans aucun traitement dans le milieu naturel, soit directement soit
travers le rseau dgouts public. Ces effluents sont responsables de srieux problmes de
pollution (Zenjari, 2002 ; El Hajjouji, 2007):
- Acidification du milieu ; odeurs nausabondes, coloration fonce (Fig. 2) ;
- Destruction de la microflore bactrienne du sol ;
- Dsquilibre de la flore tellurique ;
- Salinisation des sols ;
- Pollution des oueds et barrages et dsquilibre des cosystmes aquatiques;
- Pollution de la nappe souterraine ;
- Forte agressivit, vis--vis des matriaux constituant les canalisations ;
- Rduction du dbit et parfois bouchage des canalisations par le dpt des matires en
suspension ;
- Perturbations des stations de traitement par voies biologiques.
Les caractristiques des margines prsentes au tableau 1 leur confrent une toxicit
leve contre les bactries (Capasso et al., 1995 ; Ramos-Cormenzana et al., 1996), les
myctes (Fodale et al., 1999), les algues (DellaGreca et al., 2001), les plantes (Capasso et al.,
1992 ; Casa et al., 2003), les insectes (Capasso et al., 1994), et contre mme les animaux
(Niaounakis et Halvadakis, 2004) et les cellules humaines (Capasso et al., 1995). Cependant,
les extraits fractionns des margines et les polyphnols isols dmontrent une toxicit
slective ou minimale (Capasso et al., 1995).

Figure 2: Au Maroc, la mthode principale de gestion des margines est de les stocker dans des bassins
dvaporation ou de filtration sur sable (gauche) mais dans la plupart des cas les margines sont jetes dans le
milieu rcepteur sans aucun traitement pralable (droite).

Chapitre 1 Revue bibliographique
10
4. Les composs phnoliques
4.1. Nature et diversit
Les composes phnoliques sont des mtabolites secondaires, avec une diversit
structurelle et une large distribution phylogntique (Harborne, 1989). Plusieurs milliers de
composs phnoliques on t caractriss jusqu prsent chez les vgtaux. Bien qutant
trs diversifis, ils ont tous en commun la prsence dun ou de plusieurs cycles benzniques
portant une ou plusieurs fonctions hydroxyles.
Les composs phnoliques peuvent tre regroups en diffrentes classes (Tableau 3)
qui se diffrencient dabord par la complexit du squelette de base (allant dun simple C6
des formes trs polymrises), ensuite par le degr de modification de ce squelette (degr
doxydation, dhydroxylation, de mthylation), enfin par les liaisons possibles de ces
molcules de base avec dautres molcules (glucides, lipides, protines, autres mtabolites
secondaires pouvant tre ou non des composs phnoliques).

Tableau 3: Les diffrentes classes des composs phnoliques
Squelette
carbon
Classe Exemple Origine (exemple)
C
6
Phnols simples Catchol
C
6
-C
1
Acide hydroxybenzoques p-hydroxybenzoque Epices, Fraise
C
6
-C
3
Acide hydroxycinnamiques Acides cafique, Frulique Pomme, Olive
Coumarines Scopoltine, escultine Citrus
C
6
-C
4
Naphtoquinones Juglone Noix
C
6
-C
2
-C
6
Stibnes Resvratrol Vigne
C
6
-C
3
-C
6
Flavonodes
- Flavonols Kaempfrol, Querctine Fruits, lgumes
- Anthocyanes Cyanidine, plargonidine Fruits rouges
- Flavanols Catchine, picatchine Pomme, raison
- Flavanones Naringnine Citrus
(C
6
-C
3
)
2
Lignanes Pinorsinol Pin
(C
6
-C
3
)
n
Lignines Bois, noyau des fruits
(C
15
)
n
Tannins Olive, Raisin rouge

Les margines peuvent contenir plus de 30 composs phnoliques (Tuck et al., 2002;
Paraskeva et al., 2007). Les principaux composs phnoliques des margines sont rapports
dans le tableau 4. Les classes les plus importantes des polyphnols des margines sont les
acides phnoliques, les alcools phnoliques, les flavonodes et les scoiridodes (Macheix et
al., 1990; Ryan & Robards, 1998; Soler-Rivas et al., 2000) (Tableau 3).
Les alcools phnoliques des margines sont le 3,4-dihydroxyphenyl thanol
(hydroxytyrosol) et le p-hydroxyphenyl thanol (tyrosol). Les flavonodes des margines les
plus rapports sont le lutoline 7-Oglucoside, la rutine et lapignine 7-O-glucoside, et les
Chapitre 1 Revue bibliographique
11
anthocyanines, cyanidine 3-O-glucoside et cyanidine 3-Orutinoside. Loleuropine et le
ligustroside sont les principaux secoiridodes des margines, ils proviennent de la pulpe des
olives. Certains drivs de loleuropine ont t galement rapports, tels le
dmethyloleuropeine, loleuropine aglycone et lacide lnolique (Amiot et al., 1989; Esti et
al., 1998; Romani et al., 1999; Soler-Rivas et al., 2000). Le verbascoside est le principal
driv de lacide hydroxycinnamique prsent dans les margines (Romani et al., 1999; Ryan &
Robards, 1998; Servili et al., 1999).
Tableau 4 : Les composs phnoliques majeurs prsents dans les margines
Compos Structure Rfrences
Hydroxytyrosol glucoside

Obied et al. 2007a

Hydroxytyrosol

Ryan & Robards, 1998 ;
Romero et al., 2002 ;
Schaffer et al., 2007
Tyrosol

Ryan & Robards, 1998 ;
Romero et al., 2002 ;
Tuck et al., 2002 :
Oleuropine

Obied et al., 2007a ;
Obied et al., 2007b ;
Tuck et al., 2002
Acide cafique

Obied et al., 2007a

Verbascoside

Obied et al., 2007a ;
Romani et al., 1999 ;
Ryan & Robards, 1998 ;
Servili et al., 1999
Lutoline

Obied et al., 2007a

Querctine

Obied et al., 2007a

Apignine

Obied et al., 2007a

Chapitre 1 Revue bibliographique
12
Rutine

Obied et al., 2007a ;
Esti et al., 1998 ;
Romani et al., 1999 ;
Ryan & Robards, 1998
Alcool homovanillique

Obied et al., 2007a

Acide p-coumarique

Obied et al., 2007a

Acide lnolique cycle
ouvert

Tuck et al., 2002

Acide cinnamique

Romani et al., 1999 ;
Ryan & Robards, 1998 ;
Servili et al., 1999
3,4-Dihydroxyphenyl
glycol


Rodriguez et al., 2009

4.2. Activits antioxydantes et bienfaits des polyphnols des margines
Les Espces Ractives de l'Oxygne (Reactive Oxygen Species ou ROS) endognes
ou exognes sont une des causes potentielles de diverses maladies humaines, telles que les
maladies coronaires, le diabte et le cancer (Willcox et al., 2004). Les concentrations
intracellulaires des ROS sont gnralement rgules par les systmes de dfense antioxydants
des cellules. Toutefois, la production de grandes quantits de ROS peut dborder les systmes
de dfense antioxydant intracellulaires et provoquer l'activation des neutrophiles, la
peroxydation des lipides, la modification des protines, ou mme des cassures dADN. In
vitro, il a t dmontr que les polyphnols, peuvent intervenir dans la rcupration des ROS
telles le superoxyde, le peroxyde d'hydrogne (Pannala et al., 1997) ou lacide hypochloreux
(Binsack et al., 2001). Les polyphnols peuvent agir comme un tampon et capter les
lectrons des ROS, les rendant moins actives (Cotelle et al., 1996). En outre, certains
composs phnoliques tel la querctine peuvent agir comme des chlates de mtaux (ex. le
fer) qui peuvent tre impliqus dans la formation de radicaux libres (Korkina et Afanasev,
1997 ; Nijveldt et al., 2001). Les polyphnols peuvent aussi interfrer avec les systmes
cellulaires de dsintoxication tels que le superoxyde dismutase, les catalases, peroxydases ou
Chapitre 1 Revue bibliographique
13
le glutathion (Sies 1991 ; Krinsky 1992). Les composs phnoliques peuvent inhiber ainsi les
enzymes gnratrices des ROS comme la xanthine oxydase et le nicotinamide adnine
dinuclotide phosphate oxydase (Sies 1991 ; Krinsky 1992).
Des travaux de recherches rcents se sont intresss aux proprits antioxydantes des
composs phnoliques de lhuile dolive et des margines (Redrigez et al., 2009).
Gnralement, les composs qui partagent une structure orthodiphnolique (catcholique)
possdent une activit antioxydante. Dans les margines, plusieurs constituants phnoliques
possdent cette structure, savoir lhydroxytyrosol et loleuropine qui sont parmi les
constituants phnoliques majeurs des margines et de lhuile dolive (Tuck et al. 2002). Une
valuation in vitro des activits antioxydantes de l'huile d'olive et de ses constituants spars a
t ralise dans de nombreux travaux. Le tableau ci-aprs (Tableau 5) rsume les principales
activits biologiques des quatre composs phnoliques majeurs des margines.

4.2.1. Intrts agroalimentaires
En agriculture, les proprits prcites des composs phnoliques leur attribuent un
effet pesticide et fongicide contre les ravageurs et les parasites. Obied et al. 2007b a prouv
que les margines ont un effet molluscicide en tudiant leffet des polyphnols sur Isidorella
newcombi, lun des plus importants invertbrs parasites du riz irrigu (Stevens et al., 1996).
Jurberg et al. 1995 ont aussi dmontr que les polyphnols ont un effet molluscicide vis--vis
du vecteur de la schistosomiase. Et grce leurs proprits antioxydantes, les polyphnols
peuvent limiter loxydation des aliments et prserver laspect attractif des fruits et des
lgumes. Lhydroxytyrosol lun des composs phnoliques majeurs des margines est
actuellement reconnu par European Olive Oil Medical Library comme antioxydant naturel,
et peut tre utilis lgalement en tant que complment alimentaire dans une large gamme de
produits tels que les produits laitiers, huiles et graisses, chocolats, boissons, etc.
Chapitre 1 Revue bibliographique
14
Tableau 5 : Principales activits biologiques des composs phnoliques majeurs des margines
Compos
phnolique
Bioactivit Remarques (rfrence)
Hydroxytyrosol Antioxydant Isol partir des margines, antioxydant puissant dans le plasma du
rat (Visioli et al., 2001)
Antioxydant dans le foie du rat (Casalino et al., 2002)
Protge les rythrocytes humains contre les dommages oxydatifs
(Manna et al., 1999)
Cardioprotectif et
Antiathrognique
Effets multiples (Visioli et al., 1997, Visioli et al., 2002)
Chasse et rduit la production des anions superoxydes dans les
cellules promonocytes humaines (Leger et al., 2000)
Chemoprventif Inhibe le dommage de lADN proxynitrite-dpendant (Deiana et
al., 1999)
Induit lapoptosie cytochrome C-dpendante (Della-Ragione et al.,
2000)
Inhibe la prolifration des cellules des tumeurs (Fabiani et al., 2002)
Antimicrobien Agit contre les microorganismes pathognes chez lhomme
(Bisignano et al., 1999)
En agriculture, agit contre les bactries phytopathognes (Capasso
et al., 1995)
Anti-inflammatoire Inhibe la production des leucocytes leucotriene B4 (Petroni et al.,
1997)
Oleuropine Antioxydant Extrait partir de la pte dolive (Amro et al., 2002)
Activit in vivo et in vitro (Speroni et al., 1998)
Activit anti-radicaux libres dans des biomembranes (Saija et al.,
1998)
Antiathrognique
et
cardioprotectif
Inhibe loxydation des LDL (Petroni et al., 1995)
Amliore la production de loxyde nitrique (Visioli et al., 1998)
Hypoglycmiant Chez le rat (normal et diabtique) (Trovato et al., 1993)
Antihypertensif Vasodilatateur (Duarte et al., 1993)
Antimicrobien et
antivirale
Antibactrien (Fleming et al., 1973)
Antimycoplasme (Furneri et al., 2002)
Effets antifongiques (Aziz et al., 1998)
Activit anti-VIH de lextrait de feuilles dolive (Lee-Huang et al.,
2003)
Anti-inflammatoire Inhibe le 5 lipoxygnase (Mulinacci et al., 2001)
Cytostatique Agit contre les cellules du McCoy (Saenz et al., 1998)
Molluscicide Agit contre le mollusque sud-amricain Biomphalaria glabratus
(Kubo et Matsumoto 1984)
Activit
endocrinienne
stimulation des thyrodes (Al-Qarawi et al., 2002); modulation de
lactivit hypolipidmiante -hypoglycmiante
Rgulation des
enzymes
Activation de la pepsine et inhibition de trypsine, lipase, glycrol
dshydrognase, glycrol-3-phosphate dshydrognase, et
glycrokinase (Polzonetti et al., 2004)
Oleuropine
aglycone
Agent
antimicrobien
Agent antimicrobien dans les maladies communes de lolivier
(Amiot et al., 1989)
Antioxydant Activit antioxydante plus importante compare celle de
loleuropine (Briante et al., 2001)
Tyrosol Antioxydant protection contre les LDL oxyds (Giovannini et al., 1999)
Rduction de loxydation de lADN des concentrations leves
(Quiles et al., 2002)
Anti-inflammatoire inhibition du 5-lipoxygnase (Mulinacci et al., 2001)
Antiathrognique Pour les humains (Marrugat et al., 2004)
Cardioactif Antiarythmique et cardioprotectif (Soler-Rivas et al., 2000)

Chapitre 1 Revue bibliographique
15
4.2.2. Intrts pharmaceutiques
De nombreuses tudes ont prouv que les polyphnols sont des inhibiteurs efficaces
d'oxydation in vitro des lipoprotines LDL (Visioli et al., 1994, 1995). L'oxydation in vivo du
LDL est lie la formation des plaques athrosclrotiques impliques dans dveloppement
des maladies coronaires ou athrosclrose.
Les composs phnoliques bloquent galement les processus qui contribuent la
pathogense de lathrosclrose ou du cancer (Manna et al., 1997). En particulier
lhydroxytyrosol, un des constituants phnoliques majeurs des margines, est capable de
rduire le risque des maladies coronaires (Salami et al., 1995). Lhydroxytyrosol inhibe la
lipoxygnase de lacide arachidonique (Petroni et al, 1994, 1995, 1997), il peut pntrer la
cellule en traversant la membrane plasmique et peut empcher la production de la leucotrine
B4 produite partir dun acide arachidonique endogne (Kohyama et al., 1997). La
leucotrine est un mdiateur de linflammation vraisemblablement impliqu dans des
maladies inflammatoires comme certaines formes d'arthrites.
Les polyphnols sont galement rapports actifs contre de nombreux cancers (colon,
estomac, foie, sein, prostate, poumons, peau, vessie,... etc.) tous les stades de cancrognse.
Au stade d'initiation, ils agissent comme agent bloquant en empchant l'activation de pro-
carcinognes. Au stade de promotion et de progression, ils agissent comme agent suppresseur
de tumeurs. Les mcanismes impliqus peuvent tre trs varis: prvention du stress oxydant,
inhibition du mtabolisme de l'acide arachidonique et des ractions inflammatoires associes,
inhibition de la protine kinase C et de la prolifration cellulaire, induction de l'apoptose et
l'inhibition de l'angiogense.
Les polyphnols pourraient aussi exercer des effets protecteurs contre les maladies
hormono-dpendantes telle que l'ostoporose en modulant la rponse aux strognes
endognes (Scalbert et Williamson, 2000). Bisignano et al. (1999) a examin leffet in vitro
de l'oleuropine et de lhydroxytyrosol sur plusieurs souches bactriennes agents causals des
infections intestinales ou respiratoires chez l'homme (Tableau 6). Lhydroxytyrosol a montr
une activit antibactrienne nettement suprieure celle montr par loleuropine.
Par ailleurs, des tudes ralises sur des modles animales ont montr que certains
extraits phnoliques pouvaient inhiber la promotion de tumeurs de la peau induites par le
dimthylbenzanthracne et le ttradcanoylphorbol actate, chez la souris (Osakabe et al.,
2004).
Chapitre 1 Revue bibliographique
16
Tableau 6: Concentrations inhibitrices minimales (en g/ml) de lhydroxytyrosol et de
l'oleuropine vis--vis de certaines souches bactriennes (Tuck and Hayball, 2002)
Souche bactrienne Hydroxytyrosol oleuropine
Hemophilus influenzae ATCC 9006 0,97 500
Moraxella catarrhalis ATTC 8176 1,92 >500
Salmonella typhi ATCC 6539 3,94 125
Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802 0,24 62,5
Staphylococcus aureus ATTC 25923 7,85 62,5
Hemophilus influenzae 0,9615,60 >500
Moraxwlla catarrhalis 3,8015,60 >500
Salmonella spp. 1,907,80 125250
Vibrio parahaemolyticus 0,97 125
Vibrio alginolyticus 0,971,90 125
Vibrio cholerae 1,90 125
Staphylococcus aureus 3,931,25 62,5125

4.2.3. Intrts cosmtologiques
Les polyphnols luttent contre les radicaux libres responsables de 80 % du
vieillissement de la peau. Les polyphnols pigent les formes actives de l'oxygne et ont un
effet trs bnfique sur le collagne et l'lastine. Le resvratrol et ses drivs sont employs
dans des compositions cosmtiques, comme agent dclaircissement de la peau et/ou agents
anti-tches (Vercauteren et Castagnino, 2004). Il a galement t dmontr que des
oligomres d'picatchine peuvent protger les cellules et les tissus cutans contre les effets
des peroxynitrites qui sont des mdiateurs de l'inflammation, jouant ainsi un rle anti-
inflammatoire.

5. Principales mthodes de traitement et de valorisation des margines
Depuis plusieurs annes, les margines ont t le principal polluant engendr par les
units de trituration des olives. Pour cette raison, la gestion de ces effluents a t
extensivement tudie. Certaines revues dtailles focalisant sur les mthodes de traitement et
de valorisation des margines ont t publies durant la dernire dcennie (Niaounakis and
Halvadakis, 2004; Azbar et al., 2004; Roig et al., 2006). A lavnement au dbut des annes
1990s, dun nouveau procd de trituration dit cologique ou deux phases, un nouveau sous
Chapitre 1 Revue bibliographique
17
produit apparat. Ce dernier appel Alperujo , est constitu dune pte humide quivalent
au mlange des margines avec le grignon.
Plusieurs pays europens ont allou des budgets normes (Fig. 3) pour le financement
des projets portant sur le traitement, la rutilisation ou la valorisation des margines, ou bien
pour lamlioration technique des procds de trituration.


Figure 3 : Budgets allous aux projets de recherches sur les margines en Europe. Les couleurs reprsentent les
pays o le projet est men ou le pays du partenaire principal. Dans le cas o plusieurs projets sont mens durant
une mme anne, une ligne blanche spare les budgets correspondants. Source: Service Communautaire
d'Information sur la Recherche et le Dveloppement UE (2009).

5.1. Application directe des margines brutes pour la fertilisation du sol
Lapplication directe des margines ou pandage des margines sur les sols a t lune
des propositions les plus simples prconise par certains chercheurs. Gnralement, toute la
flore microbienne augmente avec l'humidification de sol. Les margines favorisent la rtention
d'eau du sol (Mekki et al. 2006). Toutefois, moyen terme, elles entrainent de grandes
modifications des caractristiques biologiques et physico-chimiques des sols. Lapplication
directe des margines sur le sol modifie sa texture ainsi que sa structure (Belaqziz, 2010).
L'acidit des margines est compense par l'alcalinit de carbonate de sol. Les carbonates
deviennent des bicarbonates, se dplacent et saccumulent dans des horizons plus profonds
(Sierra et al. 2001). Le chlorure du sodium et les sulfates des margines peuvent augmenter la
salinit du sol (Paredes et al., 1987 ; Sierra et al., 2001 ; Belaqziz, 2010). Pour des
applications long terme, le calcium du sol est remplac par les cations Na, K et Mg qui
pourraient dgrader la structure du sol et former des sols salins comme a t suggr par
Chapitre 1 Revue bibliographique
18
Zenjari et Nejmeddine (2001). La porosit serait rduite par l'effet combin des solides
suspendus et des composs phnoliques fortement polymriss tels que les tannins (Cox et al.,
1997). En consquence, le sol devient impermable aux changes gazeux ce qui rduit la
prolifration de la flore arobie.
5.2. Les traitements physicochimiques
Les traitements physicochimiques consistent ajouter des substances chimiques
provoquant une coagulation, prcipitation, ou destruction des composs organiques dissouts
ou en suspension. Tsonis et al. (1989) ont utilis lhydroxyde de calcium et le sulfate
daluminium pour rduire la Demande Chimique en Oxygne (DCO) de 2030% des valeurs
initiales. Dautre part, Aktas et al. (2001) a propos un prtraitement avec la chaux pour
rduire leffet polluant des margines. Plusieurs chercheurs proposent une flocculation de la
matire organique des margines par diffrents poly-lectrolytes. Ce procd produirait une
eau utilisable en agriculture et une fraction solide ou boue des margines. Ces boues pourraient
tre compostes en les mlangeant avec dautres sous-produits (Negro and Solano, 1996;
Garca-Gomez et al., 2003).
Minh et al. (2007) rapportent la possibilit dliminer lacide p-hydroxy-
phenylactique et lacide p-hydroxybenzoque, deux polluants importants prsents dans les
margines, par oxydation catalytique en utilisant un racteur avec catalyseurs en platine et
ruthnium supports sur des oxydes de titane et de zircon. Lutilisation des polymres de
polyacrylate de sodium pour dpolluer les margines a t rapporte par des tudes
relativement rcentes (Davies et al., 2004). Cet adsorbant a t rapport capable de retenir la
fraction phnolique sur la chaine polymrique, la toxicit des margines se trouve ainsi
considrablement rduite.
5.3. Les traitements biologiques
5.3.1. La transformation arobie
Plusieurs auteurs ont montr la possibilit de traiter les margines microbiologiquement
et de produire des biopolymres tels le xanthane (Lopez et Ramos-Cormenzana, 1996), le
pullulane (Ramos-Cormenzana et al., 1995) et les polyhydroxyalcanoates (Gonzalez-Lopez et
al., 1995). Ces traitements se focalisent sur la dgradation des composs phnoliques, qui sont
le facteur principal responsable de la phytotoxicit des margines. Plusieurs microorganismes
ont t tests: des champignons : Pleurotus ostreatus, Phanerochaete chrysosporium et des
levures : Yarrowia Lipolytica, etc. (Tomati et al., 1991; Ramos-Cormenzana et al., 1996;
Scioli et Vollaro, 1997, Ben Sassi, 2007). Lutilisation des margines en tant que substrat pour
la croissance dAzotobacter vinelandii et lapplication deffluents traits des sols cultivs
Chapitre 1 Revue bibliographique
19
comme fertilisant a t propos par Ehaliotis et al. (1999) et Piperidou et al. (2000). Toutes
ces mthodes intressantes dun point de vue scientifique nont pas connues dapplication
grande chelle.
5.3.2. Le compostage
Le compostage est lune des principales technologies utilises pour le recyclage des
margines et des grignons et leur transformation en fertilisants (Ait Baddi, 2005). Les margines
sont absorbes dans un substrat solide (rejets lingocellulosiques) avant de procder leur
compostage. Tomati et al. (1995) a pu obtenir un fertilisant trs humide et sans effets
phytotoxiques en compostant les margines avec la paille de bl. Aussi, Paredes et al. (2000) a
test diffrents substrats pour le co-compostage des margines. Cegarra et al. (1996) ont test
un compost issu des margines lhorticulture et ont rapport des rendements similaires et
parfois meilleurs ceux obtenus avec des fertilisants minraux. Tomati et al. (1996) ont
galement observ une amlioration des productivits aprs addition du compost des
margines. Tomati et al. (1995) ont constat une augmentation rapide des microorganismes,
une augmentation de la temprature, du pH et une diminution du carbone organique totale,
quand les margines sont composts avec la paille du bl et lure. Par ailleurs, durant le
compostage des margines avec des dchets ligninocellulosiques ou diffrents dchets
organiques riches en azote, Paredes et al. (2000) rapportent durant la phase bio-oxydative une
perte de lazote par volatilisation sous forme NH
3
. En plus, une quantit substantielle de
nitrates NO
3
-
a t enregistre la fin de la phase bio-oxydative du processus de compostage,
mais les valeurs maximales sont atteintes seulement aprs maturation (Paredes et al., 2000).
Pour des raisons de cots, les margines sont le plus souvent simplement stockes dans
des bassins dans lattente de leur vaporation naturelle. Les boues rsultantes sont trs
charges en matires organiques et contiennent des quantits importantes en nutriments (N, P,
K, Ca, Mg et Fe) (Paredes et al., 1999). De ce fait, le traitement de ces boues par compostage
pour obtenir des fertilisants organiques est, en principe, trs appropri. Lors du compostage,
les microorganismes dgradent en arobie des composs organiques, telles les protines, les
acides amins et les peptides, pour produire le dioxyde du carbone, leau, les sels minraux et
une matire organique trs stable (Humic-like substances) (Senesi, 1989).

5.3.3. La digestion anarobie
Outre le traitement des effluents, lintrt principal de la digestion anarobie est la
production de lnergie (biogaz) et lutilisation subsquente des effluents des fins
dirrigation (Marques, 2001). La limitation majeure de ce traitement est linhibition des
Chapitre 1 Revue bibliographique
20
bactries mthanognes par les composs phnoliques et les acides organiques prsents dans
les margines (Hamdi, 1996). Selon Azbar et al. (2004), les filtres anarobies ou les digesteurs
UASB (upflow anaerobic sludge bed reactors) seraient appropris pour traiter les margines,
aprs une tape de prtraitement liminant certains composs indsirables dont les composs
phnoliques.
5.4. Autres mthodes de valorisation des margines
Plusieurs mthodes moins communes, nanmoins trs intressantes, ont t proposes
pour valoriser les margines. Parmi celles-ci on peut citer :
- Lutilisation des margines en tant que milieu adsorbant des mtaux lourds pour le
traitement des solutions aqueuses (Pagnanelli et al., 2002).
- Lapplication des margines aux sols agricoles pour ladsorption des herbicides (simazine)
et des insecticides (imidaclopride) afin de rduire leur biodgradation et retarder leur
dispersion, et minimiser ainsi le risque de contamination des eaux souterraines (Albarran
et al., 2004; Cox et al., 2004).
- La production de nouveaux matriaux pour la fabrication de contenants en mlangeant les
margines avec des polymres thermoplastiques (Siracusa et al., 2001).
- La prparation de charbon actif (Baccar et al., 2009).
- La production dune farine base des margines, dun biopolymre de nature
polysaccharidique dorigine vgtale ou animale, et dun agent mulsifiant. Cette farine
peut tre employ en tant quadditif pour la fabrication de pain got dolive (Pina et al.,
2006, Brevet n EP 1 378 491 B1).
- La production de bio-hydrogne par fermentation des margines (Kapdam et Kargi, 2006;
Eroglu et al., 2006; Gelegenis et al., 2007; Azbar et al., 2008).
- Lobtention dun produit liquide similaire au ptrole aprs pyrolyse des margines (Ptn
et al., 2005).
- Lutilisation du compost des margines en tant que biopesticides pour lutter contre les
champignons, les nmatodes et les parasites des cultures (Cayuela et al., 2008).
- Incorporation des margines dans la prparation des briques de construction (De la casa et
al., 2009).
5.5. Extraction de composs haute valeur ajoute
La rcupration ou lextraction des composs bioactifs, et spcialement les composs
phnoliques partir des margines reste un moyen de valorisation trs prometteur du fait quil
prsente un double avantage. Premirement, la rcupration des composs phnoliques des
margines constitue une dpollution de ces dernires par rduction ou/et limination de leur
Chapitre 1 Revue bibliographique
21
toxicit et deuximement la valeur ajoute de ces composs phnoliques rputs bioactifs
justifiera et rendra probablement rentable tout investissement dans un tel procd de
traitement.
Durant les deux dernires dcennies, plusieurs tudes ont t publies concernant
lvaluation de la faisabilit technique et conomique de la rcupration des composs
phnoliques partir des margines (Capasso et al., 1999 ; Fernandez-Bolanos et al., 2002 ;
Romero et al., 2002 ; Fki et al., 2005). Les principaux systmes proposs sont: lextraction
par solvants; la chromatographie sur rsine; la concentration slective par ultrafiltration
(Turano et al., 2002) et losmose inverse; lextraction solide-liquide ou liquide-liquide et
lextraction par fluide supercritique (Gonzalez-Munoz et al., 2003). Briante et al., (2004)
proposent un bioracteur pour la production dantioxydants hautement purifis. Dautres
systmes, plus simples et plus conomiques, pour la purification des antioxydants des
margines ont t dvelopps, mais sont tous sous protection par des brevets internationaux
(Fernandez-Bolanos et al., 2005).

6. Les procds de sparation membranaires
6.1. Gnralits
Une membrane est une barrire slective de quelques centaines de nanomtres
quelques millimtres d'paisseur, qui sous l'effet d'une force de transfert, va permettre ou
interdire le passage de certains composants entre deux milieux qu'elle spare. La slectivit
correspond l'ensemble des taux de permabilit aux diffrentes substances contenues dans
une solution. La force de transfert rsiderait dans un gradient de pression, de concentration,
d'activit, de potentiel lectrique ou encore de temprature. De ce fait les membranes incluent
une grande varit de matriaux et de structures qui forment autant de possibilits de
configuration et de classification. Bien que la majorit des procds membranaires soit
relativement anciens, lintrt des industriels et des scientifiques pour la distillation
membranaire et pour lultrafiltration assiste par micelles est rcent, et ne cesse de croitre.
Plusieurs applications des procds membranaires au traitement des margines ont t
proposes. Canepa et al. (1988) ont tudi une application combine des procds
membranaires et dadsorption pour traiter les effluents issues des units de trituration dhuile
dolive. Leur procd est constitu dune ultrafiltration travers des membranes en
polysulfone combine laction des polymres absorbants et lamide poly piprazine. Une
rduction de DCO denviron 99% a pu ainsi tre obtenue (Canepa et al., 1988). Turano et al.,
(2002) ont dvelopp un systme de centrifugation et dultrafiltration dans le but dune
Chapitre 1 Revue bibliographique
22
rduction de la pollution cause par les margines et dune sparation slective de certains
composs utiles (acides gras, sucres, polyphnols, etc.). Ils ont prconis une tape de
centrifugation afin dliminer la matire en suspension, et une phase de sparation slective,
par ultrafiltration (UF) du surnageant des margines centrifuges. Lefficacit dlimination de
la DOC tait denviron 90% (Turano et al., 2002).
Afin de concentrer les composs phnoliques des margines en vue dune extraction
ultrieure, la distillation membranaire et lultrafiltration assiste par micelles sont deux
techniques prometteuses, et qui peuvent constituer une alternative aux mthodes classiques de
traitement des eaux uses.

6.2. La distillation membranaire
La distillation membranaire (DM) est un procd de sparation dont le gradient de
tension de vapeur ou/et la pression osmotique sont les forces motrices du transport de la
vapeur deau travers une membrane microporeuse et hydrophobe. La membrane est
maintenue entre deux solutions aqueuses. En raison de la nature hydrophobe de la membrane,
leau sous forme liquide ne peut pas traverser les pores secs de la membrane moins que la
pression hydrostatique transmembranaire dpasse la pression dentre de leau liquide (LEP
w
),
caractristique de chaque membrane. En dessous dune telle diffrence de pression
hydrostatique, des interfaces liquide-vapeur sont formes lentre de chaque pore de la
membrane.
Si la diffrence de pression de vapeur, force motrice de la DM, est maintenue entre les
deux faces de la membrane en appliquant une diffrence de temprature, les molcules deau
svaporent de linterface de liquide chaud/membrane, traversent les pores sous forme de
vapeur et se condensent linterface membrane/liquide du permat maintenu une
temprature plus basse. Au cas o les solutions contiennent des composs non-volatiles, seule
la vapeur deau passe travers les pores. Par consquent, le coefficient de rtention des
soluts sera denviron 100%.
Les procds de distillation membranaire peuvent tre classs en quatre
configurations (Fig. 4) (Khayet et Matsuura, 2011 ; Khayet, 2011):
- Distillation membranaire contact direct des liquides chaud et froid de chaque ct de la
membrane (Khayet et al., 2010).
- Distillation membranaire intervalle gazeux (air gap) interpos entre laval de la
membrane et la surface de condensation. Ce systme a pour avantage de limiter les pertes
thermiques travers de la membrane;
Chapitre 1 Revue bibliographique
23
- Distillation membranaire pression rduite (sous vide) applique du ct de condensation
pour favoriser le transfert transmembranaire ;
- Distillation membranaire entranement gazeux ou gaz vecteur laval de la membrane
pour augmenter le flux ;

Figure 4 : Diffrentes configurations de la distillation membranaire, a) distillation membranaire contact
direct, b) distillation membranaire intervalle gazeux, c) distillation membranaire sous vide et d) distillation
membranaire entranement gazeux.
Dans la littrature scientifique, la DM est moins reprsente par rapport aux autres
procds de sparation membranaires. En comparant la DM aux autres procds de sparation
membranaires, elle se dnote par plusieurs avantages trs importants :
- Une rtention pratiquement complte des soluts et des espces non volatiles ;
- opration sous pression faible ; espace dvaporation trs rduit (pratiquement gale
lpaisseur de la membrane) comparativement la distillation conventionnelle ;
- Temprature de fonctionnement relativement basse (significativement infrieure
la temprature dbullition) ;
- Possibilit dutiliser la temprature des eaux uses comme source de chaleur (sans
chauffage) ;
- Possibilit dutiliser des sources dnergie alternatives telles que lnergie solaire
ou gothermique (Tomaszewska, 2000).
Lawson et Lloyd (1997), Khayet (2011), Khayet et Matsuura (2011), ont prsent une
revue complte sur la technologie de la distillation membranaire et ont dcrit la terminologie
et les concepts qui y sont associs, y compris les phnomnes de transport, les proprits des
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g
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z
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x

Vapeur
de permat
Vapeur
de permat
V
i
d
e

Plaque de
refroidissement
de permat
a) b) c) d)
Chapitre 1 Revue bibliographique
24
membranes et la conception des modules de DM. Sirkar a rapport en 1997 une revue des
technologies de sparation membranaire, y compris la DM et les technologies hybrides qui
intgrent la distillation membranaire.
La DM a t teste dans le domaine de dessalement deau sale, la purification de l'eau
et l'amlioration de la qualit de l'eau potable (Khayet et al., 2005 ; Khayet et Matsuura,
2011 ; Khayet et Cojocaru, 2012a, 2012b). Elle a t tudie lchelle de laboratoire pour de
nombreuses applications (Calabr et al., 1991; Gryta et al., 2006) qui ont montr leurs
potentialits et leur intrt pour le traitement des eaux uses de diffrents secteurs industriels,
parmi lesquelles on peut citer :
- La concentration de solutions radioactives de lindustrie nuclaire et le traitement des
eaux rsiduaires pour la production deau pure (Khayet et al., 2006) ;
- Le traitement des eaux uses de lindustrie de textile (Calabr et al., 1991) ;
- La concentration dacides (Tomaszewska, 2000; Tang et al., 2003) et le traitement de
solutions aqueuses contenant des mtaux lourds (Manna et al., 2010) gnres par
lindustrie chimique.
Lapplication de la DM pour le traitement et la concentration des margines na jamais
t teste auparavant. Une tude mene par Gryta et Karakulski (1999) sur la faisabilit de la
DM pour concentrer des solutions huileuses dmontre linefficacit de la DM pour des
solutions concentres en huile. Linstallation utilise tait une distillation membranaire
contact direct avec des membranes capillaires de polypropylne une taille de pores comprise
entre 0,2 et 0,6 m. Le flux de permat rapport par les auteurs est autour de 6,2 L/m.h lors
du traitement dune mulsion eau/huile (500 ppm) une diffrence de temprature de 60C
(Aliment 80C).
Lintrt pour la distillation membranaire ne cesse de saccroitre, ainsi de nouveaux
articles apparaissent continuellement dcrivant de nouvelles applications de la distillation
membranaire (Khayet et Matsuura, 2011). Cependant, les applications industrielles du
procd restent encore marginales.

6.3. LUltrafiltration Assiste par Micelle
L'ultrafiltration Assiste par Micelles (UFAM) est une technique de sparation
membranaire dans laquelle un tensioactif est ajout la solution traiter pour permettre la
rtention des petites molcules organiques. Au-dessus dun certain niveau de concentration
appel Concentration Micellaire Critique (CMC), les molcules du tensioactif forment des
Chapitre 1 Revue bibliographique
25
micelles denviron 50 150 molcules avec un noyau hydrophobe et une surface hydrophile
(kaya et al., 2006).
Les composs organiques pourraient se solubiliser ainsi dans le noyau et/ou sadsorber sur la
surface des micelles (Fig. 5). La solution peut tre ultrafiltre par la suite travers une
membrane approprie, les micelles charges se trouveront retenues et concentres. Le permat
se trouvera dbarrass des molcules organiques ou minrales (polluants) liminer. Un
procd efficace dUFAM exige un flux de permat lev et une rtention leve de lagent
tensioactif et du compos organique ou minral vis.


Figure 5 : Les molcules du tensioactif forment des micelles et solubilisent les soluts et les empchent de
traverser les pores de la membrane. Les soluts restent en quilibre entre la phase aqueuse et la pseudo-phase
cre par les micelles, on parle dun coefficient de partage entre les deux phases. La concentration des
monomres du surfactant qui passe travers la membrane reste au voisinage de la CMC.
Lultrafiltration classique est inefficace pour le traitement des margines car elle laisse
passer les composs phnoliques considrs comme lagent polluant des margines. Par contre,
lUFAM a montr sa performance pour llimination des ions mtalliques et de certains
composs organiques (Zeng et al., 2008; Hyrynen et al., 2012). La dmonstration de la
faisabilit de lUFAM pour le traitement des eaux uses charges de matires organiques
comme le cas des margines est lobjet de notre travail.
6.3.1. Gnralits sur les tensioactifs
Les tensioactifs (ou surfactants) sont classs historiquement selon la charge quils
librent en solution aqueuse. Quatre grandes classes peuvent se distinguer (Tableau 7):
Chapitre 1 Revue bibliographique
26
- Les tensioactifs cationiques : Ils possdent un ou plusieurs groupements qui sionisent en
solution aqueuse donnant naissance un cation organique tensioactif et un anion de
faible masse molculaire. En pratique, ces tensioactifs appartiennent soit la famille des
amines grasses soit celle des htrocycles azots. La proprit qui les distingue des
autres tensioactifs et qui assure leur dveloppement, est leur caractre bactricide. De
plus, ils ont la proprit physicochimique de sadsorber trs facilement sur les surfaces
charges ngativement, normalement hydrophiles, les rendant ainsi lipophiles.
- Les tensioactifs anioniques : Les tensioactifs anioniques sionisent en solution aqueuse
pour fournir un anion organique tensioactif et un cation gnralement de faible masse
molculaire, souvent un mtal alcalin, un ammonium quaternaire ou une thanolamine.
Cette classe de surfactants est la plus importante industriellement : elle reprsente environ
55 % de la production mondiale. Dans ce groupe on trouve les alkylbenznesulfonates, les
alkylsulfates, les lignosulfonates, etc. Cependant, les reprsentants les plus anciennement
connus et utiliss appartiennent aux sels dacides gras, plus couramment appels savons.
Leur partie hydrophile est un groupement carboxylique (sous forme de sel de sodium ou
de potassium) tandis que leur partie lipophile est une chane alkyle linaire, sature ou
non, comportant entre 7 et 21 atomes de carbone.
- Les tensioactifs zwitterioniques: ces tensioactifs dits amphotres possdent deux groupes
fonctionnels, lun anionique et lautre cationique, comme par exemple les alkyl
aminoacides et les btanes. Selon les conditions du milieu, ils peuvent sioniser en
solution aqueuse en confrant au tensioactif un caractre anionique aux pH alcalins et un
caractre cationique aux pH acides. Au voisinage du point isolectrique leurs solutions
aqueuses ne sont pas conductrices car ils possdent les deux charges la fois. De plus,
dans ces conditions, ils prsentent la particularit davoir une solubilit et des proprits
tensioactives minimales.
- Les tensioactifs non ioniques : Ces tensioactifs sont constitus de substances qui ne
sionisent pas en solution aqueuse : leur charge est donc a priori nulle. Cependant, ils ont
la particularit de possder de longues chanes polaires capables de former des liaisons
hydrogne avec des molcules deau. Ainsi, les molcules individuelles de tensioactif
("monomres") et/ou les micelles peuvent tablir des liaisons hydrogne avec les cations
prsents dans la solution aqueuse (H
3
O
+
, par exemple) et possder une charge lgrement
positive.
Les tensioactifs ioniques (anioniques et cationiques) sont les plus employs en
ultrafiltration assiste par micelles et ils sont aussi utiliss en floculation micellaire
Chapitre 1 Revue bibliographique
27
adsorptive. Par contre les tensioactifs non ioniques naboutissent pas des niveaux de
rtention satisfaisants lorsquils sont appliqus en ultrafiltration assiste par micelles (Puasa et
al., 2011).
Tableau 7 : Exemples de diffrents types de tensioactifs
Tensioactifs anioniques
Dodcylsulfate de sodium (SDS) Sulfonate de perfluorooctane (PFOS)


Tensioactifs cationiques
Bromure de ctyltrimthylammonium (CTAB) Chlorure de ctylpyridinium (CPC)


Tensioactifs zwitterioniques
Cocamidopropyl betaine (CAPB)
3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl-
ammonio]-1-propane-sulfonate
(CHAPS)


Tensioactifs non ioniques
Dcyl glucoside
Ether de tert-octylphenol de polythylne
glycol (Triton X-100)



Les tensioactifs non ioniques ont t rcemment employs avec succs pour la
concentration et lextraction de certains composs en exploitant leur proprit de former deux
phases aqueuses sous leffet de la temprature.
6.3.2. Traitement des effluents par ultrafiltration assiste par micelles (UFAM)
Chapitre 1 Revue bibliographique
28
LUFAM a t rapport pour la sparation de diffrents composs organiques tels que
lalpha-phnylglycine (Escudero et al., 2006), des colorants (Ahmad et al., 2006), de lacide
tannique (Caizares et al., 2006), des alcools aromatiques (Purkait et al., 2005a) et du bleu de
mthylne (Zaghbani et al., 2007). Aussi, l'efficacit de lUFAM pour la rcupration des
drivs phnoliques partir des solutions modles a t value aboutissant des taux de
rtention levs (Purkait et al., 2005b). Jusqu' prsent, lUFAM a t utilise pour sparer les
diffrents composs organiques et inorganiques, employant des agents tensioactifs divers
(Purkait et al., 2006). Cependant, les tudes portant sur le traitement des milieux complexes
tels que les margines sont trs rares dans la littrature scientifique.

7. Extraction par point de trouble
Certains chercheurs ont rapport qu travers toutes les procdures employes pour la
rcupration des antioxydants naturels, lextraction liquide-liquide par solvants reprsente la
mthode la plus simple et efficace et la plus largement utilise pour la production une
chelle pilote et aussi pour la production commerciale (Tura et Robards, 2002).
Durant les deux dernires dcennies, de nouvelles techniques dextraction ont t
dveloppes mais restent encore moins connues telles que lextraction laide des tensioactifs
non ioniques tirant profit des nombreuses proprits de ces substances (adsorption aux
interfaces, micellisation, solubilisation et point de trouble). Ces tensioactifs commencent
tre employs dans de nombreux procds dextraction liquide-liquide (micromulsions,
micelles inverses, membranes liquides et point de trouble) et apparents (ultrafiltration
micellaire).
Considrant la diversit de composition des sources naturelles des polyphnols, ainsi
que la structure et la proprit physicochimique de ces composs, un protocole universel
dextraction ne pourrait pas tre concevable. Des procds spcifiques doivent tre
dvelopps et optimiss pour chaque source phnolique. En plus, la co-extraction de certains
composs indsirables tels que les sucres, les lipides, les terpnes ou les pigments, doit tre
vite. Cette limitation doit tre prise en considration durant toute optimisation de procd
dextraction. Plusieurs facteurs contribuent lefficacit de lextraction par solvant, tel le type
du solvant, le pH, la temprature, le nombre des tapes, le ratio volumique, et la taille des
particules.
Le point de trouble est dfini comme tant la temprature au-dessus de laquelle les
solutions aqueuses de tensioactifs non ioniques deviennent htrognes par formation de deux
phases aqueuses. La connaissance du point de trouble est trs importante car les proprits
Chapitre 1 Revue bibliographique
29
tensioactives varient trs rapidement au voisinage de cette temprature, en particulier avec la
diminution du pouvoir moussant et laugmentation des pouvoirs dtergent et solubilisant. Au-
dessus de la temprature de trouble apparaissent deux phases une phase concentre appele
coacervat renfermant un maximum de tensioactif et de soluts et une phase dilue (Fig. 6).

Figure 6: Schma du principe de lextraction par point de trouble, au-dessus dune temprature appele point
de trouble apparaissent deux phases, une phase concentre appele coacervat riche en tensioactif et
soluts et une phase dilue.
Lextraction par point de trouble est appele aussi extraction par coacervat ou
extraction deux phases aqueuses. Watanabe et Tanaka (1978) et Bordier (1981) sont les
premiers chercheurs tudier en dtail cette mthode dextraction en vue de la concentration
de chlates mtalliques et lextraction de protines hydrophobes et hydrophiles laide dun
octylphnol polythoxyl. Postrieurement, de nombreux auteurs (Frankewich et Hinze, 1994;
Carabias-Martinez et al., 2000 ; Kimchuwanit et al., 2000 ; Bai et al., 2001) ont mis en
vidence l'efficacit de lextraction par point de trouble dans l'limination de polluants
organiques. Les travaux de Trakultamupatam et al. (2004) rapportent lextraction par
coacervat de contaminants aromatiques (tolune et thylbenzne) une chelle pilote. Ces
auteurs ont tudi, dans une colonne disques rotatoires, les aspects hydrodynamiques,
cintiques et de transfert de matire de cette opration en vue dune application industrielle.
Lextraction deux phases aqueuses se prsente donc comme une alternative aux
systmes conventionnels dextraction liquide-liquide (Huddleston et al., 1999; Raghavarao et
al., 2003), car elle offre lnorme avantage dexclure totalement lintervention de solvants
organiques souvent volatils, inflammables et toxiques.
En plus de leurs proprits dadsorption, de micellisation et de solubilisation, les
tensioactifs non ioniques sont aisment biodgradables et peu coteux, cela permet de
sorienter vers une technologie sparative "verte" et le dveloppement de procds non
polluants et peu coteux en nergie.
Chapitre 1 Revue bibliographique
30
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CHAPITRE II

ETUDE DE LACTIVITE ANTIOXYDANTE DES EXTRAITS
PHENOLIQUES DES MARGINES





Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
41
Profil phnolique et activits antioxydantes des margines
(Phenolic profile and antioxidant activities of olive mill wastewater)

Rsum:
Il est maintenant tabli que les bienfaits associs la consommation de lhuile dolive sont
dus la richesse de cette huile en composs phnoliques qui agissent comme des antioxydants
naturels et contribuent ainsi la prvention contre les maladies cardiovasculaires. La
proportion majeure (95-99%) des composs phnoliques des olives se trouve rejete dans la
phase aqueuse (margines) lors de lextraction des huiles dolives.
Dans la prsente tude, des chantillons de margines ont t analyss en terme de leur
composition phnolique en association avec leur activit antioxydante. Les contenus totaux en
polyphnols, en flavonodes, en flavanols, et en proanthocyanidines ont t dtermins.
Lactivit antioxydante des margines microfiltrs et des extraits mthanoliques a t value
en employant diffrents tests complmentaires (activit de chlatation de fer, activit
antioxydante totale, test au DPPH et en fin le test de peroxydation des lipides).
Les margines microfiltrs ont t prpares par filtration sur une membrane de
polythersulfone (MicrodynNadir, Allemagne) avec une taille de pore de 0,05 m. La
microfiltration a t effectue une temprature ambiante avec une cellule dultrafiltration
agitation magntique (AMICON 8200, Millipore USA). La microfiltration des margines
montre des flux raisonnables (350 l/h.m) avec un permat moins color (80% de moins 465
nm) compar aux margines brutes. La demande chimique en oxygne, le rsidu sec et le
contenu total en polyphnols ont t aussi rduits respectivement de 62%, 30% et 7%.
Des chantillons de deux margines diffrentes ont t analyses. Les margines (OMW1)
issues dun procd de trituration semi-moderne montrent une concentration en polyphnols
plus leve, (9,82 g/l) par rapport aux margines issues dun procd moderne (OMW2, 6,11
g/l), les deux margines sont issues dun procd trois phases.
Les constituants majeurs en polyphnols des margines sont des flavonodes. Il sagit dun
groupe des substances naturelles connus pour leurs proprits antioxydantes, anti-
inflammatoires, antiallergiques, antivirales et anti cancers. Ce groupe phnolique correspond
environ 66,8% du contenu phnolique total des margines OMW1. En revanche, il ne constitue
que 44,3% dans les margines OMW2. Les flavanols et proanthocyanidines reprsentent plus
ou moins les mmes proportions dans les deux chantillons des margines. Toutefois, une
Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
42
petite diffrence de concentration de ces biomolcules peut affecter considrablement leur
activit antioxydante car ces composs agissent des concentrations trs faibles. La
diffrence de composition phnolique des deux margines peut tre attribue au degr de
maturit des olives et/ou aux pratiques de collecte, de stockage et de trituration des olives.
Pour dterminer et comparer le profil phnolique de chaque chantillon, une analyse HPLC
des composs phnoliques a t ralise. La teneur en polyphnols quantifie par HPLC
reprsente seulement 55% et 63% de la teneur estime par spectrophotomtrie (dosage au
Folin). Lors du dosage par la mthode de Folin-Ciocalteu, les agents rducteurs prsents dans
les extraits peuvent interfrer avec les composs phnoliques donnant lieu une surestimation
du contenu phnolique total. Les deux margines (OMW1 et OMW2) prsentent des profils
phnoliques diffrents en termes de concentration et aussi de composition (loleuropine
aglycone na t dtect que dans OMW2). Les rsultats montrent que lhydroxytyrosol est le
compos majoritaire parmi les composs phnoliques prsents dans les margines, il reprsente
environ 70% et 55% des polyphnols totaux de OMW1 et OMW2, respectivement.
Pour comparer lactivit antioxydante dun extrait, un seul test semble tre insuffisant car
plusieurs mcanismes sont impliqus dans laction antioxydante. Une valuation
multidimensionnelle de la capacit antioxydante est alors ncessaire. Nos extraits ont t
soumis quatre tests des proprits antioxydantes, reprsentant des mcanismes
dantioxydation diffrents. Le test dit de capacit antioxydante totale (CAT) est bas sur la
rduction du molybdne (VI) en Molybdne (V) et la formation dun complexe vert de
phosphate/Mo (V) un pH acide. Une absorbance leve indique une activit antioxydante
importante. Dans ce test, la CAT des microfiltrts des margines OMW1 et OMW2 et de leur
extraits phnoliques respectifs (extraction par actate dthyle) a t mesure et compare
avec celle du BHT (antioxydant synthtique puissant). Selon les rsultats obtenus, les
microfiltrts des margines montrent une CAT trs importante, deux fois plus suprieure que
celle mesure dans les extraits. Par contre, la CAT obtenue reste infrieure celle du BHT
denviron 13% (OMW1) et 18% (OMW2).
Un autre test dactivit antioxydante a t ralis (test au radical DPPH), les rsultats obtenus
montrent que le microfiltrt des margines OMW2 prsente lactivit dinhibition du radical
DPPH la plus leve (lIC50 la plus petite). Elle sest rvle plus leve que lactivit
antioxydante de lacide ascorbique. Le microfiltrt des margines OMW1 et lextrait
phnolique de OMW2 viennent juste aprs en terme dactivit inhibitrice d u radical DPPH
Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
43
(avec une activit comparable celle de lacide ascorbique) et finalement lextrait phnolique
des margines OMW1 prsente lactivit antiradicalaire la plus faible.
La capacit des extraits phnoliques et des microfiltrts entrer en comptition avec la
frrozine pour chlater les ions ferreux a t galement estime. Les rsultats montrent quune
teneur leve en composs phnoliques nest pas forcment corrle positivement avec
lactivit de chlatation des ions ferreux (Fe2+), surtout pour le cas des extraits phnoliques.
Le dernier test dactivit antioxydante a consist en ltude de linhibition de la raction de
peroxydation des lipides induite par le fer. Ce dernier est un systme valid pour gnrer des
espces ractives doxygne. Dans les systmes biologiques, la peroxydation des lipides, qui
se rfre une dgradation oxydative des acides gras polyinsature dans la membrane
cellulaire, gnre plusieurs produits de dgradation, tel le malondialdehyde (MDA). Les
concentrations de ce MDA sont utilises comme indice de lampleur de la peroxydation des
lipides et comme un marqueur du stress oxydatif. Lextrait phnolique des margines OMW2 a
montr une activit dinhibition de la peroxydation de lipides (LPI) plus leve
comparativement lextrait issu de OMW1. Par contre, aucune diffrence significative
(p>0.05) entre les deux microfiltrts na t observe en ce qui concerne la LPI.
Dune manire gnrale, nous avons not que les microfiltrts prsentent des proprits
antioxydantes plus importantes que leurs extraits phnoliques, ce qui semble indiquer que
lactivit antioxydante des margines ne peut pas tre attribue exclusivement la prsence des
composs phnoliques. Probablement, certains composs non-phnoliques contribuent
lactivit antioxydante totale des margines ou amliorent lactivit antioxydante des composs
phnoliques (synergie) surtout dans les tests de la capacit antioxydante totale, lactivit de
chlatation de fer et lactivit antiradicalaire. Lactivit antioxydante leve mesure dans les
microfiltrts des margines peut tre galement attribue la diffrence de composition
phnolique entre les extraits et les microfiltrts, puisque lextraction liquide-liquide par
lactate dthyle est efficace pour les composs phnoliques de faibles et moyens poids
molculaires. Ce solvant est inappropri pour lextraction des molcules de poids molculaire
lev tel les tannins qui restent dans la phase aqueuse.
En raison de la production consquente et saisonnire des margines, leur stockage est
assez courant. Pour cela, nous avons jug quune tude de leffet de stockage sur le contenu
phnolique des margines et leur activit antioxydante est ncessaire. Ainsi, lvolution des
polyphnols totaux ainsi que de leur IC50 a t suivie en fonction du temps de stockage des
margines temprature ambiante. Le contenu des margines en composs phnoliques
Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
44
augmente considrablement durant les premiers quatre mois et commence chuter lentement
aprs le 5me mois. En revanche, lactivit antioxydante la plus leve a t observe au
troisime mois de stockage (IC50= 150 g/ml). Lvolution de lIC50 semble tre corrle
lvolution de la concentration en polyphnols durant le stockage. Ce rsultat peut tre
expliqu par le fait que les margines sont un milieu complexe qui contient plusieurs composs
antioxydants avec diffrentes capacits antioxydante. Durant le stockage certains antioxydants
peuvent disparaitre alors que dautres issus dhydrolyse de molcules plus complexes ou de
modification des composs initiaux vont apparaitre. Le changement du contenu phnolique et
de son activit antioxydante semble tre affect par plusieurs facteurs tels les paramtres
physicochimiques des margines de dpart, les variations de temprature durant le stockage et
finalement la flore bactrienne et fongique prsente dans les margines.
Peu dtudes se sont intresses aux variations ayant lieu au cours de stockage des margines.
Une tude publie en 2006 a rapport quune accumulation trs importante de
lhydroxytyrosol avait lieu aprs 5 mois de stockage. Sa concentration aurait augment de
257302 %. Par contre, les concentrations des autres composs phnoliques ont
considrablement chut. De plus, il a t aussi conclu que le stockage des margines pour
plusieurs mois amliore le rendement dextraction de lhydroxytyrosol. Ce dernier compos
aurait augment de 85 97 %.
Lensemble de ces rsultats dmontre limportance des margines en tant que source
potentielle bon march de composs naturels dots dun pouvoir antioxydant comparable aux
antioxydants synthtiques communment utiliss dans diffrentes industries : alimentaire,
cosmtique et pharmaceutique. Nous comprenons ainsi lintrt et le caractre innovant que
revt toute tude visant le dveloppement de procds dextraction de composs phnoliques
responsables dune grande partie des proprits antioxydantes des margines.
Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
45


Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
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Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
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Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
50

Chapitre 2 Activits antioxydantes des margines
51















CHAPITRE III

APPLICATION DE LULTRAFILTRATION ASSISTEE PAR MICELLES
POUR LA SEPARATION DES COMPOSES PHENOLIQUES A PARTIR DES
SOLUTIONS MODELES ET DES MARGINES







Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
52

Sparation des composs phnoliques monocycliques naturels par ultrafiltration assiste
par micelles laide dun tensioactif cationique
(Separation of natural monocyclic phenolic compounds by micellar-enhanced ultrafiltration
using a cationic surfactant)

Rsum:
Les composs phnoliques sont connus en tant que polluants rcalcitrants prsents
dans les eaux uses de certaines industries. Les margines contiennent des concentrations
normes en composs phnoliques rsistants la biodgradation. Un traitement efficace est
alors ncessaire avant leur rutilisation ou leur dcharge dans lenvironnement. Quelques
composs phnoliques prsents naturellement dans les margines, savoir le tyrosol, lacide
para-coumarique et lacide vanillique ont t pris comme modles pour tester lefficacit de
rtention des polyphnols par ultrafiltration assiste par micelles (UFAM) en employant un
tensioactif cationique, le chlorure de ctylpyridinium (CPC), et deux membranes
polymriques en polythersulfone avec des seuils de coupure molculaire de 20 et 50 kDa.
LUFAM est une technique couplant la solubilisation micellaire des soluts lultrafiltration
conventionnelle afin daugmenter la slectivit du procd de sparation membranaire oprant
sous des pressions basses (infrieures 5 bar).
Les expriences ont t conduites sous une temprature ambiante (25C 2C) en
utilisant une cellule de filtration frontale sous agitation magntique. Le volume de laliment
(margines) tait 200 ml. Le CPC a une concentration micellaire critique (CMC) de 0,91 mM.
Les expriences de lUFAM des solutions modles ont t conduites sous une pression
transmembranaire de 3 bars. Les flux de permat ont t dtermins dune faon continue en
utilisant une prouvette gradue connecte la sortie du permat. Avant et aprs chaque
exprience, leau distille a t filtre sur la membrane pour dterminer et comparer sa
permabilit.
Dans cette tude, leffet de la concentration du tensioactif et des soluts sur la
rtention des composs phnoliques et les flux des permats a t tudi, ainsi que
llimination et la rcupration du tensioactif par prcipitation partir du retentt en
exploitant lune des caractristiques des tensioactifs ioniques savoir lhabilit prcipiter
une temprature infrieure au point de Krafft. Ce dernier tant la temprature sous laquelle la
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
53
concentration en tensioactifs en solution devient infrieure la CMC. Le tensioactif se trouve
alors sous forme prcipite (cristaux).
Des rtentions importantes (>60%) ont t obtenues en utilisant 5 et 10 fois la CMC
du CPC et une membrane dun seuil de coupure de 20 kDa. Le taux de rtention de lacide
vanillique et lacide p-coumarique tait plus leve que la rtention du tyrosol. Ces
diffrences en rtention indiquent clairement que les trois composs phnoliques sont
solubiliss dans/sur les micelles de CPC mais avec des coefficients de partage diffrents entre
la phase aqueuse et la pseudo-phase des micelles.
Un mlange de composs phnoliques a t filtr sur la membrane UP020 (20 kDa) en
employant diffrentes concentrations de CPC et une concentration finale de chaque compos
phnolique gale 0,1 g/L. Les rtentions des diffrents composs se sont rvles
pratiquement quivalentes (86-90%). Ces composs phnoliques en mlange auraient un
comportement diffrent compar aux composs traits individuellement. Les rtentions du
tyrosol et de lacide vanillique ont t amliores en prsence de lacide p-coumarique.
Les taux de rejet chutent de 51-54% 31-33%, avec laugmentation de la
concentration totale des composs phnoliques de 0,3 0,9 g/L. Les rtentions de lacide p-
coumarique et lacide vanillique taient similaires mais plus leves que celles enregistres
pour le tyrosol. Ltude des flux du permat en fonction de la concentration de laliment en
tensioactif a rvl que le CPC contribue considrablement au phnomne de colmatage de la
membrane.
La temprature de Krafft du CPC est denviron 10C. Les molcules du CPC dans le
retentt de lUFAM obtenus aprs traitement de solutions de 5 et 10 CMC prcipitent avec un
rendement denviron 50% de leur concentration initiale au bout de deux heures de sjour
9C. Llimination du CPC atteint environ 90% aprs 20 heures. Par contre, la concentration
du CPC dans le retentt obtenu aprs UFAM des solutions avec une concentration de 2 CMC
reste plus ou moins sans changement. Par ailleurs, la concentration en tensioactif des 3
rtentts (2, 5 et 10 CMC) diminue suite sa prcipitation 5C. La formation des cristaux de
CPC tait rapide durant les premires heures. Llimination du tensioactif a dpass 80%
aprs 6 heures. Des dures plus longues (jusqu 24 heures) namliorent pas
considrablement le taux dlimination. Les taux dlimination enregistrs sont denviron
80%, 90% et 95% pour les rtentts issus dUFAM 2 CMC, 5 CMC et 10 CMC,
respectivement. Le prcipit peut tre facilement rcupr par filtration une temprature
basse ou par centrifugation. Aprs filtration sur membrane de cellulose avec une taille
moyenne de pore de 2 m, la phase solide a t sche 105C pendant 6 heures et le rsidu a
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
54
t pes. Ainsi, la prcipitation du CPC une temprature infrieure son point de Krafft a
permis la rgnration denviron 92% du CPC du retentt.
Ces rsultats dmontrent que le procd dultrafiltration assiste par micelles de CPC
peut tre utilis dune faon efficace pour la rcupration des composs phnoliques partir
des eaux uses avec la possibilit de recyclage du tensioactif aprs isolement par prcipitation
une temprature basse.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
55
SEPARATION OF NATURAL MONOCYCLIC PHENOLIC COMPOUNDS BY
MICELLAR-ENHANCED ULTRAFILTRATION USING A CATIONIC
SURFACTANT

Abdelilah El-Abbassi
1
and Jan Hoinkis
2
, Abdellatif Hafidi
1*


1
Food Science Laboratory, Faculty of Sciences-Semlalia, Cadi Ayyad University, 40090
Marrakech, Morocco.
2
Karlsruhe University of Applied Sciences, 76133 Karlsruhe, Germany.

Abstract
Phenolic compounds are known as recalcitrant pollutants in many industrial wastewaters, e.g.
olive mill wastewater. An efficient treatment is therefore needed before the discharge of
phenol-containing wastewaters into the environment. The possibility of removing some
natural occurring phenolics, namely tyrosol, p-coumaric acid and vanillic acid, by micellar-
enhanced ultrafiltration (MEUF) using a cationic surfactant, cetylpyridinium chloride (CPC),
and polyethersulfone membranes of 20 and 50 kDa molecular weight cut-off (MWCO), was
investigated. The effect of the surfactant and the solute concentrations on the retention and the
permeate fluxes were studied. The elimination and recovery of the surfactant from the
retentate stream under its Krafft point was also investigated. High rejections were obtained
using 5 and 10 times the critical micellar concentration (CMC) of CPC and a membrane of 20
kDa (MWCO). The rejection of vanillic acid and p-coumaric acid was higher than the
rejection of tyrosol. The CPC was found to contribute significantly to the fouling
phenomenon. The precipitation of CPC under its Krafft temperature allowed the recovery of
about 92% of the initial concentration of CPC from retentate streams. The obtained results
showed that the MEUF process can be used efficiently for the recovery of phenolic
compounds from wastewaters and that the surfactant can be recovered from the retentate
stream and reused.
Keywords: phenol-containing wastewaters; micellar-enhanced ultrafiltration; cationic
surfactant; Krafft temperature; surfactant recovery.

*Corresponding author: Abdellatif HAFIDI. E-mail: a.hafidi@ucam.ac.ma. Tel: +212 5 24 43
46 49 (Office: 515), Fax: +212 5 24 43 67 69.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
56
Nomenclature
Symbols
V : volume (ml)
C : concentration of phenolic compounds (g/L)
R : rejection (%)
J : permeate flux (L.h
-1.
m
-2
).
L
p
: membrane permeability (L.h
-1
.m
-
.MPa
-1
)
R
m
: membrane hydraulic resistance (m
-1
)
R
s
: membrane secondary resistance (m
-1
)
P : transmembrane pressure (bar and MPa)
: dynamic water viscosity (Pa
.
s)
K
ow
: octanol-water partition coefficient

Index
O
: initial value
p
:
permeate
r : retentate
w : water
f : feed
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
57
1. Introduction
Wastewaters containing dissolved organics are a common problem in many industries. These
organics are often toxic and must be removed or degraded before the water can be discharged
into the environment or reused in the process. However, these organics could be of a high
added value such as in the case of polyphenols in some agro-industrial wastewater streams,
e.g. olive mill wastewater. Phenolic derivatives are a common class of organic pollutants and
are (more or less) toxic. Biological treatments are not suitable for these compounds due to
their toxicity. Furthermore, common ultrafiltration is ineffective for most of these substances,
especially those with low molecular weights which are generally known to be the most toxic.
Micellar-enhanced ultrafiltration (MEUF) could be a good alternative for the removal and
recovery of low molecular weight phenolics. A survey of literature related to MEUF reveals
that a number of studies have been carried out looking at the mechanisms of separation and
solubilization of the solute in micelles. MEUF was first introduced by Scamehorn et al. in the
1980s for the removal of dissolved organic compounds and metal ions from aqueous streams
[1,2]. Few years later, the MEUF process was widely used. However, limited works on
MEUF dealt with phenols and their derivatives (36), the great majority of works focused on
the MEUF separation of metal ions and heavy metals (710).
Sabat et al. (6) studied a micellar-enhanced ultrafiltration (MEUF) separation of the phenol
using a cationic surfactant, cetylpyridinium chloride (CPC), and two polysulfone membranes
of 5 and 50 kDa molecular weight cut-off (MWCO) and two ceramic membranes of 15 and 50
kDa MWCO. They reported that the type of membrane material may affect the optimized
parameters in a MEUF process. Purkait et al. (4) studied the removal of four phenolic
derivatives (catechol, meta-nitrophenol, para-nitrophenol and beta-napthol) from their
mixtures using the CPC as a surfactant and an organic polyamide membrane with molecular
weight cutoff of 1000 Da. This revealed a maximum retention of solute at a concentration
ratio of surfactant-to-solute around 110 (4).
To make the MEUF system more economical, it may be necessary to recycle the surfactant
molecules that are present in permeate and retentate streams before final disposal. For
example, foam fractionation to recover valuable surfactant (SDS) in the permeate of micellar-
enhanced ultrafiltration was proposed by Qu et al. (7). Free CPC surfactants molecules can be
recovered from the permeate by a two-step chemical treatment, procedure studied by Purkait
et al. (4). The works interested in the removal of natural phenolic compounds by MEUF
process remain very scarce. In our previous work, we applied the MEUF for the rejection of
phenolic compounds from OMW using SDS at pH2 (11). The rejection rate reached 70%
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
58
when using a surfactant concentration 10 times the CMC. To the best of our knowledge, no
other works has been done on the MEUF separation of natural phenolic compounds.
In this study, we investigated the possibility of removing some natural phenolics, namely
tyrosol, p-coumaric acid and vanillic acid, using a cationic surfactant, cetylpyridinium
chloride (CPC), and two polyethersulfone membranes of different MWCO at an acidic pH
(pH2). The ultrafiltring behavior of the studied natural phenolics and CPC was also studied
for MEUF of individual phenolics and their mixture in view of reaching maximum retention
since it has been never studied previously. The concentrations of the studied phenolic
compounds in the model solutions were chosen to be more or less equivalent to the
concentrations found in some phenolic wastewaters mainly olive mill wastewaters and table
olive wastewaters. The effect of the surfactant and the solutes concentrations on the retention
and the permeate fluxes were studied. The elimination and recovery of the surfactant from the
retentate stream under its Krafft point was also investigated.
2. Experimental
2.1. Chemicals
Cetylpyridinium chloride (CPC), 4-Hydroxy-3-methoxybenzoic acid (vanillic acid, VA),
trans-4-Hydroxycinnamic acid (p-coumaric acid, CA) and 4-Hydroxyphenylethanol (tyrosol,
TY) were supplied by Sigma-Aldrich (Germany). Isopropyl alcohol was purchased from
Merck (Germany). Deionized water was produced by a water purification system DI4000
(TKA, Germany).
2.2. Apparatus, membranes and solutions
The ultrafiltration experiments were conducted in a 500 ml capacity stirred filtration cell.
Inside the cell, a circular membrane is placed over a base support (Fig. 1). The effective
membrane area is 50 cm. The permeate is collected from the outlet of the cell at the bottom.
The cell is pressurized by nitrogen. Two polyethersulfone membranes (Microdyn-Nadir,
Germany) with different molecular weight cut-offs (Table 1) were used.

Table 1. Main characteristics of the tested membranes
Membrane
Membrane
material
MWCO
(kDa)
Water flux
(L.h
-1
.m
-2
)
pH range
Processing
temperature (C)
UP020 PES 20 600
*
0-14
5-95
UH050 PESH 50 1500
*
0-14 5-95
*
Test conditions: 3 bar, 25C, stirring rate 200 rpm, membranes were treated by isopropanol alcohol before use.
Abbreviations: PES, polyethersulfone; PESH, permanently hydrophilic polyethersulfone; MWCO, molecular
weight cut-off.

Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
59
Feed solution for each experiment was prepared using specific amounts of the different
phenolic compounds (Fig. 2) and the CPC as a surfactant, dissolving them in 1000 ml of
deionized water. The pH of the model solutions was adjusted to pH 2 with a solution of HCl
(2M) using a pH-meter (WTW, model pH325).

Fig. 1. Scheme of ultrafiltration experimental set-up: 1. Feed inlet, 2. Connection to the
nitrogen cylinder, 3. Screw, 4. Membrane, 5. Permeate outlet, 6. Magnetic stirrer, 7. Magnetic
bar, 8. Temperature sensor.

Cetylpyridinium chloride

Vanillic acid

Tyrosol

p-Coumaric acid
Fig. 2. Chemical structures of the studied phenolic compounds and surfactant.
2.3. Procedures
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
60
The experiments were conducted under ambient temperature (25C 2C). The membranes
were left overnight in Isopropyl alcohol solution (50%) and then treated by filtering distilled
water under high transmembrane pressure (10 bar). The feed volume was 200 ml and the cell
was stirred at 200 rpm using a magnetic stirrer. The CPC surfactant, which is an ammonium
salt containing a long aliphatic chain (Fig. 2), has a critical micellar concentration (CMC)
equal to 0.91 mM (12). It is not considered to be affected by adding the phenolics. The MEUF
experiments of model solutions were carried out under transmembrane pressure at 3 bar.
Permeate fluxes were determined continuously using a graduated cylinder connected to the
permeate outlet. Before and after each run, deionized water was filtered to determine and
compare the permeability of the membrane.
The MEUF experiments were stopped on reaching a volume concentration (VCF) factor equal
to 2:
o
r
V
VCF
V
= (1)
Rejection of phenols was calculated using the coefficient of rejection R according to the
following equation:
1 100
p
r
C
R
C

=


(2)
The removal of surfactant from the retentate stream was performed by its precipitation below
its Krafft temperature at 9C and 5C. 50 ml of the retentate stream in a graduate cylinder was
placed in a bath with the temperature adjusted to the desired value. Samples of 100 l were
taken against time at the same height (30 ml) and were diluted adequately prior to analysis.
2.3. Analysis
Feed and permeate concentrations of surfactant and solute were measured by UV-VIS
spectrophotometer (550S PERKIN-ELMER). The wavelengths at which maximum absorption
occurs and the molar extinction coefficients of different species were obtained from the
measurements of the pure components. The concentrations of different solutes and surfactant
in the mixture were calculated from the absorbance at different wavelengths using the molar
extinction coefficients.
3. Results
3.1. Ultrafiltration of surfactant solution
3.1.1. Hydraulic permeability and resistances
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
61
Ultrafiltration experiments were conducted under different transmembrane pressure (2 to 6
bar) using deionized water. The permeate flux was plotted against the operating pressure and
fitted with a straight line through the origin (Fig. 3).

Fig. 3. Initial permeate fluxes of deionized water and CPC solution (1.82 mM) on UH050
membrane against transmembrane pressure.
The slope of this straight line is the membrane permeability (L
p,
L.h
-1
.m
-2
.MPa
-1
) and can be
calculated using the following equation:
w
p
J
L
P
=

(3)
where
w
J
is the volumetric permeate flux of deionized water in L.h
-1
.m
-2
, and P is the
transmembrane pressure in MPa. The membrane hydraulic resistance was calculated from the
permeability as:
1
m
p
R
L
= (4)
In the case of surfactant solution, the CPC molecules create an additional resistance called the
secondary membrane resistance (R
s
) which reduces the permeability of the membrane. The R
s

(in m
-1
) was calculated as:
s m
CPC
P
R R
J

= (5)
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
62
The secondary membrane resistance average was found to be about 220 10
10
m
-1
which is
considerably higher than the intrinsic membrane resistance, 91 10
10
m
-1
(Table 2).
Table 3. Permeate fluxes and resistances of the membrane UH050 under different
transmembrane pressure conditions
P
(MPa)
J
W

(L.h
-1
.m
-2
)
J
CPC
(L.h
-1
.m
-2
)
L
P

(L.h
-1
.m
-2
.MPa
-1
)
R
mem
(10
10
m
-1
)
R
s
(10
10
m
-1
)
0.2 1038 276 5190 83 230
0.3 1451 413 4836 89 224
0.4 1909 556 4772 91 220
0.5 2250 699 4500 96 213
0.6 2725 847 4542 95 211

The membrane resistance created by CPC molecules contributes to about 71% of the total
resistance. When considering the resistance-in-series model (13), the total resistance can be
written as:
tot mem cp f mem s
R R R R R R = + + = +
(6)
where the total membrane resistance R
tot
is composed of the resistances caused by: the
membrane itself (R
mem
), concentration polarization (R
cp
) and fouling (R
f
). The most important
parameter for flux decline is fouling resistance (R
f
), which contributes to a great part of the
secondary resistance. Nevertheless, R
f
can be reduced by appropriate methods such as cross-
flow ultrafiltration. Talens-Alesson et al. [14] studied the effect of secondary resistance on
membrane permeability when rejecting two synthetic phenolics namely phenol and 4-
nitrophenol by mean of MEUF process using different surfactants. The results showed that
some adaptation of the forming gelation layer to gain permeability [14]. It was found also that
the presence of salt reduces the membrane resistant in presence of cationic (CTAB) and
nonionic (APG) surfactant [14].
The membrane fouling can be divided into reversible and irreversible fouling depending on
the attachment strength of solutes to the membrane material. In the case of CPC solution
ultrafiltration, a great part of the membrane fouling was reversible because the flux reduction
after external cleaning of the membrane did not exceed 5%. Thus, the membrane was reused
for several times.
3.1.2. Surfactant retention
It can be observed from the Figure 4 that the permeate concentration of CPC increases with
the progressing MEUF. The increase of CPC concentration in the feed increases the permeate
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
63
CPC concentration but remains under its CMC in all cases in the studied range of
concentrations (2 to 10 CMC) (Fig. 4). This increase in permeate concentration may be due to
the concentration polarization over the membrane surface, which promotes the convective
transport of CPC molecules through the membrane along with smaller size micelles to the
permeate side.
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1 1,2 1,4 1,6 1,8 2
S
u
r
f
a
c
t
a
n
t

C
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n

(
m
M
)
Volume Concentration Factor (-)
CMC
2 CMC
5 CMC
10 CMC

Fig. 4. The CPC concentration in the permeate against the volume concentration factor for
ultrafiltration (on UP020 membrane) of surfactant solutions of different feed concentrations.

The retention of micelles by the membrane results in the concentration polarization and the
deposition of micelles on the membrane surface (12). Consequently, the concentration of CPC
adjacent to the membrane surface is higher than the bulk concentration of CPC. An
aggregation of micelles and rearrangement of molecules may occur resulting in a deformation
and change of micelle dimension and shape. This rearrangement can produce more free
monomers that pass through the membrane, so the permeate CPC concentration increases.
Some authors reported that micelles can pass through the membrane after changing shape due
to the fact that membranes have a distribution of pore sizes and micelles have a distribution of
sizes (15).
3.2. Micellar-enhanced ultrafiltration using UH050 PES membrane
The effect of surfactant concentration in the feed on the permeate flux and retention of p-
coumaric acid is shown in Fig. 5. In this case, p-coumaric acid concentration was kept
constant at 0.1 g/L while different CPC concentrations were tested. The results depicted in
Fig. 5 show that the initial fluxes in the permeate decrease considerably with the increase of
CPC surfactant. The permeate flux exceeds 1400 L.h
-1
.m
-2
for the ultrafiltration of the
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
64
phenolic solution without surfactant but the permeate flux (520 L.h
-1
.m
-2
) decreases by 63%
when using 2 CMC (1.8 mM) of the CPC. Further increases in the surfactant concentration
significantly affect the permeate flux, which reaches values as low as 66 L.h
-1
.m
-2
when using
CPC concentrations as high as 80 CMC (72 mM).
0
20
40
60
80
100
0
400
800
1200
1600
0 2 5 10 20 40 80
R
e
j
e
c
t
i
o
n

(
%
)
P
e
r
m
e
a
t
e

F
l
u
x

(
L
.
h
-
1
.
m
-
2
)
Surfactant concentration (CMC)

Fig. 5. Permeate initial fluxes (column) and rejection rates (strait line) for the micellar-
enhanced ultrafiltration of p-coumaric solution (0.1 g/L) against surfactant concentration on
the membrane UH050.
It can also be observed from Figure 5 that the retention did not exceed 7% for the solution of
p-coumaric without any surfactant. This retention may result from adsorption on the
membrane surface. Susanto et al. (16) reported that phenolic compounds can be adsorbed on
the surface of polyethersulfone membranes. When surfactant is used (2 to 80 CMC) the
retentions increased significantly and reached 93% at the highest used surfactant
concentration (80 CMC). This clearly indicates that p-coumaric acid is solubilized on/in the
surfactant micelles, which are subsequently retained by the ultrafiltration membrane. Syamal
et al. [17] studied the solubilization of phenol on CPC micelles and reported that a maximum
solute solubilization within micelles was controlled by an optimum surfactant/solute ratio.
Theoretical development of the concentration profile within micelle suggested that there is a
uniform distribution of the solute throughout the micelle [17].
In aqueous solutions exempt from electrolytes, the reported micelle aggregation number for
CPC is 95 at a concentration close to 1 CMC (18,19). This gives the micelle an equivalent
molecular weight of about 32 kDa. However, the high p-coumaric acid retention values
indicate that CPC micelles were rejected by the membrane even if its nominal molecular
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
65
weight cut-off is 50 kDa. At higher CPC concentrations, aggregation of micelles and/or
formation of bigger micelles can occur. As a result, the rejection of CPC micelles is improved
and consequently higher retention of p-coumaric compound is observed (Fig. 5).
3.3. Micellar-enhanced ultrafiltration of phenolics using the UP020 membrane
3.3.1. Micellar-enhanced ultrafiltration of individual phenolic compounds
Figure 6 demonstrates that the three phenolic compounds showed similar behavior during
ultrafiltration at different CPC concentrations. The increase of the surfactant concentration
increased the rejection of the phenolics. p-Coumaric acid exhibits the highest rejection
coefficient followed by vanillic acid and tyrosol. This finding indicates clearly that the three
phenolics are solubilized into the CPC micelles but with different partition coefficients
between the water phase and micelles pseudo-phase most likely in respect to the
hydrophobicity degree of these phenolics.
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6 8 10
R
e
j
e
c
t
i
o
n

(
%
)
Surfactant concentration (CMC)
para-coumaric acid
vanillic acid
Tyrosol

Fig. 6. Rejection rates of single phenolic compounds (0.1 g/L) by MEUF on UP020
membrane under different surfactant concentrations.

The hydrophobicity of a chemical can be estimated by the octanol-water partition coefficient
(K
ow
) expressed in log units. The log K
ow
of p-coumaric acid, vanillic acid and tyrosol are 1.6
(20), 1.42 and 0.69 (21), respectively. From these values we can notice that the rejection
coefficients of each phenolic compound are correlated positively to their octanol-water
partition coefficients (K
ow
).
It should also be noted that the retention of solutes decreases during the MEUF processing of
phenolic solution. During the ultrafiltration of p-coumaric acid solution (0.1 g/L) on UP020
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
66
using 10 CMC of CPC, the retention decreased from 92% at the start of the MEUF separation
to 78%, which is reached at a VCF of 2 (data not shown), most likely as a result of the
increase of phenolics concentration in the retentate with operating time. This increase of the
permeate phenolics concentration is related to the increase of the concentration of micelles-
unsolubilized phenolics in the feed which pass through the membrane. The phenolics are
involved to the same extent as the surfactant. Thus, when a change is introduced, the
equilibrium between phenolics in bulk water and in micelles is reestablished as fast as the
equilibrium between monomers and micellar CPC. Sabat et al. [22] developed a
mathematical model to predict the permeate composition in continuous MEUF of phenol
using different surfactants and membranes with different MWCO. The micelle rejections for
different surfactants were correlated with the equivalent molecular weight of the micelles and
they are not affected by the addition of phenol [22]. However, the effect of the membrane
MWCO on the micelle rejection could not be quantitatively explained because of the lack of
knowledge about the concentration polarization layer [22].
3.3.2. Micellar-enhanced ultrafiltration of a phenolics mixture
A phenolic mixture was filtered through UP020 using different concentrations of the CPC and
a final concentration of each phenolic compound of 0.1 g/L. As revealed by the results
depicted in Fig. 7, rejections for the different compounds are more or less identical.
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6 8 10
R
e
j
e
c
t
i
o
n

(
%
)
Surfactant concentration (CMC)
para-coumaric acid
vanillic acid
Tyrosol

Fig. 7. Rejection rates of phenolic compounds from their mixture (0.1g/L each) by MEUF on
UP020 membrane under different surfactant concentrations.
When mixed, these phenolic compounds behave differently to single phenolics. The rejections
of tyrosol and vanillic acid were enhanced in the presence of p-coumaric acid compared to
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
67
their rejections when processed separately. Figure 8 shows the MEUF of different total
concentrations of phenolic mixture using 2 CMC of the surfactant. The retention decreases
from the range of 51-54% to the range of 31-33% with the increase of the total phenolics
concentration from 0.3 to 0.9 g/L. The rejection rates of p-coumaric acid and vanillic acid
were found to be similar but higher than the rejection of tyrosol.

0
10
20
30
40
50
60
70
0,3 0,6 0,9
R
e
t
e
n
t
i
o
n

(
%
)
Phenolics mixture (g/L)
para-coumaric acid
vanillic acid
tyrosol

Fig. 8. Rejection of phenolics by MEUF on UP020 membrane using 2 CMC surfactant
concentration and different concentrations of a phenolic mixture (the different phenolic
compounds concentrations were equivalent, wt. 1:1:1).
The increase in the concentration of phenolic compounds did not affect the permeate flux
which remains more or less unchanged (140 8 L.h
-1
.m
-2
) (data not shown). This is due to the
fact that the major contribution of resistance against the solvent flux comes from the
deposited layer of CPC micelles, which are quite large, compared to the phenolics molecules.
Since CPC concentration remains constant and the total phenolics concentration varies over a
range between 0.3 and 0.9 g/L, the permeate flux remains almost unchanged (Fig. 8).
3.4. Surfactant recovery
An important characteristic feature of ionic surfactants is their tendency to precipitate from
aqueous solutions as solid hydrates. The temperature at which the solubility of the surfactant
falls below its critical micellar concentration is termed its Krafft temperature. The Krafft
temperature of CPC is about 10C (23). At 9C, the CPC molecules of the retentate streams of
the phenolics MEUF using 5 and 10 CMC precipitate to about 50% of the initial concentration
within two hours of low temperature treatment (Fig. 9a).
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
68
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
0 5 10 15 20 25
C
/
C
o
Time (hour)
(a) 9C 2 CMC
5 CMC
10 CMC

0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
0 5 10 15 20 25
C
/
C
o
Time (hour)
(b) 5C 2 CMC
5 CMC
10 CMC

Fig. 9. Removal of surfactant from different retentate streams by precipitation at 9C (a) and
5C (b).
The CPC removal reached about 90% after 20 hours. However, the CPC concentration in the
retentate stream of MEUF with 2 CMC was still more or less unchanged (Fig. 9a).
Furthermore, the surfactant concentration decreased in the three retentate streams at 5C (Fig.
9b).
The crystal formation was rapid within the first hours and the removal exceeded 80% after 6
hours. The treatment for longer durations (up to 24 hours) did not significantly enhance the
removal rate. This removal is about 80%, 90% and 95% for the 2 CMC, 5 CMC and 10 CMC
retentate streams, respectively. The precipitate can easily be recovered by filtration at low
temperature or centrifugation. After filtration on a 2 m pore size cellulose membrane, the
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
69
solid phase was dried at 105C for 6 hours and the residue was weighted. The recovered
surfactant was up to 92% of the initial concentration of CPC in the retentate stream.
4. Conclusion
The CPC molecules were found to reduce the permeate flux considerably and contribute to
the membrane fouling phenomenon. However, a great part of the membrane fouling caused by
CPC was reversible since the flux reduction after external cleaning of the membrane did not
exceed 5%. The rejection of phenolics by micellar-enhanced ultrafiltration using CPC was
positively correlated to their hydrophobicity, estimated by the octanol-water partition
coefficient. The relatively more hydrophobic compounds (vanillic acid and p-coumaric acid)
were rejected more by MEUF using CPC than tyrosol. The membrane of 20 kDa (MWCO)
exhibits higher rejection than the membrane of 50 kDa. The CPC was removed and recovered
efficiently from the retentate streams by precipitation under its Krafft temperature, especially
at 5C. The surfactant recovery makes the MEUF process more economic. Further
investigations are needed to enhance the permeate fluxes and the rejection of phenolics.

Acknowledgments
The authors are grateful to GEA Wiegand GmbH for its support and greatly thank the
Deutscher Akademischer Austauschdienst (DAAD) for providing two scholarships to the
Moroccan authors as a support for this study.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
70
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Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
72

Elimination des composs phnoliques par ultrafiltration assiste par micelles en
utilisant un tensioactif anionique
(Removal of phenolic compounds by micellar enhanced ultrafiltration using an anionic
surfactant)


Rsum:
Dans le prsent travail, la rtention des composs phnoliques (acide p-coumarique,
acide vanillique et tyrosol) par ultrafiltration assiste par micelles (UFAM) partir de
solutions aqueuses modles a t tudie. Les expriences dUFAM ont t conduites en
utilisant cette fois un tensioactif anionique (dodcyl sulfate de sodium SDS). Deux
membranes de polythersulfone (20 et 50 kDa) ont t testes. Les expriences
dultrafiltration ont t ralises sur un module dultrafiltration frontale agitation
magntique. Leffet des variations de la concentration du tensioactif et des soluts sur le flux
du permat ainsi que sur la rtention des soluts a t tudi. Lefficacit de rtention des
composs phnoliques par UFAM a t compare avec la nanofiltration. Les flux enregistrs
de lUFAM des solutions phnoliques avec diffrentes concentrations du tensioactif (2, 5 et
10 fois la concentration micellaire critique, CMC) varient entre 66 et 510 L.h
-1
.m
-2
.
Une rtention des composs phnoliques denviron 15% a t observe en absence de
tensioactif. Cette rtention serait due principalement ladsorption des composs phnoliques
sur la membrane. Le phnomne dadsorption des polyphnols sur les membranes de
polythersulfonate a t dj rapport par dautres auteurs. Quand le tensioactif est employ,
la rtention des composs phnoliques augmente considrablement, en fonction de la
concentration du tensioactif, atteignant des valeurs allant de 16% 67%, pour lacide p-
coumarique, de 29% 66% pour lacide vanillique et de 8% 51% pour le tyrosol. Ces
rtentions indiquent clairement que les composs phnoliques tudis interagissent dune
manire ou dune autre avec les micelles du tensioactif, qui sont par la suite retenues par la
membrane lors de lultrafiltration. De plus, laugmentation de la concentration du tensioactif
de 5 10 CMC amliore la rtention des composs phnoliques de 15% 30%. Par contre,
lorsquune concentration de 2 CMC de SDS est employe, la rtention ne dpasse pas 33%,
30% et 22% pour lacide p-coumarique, lacide vanillique et le tyrosol, respectivement.
Lutilisation dune membrane avec une taille de pores plus faible (20 kDa) amliore
considrablement la rtention des composs phnoliques mme une concentration faible de
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
73
tensioactif (2 CMC). Les rtentions observes varient de 61% 83%, de 32% 43% et de
22% 26% selon les concentrations en acide p-coumarique, en acide vanillique et en tyrosol,
respectivement.
Dans une solution aqueuse et en absence dlectrolytes, le nombre dagrgation dune
micelle de SDS est rapport gal 64, ce qui aboutit une micelle de poids molculaire
quivalent 18 kDa. Cependant, laugmentation de la concentration du tensioactif peut
engendrer la formation dagrgats micellaires plus grands capables de solubiliser plus de
soluts. Les rsultats obtenus montrent que lacide p-coumarique (APC) est le compos
phnolique le plus retenu par lUFAM en employant le SDS, ce qui signifie que ce compos
interagit avec les micelles de SDS plus que les deux autres composs phnoliques tudis.
Lacide vanillique (AV) vient en deuxime place en terme de rtention suivi du tyrosol (TY).
Ces rsultats indiquent clairement que les trois composs phnoliques sont solubiliss
sur/dans les micelles du SDS mais avec diffrents coefficients de partage entre la phase
aqueuse et la pseudo-phase des micelles selon le degr dhydrophobicit de ces composs
phnoliques.
Lhydrophobicit dun compos chimique peut tre estime par le coefficient de
partage octanol-eau (K
ow
) exprim en units logarithmiques. Les K
ow
de lAPC, lAV et le TY
sont 1,6, 1,42 et 0,69, respectivement. A partir de ces valeurs on peut conclure que les
coefficients de rtention de chaque compos phnolique sont positivement corrls aux
coefficient de partage octanol-eau (K
ow
). Les caractristiques ioniques et structurelles des
soluts jouent un rle cl dans leur solubilisation dans les micelles. Par ailleurs, lAPC et
lAV sont moins hydrophiles que le TY car leur solubilit dans leau ne dpasse pas 0,72, 1,5
et 124 g/l, respectivement. Pour cela, lacide p-coumarique et lacide vanillique sont les
composs les plus solubiliss dans la pseudo-phase hydrophobe des micelles et montrent par
consquent des rtentions plus leves.
Aprs avoir rcupr les rtentts, riches en tensioactif et en soluts, des essais
dlimination et de rcupration du tensioactif par prcipitation ont t conduits en employant
des lectrolytes monovalents et divalents (K
+
et Ca
2+
). La prcipitation des molcules de
tensioactif au-dessus de la CMC a t value en suivant les variations de la conductivit
lectrique ( ) en fonction du temps. Quand les ions forment des complexes ou incorpors
dans une matrice cristalline, la conductivit de la solution diminue. Dans le systme
SDS/KCl/APC, les cations de potassium forment des liaisons avec les anions de dodcyl
sulfate pour former le dodcyl sulfate de potassium (KDS) qui prcipite conduisant une
chute de la conductivit lectrique. Pour tudier la prcipitation du SDS des concentrations
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
74
en sels relativement faibles, la prcipitation a t conduite un ratio molaire de K
+
par rapport
au SDS gal 0,25 et la diminution de enregistre durant cette dernire exprience ne
dpasse pas 5% de la conductivit initiale (
o
). Le KDS peut tre rutilis comme tensioactif pour
lUFAM, avec possibilit de sa rcupration en diminuant la temprature du systme au-dessus du
point Krafft de KDS. Le KDS a un point Krafft plus lev que le SDS (35C). Par consquent, il
prcipite la temprature ambiante.
Le cation divalent (Ca
2+
) test un ratio molaire de 0,25 par rapport au SDS donne
lieu une diminution de conductivit beaucoup plus importante atteignant 18% de la valeur
initiale. La raction du dodcyl sulfate de sodium avec le chlorure de calcium produit le
dodcyl sulfate de calcium (Ca(DS)
2
, CDS) qui prcipite immdiatement. Un tel processus de
rcupration de tensioactif rapide, propre, ncessite des petites quantits des lectrolytes. La
prcipitation tait trs rapide et sest produite en moins de 2 minutes. Le temps dinduction,
qui est le temps ncessaire avant que la chute de la conductivit commence (prcipitation),
tait denviron 45 s. La prcipitation du dodcyl sulfate tait plus rapide et efficace des
ratios molaires Ca
2+
/SDS plus levs. Laugmentation du ratio molaire entre Ca
2+
et SDS
rduit le temps dinduction de 45 s moins de 5 s. Cependant, la rcupration du tensioactif
une grande chelle, un ratio molaire optimal doit tre dtermin pour assurer une prcipitation
efficace afin dviter la cration dun problme de pollution secondaire li lexcs de sels.
Le rapport optimal entre les concentrations molaires du cation et du tensioactif avoisine 0,5,
au-dessus de ce ratio molaire le rendement de prcipitation de SDS diminue. Ce rsultat est en
concordance avec la stchiomtrie de la raction qui est de 1:2 (Ca
2+
:DS).
Dans la perspective dune rutilisation du tensioactif, les cristaux de CDS peuvent tre
spars par une filtration simple et schs une temprature leve. Le CDS sch pourra tre
employ aprs dans lUFAM avec efficacit mais une temprature relativement leve car
sa temprature de Krafft est rapporte tre gale 50C. De plus, le CMC de CDS est
approximativement 2,4 mM. En revanche, le CDS na quune solubilit faible dans les
solutions aqueuses. Il serait mieux de le transformer un sel monovalent (ex. SDS en ajoutant
du Na
2
CO
3
) avant dtre re-solubilis dans leau pour une rutilisation ultrieure.
A partir de ces rsultats, il apparait clairement que la MEUF est un procd prometteur pour
le traitement et la valorisation des effluents contenant des composs haute valeur ajoute
tels les composs phnoliques, surtout quelle permet un taux de rtention lev et des flux de
permat raisonnables en comparaison avec la nanofiltration qui a montr une rtention
maximale ne dpassant pas 40% pour lacide vanillique et 13% pour le tyrosol.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
75
REMOVAL OF PHENOLIC COMPOUNDS BY MICELLAR ENHANCED
ULTRAFILTRATION USING AN ANIONIC SURFACTANT

Abdelilah El-Abbassi
1
, Jan Hoinkis
2
and Abdellatif Hafidi
1*


1
Food Science laboratory, Faculty of Sciences-Semalia, Cadi Ayyad University, 40090
Marrakech. Morocco.
2
Karlsruhe University of Applied Sciences, 76133 Karlsruhe. Germany.
Abstract
Micellar Enhanced Ultrafiltration (MEUF) of different phenolic derivatives including para-
coumaric acid, vanillic acid, and tyrosol, in aqueous solutions has been studied. The MEUF
experiments were conducted using an anionic surfactant, namely, Sodium Dodecyl Sulfate
(SDS). Two polyethersulfone membranes with different molecular weight cut-off (50 kDa and
20 kDa) were used. Experiments were conducted in a stirred batch cell. The effects of
surfactant and solutes concentrations on the permeate flux and on the observed retention have
been investigated. The MEUF efficiency was compared to the nanofiltration in terms of flux
and rejection. Monovalent and divalent electrolytes were tested for precipitation and recovery
of the dodecyl sulfate anion from the retentate stream.
The obtained fluxes of the MEUF of phenolic solutions using different concentrations of the
surfactant (2, 5 and 10 CMC) vary from 66 to 510 L.h
-1
.m
-
for the 50 kDa and 20 kDa
membranes, respectively. The retention of solutes without using any surfactant varies from
1.2 to 6.8% only, whereas, under the same operating conditions, retention increases to about
30 to 67% depending on the nature of solute, the surfactant concentration and the molecular
weight cut-off of the membrane. The rise of the surfactant concentration from 5 CMC to 10
CMC increases the phenolic compounds rejection by 15 to 30% only. Our tests demonstrated
that the SDS can be removed easily from the retentate by precipitation using CaCl
2
. The
MEUF appears as a promising process for the treatment and valorization of phenolic effluents
since it allows higher rejection and reasonable fluxes compared to the nanofiltration which
showed a maximum rejection of 40% for vanillic acid and 13% for tyrosol.
Keywords: Micellar Enhanced Ultrafiltration, phenolic compounds, anionic surfactant,
rejection.

*Corresponding author: Abdellatif HAFIDI, E-mail address: a.hafidi@ucam.ac.ma. Tel: +212 5
24 43 46 49 (Office: 515), Fax: +212 5 24 43 67 69.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
76
Nomenclature
Abbreviations
MEUF : micellar-enhanced ultrafiltration.
CMC : critical micellar concentration.
PCA : p-coumaric acid.
VA : vanillic acid.
TY : tyrosol.
OD : optical density.
RFR : relative flux reduction (%)
VCF : volume concentration factor.
Symbols
J : permeate flux (l/h.m).
R : rejection (%).
v : volume.
K
ow
: octanol-water partition coefficient.
Subscripts
o : initial value.
f : feed.
p : permeate.
r : retentate.
Greek letters
: electrical conductivity (mS/cm).
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
77
Introduction
Industrial wastewater pollution is a serious problem especially in the Mediterranean region
where water resources become more and more scarce. Phenolic derivatives are a class of
common pollutants of many industries. These organics are phytotoxic and bactericide which
consequently resist biodegradation. In the Mediterranean region, more than 30 million tons of
phenol loaded agro-food wastewaters (olive mill wastewater, table olive wastewaters, winery
and distillery wastewaters, etc.) are produced yearly [1].
Various techniques were tested for the removal of phenols and their derivatives from
wastewater, e.g., Photooxidation [2], different advance oxidation processes [3], ozonation [4],
nanofiltration [5] and adsorption on: low cost adsorbents [6], different bentonites [7], different
types of activated carbon [8], and on other materials [9,10]. Due to the low biodegradability
of phenolics, conventional biological wastewater treatment processes are generally found not
efficient in treating the phenolic-containing wastewaters [11].
Membrane processes have also been investigated for removing the phenolics from
wastewaters. Different kinds of membranes have been used: liquid membranes [12], anion
exchange membranes [13], nanofiltration/reverse osmosis membranes [14] and pervaporation
membranes [15]. Unfortunately, those processes often show low rejection levels for many
small organic molecules such as monocyclic phenolic compounds and are generally energy
intensive. As a solution hybrid processes have been developed that combine pressure driven
membrane and adsorption processes [16-18] for the separation and/or removal of phenols.
Because of their low molecular weights, simple ultrafiltration is ineffective for retaining these
compounds. Micellar Enhanced Ultrafiltration (MEUF) could be considered for the retention
of these pollutants. In such a process, a surfactant is added into the aqueous stream containing
organic matters. When the surfactant concentration rises above the critical micellar
concentration (CMC), surfactant monomers assemble and aggregate to form micelles. These
macromolecular structures can solubilize organic matters into their hydrophobic core or
adsorb on its surface. The aqueous stream is then filtered by an appropriate ultrafiltration
membrane with pore sizes smaller than the micelle size. The micelles along with the
solubilized organic matters are then rejected into the retentate stream.
The MEUF process has been recently reported to separate different organic compounds: a-
Phenylglycine [19], dye [20], tannic acid [21], aromatic alcohols [22], methylene blue [23],
and phenols [24]. As far as the surfactants used can generate some pollution and/or are costly,
recycling will be needed prior to final disposal. Different methods were proposed for such a
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
78
purpose. As an example, foam fractionation was reported as an efficient method for the SDS
recovery after a of micellar-enhanced ultrafiltration process [25].
In this study we investigated the possibility to remove some phenolic compounds from model
solutions using an anionic surfactant and PES membranes with different molecular weight
cut-off. The effects of surfactant and phenolics concentration on rejection and permeate flux
were studied. The removal and recovery of the surfactant by precipitation from the retentate
stream in the presence of p-coumaric acid (PCA) were also studied.
2. Experiments
2.1. Chemicals
Sodium dodecyl sulfate (SDS) was obtained from VWR International (Belgium). 4-Hydroxy-
3-methoxybenzoic acid (vanillic acid), trans-4-Hydroxycinnamic acid (p-coumaric acid) and
4-Hydroxyphenylethanol (tyrosol) were supplied by Sigma-Aldrich (Germany). KCl, CaCl
2

and isopropyl alcohol were purchased from Merck (Germany). Deionized water produced by
a DI4000 (TKA, Germany) system was used in all experiments. The membranes were
supplied gratefully by GEA-Wiegand, G.m.b.H (Etlingen, Germany).
2.2. Model solutions
Phenolics were solubilized in deionized water. Solutions were stirred overnight before adding
the SDS at pre-determined concentrations. The CMC of SDS was measured at room
temperature (25C 2C) in deionized water using the electrical conductivity method and it
was found to be equal to 9.6 mM, which is similar to the value (9.7 mM) reported by Rosen
[26]. The pH of the model solutions was adjusted to 2 with a solution of HCl (2N) using a pH-
meter (WTW, model pH325). Some physicochemical characteristics of the three studied
phenolic compounds are shown in the Table 1.
2.3. Nanofiltration experiments
In nanofiltration experiments, the transmembrane pressure was monitored with pressurized
nitrogen gas using a pressure gauge. The experimental set-up is illustrated in Fig. 1.
A PES membrane (MicrodynNadir, Germany) with a nominal retention of Na
2
SO
4
higher than
30% (NP030) was tested for phenolic compounds removal under a transmembrane pressure of
30 bars. The operating conditions (temperature, feed volume, volume concentration factor and
stirring rate) and the experimental set-up were the same as for the MEUF experiments. The
rejection coefficient was estimated using the Eq. (2).
2.4. Ultrafiltration experiments
Experiments were conducted under ambient temperature (252C) and under a
transmembrane pressure of 3 bar.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
79
Table 1.
Physicochemical characteristics of the tree studied phenolic compounds

Phenolic Compounds Chemical structure Molecular Weight (g.mol
-1
) Purity Solubility Peak of absorbance
p. coumaric acid

164.16 98 0.74
[27]
285
Vanillic acid

168.15 97 1.50
[28]
288
Tyrosol

138.16 97 124
[29]
275



Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
80

Fig. 1. Scheme of the nanofiltration and ultrafiltration experimental set-up: 1. Connection to
the nitrogen cylinder, 2. Screw, 3. Feed, 4. Membrane, 5. Permeate outlet, 6. Magnetic stirrer,
7. Magnetic bar, 8. Temperature sensor, 9. Feed inlet.
The feed volume was 200 ml and the cell was stirred at 200 rpm using a magnetic stirrer. Two
polyethersulfone (PES) membranes (MicrodynNadir, Germany) with different molecular
weight cut-off (50 kDa: UH050 and 20 kDa: UP020, data sheet: http://www.microdyn-
nadir.de/cms/pdf/produkte/en/1_katalog_engl_rz_screen.pdf) were used. The effective surface
area of the membrane was 50 cm. Permeate fluxes were determined continuously using a
graduated cylinder connected to the permeate outlet. Before and after each run, deionized
water was filtered to determine and compare the permeability of the membrane. MEUF
experiments were stopped when the volume concentration factor (VCF) reached a value of 2:
o
r
v
VCF
v
= (1)
where v
o
is the initial volume and v
r
is the volume of the retentate
Phenols rejection was determined by analyzing the permeate and the retentate
spectrophotometrically.
The SDS molecules do not absorb at any of the used wavelengths (285 nm, 288 nm, 275 nm)
and the rejection coefficient was calculated as follow:
( ) % 1 100
p
r
OD
R
OD

=


(2)
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
81
where OD
p
stands for the optical density of the permeate and the OD
r
is the optical density of
the retentate at the wavelength corresponding to the peak of absorbance of the studied
phenolic compound (Table 1).
The relative flux reduction (RFR) was calculated from the difference between the permeate
fluxes measured at t=0 (J
o
) and at the end of the experiment (J
f
). The RFR was then calculated
as follow:
(%) 1 100
f
o
J
RFR
J

=


(3)
After removing the feed solution, the membrane surface was externally rinsed twice by filling
the cell with pure water (200 ml) and leaving it under high stirring rate (800 rpm) for up to 10
min. The membrane was reused as the water flux reduction after use of membrane did not
exceed 5%.
2.5. Surfactant precipitation and recovery
The electrical conductivity () measurements were used to follow the precipitation reactions
of the SDS on different systems (SDS/KCl/PCA and SDS/CaCl
2
/PCA). As precipitation
occurs, ions are removed from the solution, the conductivity decreased consequently. An SDS
solution (20mM) containing 1.2 mM of PCA was placed in a flask kept at 20C. The solution
was stirred and nitrogen was blown into the flask to reduce the absorption of carbon dioxide
into the solution [30]. A salt solution of 8 mM and 16 mM containing 1.2 mM of PCA was
added to the SDS solution under stirring rate of 200 rpm. A WTW (Germany) conductivity-
meter model 3L5i was used to follow the conductivity of the solution as a function of time
during the precipitation reaction. The precipitation efficiency with each cation was compared
and the eventual loss of the PCA after the SDS precipitation was evaluated by comparing its
absorbance at 285 nm before and after precipitation.
3. Results and discussion
3.1. Nanofiltration
Nanofiltration on the NP030 membrane exhibits rejections up to 14% and 40% for tyrosol and
vanillic acid, respectively (Table 2). The permeate fluxes decreased considerably when using
phenolic solutions compared to the deionized water flux. The observed retentions of vanillic
acid (30% to 40%) are higher than those of tyrosol (9% to 13%). Conversely, the permeate
fluxes of the nanofiltration of tyrosol solutions were relatively higher. This may partly
originates from the difference of molecular weight between the two phenolics. The vanillic
acid (168 Da) is slightly bigger than tyrosol (138 Da). Furthermore, this difference in
rejection rates can be due in part to the charge exclusion effect since the vanillic acid has a
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
82
carboxyl group with a negative charge, so it may be rejected more efficiently by the PES
membranes (Table 2).
Table 2.
Permeate fluxes and rejection of phenolic compounds by nanofiltration using A PES
membrane (NP030).
Phenolic compound (g/l) Rejection (%) Flux (L/h/m)
Tyrosol
0 -- 116
0.25 8.92 25
0.5 10.24 18
0.75 13.56 13
Vanillic acid
0 -- 116
0.25 40.06 18
0.5 29.89 9
0.75 33.43 7

3.2. MEUF processing of phenolic solutions
3.2.1. Permeate fluxes and membrane fouling
The UF permeate flux of the deionized water when using the UH050 membrane was about
2500 l/h.m. It is evident from the Fig. 2 that the permeate fluxes were higher in absence of
surfactant. The addition of the SDS above the CMC leads to the formation of large aggregates
which may deposit on the membrane surface. The membrane resistance to solvent transfer
consequently increased leading to a decrease of the permeate flux. As can be observed from
Fig. 2, the fluxes drastically decreased for the solutions containing the SDS. Reductions up to
97% were observed at the highest concentrations of the SDS and the phenolic compounds
(Fig. 2). When using the membrane UP020 the decrease of the permeate fluxes (77%-79%)
was not as important as that shown by UH050 (Table 3).
However, high fluxes were recovered after membrane cleaning inside the UF module by
deionized water at high stirring rate (800 rpm) for 10 min. The high water flux recovered
after external cleaning of the membrane with water (rinsing) indicates that reversible fouling,
caused by concentration polarization, contribute greatly to the overall flux decline. The
relative flux reduction (RFR) was estimated to 23% and 63% for UP020 and UH050,
respectively. However, longer operating times significantly affect the recovered fluxes
revealing that irreversible fouling takes place.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
83
0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
0
400
800
1200
1600
2000
2400
P
e
r
m
e
a
t
e

f
l
u
x

(
l
/
h
.
m

)
0.1 g/l
0.2 g/l
0.3 g/l
(a) p-Coumaric acid

0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
0
400
800
1200
1600
2000
2400
P
e
r
m
e
a
t
e

f
l
u
x

(
l
/
h
.
m

)
0.1 g/l
0.2 g/l
0.3 g/l
(b) Vanillic acid

0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
0
400
800
1200
1600
2000
2400
P
e
r
m
e
a
t
e

f
l
u
x

(
l
/
h
.
m

)
0.1 g/l
0.2 g/l
0.3 g/l
(c) Tyrosol

Fig. 2. Permeate fluxes against surfactant concentration for the MEUF of different model
solutions using UH050 membrane: (a) p-coumaric acid, (b) vanillic acid and (c) tyrosol.
The difference of RFR may originates from the nature of the membrane material and also the
larger pores of the UH050 membrane may facilitate the penetration of the small micelles into
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
84
the pores and the adsorption on the walls leading to a narrowing and to greater RFR. Susanto
et al. [31] reported significant water flux reductions and changes in polyethersulfone
membranes surface properties after static adsorption of phenolic compounds.
Table 3.
Rejections and permeate fluxes of the MEUF of phenolic compounds using membrane UP020
and 2 CMC of the SDS

p-Coumaric acid Vanillic acid Tyrosol
Concentration (g/L) R (%) J
o
(L/h.m) R (%) J
o
(L/h.m) R (%) J
o
(L/h.m)
0 0 600 0 600 0 600
0.1 83 129 32 125 26 127
0.2 63 131 43 134 27 126
0.3 61 129 39 130 22 129

3.3. Removal of phenolic compounds
A rejection up to 15% of phenolics was observed in absence of any surfactant (Figs. 3a, 3b
and 3c). Most likely some adsorptions of phenolic compounds occur on the membrane
material. When the surfactant is used, the retentions of phenolics are increased significantly,
depending on the surfactant concentration, to the range of 16%-67%, for the p-coumaric acid,
29%-66% for the vanillic acid and 8%-51% for the tyrosol, respectively. This clearly
evidences that the solutes are somehow linked to the surfactant micelles, which are
subsequently retained by the ultrafiltration membrane. It may also be observed from the
Figures 3a, 3b and 3c that the rise of the surfactant concentration from 5 to 10 CMC increases
the rejection of different phenolic compounds from 15% to 30%. When 2 CMC of the SDS is
used, the retention did not exceed 33%, 30% and 22% for the p-coumaric acid, vanillic acid
and tyrosol, respectively. However, the decrease of the MWCO of the membrane to 20 kDa
improves considerably the rejection at a low concentration of the surfactant (2 CMC) (Table
3). The observed retentions were in the range of 61%-83%, 32%-43% and 22%-26% for p-
coumaric acid, vanillic acid and tyrosol, respectively. Therefore, the SDS micelles are
retained more efficiently when using a membrane with lower MWCO. In aqueous solutions
not including electrolytes, the reported micelle aggregation number for SDS is 64 [32,33].
This gives the micelles an equivalent molecular weight of about 18 kDa. When increasing the
concentration of the surfactant, the micelles can aggregate and form bigger macrostructures
that can solubilize more solutes.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
85
0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
0
10
20
30
40
50
60
70
R
e
j
e
c
t
i
o
n

(
%
)
0.1 g/l
0.2 g/l
0.3 g/l
(a) p-Couamric acid

0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
0
10
20
30
40
50
60
70
R
e
j
e
c
t
i
o
n

(
%
)
0.1 g/l
0.2 g/l
0.3 g/l
(b) Vanillic acid

0 2 4 6 8 10
SDS concentration (CMC)
0
10
20
30
40
50
60
R
e
j
e
c
t
i
o
n

(
%
)
0.1 g/l
0.2 g/l
0.3 g/l
(c) Tyrosol

Fig. 3. Rejection of phenolic compounds by MEUF against surfactant concentration for
different model solutions using UF050 membrane: (a) p-coumaric acid, (b) vanillic acid and
(c) tyrosol.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
86
Table 3 shows also that the p-coumaric acid (PCA) is the most rejected phenolic compound
by MEUF using the SDS, it must be the most interacting or/and solubilized in SDS micelles.
PCA exhibits the highest rejection coefficient followed by VA and TY (Table 3, Figs. 3a, 3b
and 3c). This finding indicates clearly that the three phenolics are solubilized into the SDS
micelles but with different partition coefficients between the water phase and micelles
pseudo-phase most likely in respect to the hydrophobicity degree of these phenolics.
The hydrophobicity of a chemical can be estimated by the octanol-water partition coefficient
(K
ow
) expressed in log units. The log K
ow
of PCA, VA and TY are 1.6 [34], 1.42 and 0.69
[35], respectively. From these values we can notice that the rejection coefficients of each
phenolic compound are correlated positively to their octanol-water partition coefficients
(K
ow
).
The ionic and structural characteristic of the solutes plays a key rule on their solubilization in
the micelles. On the other hand, p-coumaric acid and vanillic acid are less hydrophilic
compounds than tyrosol since their respective solubility in water did not exceed 0.72 and 1.5
g/l (Table 3). Thus, the p-coumaric and vanillic acids are readily solubilized in the
hydrophobic core of the micelles and shows higher observed retention.
3.4. Surfactant recovery from the retentate stream
The precipitation of surfactant molecules above CMC was approached by measuring the
variation in the electrical conductivity ( ) of the solution against time. When ions form
complexes or are incorporated into crystal lattices, the conductivity of the solution must
decrease. In the system SDS/KCl/PCA, The potassium cations bind to dodecyl sulfate anion
(Appendix A) to form the potassium dodecyl sulfate (KDS) which precipitate and
consequently the electrical conductivity decreases (Fig. 4). To test the precipitation of the
SDS at low relative concentration of salt, the precipitation was conducted at a mole ratio of
K
+
to SDS equal to 0.25 and the decrease of the did not exceed 5% of the initial
conductivity,
o
(Fig. 4).
Wu et al., [36] reported that the KDS have similar CMC, water solubility, and ability to
solubilize organic solutes in micellar solutions as the SDS. KDS was proposed as a potential
surfactant for use in MEUF, with recovery of the surfactant to be accomplished by lowering
the system temperature below the Krafft point. KDS has a significantly higher Krafft point
than SDS (35C) [36]. Consequently, it precipitates at ambient temperature. The Krafft point
of the SDS is 16C [37].
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
87
0 1 2 3 4 5 6
Time (min)
0,80
0,84
0,88
0,92
0,96
1,00
1,04
p
/
p
o
[K
+
]/[SDS]=0.25
[Ca
2+
]/[SDS]=0.25

Fig. 4. Normalized electrical conductivity time course during the precipitation of the SDS at
30C using KCl and CaCl
2
in presence of 1.2 mM of p-coumaric acid.
The divalent cation (Ca
2+
) used at a mole ratio to SDS equal to 0.25 leads to a more
significant decrease of the conductivity down to 18% of the initial value (Fig. 4). Such a
recovery process is rapid, clean and requires only small amounts of the electrolyte. The
precipitation was very rapid and occurred during less than 2 minute (Fig. 4 and 5).
The induction time which is the time needed before the decrease of conductivity started
(precipitation) was about 0.75 min. The precipitation of dodecyl sulfate was more rapid and
effective at higher Ca
2+
/SDS mole ratio (Fig. 5). Furthermore, the increase of the Ca
2+
/SDS
mole ratio decreases the induction time from 0.75min to less than 0.08 min.
When using the precipitation process to remove and recover SDS at large scale, an optimal
mole ratio should be determined to assure an efficient precipitation without creating a
secondary pollution problem related to the excess of salt.
The optimum as shown by the Fig. 5 could be around a mole ratio of 0.5, since the increase of
the Ca
2+
/SDS mole ratio above this value leads to the decrease of the SDS precipitation rate.
This finding can be attributed to the fact that the reaction stoichiometry is shown to be 1:2
(Ca
2+
:DS)(Appendix B). The reaction of sodium dodecyl sulfate with calcium chloride
produces the calcium dodecyl sulfate (Ca(DS)
2
, CDS) which precipitates immediately.
Micelles act as sequestering agents for the calcium ions. As more Ca
2+
is added to the system,
the additional cations tend to form more Ca(DS)
2
, reducing the dissolved SDS in the solution.
Although, the increase of Ca
2+
/SDS mole ratio beyond the value of 0.5 leads to a decrease of
precipitation rate as followed by electrical conductivity measurements (Fig. 5). The mole ratio
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
88
between surfactant and cation for the formation of precipitation results in different degrees of
charge neutrality of the precipitate. The degree of charge neutrality of the precipitate shows
different solubility. This is clearly shown by the decreasing yield of the precipitate with
increasing mole ratio of Ca
2+
to SDS to from 0.5 to 1.7. This same phenomenon was observed
when precipitating SDS with a cationic surfactant (CPC) [38].
0 1 2 3 4 5 6
Time (min)
0,80
0,84
0,88
0,92
0,96
1,00
1,04
p
/
p
o
[Ca
2+
]/[SDS]=0.25
[Ca
2+
]/[SDS]=0.50
[Ca
2+
]/[SDS]=0.80
[Ca
2+
]/[SDS]=1.70

Fig. 5. Normalized electrical conductivity time course during the precipitation of the SDS at
30C using CaCl
2
at different mole ratios in presence of 1.2 mM of p-coumaric acid.
Micelles act as sequestering agents for the calcium ions. As more Ca
2+
is added to the system,
the additional cations tend to form more Ca(DS)
2
, reducing the dissolved SDS in the solution.
Although, the increase of Ca
2+
/SDS mole ratio beyond the value of 0.5 leads to a decrease of
precipitation rate as followed by electrical conductivity measurements (Fig. 5). The mole ratio
between surfactant and cation for the formation of precipitation results in different degrees of
charge neutrality of the precipitate. The degree of charge neutrality of the precipitate shows
different solubility. This is clearly shown by the decreasing yield of the precipitate with
increasing mole ratio of Ca
2+
to SDS to from 0.5 to 1.7. This same phenomenon was observed
when precipitating SDS with a cationic surfactant (CPC) [38].
However, CDS has a low solubility in solutions and cannot be directly recycled to the process.
It must be transformed to the monovalent salt (e.g. to SDS by adding Na
2
CO
3
) before it is re-
dissolved in water for recycle [39].
The crystals can be separated by a simple filtration and dried at high temperature or by silica
gel at room temperature overnight. The dried CDS can be then used in the MEUF process
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
89
efficiently but at high temperature since its Krafft temperature is 50C [40]. The CMC of
CDS is approximately at 2.4 mM [29].
Conclusion
Micellar Enhanced Ultrafiltration was more effective to remove phenolic compounds from
model solution than nanofiltration. It was found that PES membranes adsorb phenolic
compounds. Consequently, the effect of pore size on adsorptive fouling was expected to be
very important. The rejection reached satisfactory levels (80%) under some conditions but the
use of the SDS involves a considerable decrease in the permeate fluxes.
A precipitation process was proposed to recover the surfactant from the retentate stream. Two
systems were tested, SDS/CaCl
2
/PCA and SDS/KCl/PCA. No substantial loss of p-coumaric
acid occurs during the precipitation since no significant change in the absorbance at the wave
length 285 nm before and after precipitation was observed for both systems. The elimination
and recuperation of the surfactant from the retentate will allow the recovery of pure phenolics
more efficiently. Further investigations are needed to enhance the rejection with small amount
of surfactant and to increase the permeate fluxes. Furthermore, the minimization of the
adsorption on the membrane surface can limit the adsorptive fouling.

Acknowledgments
The authors thank GEA Wiegand GmbH for its support and thank sincerely the Deutscher
Akademischer Austauschdienst (DAAD) which provided scholarships to the Moroccan
authors as a contribution to this work.

Appendix A
Reactions occurring though the dodecyl sulfate anion precipitation using KCl:
KCl K
+
+ Cl
-

+ K
+
+Na
+

Appendix B
Reactions occurring though the dodecyl sulfate anion precipitation using CaCl
2
:
CaCl
2
Ca
2+
+ 2Cl
-
+ Ca
2+

+2Na
+

Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
90
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Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
92

Application de lultrafiltration assiste par micelles pour le traitement des
margines
(Micellar enhanced ultrafiltration process for the treatment of olive mill wastewater)
Rsum:
Les margines reprsentent un problme srieux de pollution environnemental,
spcialement en Mditerrane, qui est la rgion principale de production dhuile dolive
lchelle mondiale. Limpact environnemental des margines est li leur charge organique et
en particulier laction phytotoxique et antibactriale de leur contenu phnolique. Les
polyphnols sont galement reconnus en tant quantioxydants puissants avec des proprits
nutritionnelles et pharmacologiques intressantes. Dans le prsent travail, lefficacit de
traitement des margines par ultrafiltration assiste par micelles (MEUF) pour la rtention et la
concentration des polyphnols, a t value, en employant un tensioactif anionique
(dodcylsulfate de sodium, SDS) et une membrane hydrophobe de polyfluorure de vinylidne
(PVDF). La possibilit de rtention des composs phnoliques par ultrafiltration assiste par
micelles de SDS a t dmontre dans des travaux prcdents sur des solutions modles
contenant des composs phnoliques monocycliques savoir le tyrosol, lacide p-coumarique
et lacide vanillique. Cette fois, la MEUF est teste sur des eaux uses relles, les margines
issues dune unit semi-moderne de trituration dolive.
Les membranes de PVDF employes dans cette tude ont t prpares par la
technique dinversion de phases, en utilisant le polythylne glycol (PEG) comme additif et le
N,N-dimthylactamide (DMAc) comme solvant.
La concentration de glation (C
g
) de SDS a t dtermine thoriquement en suivant
les flux de permat de lUFAM en fonction de laugmentation de la concentration de SDS
dans le rtentt en fonction du temps dopration sous diffrentes pressions. La C
g
moyenne
retrouve tait denviron 28 fois la CMC (0,27 M). Cette valeur est plus importante
comparativement aux valeurs rapportes dans la littrature scientifique (0,87 M et 57 M).
Cette diffrence peut tre justifie par les variations des conditions exprimentales affectant la
concentration du tensioactif la surface de la membrane (caractristiques de la membrane,
temprature, pH, force ionique de la solution, etc.). En outre, le PVDF possde des
proprits ferrolectriques et il est lectrostatiquement charg. Par consquent, certaines
interactions entre la membrane de PVDF et les soluts chargs peuvent avoir lieu favorisant
une formation rapide de gel.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
93
Leffet des conditions opratoires sur le flux du permat a t tudi. La rsistance
membranaire secondaire cre par les molcules de SDS a t value. Les flux initiaux
obtenus lors du traitement des margines par UFAM en employant 10 fois la concentration
micellaire critique (CMC) du SDS sont 25,7 et 44,5 l/m
2
.h respectivement sous une pression
transmembraine de 3,5 et 4,5 bar.
La rtention des polyphenols diffrentes concentrations du tensioactif (0, 5 et 10
CMC) a t dtermine. Dans le cas du traitement des margines sans tensioactif (0 CMC de
SDS), la rtention ne dpasse pas 30%, et elle diminue en fonction de temps. Au cours de
lUFAM, de plus en plus de soluts vont tre dposes la surface de la membrane
conduisant une augmentation de la concentration des polyphnols et une polarisation de la
concentration. Par consquent, le transport convectif des composs phnoliques au cot de
permat augmente, ce qui augmenterait la concentration des polyphnols dans le permat.
Comme rsultat, le taux de rtention diminue en fonction de temps. Le taux de rtention des
polyphnols sans tensioactif varie entre 5 et 28%, par contre, il atteint 74% avec lemploi du
SDS 10 CMC et un pH optimal de 2.
Les flux initiaux obtenus lors du traitement des margines par UFAM sous une pression
transmembranaire de 3,5 bar et 4,5 bar taient 25,7 et 44,5 l/m
2
.h, respectivement. Pourtant, le
flux de permat mesur aprs 160 min sous une pression de 4,5 bar montre une valeur plus
faible par rapport celle enregistre 3,5 bar aprs la mme dure. Le colmatage se
dclencherait entre 3,5 bar et 4,5 bar. La pression critique au dessous de laquelle le
phnomne de colmatage ne se manifeste pas se siturait dans cette zone. Dans notre cas cette
pression critique semble relativement leve. Elle sexpliquerait par laddition dun tensioactif
anionique qui augmenterait la taille de particules suspensus des margines en favorisant leur
agrgation et floculation. Il a t dmontr rcemment que la distribution de taille de
particules peut avoir un effet considrable sur les valeurs de la pression critique.
En terme de dpollution, lUFAM offre un permat limpide (environ 88% de
dcoloration), qui ncessite videment moins de demande chimique en oxygne (DCO) pour
son oxydation (4,33% de la DCO initiale).
Lensemble de ces rsultats montre que la MEUF peut tre applique efficacement
pour le traitement et la concentration des margines pour une rcupration ultrieure de leur
contenu phnolique.
Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
94

Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
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Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
100

Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
101

Chapitre 3 Ultrafiltration Assiste par Micelles
102











CHAPITRE IV

TRAITEMENT ET CONCENTRATION DES MARGINES PAR
DISTILLATION MEMBRANAIRE ET OSMOTIQUE







Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
103

Concentration des margines par distillation membranaire en vue dune
rcupration subsquente des composs phnoliques
(Concentration of olive mill wastewater by membrane distillation for polyphenols recovery)



Rsum:
Dans cette partie, la possibilit de traiter et concentrer les margines par distillation
membranaire a t tudie pour la premire fois. Lobjectif est dobtenir un permat deau
quasiment pure et un concentrt des margines enrichies en polyphnols, qui pourra servir pour une
extraction ultrieure. La distillation membranaire (DM) est un procd de sparation dont la
temprature est la force motrice du transport de vapeur deau travers une membrane microporeuse
hydrophobe.
Deux types des membranes polymriques commerciales, en polyvinilydne triflurothylne
(PTFE, TF200) et en fluorure de polyvinilydne (PVDF, GVHP), ont t testes. Les effets des
paramtres opratoires et des caracteristiques de chaque membrane sur la performance de la
distillation membranaire par contact direct (DCMD) ont t tudis. Lefficience de la DCMD pour
le traitement et la concentration des margines a t value en suivant le flux du permat en
fonction du temps et les taux de rtention des composs phnoliques.
Les rsultats obtenus dmontrent la possibilit et lefficacit du traitement et de
concentration des margines par distillation membranaire. La membrane TF200 montre un
coefficient de sparation lev (99%) comparativement la membrane GVHP (89%). Le facteur de
concentration des polyphnols des margines tait 1,72 pour la membrane TF200, par contre pour la
membrane GVHP, le facteur de concentration ne dpasse par 1,4 aprs 9 heures de distillation.
Les coefficients de sparation des deux membranes diminuent en fonction du temps de
distillation. Cette diminution serait due aux phnomnes de colmatage et de polarisation de
concentration. Les margines tant un mlange complexe incluant des particules solides, huile,
sucres, protines, macromolcules, polyphnols et beaucoup dautres substances solubles, au cours
dune opration de DM prolonge, des soluts vont tre dposes sur la surface de la membrane en
conduisant une augmentation de la concentration des polyphnols la surface de la membrane
(polarisation de concentration), un dclin des flux transmembranaire et une diminution de la
selectivit de la membrane. Par consquent, la concentration des polyphnols dans le permat
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
104
augmente et le coefficient de sparation des polyphnols chute avec le temps. Ces rsultats
dmontrent pour la premire fois la possibilit dappliquer la distillation membranaire pour le
traitement et la concentration des margines en vue dune valorisation ultrieure.
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
105

Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
106

Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
107

Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
108

Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
109




Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
110

Traitement des margines par distillation membranaire en employant
diffrentes membranes de polyttrafluorothylne
(Treatment of olive mill wastewater by membrane distillation using polytetrafluoroethylene
membranes)

Rsum
Le procd de distillation membranaire contact direct (DMCD) a t appliqu pour
le traitement et la concentration des margines. Dans notre tude prcdente, nous avons pu
constater les performances de la membrane de polyttrafluorothylne (PTFE) pour le
traitement des margines comparativement la membrane en PVDF. Nous avons alors test
trois membranes polymriques commerciales en PTFE avec diffrentes tailles de pores
(TF200 de 0.2 m, TF450 de 0.45 m et TF1000 de 1 m) sous diffrentes tempratures
(diffrences de temprature et tempratures moyennes entre les deux cots de la membrane).
Lobjectif de cette tude est la slection de la meilleure membrane en terme de taille
de pores pour le traitement des margines en vue dune production deau quasiment pure et un
concentrt phnolique. Une bonne membrane pour la DMCD doit montrer une faible
rsistance membranaire au transfert de masse, une pression dentre deau liquide leve pour
garder les pores membranaires secs, une faible conductivit thermique pour viter la perte de
chaleur travers la matrice membranaire, une bonne stabilit thermique et en fin une
rsistance chimique excellente. Dans cette tude, une vitesse dagitation relativement faible
(500 rpm) a t applique dans les deux compartiments pour rduire lpaisseur des couches
tablies au voisinage des deux surfaces de la membrane (dposition de la particule, couche de
polarisation et de transition de temprature).
Une srie dexpriences de DCMD de leau distille comme aliment, a t ralise
diffrentes tempratures moyennes de 20C 50C en gardant la
diffrence de temprature entre les deux cots de la membrane constante et
gale 10C. Les rsultats obtenus montrent que les flux de permat augmentent avec
laugmentation de la temprature moyenne pour les trois membranes tudies, de moins de 5
L/h.m plus de 30 L/h.m aprs une augmentation de la temprature moyenne de 20C
50C. Aussi, quand la temprature de laliment (margines) a t augmente de 25C 55C
les flux ont aussi augment de 5 L/h.m aux environs de 18 L/h.m. Cette augmentation est
due un accroissement exponentiel de la pression de vapeur deau avec la temprature.
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
111
Leffet des variations de la diffrence de temprature entre les deux cots de la
membrane sur les flux de permat a t aussi valu en changeant la temprature de laliment
(eau distille) et en gardant la temprature de permat constante 20C. Les rsultats
dmontrent que les variations des flux en fonction de la temprature suivent une quation
exponentielle dArrhenius. Aussi, nous avons enregistr des flux plus levs pour les
membranes qui ont des pores plus larges. Les flux de permat enregistrs taient : 8,97 ; 9,03
et 10,62 L/h.m pour TF200, TF450 et TF1000, respectivement.
Le traitement des margines par DMCD a t conduite sous diffrentes tempratures de
laliment (margines) de 30C 70C, en gardant la temprature de permat constant 20C.
Les flux de permat enregistrs par les expriences de DMCD des margines ont t nettement
infrieurs ceux enregistrs durant les expriences avec leau distille (7,68-8,84 L/h.m
compars 8,97-10,62 L/h.m). Ceci est attribu la pression de vapeur faible des margines
cause de la prsence de diffrentes soluts en plus de leffet de la polarisation de
concentration. De plus, laccroissement exponentiel des flux de permat en fonction de la
temprature pour leau distille tait plus importante par rapport aux expriences ralises sur
les margines.
La diminution du flux de permat en fonction du temps lors du traitement des
margines est due leffet cumulatif de la concentration des margines avec le temps, la
polarisation de concentration et de temprature, et le phnomne de colmatage. En outre, le
dclin observ des flux peut tre aussi due partiellement aux interactions lectrostatiques qui
peuvent avoir lieur entre la surface de la membrane et les soluts des margines en favorisant
le colmatage de la membrane par formation dune couche adsorptive sur la surface de la
membrane. Pour comparer la performance des trois membranes, nous avons procd au calcul
dun indice de performance de membrane (IP) qui consiste en le produit du facteur de
concentration et le flux de permat en fonction de temps.
Le traitement des margines par distillation membranaire avec des membranes de PTFE
permet la concentration du contenu phnolique des margines jusqu 1,78 fois aprs 8 heures
de distillation, aboutissant un indice de performance meilleur pour la membrane TF1000,
montrant la taille de pore la plus large. Le choix dune membrane adapte au traitement des
margines par DMCD doit prendre en considration la fois la slectivit et la permabilit.
Les trois membranes testes montrent des flux raisonnables avec des facteurs de sparation
trs levs, au voisinage de 100 % durant les premires 8 heures de traitement des margines
par DMCD.
Par ailleurs, leffet du traitement des margines tempratures leves sur le contenu
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
112
phnolique et son activit antioxydante (test de DPPH) a t valu en fonction du temps de
traitement. Les rsultats obtenus ne montrent aucun effet indsirable de la temprature leve
sur le contenu phnolique ou sur son activit antioxydante.
Finalement, il est noter que les trois membranes employes dans cette tude sont
conues pour tre appliques la microfiltration. Ces membranes montrent des flux de
permat raisonnables lors de la DMCD et peuvent tre appliques avec succs pour le
traitement des margines. Ainsi, le permat issu de la DMCD des margines peut tre rutilis
dans le procd de trituration des olives.

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Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
120
Traitement intgr des margines par distillation membranaire contact direct
(Integrated direct contact membrane distillation for olive mill wastewater treatment)

Rsum:
Il parait clairement quune amlioration des flux de la DM des margines simpose
avant denvisager une application industrielle du procd. Un tel objectif peut tre atteint par
une optimisation des paramtres opratoires mais galement par une rduction de la charge
colmatante des margines. Ainsi, des margines issues dun procd semi-moderne de
trituration dolive ont t prtraites par afin dliminer les matires en suspensions avant
dtre concentres par distillation membranaire contact direct (DMCD). Les expriences ont
t effectues en utilisant des membranes plates commerciales de polyttrafluorothylne
(TF200) avec une taille de pore moyenne de 0.2 m. Leffet de la temprature moyenne, de la
diffrence de temprature et de prtraitements (coagulation/floculation ou microfiltration,
MF) sur le flux du permat a t tudi.
Dans le but damliorer les performances du procd, de rduire le colmatage de la
membrane, et de produire un concentrt phnolique relativement propre, les particules larges
prsentes dans les margines ont t limines avant le traitement des margines par DMCD.
Deux mthodes diffrentes de prtraitement ont t testes savoir la coagulation/floculation
et la microfiltration. Les flux de permat de la DMCD des margines brutes et des margines
prtraites ont t compars en vue de slectionner le meilleur prtraitement. Les flux initiaux
de permat, des margines brutes prtraites par coagulation/floculation et prtraites par
microfiltration (MF) sont 5,6 ; 6,9 et 7,7 L/m.h, respectivement. En consquence, le flux de
permat lors du traitement des margines par DMCD a t amlior considrablement aprs
prtraitement par microfiltration compare la coagulation/floculation. Ce dernier
prtraitement a permis la rduction denviron 23% des solides totaux (ST) des margines. Le
contenu phnolique des margines a t aussi rduit de 20%. Par contre, quant au prtraitement
des margines par MF en utilisant une membrane de TF200, les ST ont t rduits de 30% et
les composs phnoliques denviron 5%.
Le colmatage de la membrane durant le traitement des margines par DMCD avec ou
sans prtraitement a t valu en calculant la valeur absolue de la pente de la ligne de
rgression du flux de permat en fonction de temps. Les valeurs obtenues sont considres
comme un indice de colmatage. Les petites valeurs indiquent une diminution faible du flux de
permat durant le traitement des margines par DMCD. Les indices de colmatage des
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
121
membranes lors du traitement des margines brutes, des margines prtraites par
coagulation/floculation et par MF sont : 0,39 ; 0,25 et 0,18, respectivement. Le prtraitement
des margines par MF a permis une rduction du phnomne de colmatage comparativement
au prtraitement par coagulation/floculation. Ainsi, la microfiltration a t adopte comme
prtraitement optimale pour la suite des expriences. Les rsultats obtenus pour les flux de
permat montrent une augmentation avec laccroissement de la temprature du compartiment
des margines. Les flux de permat a augment de 5,0 29,6 L/m
2
h pour la distillation de leau
et de 4,6 seulement 15,4 L/m
2
h pour les margines, lorsquon a augment la temprature de
laliment (margines) de 30C 60C, respectivement. La temprature du compartiment de
permat a t garde constante (20C).
Des facteurs de concentration de 1,5 et 1,7 fois ont t obtenus aprs 8 h de DMCD
quand la diffrence de temprature est ajuste 20C et 30C, respectivement. Le taux de
sparation tait trs proche de 100% durant les six premires heures de traitement des
margines. Aprs 8h de traitement, le facteur de sparation atteint environ 99% pour T =
20C. La concentration des polyphnols dans le permat est reste pratiquement nulle durant
le traitement.
Le profil phnolique des margines avant et aprs concentration par DMCD a t
dtermin par HPLC. LHydroxytyrosol qui est lun des antioxydants les plus puissant prsent
dans les margines, reprsente environ 53% du contenu phnolique total des margines.
Dautres composs phnoliques (3,4-dihydroxyphnylglycol, acide gallique, acide actique p-
dihydroxyphnyl, tyrosol, oleuropine et acide frulique) ont t aussi dtects. La
concentration de lhydroxytyrosol tait 4 g/L dans les margines avant traitement par DMCD.
Elle a augment considrablement (deux fois de plus) pour atteindre 8,18 g/L dans le retentt
aprs 76 h de traitement et concentration par DMCD. Le mme profil phnolique (excpt
loleuropine) a t observ dans le permat mais des concentrations trs faibles.

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122






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130

Traitement des margines brutes par distillation osmotique et
distillation membranaire osmotique
(Treatment of crude olive mill wastewaters by osmotic distillation and osmotic membrane
distillation)

Rsum:
Considrant la possibilit dextraction des polyphnols des margines, et afin de palier
linconvnient majeur (faiblesse des flux) dont soufre la distillation membranaire. La
distillation osmotique, tout en gardant les avantages de la distillation membranaire, pourrait
offrir des flux plus importants. Dans le cas de la distillation membranaire osmotique, la
diffrence de pression de vapeur des deux cots de la membrane peut tre gnre par
diffrence de temprature et/ou par pression osmotique. Dans le cas o la pression osmotique
est la force motrice de transport de vapeur deau, le procd est appel distillation osmotique
(DO). La distillation osmotique (DO) est une variante de la distillation membranaire (DM),
opre des tempratures basses. Or, plusieurs auteurs considrent le procd de DO comme
un procd diffrent de la distillation membranaire. Pour cela, on trouve dans la littrature
scientifique cot de la distillation osmotique, dautres appellations telles que la distillation
membranaire isothermique (DMI), la distillation membranaire osmotique (DMO),
lvaporation osmotique (EO) ou bien la distillation osmotique membranaire (DOM).
Dans cette tude, nous avons vrifi la possibilit dappliquer la distillation osmotique
pour le traitement et la concentration des margines en utilisant des membranes polymriques
en polyttrafluorothylne (PTFE) avec des tailles moyennes de pores diffrentes (TF200, 0,2
m; TF450, 0,45 m et TF1000, 1 m) 30C (0.1C). Le chlorure de calcium (5 M) a t
employ en tant quagent osmotique dans le compartiment du permat. Leffet des conditions
opratoires sur les flux de permat, le colmatage de la membrane et sur la performance du
systme en entier, a t tudi. Finalement, un procd hybride couplant la distillation
membranaire la distillation osmotique (distillation membranaire osmotique, DMO) a t
appliqu pour le traitement et la concentration des margines pendant 30 heures. Lefficacit
du procd en termes de flux et de sparation et concentration des composs phnoliques a t
value.
Les rsultats montrent que les membranes en PTFE offrent des flux raisonnables (2,9-
4,2 L/h.m
2
). Les facteurs de concentration obtenus des margines taient de lordre de 1,2
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
131
aprs 280 min de distillation osmotique des margines 30C. Le contenu phnolique total
(CPT) des margines a t suivi en fonction de temps lors de traitement des margines par
distillation osmotique et il a atteint une concentration de 9,7 g/L. Par contre, dans le permat
la prsence de composs phnoliques a t dtecte aprs 15 heures de traitement des
margines. La concentration des composs phnoliques des margines la fin de lexprience
tait denviron 0,045 g/L. Laugmentation de CPT des margines (aliment) en fonction du
temps est devenue trs lente aprs 20 h de distillation. Ce ralentissement est attribu la chute
des flux de permat durant les dix dernires heures de traitement.
Par ailleurs, durant la DMO, la solution saline du compartiment permat se dilue dune
faon continue par le permeat ce qui diminue la pression osmotique gnre par la
concentration initiale en sels (CaCl
2
) et par consquent le flux de permat chute en fonction
de temps. En plus, les margines deviennent de plus en plus concentres en fonction du temps
et lvaporation de leau des margines sous leffet du gradient osmotique devient de plus en
plus difficile avec laugmentation de la viscosit et de la concentration de laliment (les
margines). Malgr ces limites, le facteur de concentration des polyphnols des margines
obtenu a atteint 1,9 et la sparation reste au voisinage de 100% jusqu la fin de lexprience.
La solution de permat reste presque incolore mais odorante tmoignant de lentrainement par
vapeur travers les pores de la membrane des composs volatiles des margines.
Les flux initiaux de permat des margines augmentent considrablement lorsquon
augmente la temprature de 20 40C. Les variations observes des flux de leau des
tempratures diffrentes sont dues principalement la relation entre la temprature et la
pression de saturation de vapeur deau, et non aux changements intrinsques de la
permabilit de la membrane.
Le transfert de masse travers les pores des membranes est directement proportionnel
la taille des pores de la membrane, sa porosit est inversement proportionnel lpaisseur de
la membrane et sa tortuosit. Les rsultats montrent que les flux de permat augmentent
proportionnellement avec la taille des pores des membranes. Cette augmentation de flux tait
trs remarquable 40C o les flux de permat des margines ont augment de 3,5 5,2
L/h.m, quand on a augment la taille de pores de 0,2 m (TF200) 1 m (TF1000). Durant
le procd de la DO, une couche de polarisation de concentration est cre cause de
laugmentation de la concentration des soluts sur la face de la membrane en contact avec les
margines. Sur la face oppose, la polarisation de concentration est due la dilution
progressive de la concentration de lagent osmotique ce qui engendre une chute de la pression
de vapeur deau et par consquent une chute des flux.
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
132
Les flux de permat diminuent en fonction de temps, mais cette diminution tait plus
importante dans le cas de la membrane TF1000. Les flux de permat ont chut de 15%, 13%
et 26% des flux initiaux de DO, aprs 280 min de traitement des margines sur TF200, TF450
et TF1000, respectivement.
Dans les deux extrmits de pores membranaires, stabli un quilibre liquide-vapeur
donnant lieu une diffrence partielle de pression de vapeur deau qui diffuse travers les
pores. En effet, le transport de leau implique une vaporation du ct des margines et une
condensation au ct de permat. Par consquent, une diffrence de temprature est cre en
rduisant la diffrence de pression de vapeur travers la membrane ce qui gnre une force
motrice de transport deau (vapeur). Leffet de la temprature sur lvaporation travers les
pores de la membrane sous des conditions isothermiquse peut tre expliqu par le fait que la
densit de leau est dpendante de sa temprature. Pour cela, quand on augmente la
temprature de leau, elle devient moins dense et son vaporation travers les pores devient
plus facile.
La DO et la DMO peuvent aussi tre appliques pour la production dune eau
quasiment propre. Leau produite est approprie pour une rutilisation en agriculture ou en
industrie. Aussi, le concentrt des margines peut tre considr comme une source de
composs haute valeur ajoute tels les composs phnoliques. Le rsidu obtenu aprs
extraction des composs phnoliques peut aussi tre valoris en agriculture en tant que
fertilisant grce sa charge en matires organiques.
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
133
Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
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Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
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Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
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Chapitre 4 Distillation membranaire et osmotique
138











CHAPITRE V

EXTRACTION MICELLAIRE DES COMPOSES PHENOLIQUES DES
MARGINES






Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
139

Extraction des composs phnoliques par point de trouble partir des margines
prtraites
(Cloud Point Extraction of Phenolic Compounds from Pretreated Olive Mill Wastewater)


Rsum:
Les margines constituent une source riche en antioxydants naturels puissants. Une mthode
dextraction base sur lemploi des tensioactifs non-ioniques a t teste pour rcuprer et
sparer les composs phnoliques partir de margines prtraites. Cette technique est appele
extraction par point de trouble cloud point (CPE) ou extraction deux phases aqueuses. Les
tensioactifs employs dans cette technique sont biodgradables et prsentent lavantage dtre
moins toxiques comparativement aux solvants utiliss dans les mthodes classiques
dextraction liquide-liquide.
Au-dessus dune temprature appele point de trouble, la solution aqueuse de
tensioactifs non-ioniques se spare en deux phases : une phase concentre dite coacervat
et une phase dilue. Grce aux proprits dadsorption et de solubilisation micellaire, les
composs organiques moins hydrophiles se solubiliseront des les micelles des tensioactifs
non-ioniques et peuvent aprs sparation des phases une temprature au dessus du point de
trouble tre extraits des margines et concentrs dans le coacervat. Ce coacervat servira par la
suite lisolement des composs phnoliques aprs leur dissociation des micelles de
tensioactif.
Des chantillons de margines issues dune unit semi-moderne de trituration dolive
ont t prtraits par ultrafiltration sur des membranes de polyethersulphone (PES) dun seuil
de coupure molculaire de 50 kDa. Lefficacit de prtraitement des margines par
ultrafiltration rduire lintensit de la couleur fonce des margines (gnante pour la mthode
dextraction par point de trouble), la matire en suspension, le rsidu sec, et la demande
chimique en oxygne (DCO), a t value. Tant que la valorisation des margines par
extraction de leur contenu phnolique est vise, un prtraitement efficace doit rduire au
maximum la charge organique des margines en produisant des margines limpides pour une
visualisation facile des phases. Cependant, la concentration des margines prtraites en
composs phnoliques doit tre garde aussi leve que possible.
Lultrafiltration des margines a donn lieu une rduction de lintensit de couleur
denviron 80 et 87 % telle questime par mesure de la densit optique 395 et 465 nm,
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
140

respectivement. La DCO et le rsidu sec des margines ont t aussi rduits de 31,4 % et 27,6
%, respectivement. Une faible rduction du contenu phnolique des margines a t enregistre
(<10 %).
Le Triton X-100 (tensioactif non-ionique) a t employ dans des concentrations allant
de 1 10 % (p/p) et sous des tempratures au dessus de sa temprature de trouble (70, 80 et
90C). Aprs 30 minutes de sjour la temprature choisie, le mlange se spare en deux
phases: une phase dilue et une phase concentre en tensioactif et petites molcules
organiques dont les composs phnoliques. Lefficacit de la mthode dextraction par point
de trouble a t value en dterminant le volume des deux phases et leur concentration en
composs phnoliques.
Les rsultats obtenus montrent la possibilit dextraire jusqu 66,5 % du contenu
phnolique des margines en un seul cycle dextraction. Le rendement le plus lev
dextraction des polyphnols a t obtenu lors de lemploi de 10 % du Triton X-100 90C.
Les rsultats de modlisation des fractions volumiques et du taux de rcupration (R%) par la
mthodologie des surfaces de rponse taient en parfaite corrlation avec les donnes
exprimentales.
Dans lintervalle des concentrations de Triton X-100 tudies (0 to 10%), le
coefficient de partage augmente avec laugmentation de la concentration en tensioactif. A une
concentration donne, llvation de la temprature amliore considrablement le coefficient
de partage. Ainsi, 10 % de Triton X-100, le coefficient de partage obtenu est pass de 3,7
70C pour atteindre 13,4 90C. Llvation de la temprature amliore davantage la
solubilit des composs phnoliques dans la phase de tensioactif et par consquent amliore
leur extraction. En augmentant la temprature, des volumes plus petits de coacervat ont t
obtenus et galement des coefficients de partage plus levs ont t enregistrs. A des
tempratures dpassant 80C, le taux dextraction des composs phnoliques semble tre
proportionnel aux concentrations de tensioactif. Par contre, 70C, et particulirement des
concentrations en tensioactif suprieures 5 %, lextraction montre moins de dpendance vis-
-vis la concentration du tensioactif. Les taux moyens de rcupration (R%) obtenus avec 10
% du Triton X-100, taient 46,4 ; 63,9 et 66,5 % respectivement 70 ; 80 et 90C.
Le coacervat tant moins hydrophile que la phase aqueuse, lextraction serait plus
favorable pour les composs organiques les plus hydrophobes prsents dans les margines tels
les composs phnoliques. Le Triton X-100 peut engager des interactions type liaisons
hydrogne avec les composs phnoliques et contribuer leur concentration dans la phase
riche en tensioactif. Une fois ces laissons hydrognes brises, les composs phnoliques libres
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
141

vont tre resolubiliss dans la phase aqueuse du coacervat. Ainsi, une modification du pH du
coacervat vers un pH alcalin au dessus du pKa des composs phnoliques (qui sont en
majorit des acides faibles) favorisera la libration des composs phnoliques et leur
isolement de la phase concentre. Les composs phnoliques sont ainsi rcuprs du
coacervat en ajustant le pH 10 par une solution de NaOH (2M) et en incubant la solution
70C pour 20 min pour obtenir deux nouvelles phases: une phase limpide claire riche en
tensioactif et une petite phase aqueuse de couleur marron rougetre fonce riche en composs
phnoliques. Environ 54 % des composs phnoliques ont t librs du coacervat. Ainsi, le
rendement global dextraction des composs phnoliques est estim 32 %.
A la lumire de ces rsultats nous pouvons affirmer que lextraction par point de
trouble se prsente comme une alternative aux systmes conventionnels dextraction liquide-
liquide, car elle offre lnorme avantage dexclure totalement lutilisation de solvants
organiques souvent volatils, inflammables et toxiques.

Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
142

CLOUD POINT EXTRACTION OF PHENOLIC COMPOUNDS FROM
PRETREATED OLIVE MILL WASTEWATER

Abdelilah El-Abbassi, Hajar Kiai and Abdellatif Hafidi*

Food Sciences Laboratory, Department of Biology, Faculty of Sciences Semlalia, Avenue of
Prince Moulay Abdellah, P.O. Box 2390, 40090 Marrakesh, Morocco.
Abstract
Olive mill wastewater (OMW) causes many environmental problems, mainly in the
Mediterranean area. The phenolic content of OMW is principally responsible for the
phytotoxicity and microbial growth inhibitory effects. However, these effluents can be
considered as a source of powerful natural antioxidants. Cloud Point Extraction method was
used to recover and separate phenolic compounds from pretreated olive mill wastewater. The
OMW samples were ultrafiltred on 50 kDa polyethersulfone (PES) membrane. The Triton X-
100 was used as surfactant at concentrations ranging from 1 to 10 % (w/w). Three
temperatures (70, 80 and 90C) above the cloud point temperature of the surfactant were
tested. After 30 minutes at the desired temperature the mixture form two phases: a diluted
phase and a concentrated phase called coacervate. The efficiency of the extraction was
evaluated by determining the phenolic compounds concentration and the volume of the both
phases. The obtained results show the possibility to extract up to 66.5 % of the phenolic
content from OMW using one step CPE. The highest yield was obtained when using 10 % of
Triton X-100 at 90C. The results obtained for volume fraction (
c
) and rate of recovery
(R%), by response surface methodology were in agreement with the experimental data. The
results show that the CPE can be an efficient alternative to the classic methods of extraction
since it can offer a mixture of natural antioxidants suitable for pharmaceutical, cosmetic or
food applications.
Keywords: olive mill wastewater, cloud point extraction, phenolic compounds, Triton X-100.

*Corresponding author. Tel.: +212 524 434 649 (Office: 515); fax: +212 524 436 769. E-mail
addresses: a.hafidi@ucam.ac.ma, hafidi.abdellatif@googlemail.com (A. Hafidi).
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
143

Abbreviations

Nomenclature
OMW olive mill wastewater
CMC critical micellar concentration
COD chemical oxygen demand
TPC total phenolic content
CPE cloud point extraction

Symbols
T temperature (C)
C concentration of phenolic compounds (g/l)
V volume (l)
T
c
cloud point temperature (C)
R recovery (%)

c
volume fraction of the coacervate (-)
K
C/D
partition coefficient (-)
f
c
concentration factor (-)
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
144

1. Introduction
The continuous three-phase olive oil extraction generates large quantities of olive mill
wastewaters, which cause serious environmental problems. These extraction systems are still
widely used in olive oil mills, especially in Morocco. It is widely acknowledged that the
phytotoxic and antimicrobial effects of OMW are mainly related to the naturally-occurring
phenolic fraction. The olive fruit is very rich in phenolic compounds, but only about 2 % of
the total phenolic content of the olive fruit dissolves in the oil phase, while the remaining
amount is lost in the OMW (53 %) and the pomace (45 %) [1]. Partition coefficients
(oil/water) of most olive phenols, ranging from 6 10
4
to 1.5 [1], are clearly in favour of the
water phase.
Several methods have been developed aiming the extraction and purification of phenolics
from OMW, including membrane technologies, liquid-liquid extraction and solid-liquid
extraction, most of them are under patent protection [2-5].
The liquid-liquid extraction exhibits important restrictions and drawbacks related to the use of
expensive, toxic and inflammable organic diluents. Almost all methods proposed to treat and
valorise OMW remain not adopted mainly because of practical/economic reasons. Owing to
the small scale and dispersed nature of the olive mills and the seasonality of the process,
choosing a proper technique is a real challenge.
In the last decade, increasing interests on the use of aqueous micellar solutions in the field of
separation science have been observed. Above a specific temperature, aqueous solution of a
non-ionic surfactant becomes cloudy. With further increase of temperature, solution separates
in two phases: a phase containing high concentration of the surfactant called surfactant-rich
phase or coacervate and the other is bulk aqueous solution containing surfactant concentration
slightly above the critical micelle concentration (CMC) and called the diluted phase [6]. This
temperature is known as the cloud point temperature (T
c
) of the surfactant. The solute present
in aqueous solution of non-ionic surfactant is distributed between the two phases [6]. This
phenomenon is known as cloud point extraction (CPE). During the last two decades, scientists
developed its potential, adding more applications. Thus, numerous studies were published
covering its theoretical background and especially proposing CPE methodology for the
preconcentration of trace elements prior to analysis mainly related to pollution, toxicology
and food quality assessments [7-13].
However, works related to the use of CPE for the extraction of valuable organic substances
remain relatively scarce. Gortzi et al. [14] tested the ability of a surfactant (Genapol X-080) to
recover individual and mixtures of phenols and tocopherols in various concentrations from
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
145

model aqueous solutions, before its application for the recovery of phenols from olive mill
wastewater. This unique work testing the CPE method directly on OMW reported extraction
yields up to 98 % for some phenolic compounds and up to 75 % of the total phenolic content
in a one step extraction. In the present work, we applied CPE method for the extraction of
phenolic compounds from an ultrafiltred sample of OMW. Response surface methodology
was applied for the optimization of the recovery of phenolic compounds from OMW using the
Triton X-100 as a non-ionic surfactant at different concentrations and at different
temperatures above its cloud point temperature.
2. Experimental
2.1. Chemical
Polyethylene glycol p-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)-phenyl ether (Triton X-100), Folin-ciocalteu
Reagent, ethyl acetate, hexane methanol anhydrous sodium carbonate (Na
2
CO
3
) were
purchased from Sigma-Aldrich (Germany). Hydrochloric acid (HCl) and sodium hydroxide
(NaOH) were purchased from Merck (France). All the other chemicals were also purchased
from Sigma-Aldrich and were prepared in distilled water except the Tyrosol standard
solutions that were prepared in methanol 80%.
2.2. OMW samples
Samples were collected from a continuous three-phase extraction system in the region of
Marrakech (Morocco) in the season of 2009/2010 and were stored in the dark at room
temperature until use. As far as OMW contains high amounts of total suspended solids, a
pretreatment is needed. These particles may affect phase separation, phenolic compounds
extraction and also may be extracted partially into the coacervate and consequently increases
its fraction volume, which is one of the main parameters used for the evaluation of the CPE
efficiency. For these raisons, the OMW samples were pretreated by ultrafiltration prior to the
CPE implementation. The characterization of OMW samples before and after pretreatment
was performed as follow:
- pH and electrical conductivity (CE): were determined directly on fresh olive mill wastewater
samples using Multilab P5 (WTW, Germany).
- Total phenolic content (TPC) was determined in samples following the Folin-Ciocalteu
spectrophotometeric method according to Singleton and Orthofer [15] using tyrosol as
standard. The methanolic extract (0.1 ml) in a volumetric flask was diluted with distilled
water (3.4 mL). FolinCiocalteu reagent (0.5 mL) was added and the contents of flask were
mixed thoroughly. After 3 min, 1 ml of 20 wt% anhydrous sodium carbonate solution was
added, and then the mixture was allowed to stand for 1 h in the dark. The optical density of
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
146

the blue-coloured samples was measured at 765 nm. The TPC was determined as tyrosol
equivalents (TYE) and values are expressed as g of TYE/L of OMW.
- Chemical oxygen demand (COD) was determined by the dichromate method as described by
LaPara et al. [16]. An appropriate amount of wastewater samples was diluted up to 100 times
and introduced into a lab-prepared digestion solution containing potassium dichromate,
sulphuric acid and mercuric sulphate, the mixture was then incubated for 120 min at 150C in
a COD reactor (Model WTW CR3000, Germany). COD concentration was measured
colourimetrically at 600 nm using a MultiLab P5 (WTW, Germany). The standard solutions
of 1 to 4 g of O
2
per litter were prepared using the potassium biphthalate. All measures were
done in triplicate.
2.3. OMW pretreatment by ultrafiltration
Ultrafiltration (UF) was carried out at room temperature in a stirred cross-flow ultrafiltration
cell (AMICON 8200, Millipore USA) with 200 ml of volume. A polyethersulfone membrane
(MicrodynNadir, Germany) with a molecular weight cut-off of 50 kDa (UH050, data sheet:
http://www.microdyn-nadir.de/cms/pdf/produkte/en/1_katalog_engl_rz_screen.pdf) was used.
The effective area of the membrane is 28.7 cm
2
. The transmembrane pressure was kept at 3
bar using a nitrogen cylinder and the stirring rate was set at 250 rpm.
2.4. Cloud point temperature determination
The cloud point temperature (T
c
) is the temperature at which dissolved surfactant is no longer
completely soluble, precipitating as a second phase resulting in a decrease of the water phase
viscosity. Thus, the measurement of viscosity against temperature can be used for T
c

estimation. The determinations of the T
c
in water and OMW was carried out using a SV-10
vibro-viscometer (Malvern Instruments Ltd, Japan), temperature of the sample placed in the
measurement cell was measured using a precise sensor placed in the apparatus. The
temperature of the solution was controlled using water jacket connected to a recirculating
water bath. The thermostat was set to 90C and the recirculating flow was set to a low speed
to ensure a slow increase of the temperature in the measurement cell. The viscosity was then
monitored against temperature and the T
c
was considered as the temperature at which the
viscosity drops suddenly.
2.5. Phenolic compounds recovery from OMW by CPE
A mother solution of 20 % Triton X-100 in ultrafiltred OMW was prepared and homogenized
by magnetic stirring (300 rpm) at 50C over a night. This solution was used to prepare 3
series of tubes with 0 to 10 % of Triton X-100 in ultrafiltred OMW, the final volume of each
tube was 10 ml. The tubes were then vortexed and incubated for 30 min in a water bath at 70,
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
147

80 or 90C. Once the tubes were taken out from the bath, they were left to settle for 4 hours at
room temperature until a clear separation of two phases. The volume of each phase was
measured and the total phenolic content of the diluted phase was extracted by ethyl acetate
and determined colourimetrically using Folin-Ciocalteu method.
The efficiency of the extraction was evaluated according to three parameters: percentage of
recovery (R%), volume fraction of the coacervate (
c
), and finally partition coefficient of
phenolic compounds between the coacervate and the diluted phase (K
C/D
). The choice of
optimal operating conditions results from a compromise between all these five parameters.
The phenols recovery was calculated using the following equation:
% 100 100
c c o o D D
o o o o
CV CV C V
R
CV CV

= = (1)
where C
o
represents the phenol initial concentration in the ultrafiltred OMW-surfactant
mixture of volume V
o
, C
D
represents the phenol concentration in the water phase of volume
V
D
and C
C
represents the phenol concentration in the surfactant concentrated-phase of volume
V
C
.
The volume fraction is the volume ratio of the coacervate volume (V
C
) to the initial volume
(V
o
):
C
c
o
V
V
= (2)
The partition coefficient was calculated as the ratio of the total phenolic compounds
concentration in the coacervate to the total phenolics concentration in the diluted phase.
/
C
C D
D
C
K
C
= (3)
Then, high partition coefficients reveal that more phenolic compounds were extracted in the
coacervate.
The concentration factor was calculated as the ratio of the phenolic compounds concentration
in the coacervate to the initial concentration of the phenolic compounds in the OMW:

C
C
o
C
f
C
= (4)
The major phenolic compounds naturally occurring in OMW are weak acids, which can be
deprotonated by increasing the medium pH leading to a complete dissociation of the phenols
and their dissolution in the aqueous phase. So, the coacervate treated with NaOH, can be
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
148

separated into two new phases at a temperature above T
c
: a small aqueous phase and a new
coacervate containing the surfactant.
2.6. Experimental design
The optimization of the experimental conditions of the phenolic compounds recovery by CPE
from pretreated OMW was achieved using the response surface methodology (RSM). RSM
consists of (i) a design of experiments to provide adequate and reliable measurements of the
response, (ii) a development of a mathematical model showing the best fit to the data obtained
from the experimental design, and (iii) a determination of the optimal values of the
independent variables that produce maximum or minimum values of the response [17].
The RSM was used to evaluate the effects of surfactant concentration (C
TX
), and temperature
(T) on the coacervate volume fraction (
c
) and phenolic compounds recovery (R%).
Surfactant concentration varied between 0 and 10 % (w/w) and the equilibrium temperature
varied between 70 and 90C.
Data were adjusted using STATISTICA 8.0 software to a response surface Z (
c
and R%):
2 2
0 1 2 11 TX 12 22
+ C +
TX TX
Z a aC a T a a C T a T = + + +
where a
0
is the value of the objective function under the central point conditions, a
1
, a
2
, a
11
,
a
22
, represent the principal effect associated with each variable and a
12,
represent the crossed
effects among variables.

3. Results and discussion
3.1. Pretreatment of OMW
The efficiency of OMW pretreatment to decrease the dark colour of OMW, the dry residue
and the chemical oxygen demand was evaluated by estimating the reduction rate of each
parameter. As far as a valorisation of the OMW through phenolic compounds extraction is
aimed, an efficient pretreatment should reduce as much as possible the organic load to allow
the most limpid OMW with an easy visualization of phases while, the total phenolic content
must remain as high as possible.
The ultrafiltration pretreatment using a 50 kDa MWCO membrane, resulted in a colour
intensity reductions of about 80 and 87 % as estimated at 395 and 465 nm, respectively (Table
1). The COD and the dry residue were reduced by 31.4 and 27.6 %, respectively. Our results
revealed a slight reduction of OMW phenolic content (<10 %, Table 1).

Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
149

Table 1 Main physicochemical characteristics of OMW before and after pretreatment by
ultrafiltration.
Parameter Unit Raw OMW Pretreated OMW Reduction (%)
pH - 4 4.1 -
Electrical Conductivity mS/cm 35.1 36.7 -
Dry Residue g/l 119 86 27.6
Total Phenolic Content
g/l 10.13 9.15 9.6
Chemical Oxygen Demand
g of O
2
/l 156 107 31.4
Color* (at 395nm)
- 1.33 0.27 80
Color* (at 465nm) - 0.90 0.12 87
*absorbance was measured after dilution of samples 100 times against distilled water
3.2. Cloud point temperature (T
c
) determination
The T
c
of Triton X-100 in water is 67C [18]. However, a lower value (64.9C) was estimated
using viscosity measurements (Fig. 1). As shown in figure 1, the T
c
of Triton X-100 in OMW
is significantly lower than in water (59C versus 64.9C). It has been reported that additives
may raise or lower the cloud point of non-ionic surfactants. Their effects may be linear or
nonlinear, and theoretically complicated phenomenon. Electrolytes usually lower the T
c

through dehydration and electrostriction [18].
20 30 40 50 60 70 80 90 100
Temperature (C)
0,0
0,4
0,8
1,2
1,6
2,0
2,4
V
i
s
c
o
s
i
t
y

(
m
P
a
.
s
)
Water + 5%TX100
OMW + 5%TX100
OMW
Water
64.9C
59C

Fig. 1. The evolution of viscosity of pretreated OMW and water with and without 5% Triton
X-100 against temperature.
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
150

The pretreated OMW samples show a high electrical conductivity (36.7 mS/cm), which is
mainly due to olive salting practices (by adding NaCl) often used in Morocco to preserve
olive fruits before oil extraction. This will facilitate the phase separation process during
phenolic compounds extraction using CPE by increasing the density of the bulk aqueous
phase [19], resulting in lower T
c
(Fig. 1). Besides, NaCl is reported to reduce the T
c
of the
Triton X-100 [18] as shown in Table 2.
3.3. Extraction of phenolic compounds from OMW using CPE
The results showed that the coacervate volume fraction (
c
) depend on the surfactant
concentration and the equilibrium temperature (Fig. 2).
c
increases with the increase of
surfactant concentration and decreases with the increase of temperature. At 5 % of Triton X-
100 the coacervate volume fraction decreased from 0.18 to 0.14 then to 0.11 at 70, 80 and
90C, respectively. Paleologos et al. [23] reported that elevated temperatures lead to some
dehydration of the micelle, decreasing the volume ratio of the coacervate to the diluted phase
and consequently the recovery increases. Equilibrium temperature is expected to be a decisive
factor during optimization and scale-up of the CPE of phenols from OMW.

0 2 4 6 8 10 12
Surfactant concentration, C
TX
(%)
0,00
0,04
0,08
0,12
0,16
0,20
0,24
C
o
a
c
e
r
v
a
t
e

v
o
l
u
m
e

f
r
a
c
t
i
o
n
70C
80C
90C

Fig. 2. Coacervate volume fraction against the Triton X-100 concentration at different
equilibrium temperatures. Solid line presents the trend line of experimental data and the
dashed line shows to the confidence interval of 95%.
The concentration factor (f
c
) and the coacervate volume fraction (
c
) are important parameters
for the appreciation of the efficiency of the separation. For maximum efficiency the
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
151

coacervate volume should be the smallest and the phenolic compounds concentration in the
coacervate the highest. Thus, the phenolic compounds recovery (R%) and the f
c
should reach
maximum values, while the
c
must be kept as low as possible. The obtained results showed
that in all cases the volume fraction of the coacervate is higher than the volume fraction of the
surfactant (the ratio of the surfactant volume to the total volume). A volume fraction of 18%
was registered when using 10% of the Triton X-100 at 90C (Fig. 2). Evidently, the
coacervate contains other compounds than the surfactant. Phenols, water and most likely other
organic compounds showing a partition coefficient in favour of the surfactant phase may
solubilise in the coacervate.
The partition coefficient (K
C/D
) of the total phenolic content of OMW was determined for
each surfactant concentration at different equilibrium temperatures (Fig. 3). The K
C/D
was
found to be affected by the surfactant concentration (C
TX
).

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Surfactant Concentration, C
TX
(%)
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
L
o
g
(
K
C
/
D
)
70C
80C
90C

Fig. 3. Phenolic compounds partition coefficients versus surfactant concentrations in CPE
from OMW at different equilibrium temperatures. (Correlation coefficients: 70C, r = 0.9641; 80C,
r = 0.9574; 90C, r = 0.9587). Solid line presents the trendline of experimental data and the dashed line shows
to the confidence interval of 95%.
Within the studied range of Triton X-100 concentrations (0 to 10%), the partition coefficient
increases with the increase of surfactant concentration. At a given surfactant concentration,
the temperature enhanced considerably the partition coefficient. At 10 % Triton X-100, the
obtained partition coefficients were 3.69, 7.59 and 13.42 at 70, 80 and 90C respectively.
The increase of temperature enhances more the solubility of the phenolic compounds into the
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
152

surfactant phase and improves their recovery (Fig. 4). Furthermore, higher temperature is,
smaller the coacervate volume is, leading to higher partition coefficients. At temperatures
above 80C, the phenolic compounds recovery seems proportional to the surfactant
concentration. At 70C, particularly at surfactant concentrations above 5 %, the phenols
recovery showed a less dependent behaviour on the surfactant concentration. The average
recovery rate (R%) obtained with 10 % Triton X-100, were 46.4, 63.9 and 66.5 % at 70, 80
and 90C, respectively.

0 2 4 6 8 10 12
Surfactant Concentration, C
TX
(%)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
R
e
c
o
v
e
r
y
,

R

(
%
)
70C
80C
90C
80C
70C
90C

Fig. 4. Total phenolic compounds recovery (%) from OMW versus surfactant concentrations.
Solid line presents the trendline of experimental data and the dashed line shows to the confidence interval of
95%.
As the coacervate is less hydrophilic than the micellar aqueous phase, the extraction may be
increased for the most hydrophobic organic compounds in OMW including phenolic
compounds. As the Triton X-100 is a strong hydrogen-bond acceptor, such interactions may
contribute to the concentration of phenolic compounds among other solutes in the surfactant
rich phase [24]. Once, these hydrogen bonds broken, the free phenolics may solubilise in the
aqueous phase of the coacervate. Hence, changing the solution pH to alkaline conditions
above their pKa will lead to free phenolic compounds, which can be effectively stripped from
the coacervate [25]. Subsequently, the phenolic compounds are recovered from the coacervate
after adjusting the pH to 10 using with a NaOH 2M and re-incubation at 70C for 20 min to
obtain two new phases: A clear surfactant-rich phase and a dark small aqueous phase
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
153

containing the phenols. About 54 wt% of the phenols was released from the coacervate into
the new small water phase. As a result, the overall phenolic compounds extraction yield is
about 32 %. Recycling the surfactant phase in multistage extractions will lead to higher
yields.
3.4. Optimization of the CPE using response surface methodology (RSM)
The RSM was applied to evaluate the effects of surfactant concentration (C
TX
), and
temperature (T) on the coacervate volume fraction (
c
), and phenolic compounds recovery
(R%). The mathematical models obtained for each parameter using STATISTICA 8.0 are the
following:
2 2
0.192 0.0666 0.0036 0.0022 0.0003 0.000015
c TX TX TX
C T C C T T = + +
2 2
% 153.1401 6.5283 3.2852 0.0223 0.1541 0.0168
TX TX TX
R C T C C T T = + + +
The coacervate volume fraction increases considerably with the increase of surfactant
concentration at surfactant concentrations not exceeding 8 % (Fig. 5). Above this
concentration, only slight increase can be observed at 70C whereas a decrease of
c
is
observed at high equilibrium temperatures (> 80C) and high surfactant concentrations (> 8
%). The phenolic compounds recovery (R) is found to increase with the increase of
temperature and surfactant concentration (C
TX
). The increase against C
TX
is more significant
at high temperatures (Fig. 6).


Fig. 5. 3D Surface Plot of the coacervate volume fraction (
c
) against surfactant concentration
and equilibrium temperature.
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
154

Temperature-induced losses of phenolic compounds during the CPE procedure are negligible.
Temperatures in the range of 70 and 90C are found not to affect neither the total phenolic
content of OMW and nor its antioxidant activity after up to 24 hour of heating (data not yet
published). Furthermore, Rodriguez et al., [26] reported an increase of the concentrations of a
powerful antioxidant, (the 3,4-Dihydroxyphenylglycol (DHPG) in OMW as a result of heating
at a temperature as high as 90C.

Fig. 6. 3D Surface Plot of polyphenol recovery against surfactant concentration and
equilibrium temperature.

The predicted values of the two studied CPE efficiency parameters were calculated using the
model and compared with experimental values. It can be seen from Fig 7 and Fig. 8 that the
experimental values were distributed relatively near to a straight line and a satisfactory
correlation between these values is observed. The determination coefficients (
c
, r
2
= 0.9597;
R%, r
2
= 0.9552) indicates a sufficient adjustment of the model with the experimental data.
Subsequently, the mathematical models can be used for the determination of the optimal
extraction conditions that may allow a maximal recovery of phenolic compounds from OMW.
Three basic intermolecular forces governing the solubilisation of phenolic compounds into
surfactant phase (net intermicellar attraction; micellar excluded volume; and tendency of the
solute to solubilise in micelles) are hypothesized to control the important CPE efficiency
parameters [27]. As intermicellar attraction increases, micelles can coagulate into a coacervate
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
155

phase at a lower T
c
. The micellar excluded volume the volume that is inaccessible to other
molecules in the system as a result of the presence of micelles determines the density and
the volume of the coacervate phase [27]. Wang et al. [28] reported that the solubilisation in
the coacervate phase is different from that in individual micelles. This may be explained by
different macromolecular arrangements of the surfactant molecules in the coacervate phases
[28].
Gortzi et al. [14] studied the CPE application to the extraction of individual phenolics from
model solutions using Genapol X-080. The obtained extraction yields were up to 98 % using
one step extraction. As mentioned earlier, the partition coefficient of the phenolic compounds
between the water phase and the surfactant phase plays an important role in the extraction
process. The total phenolic content of OMW contains a mixture of compounds with different
individual concentrations. Understanding the interactions between phenolic compounds and
the surfactant-rich phase seems to be of a decisive importance to design an efficient extraction
process.
Further research is needed to investigate the partition coefficient of each phenolic compound
between the water phase and different surfactant phase and elucidate the behaviour of each
phenolic compound in different systems. The surfactant that extracts the most bioactive and/or
the most desired compound can be then determined and an optimized process can be
designed.

0,04 0,08 0,12 0,16 0,20 0,24
Experimental coacervate volume fraction
0,04
0,08
0,12
0,16
0,20
0,24
P
r
e
d
e
c
t
e
d

c
o
a
c
e
r
v
a
t
e

v
o
l
u
m
e

f
r
a
c
t
i
o
n

Fig. 7. Regression of the predicted values of coacervate volume fraction against the
experimental values (r = 0.9597).
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
156



0 10 20 30 40 50 60 70 80
R experimental
0
10
20
30
40
50
60
70
80
R

p
r
e
d
e
c
t
e
d


Fig. 8. Regression of the predicted values of polyphenol recovery against the experimental
values (r=0.9552).
4. Conclusion
The ultrafiltration of OMW was adopted as pretreatment prior to the CPE implementation.
The organic load and suspended solids were reduced and more limpid OMW was produced
with an easy visualization of phases during cloud point extraction, while the total phenolic
content remained as high as possible. The T
c
of Triton X-100 in water and OMW was
determined and was found to be lower in OMW (59C vs. 64.9C). This low T
c
in OMW is
attributed mainly to its salt content which facilitates the phase separation process during
phenolic compounds extraction using CPE by increasing the density of the bulk aqueous
phase. CPE with Triton X-100 was successfully applied to OMW and a quantitative extraction
of phenols was achieved. Up to 66.5 % of the phenolic content from OMW was extracted
using one step CPE. The highest yield was obtained when using 10 % of Triton X-100 at
90C. Response surface methodology was applied to the CPE of phenolic compounds from
OMW using different concentrations of Triton X-100 at different equilibrium temperatures.
The predicted values of the two studied CPE efficiency parameters (volume fraction and
polyphenols recovery) were in good agreement with the experimental values. Subsequently,
the mathematical models can be used for the determination of the optimal extraction
conditions that may allow a maximal recovery of phenolic compounds from OMW.
The CPE procedure offers an interesting alternative to the liquidliquid or liquid-solid
extraction of phenols due to its simplicity, less time, employment and equipment requirements
Chapitre 5 Extraction par Point de Trouble
157

and the use of non-toxic chemicals. Cloud point extraction, as a clean technology, could be a
simple and economical solution for the dephenolisation of OMW and the preparation of
natural antioxidants concentrate, suitable for pharmaceutical, cosmetic and food applications.

Acknowledgement
This work was financially supported by the International Foundation for Sciences (IFS) under
the grant number W4749. The authors thank gratefully the Prof-Ing. Jan Hoinkis from
Karsruhe University of Applied Sciences (Germany) for the donation of membranes used for
OMW pretreatment.

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DISCUSSION GENERALE




Discussion gnrale
160
Discussion gnrale

Les margines prsentent une composition chimique trs complexe et htrogne. Elles
contiennent une varit de composs organiques et minraux, (phnols, glucides, matires
azotes, matires grasses...etc.) de nature et de concentration trs variables. Cette variation est
due essentiellement aux facteurs suivants: Stade de maturation des olives; Conditions
climatiques; Varit des oliviers; Systme de culture; Situation gographique; dure et
techniques de stockage des olives avant la trituration et aux procds dextractions dhuile.
Au Maroc, mais galement dans dautres pays olicoles, labsence de contrles et de
mthodes de traitements adaptes oblige les propritaires de moulins huile rejeter ces eaux
polluantes dans la nature. La toxicit des margines est principalement due la fraction soluble
et surtout aux composs phnoliques difficilement biodgradables. Durant ce travail, notre
ambition a t de transformer ce problme en avantage en isolant ces composs phnoliques
haute valeur ajoute. Nos tudes ont montr que les composs phnoliques des margines
possdent une importante capacit d'inhibition des espces ractives de l'oxygne. Un faisceau
de plus en plus consistant de preuves indiquent limplication des radicaux libres dans
plusieurs processus pathologiques, comme le cancer et l'athrosclrose. Les margines
pourraient donc tre une source d'antioxydants naturels vises thrapeutiques. Les margines
renferment pas moins de 30 composs phnoliques diffrents. Les principaux constituants de
la fraction phnolique des margines sont lhydroxytyrosol, le tyrosol, l'oleuropine et leurs
drivs.
Nous avons not que les microfiltrts des margines prsentent des proprits
antioxydantes plus importantes que leurs extraits phnoliques, ceci est probablement due au
fait que certains composs non-phnoliques contribuent lactivit antioxydante totale des
margines ou amliorent lactivit antioxydante des composs phnoliques (synergie) surtout
dans les tests de la capacit antioxydante totale, lactivit de chlatation de fer et lactivit
antiradicalaire. Lactivit antioxydante leve mesure dans les microfiltrts des margines
peut tre galement attribue la diffrence de composition phnolique entre les extraits et les
microfiltrts, puisque lextraction liquide-liquide par lactate dthyle est inappropri pour
lextraction des molcules de poids molculaire lev tel les tannins qui restent dans la phase
aqueuse.
Les composs phnoliques peuvent intervenir par trois principaux mcanismes pour
lutter contre le stresse oxydatif : 1) pigeage direct des espces ractives doxygne (ERO) ;
2) inhibition des enzymes impliques dans le stress oxydatif et la chlation des traces
Discussion gnrale
161
mtalliques responsables de la production des ERO; 3) protection des systmes de dfense
antioxydants. Il est clair que le pouvoir antioxydant des polyphnols dpend de nombreux
facteurs selon le systme considr: pouvoir rducteur de lantioxydant vis--vis des ions
mtalliques (transfert dlectrons) et des radicaux oxygns (transfert dlectrons et/ou
datomes H), sensibilit de lantioxydant lauto-oxydation, stabilit des complexes
mtalliques avec lantioxydant et comptition avec dautres agents complexants prsents dans
le milieu, etc. Il est donc important dtudier ces diffrents phnomnes laide de systmes
plus simples avant de tenter dinterprter la capacit antioxydante observe dans le systme
complet.
Le profile phnolique des margines dpends principalement de la varit et du stade de
maturation des olives tritures. Plusieurs tudes ont t consacres la caractrisation
biochimique des varits dolives et pour la comprhension des variations quantitatives et
qualitatives affectant le profile phnoliques des olives au cours de la maturation
1,2
. En outre,
lors de lextraction de l'huile, les drivs glycosyls prsents dans les olives (surtout
loleuropine) peuvent tre hydrolyss par des glucosidases endognes, probablement actives
lors de la macration et de la malaxation. Loleuropine aglycone passe dans l'huile, tandis
que loleuropine glucoside reste dans les eaux uses. Au cours de la maturation des olives,
les drivs secoiridodes de lhydroxytyrosol diminuent davantage plus que ceux du tyrosol.
Ceci est trs important, car lhydroxytyrosol et ses formes drives complexes sont connus
pour avoir une activit antioxydante plus importante et une grande influence sur les proprits
organoleptiques de lhuile que le groupe tyrosol
3
. Puisque les industriels cherchent une huile
de bonne qualit et un bon rendement dextraction dhuile, il est prfrable de triturer les
olives dans un stade de maturit avance car les olives vertes sont peu riches en huile. Les
margines rsultants auront moins de contenu phnolique. Par ailleurs, durant le stockage des
margine, les ractions enzymatiques de dgradation de loleuropine et des drivs
secoiridodes engendrent une augmentation de la concentration en composs phnoliques
monocycliques.

1
Zamora, R., Alaiz, M., Hidalgo, F.J., 2001. Influence of cultivar and fruit ripening on olive (Olea europaea)
fruit protein content, composition, and antioxidant activity. Journal of Agricultural Food Chemistry. 49, 4267
4270.
2
Beltran , G. , Aguilera , M.P. , Del Rio , S. , Sanchez , S. , Martinez , L. , 2005. Influence of fruit ripening
process on the natural antioxidant content of Hojiblanca virgin olive oils. Food Chemistry. 89, 207 215.
3
Gmez-Rico, A., Salvador , M.D., La Greca, M., Fregapane, G., 2006. Phenolic and volatile compounds of
extra virgin olive oil (Olea europea L. cv. Cornicabra) with regards to fruit ripening and irrigation management.
Journal of Agricultural and Food Chemistry 54, 7130 7136.
Discussion gnrale
162
Nos rsultats rvlent que le contenu des margines en composs phnoliques
augmente considrablement durant les premiers quatre mois du stockage des margines et
commence chuter lentement aprs le 5
me
mois. En revanche, lactivit antioxydante la plus
leve a t observe au troisime mois de stockage. Lvolution de lactivit antioxydante
des margines semble tre corrle lvolution de la concentration en polyphnols durant le
stockage. Ce rsultat peut tre expliqu par le fait que les margines sont un milieu complexe
qui contient plusieurs composs antioxydants avec diffrentes capacits antioxydantes. Durant
le stockage certains antioxydants peuvent disparaitre alors que dautres issus dhydrolyse de
molcules plus complexes ou de modification des composs initiaux vont apparaitre. Le
changement du contenu phnolique et de son activit antioxydante semble tre affect par
plusieurs facteurs tels les paramtres physicochimiques des margines de dpart, les variations
de temprature durant le stockage et finalement la flore bactrienne et fongique prsente dans
les margines.
Au Maroc, les margines sont produites pendant 4 5 mois seulement, par consquent,
le stockage sera ncessaire dans le cas o des composs haute valeur ajoute doivent tre
rcuprs partir de ces effluents pendant de longues priodes. Trs peu d'tudes se sont
intresss l'effet du stockage des margines sur leur teneur en composs phnoliques. Feki et
al. (2006) a rapport une accumulation importante de hydroxytyrosol aprs 5 mois de
stockage. La concentration correspondant a augment de 257 302%. Cependant, les
concentrations des autres composs phnoliques ont nettement diminu. En outre, il a t
dduit que le stockage des margines facilite la procdure d'extraction et amliore le rendement
d'extraction de hydroxytyrosol qui selon certain tude augmente de 85,5 96,8%
4
. En
pratique, il serait prfrable pour les industriels dsirant valoriser le contenu phnolique des
margines dattendre la fin de la saison olicole (5 6 mois de stockage) pour procder
lextraction. Dans ce cas, les frais de stockage sajouteront aux frais lis lextraction. Seule
une tude comparative des gains en rendement et des pertes en fond dinvestissement lies au
stockage pourra trancher sur lutilit du stockage.
Laugmentation de la concentration des margines en composs phnoliques simples
pourra aussi seffectuer sans recours au stockage en acclrant les processus de dgradation
de loleuropine et les drivs secoiridodes par hydrolyse acide (Ajout de lHCl, par
exemple).

4
Feki, M., Allouche, N., Bouaziz, M., Gargoubi, A., Sayadi, S. (2006). Effect of storage of olive mill
wastewaters on hydroxytyrosol concentration. European Journal of Lipid Science and Technology, 108, 1021
1027.
Discussion gnrale
163
Jusqu' prsent, les composs antioxydants des margines n'ont pas pu tre valoriss, en
raison du manque defficacit ou/et de praticit des technologies conventionnelles
d'extraction. Lultrafiltration simple est inefficace pour la rtention de la plupart des
composs phnoliques en raison de leur faible poids molculaire. Toutefois, l'ultrafiltration
assiste par micelles (UFAM) dmontre une certaine efficacit pour leur isolement. Nos
travaux dmontrent les potentialits d'un procd intgr pour la concentration, l'limination
et la rcupration de composs phnoliques des margines. Le prtraitement des margines est
une tape cl dans tout procd de traitement. La charge organique leve des margines
bloque les pores des membranes et acclre le phnomne de colmatage. Deux procds
membranaires (Ultrafiltration, UF et microfiltration, MF) ont t tests pour le prtraitement
des margines. L'avantage majeur de ces techniques rside dans un cot peu lev par rapport
la mthode traditionnelle de floculation/coagulation utilisant le sulfate d'aluminium, produit
chimique cher et polluant. Deux autres procds membranaires diffrents, savoir
d'ultrafiltration assiste par micelles (UFAM) et la distillation membranaire contact directe
(DCMD) ont t appliques avec succs pour la concentration pralable des margines avant la
rcupration des composs phnoliques. La concentration des composs phnoliques des
margines permettra lconomie des produits chimiques employs lors dune extraction
ultrieure.
Les principaux avantages de lUFAM rsident dans la production dun flux de permat
lev avec une rtention raisonnable des composs phnoliques, mais le fait davoir recours
une grande quantit de tensioactifs ioniques (toxiques et non biodgradables) constitue
linconvnient majeur de cette technique. En plus, ces tensioactifs aggravent le phnomne de
colmatage et rduit ainsi la vie de la membrane. En ce qui concerne la rentabilit et la qualit
du concentrt issu de lUFAM des margines, il reste encore tudier la composition de la
matire organique retenue par les micelles pour dterminer sa teneur en composs
phnoliques et identifier les composs qui sont les plus retenus.
La distillation membranaire est une technologie mergente encore l'tat
exprimental. Le traitement des margines par distillation membranaire avec des membranes
de tflon (PTFE) a permis la concentration du contenu phnolique des margines jusqu 1,78
fois aprs 8 heures de distillation, en obtenant un indice de performance meilleure pour la
membrane TF1000, qui a la taille de pore la plus large (1 m). En plus, leffet de traitement
des margines par tempratures leves sur leur contenu phnolique et leur activit
antioxydante (test de DPPH) a t valu en fonction du temps de traitement. Les rsultats
Discussion gnrale
164
obtenus montrent quil ny pas deffets indsirables de la temprature leve (jusqu 80C)
sur le contenu phnolique et son activit antioxydant. La concentration de lhydroxytyrosol
dans les margines a augment par 45% aprs 1200 min de sjour dans une temprature de
80C. Lhydroxytyrosol (2-(3,4-dihydroxyphnyl) thanol) est lun des composs les plus
recherchs parmi les composs phnoliques dolives. En plus, lhydroxytyrosol est le
compos phnolique le plus tudi pour ses proprits antioxydantes et pharmacologiques
5,6
.
Ce compose se trouve dans les margines en une concentration relativement leve, en forme
libre en tant que monomre, ou en forme li comme dans loleuropine ou verbascoside.
Rcemment, un autre compose phnolique simple, le 3,4-dihydroxyphnylglycol (DHPG),
avec une structure similaire celle de lhydroxytyrosol mais il dispose dun groupe hydroxyle
de plus et une activit antioxydante plus leve a t trouv dans des margines
7
. La
concentration de ce compos augmente de 237% aprs traitement des margines par une
temprature leve (90C) pour 120 min seulement
7
. Ces rsultats confirment que lutilisation
dune temprature relativement leve dans le procd de la distillation membrane en vue de
traiter et de valoriser les margines pouvait avoir des effets positifs sur la quantit et la qualit
du concentrt phnolique rcupr.
En distillation osmotique isothermique, les membranes de PTFE offrent des flux
raisonnables (2,9-4,2 L/h.m
2
) avec des facteurs de concentration du contenu phnolique des
margines de lordre de 1,2 aprs 280 min de distillation osmotique 30C. La distillation
osmotique est relativement lente en terme de concentration des margines compare la
distillation membranaire thermique. Par contre, la distillation osmotique isothermique est
mois couteuse en terme dnergie.
Le choix dune membrane adapte au traitement des margines par distillation
membranaire doit prendre en considration la fois la slectivit et la permabilit. Les trois
membranes testes montrent des flux raisonnables avec des facteurs de sparation trs levs,
au voisinage de 100 % durant les premires 8 heures de traitement des margines par
distillation.

5
Manna C., Migliardi V., Sannino F., De Martino A., and Capasso R., Protective effects of synthetic
Hydroxytyrosol acetyl derivatives against oxidative stress in human cells, Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 2005, 53, 9602-9607.
6
Schaffer, S., Podstawa, M., Visioli, F., Bogani, P., Mller, W. E., & Eckert, G. P. Hydroxytyrosol-rich olive
mill wastewater extract protects brain cells in vitro and ex vivo. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55
(2007) 50435049.
7
Rodrguez G., Lama A., Trujillo M., Espartero J.L., Fernndez-Bolanos J., Isolation of a powerful antioxidant
from Olea europaea fruit-mill waste: 3,4-Dihydroxyphenylglycol, Food Science and Technology 42 (2009) 483
490.
Discussion gnrale
165
La distillation membranaire pourra constituer une solution efficace pour le traitement
des margines en produisant de leau propre et un concentrt de matire organique riche en
polyphnols. Lnergie requise pour llvation de la temprature des margines pourra tre
fournie par lnergie solaire pour rendre le procd plus conomique et cologique. Le
procd dispose de nombreux avantages compar aux autres procds de sparation:
possibilit de travailler des tempratures infrieures la temprature d'bullition de l'eau
traiter ; faible colmatage; grande slectivit (taux de rejet au voisinage de 100%) ; Surface
au sol demande faible; procd est moins sensible la concentration en alimentation
contrairement, par exemple, l'osmose inverse. En plus de ces avantages, il est possible de
coupler ce procd avec une nergie renouvelable.
La distillation osmotique ou membranaire prsente des inconvnients qui font que
pour le moment cette technologie est reste un stade exprimental : aucune membrane ni
module n'ont t conus spcifiquement pour ce procd hybride ; la productivit (flux de
permat) est faible compar lultrafiltration ou losmose inverse ; le procd consomme
beaucoup d'nergie. La consommation nergtique et le cot lev de ce procd ne peuvent
pas tre rentabiliss par sa faible productivit. Les flux de permat enregistr durant la
distillation membranaire et surtout de la distillation osmotique des margines demeurent trs
faibles ce qui empcherait toute application industrielle de ce procd. Ces flux rendent la
rentabilit de ce procd sujette questions. Nanmoins, la distillation membranaire et la
distillation osmotique sont des procds en cours dexprimentation dinvestigations trs
actives et on ne pourra pas encore trancher sur leur utilit et leur viabilit conomique.
Nos travaux ont dmontr que lUFAM permet - dans des conditions optimales la
rtention de 88% de la couleur sombre des margines et de 95% de la DCO initiale avec un
taux de rejet 70% des composs phnoliques. Le rejet de composs phnoliques individuels
partir des solutions modles a t tudi en utilisant diffrentes tailles des pores
membranaires (20 et 50 KDa) et en employant diffrents types d'agents tensioactifs
(cationiques et anioniques). Le rtention a t trs leve lors de l'utilisation de 10 fois la
concentration micellaire critique (CMC) du chlorure de ctylpyridinium (CPC) et atteint 95%
pour l'acide p-coumarique. LUFAM montre des retentions variables selon la structure
molculaire des composs phnoliques. Le tensioactif a t rcupr efficacement du retentt
par prcipitation sous sa temprature de Krafft, surtout 5 C, o le taux de rcupration a t
suprieur 90%. La rcupration du tensioactif (SDS) par prcipitation avec des lectrolytes a
t aussi tudie et a montr son efficacit. Mais, la prcipitation physique (par abaissement
Discussion gnrale
166
de temprature) est la plus pratique et efficace par rapport la prcipitation chimique qui
ncessite laddition des sels aux solutions. Le recyclage du tensioactif du permat et du
retentt rendra le procd plus cologique et conomique et permettra ainsi de rduire toute
pollution secondaires gnrs par des agents tensioactifs.
Les tensioactifs ioniques peuvent avoir une toxicit directe (tensioactifs cationiques)
ou indirecte (tensioactifs anioniques) en favorisant la solubilisation voire la pntration
digestive dans l'organisme de certains toxiques tels que les hydrocarbures aromatiques
polycycliques dont certains sont de puissants cancrognes
8,9
. Pour ces raisons-l, il est
indispensable dliminer les traces rsiduelles de tensioactifs (ou les recycler dans le procd)
prsente dans le permat mme selle infrieure 1 CMC, car la plus part des tensioactifs
ioniques ont montr une toxicit vis--vis des micro-organismes mme des concentrations
infrieures leur CMC
10
. Aussi, avant de se dbarrasser de tout dchet ou effluent issu du
procd, on sera oblig de penser au devenir des tensioactifs quil contient.
Au-del d'une temprature appele point de trouble, les solutions aqueuses de la
plupart des tensioactifs non ioniques se sparent en deux phases liquides en quilibre : le
coacervat, riche en tensioactif, et la phase dilue. Grce la solubilisation micellaire de
composs hydrophobes, amphiphiles ou mme ioniques et leur concentration dans le (faible)
volume de coacervat, une extraction deux phases aqueuses (extraction par point de trouble
ou par coacervat) peut tre ralise et applique des oprations de dpollution d'effluents
industriels ou la concentration ou encore la sparation de substances haute valeur
ajoute. Cette technique peut donc conduire un procd de "chimie verte", c'est--dire non
polluant et peu coteux en nergie.
Nous avons galement valu la possibilit dextraire les composs phnoliques des
margines par extraction par point de trouble (cloud point Extraction) (CPE) laide dun
tensioactif non ionique (Triton X-100). Le procd dextraction par point de trouble appliqu
la rcupration des composs phnoliques partir des margines microfiltres, dmontre la
possibilit d'extraire jusqu' 66,5% de la teneur totale en composs phnoliques des margines
en utilisant un seul cycle dextraction par CPE. Le rendement le plus lev a t obtenu lors
de l'utilisation de 10% de Triton X-100 90 C.

8
Margesin R., Schinner, F. (1998), Biodegradation of the anionic surfactant sodium dodecyl sulfate at low
temperatures, International Biodeterioration and Biodegradation, 41, 139143.
9
de Melo, E. D., Mounteer, A. H., de Souza Leo, L. H., Bahia, R. C. B., Campos, I. M. F. (2013). Toxicity
identification evaluation of cosmetics industry wastewater. Journal of Hazardous Materials, 244245, 329-334.
10
Rodrguez G., Lama A., Trujillo M., Espartero J.L., Fernndez-Bolanos J., Isolation of a powerful antioxidant
from Olea europaea fruit-mill waste: 3,4-Dihydroxyphenylglycol, Food Science and Technology 42 (2009) 483
490.
Discussion gnrale
167
En utilisant un plan d'expriences (mthodologie de surface de rponse) et un lissage
empirique des courbes tridimensionnelles, nous avons cherch le meilleur compromis entre
les paramtres qui gouvernent lefficacit de lextraction des polyphnols en fonction de la
concentration initiale en tensioactif (Triton X-100) et de la temprature. Cette tude met ainsi
en vidence lvolution du pourcentage des composs phnoliques extraits, du facteur de
concentration, du coefficient de partage et de la fraction volumique de coacervat, celle-ci
rduire au minimum. Le choix des conditions opratoires optimales rsultera donc d'un
compromis entre ces paramtres. Ainsi, on a intrt utiliser moins de tensioactif afin d'avoir
un volume moindre de coacervat mme si le rendement d'extraction se trouvera diminu.
Dun point de vue industriel, il serait fortement conseill d'envisager un procd multi-cycles
(cycles multiples dextraction).
Les polyphnols des margines sont structurellement diversifis et appartiennent
diffrentes classes de composs phytochimiques. Cela rend le dveloppement de procdures
standardises pour l'extraction simultane de tous les composs phnoliques une tche trs
difficile. Presque toutes les procdures d'extraction, rapports dans la littrature scientifique,
prsentent la fois une faible slectivit et de faibles rendements d'extraction, sinon les
processus les plus efficaces impliquent des cots levs. Par consquent, il y a toujours un
besoin pour une recherche systmatique pour laborer un processus rentable pour la
rcupration des composs phnoliques des margines en amliorant la fois la slectivit et
les rendements d'extraction.
Les rsultats montrent que la CPE peut tre une alternative efficace aux mthodes
classiques d'extraction, car elle peut aboutir lisolement dun mlange d'antioxydants
naturels adapts pour des applications pharmaceutiques, cosmtiques ou alimentaires.
La CPE, compare aux mthodes conventionnelles dextraction, gagne de plus en plus
un intrt croissant grce son rendement lev et lemploi de faibles quantits de
tensioactifs. En plus, les tensioactifs utiliss sont biodgradables et ont une toxicit limite.
Le procd dextraction ne prsente aucun risque puisque quil utilise des tensioactifs non
volatiles et non inflammables. Un autre avantage en faveur de lextraction par point de trouble
est le fait que le procd ne comporte par une tape de concentration de solvant qui peut
constituer une source de perte dune proportion des composs extraire.
Pour quun procd soit transposable une plus grande chelle (industrielle), son
produit doit tre standard et avec des caractristiques bien prcises. Ce produit ne doit pas
tre sujet des changements qualitatifs suite aux variations qui peuvent toucher la matire
Discussion gnrale
168
premire (les margines). Le dfis majeur face au procd dvelopp dans cette tude est la
possibilit de fournir un produit stanrdadis de bonne qualit. Les industriels ne peuvent pas
facilement intgrer un produit dans leur formulations cosmtiques ou pharmaceutiques si ce
produit ne prsente des caractristiques standardises identiques dun lot lautre et dune
saison lautre. Ainsi, aprs une optimisation du procd et son adaptation aux conditions de
travail dans une chelle industrielle, il sera indispensable de focaliser les travaux de
recherche futurs sur le produit afin de cerner les facteurs jouant sur sa qualit et sa stabilit et
la constance de sa composition.
la lumire de tous nos rsultats, nous pouvons proposer un procd intgr pour la
valorisation et le traitement des margines (Schma ci-aprs). Un tel procd comprendra:

1. Une tape de prtraitement par microfiltration ou/et ultrafiltration. L'limination des
matires en suspension avant tout isolement des composs phnoliques est fortement
recommande afin d'obtenir un concentrt limpide. Les margines sont particulirement
riches en matires en suspension qui peuvent dpasser 15%.
2. L'effluent prtrait sera soumis une opration de concentration par ultrafiltration
assiste par micelles ou par distillation membranaire. A ce stade, les composs
phnoliques peuvent tre retenus. Un concentrt riche en composs phnoliques peut
tre rcupr. Selon la concentration restante des composs phnoliques et les normes
respecter, le permat peut tre directement rejet ou rutilis dans l'irrigation, ou
recycl. Le retentt de lultrafiltration assiste par micelles sera trait par temprature
basse (infrieure la temprature de Krafft du tensioactif employ) pour liminer une
grande partie de tensioactif. Ce dernier pourra tre rcupr et rutilis.
3. Un procd d'extraction finale des composs phnoliques du retentt peut tre effectu
par CPE. Cette mthode dextraction offrira un mlange des composs phnoliques
haute valeur ajoute, qui pourra tre commercialis tel quel ou aprs purification.
Des essais semi-pilotes de ce procd sont ncessaires avant toute application
industrielle. Des travaux de recherche supplmentaires son en cours de ralisation dans notre
laboratoire pour loptimisation des paramtres opratoires (temprature, pression, vitesse
dagitation, type de configuration dultrafiltration, type de tensioactif et sa concentration,...)
pour une isolation efficace des composs phnoliques naturels partir des margines. Ce
procd pourra toutefois tre appliqu aux autres effluents agroindustriels telles les saumures
Discussion gnrale
169
gnres par la prparation des olives de table. Cet effluent est galement trs riche en
composs phnoliques haute valeur ajoute (hydroxytyrosol, oleuropine, etc.).
Vu la petite taille des units dextraction de lhuile dolive, leur dispersion
gographique et la saisonnalit de la production, nous pensons que seule des units mobiles
de traitement et de valorisation des margines peuvent offrir la possibilit de rsoudre le
problme de pollution que posent ces effluents. Le dveloppement dun tel systme aura le
potentiel de raliser des conomies substantielles dans les investissements en capital par
rapport aux usines de traitement stationnaires. De ce fait les questions qui sont autour
llaboration des solutions rationnelle et adaptes de traitement des margines, concernent de
faon plus large lensemble des pays producteurs dolive du bassin mditerranen, mais
touchent aussi de vritables dbats de socit tels que ceux suscits par la prise en compte
des pollutions agricoles : qui est responsable ? Qui doit payer selon le principe pollueur-
payeur ? Est ce lagriculteur, le consommateur, le contribuable, ou bien les trois la fois ?
Il semble que la recherche de solutions au problme de la pollution engendre par les
margines doit se placer sous le signe de solidarit et de la rpartition quitable des charges
financires de la dpollution. Jusqu' prsent, dans ce domaine, la discontinuit est la rgle,
mais il semble que le maintien dune activit olicole performante repose en partie sur
lunification des efforts de tous les acteurs concerns : les pouvoirs publics, ainsi que les
agences des bassins hydrauliques et les collectivits locales. Cest donc en confortant la place
des petites structures de transformation (masras traditionnelles), en amliorant leurs
comptences commerciales sur un march concurrentiel, que lon contribuera le plus au
dveloppement de cette production.
Discussion gnrale
170

Schma montrant les diffrentes tapes du procd propos en vu du traitement et de la
valorisation des margines par extraction de leur contenu phnolique.
Certainement, il ny aura pas une seule solution pour le traitement et la valorisation
des margines. Plusieurs solutions peuvent tre adaptes la fois pour rpondre aux besoins de
chaque type dunit de trituration en termes dconomie deau, de dpollution et de
valorisation des ressources. Durant ces deux dernires dcennies, le systme de trituration
deux phases sest largement rpondu au Maroc. Il sagit dun procd biphasique dit
cologique puisquil ne produit quun faible volume des margines, dix fois moins compar
au procd trois phases. Lintensification en cours et en perspective du systme biphasique
remette en question lutilit du dveloppement dun procd de traitement des margines. En
revanche, le systme n'est pas vraiment une solution dfinitive aux problmes
environnementaux gnrs par les margines car le procd prsente un autre problme li au
traitement et la valorisation des grignons qui sont trs humides et elle ncessite une tape de
dessiccation par schage au soleil ou par vaporation force.












CONCLUSION GENERALE




Conclusion Gnrale
171

Conclusion gnrale
Lindustrie dextraction dhuile dolive constitue une activit conomique majeure
dans plusieurs pays mditerranens comme l'Italie, lEspagne, la Turquie, la Tunisie, la Grce
et le Maroc. Les deux systmes de trituration des olives les plus rpondus au Maroc (le
systme traditionnel presse et le systme centrifugation trois phases) gnrent jusqu
une tonne deffluents liquides par tonne dolives traites. Ces eaux uses appels margines
sont constitues des eaux de vgtation et des eaux ajoutes lors du procd dextraction de
lhuile. Ces effluents olicoles sont dans la plupart des cas dverses brutes sans aucun
traitement dans le milieu naturel, soit directement soit travers le rseau dgouts public,
conduisant de srieux problmes de pollution (destruction de la microflore bactrienne du
sol, pollution des oueds et barrages et disparition de la vie aquatique, pollution de la nappe
souterraine, etc.).
Aujourdhui, lindustrie olicole marocaine se trouve confronte aux nouvelles
rglementations en matire de lenvironnement, de plus en plus exigeantes. Do la ncessit
dadopter une solution efficace et non couteuse pour le traitement et/ou la valorisation des
margines. La recherche dusages secondaires pour les margines contribuera leur valorisation
et permettra aux procds de traitements employs tre conomiquement viables. Ainsi, ces
effluents pourraient constituer des sources bon march et abondantes de composs haute
valeur ajoute tels des antioxydants naturels, des agents antimicrobiens, des biopesticides,
etc., d'un grand intrt pour les industries pharmaceutiques, cosmtiques et alimentaires.
Les mthodes physiques de traitements des margines telles que l'incinration impliquent
des cots nergtiques levs. Les procds physico-chimiques tels que la floculation et la
coagulation offrent seulement une solution partielle et doivent tre complter par un
traitement secondaire et produisent de grandes quantits de boues qui peuvent causer d'autres
problmes environnementaux. Dautres traitements, quoique efficaces, osmose inverse,
vaporation force, ozonation, etc., restent trs coteux et demandent parfois une technicit
leve.
Les rsultats prsents dans cette thse, dmontrent clairement que les procds
membranaires intgrs pourraient tre appliqus avec succs pour le traitement et la
concentration des margines. L'utilisation de la mthodologie du CPE offre une alternative aux
systmes conventionnels d'extraction et permet la conception de systmes d'extraction
simples, bon march, trs efficace et d'une plus faible toxicit que les systmes d'extraction
liquide-liquide. Par ailleurs, la CPE peut tre applique soit sur des margines prtraites par
Conclusion Gnrale
172

MF ou UF, ou sur le concentrt de la distillation membranaire (ou osmotique). La
rcupration des constituants phnoliques des effluents olicoles, liminera les risques
environnementaux de ces dernirs, tout en les rendant facilement biodgradables. les margines
traites pourront tre rutilises en tant que fertilisant, comme elles pourront servir d'autres
applications (compostage, additif pour la prparation de matriaux de construction, etc.).
Vu leur intrts conomiques les composs phnoliques rcuprs, constitueront une source
de revenus suplmentaires pour les huileries.
En raison des nombreux avantages quelles offrent (exigences nergtiques plus faibles,
conditions opratoires douces, facilit de transposition des chelles industrielles)
lapplication des mthodes de sparations membranaires pour le traitement des margines
suscite de plus en plus d'intrt. Nos travaux ont clairement dmontr les potentialits de deux
procds membranaires diffrents savoir la distillation membranaire directe et
lultrafiltration assiste par micelles pour le traitement et la concentration des composs
phnoliques des margines. Si la simple ultrafiltration est inefficace pour la rtention des
composs phnoliques faible poids molculaires, nous avons prouv pour la premire fois
que lUFAM est une mthode alternative et efficace pour la rtention des composs
phnoliques naturels. La rtention des composs phnoliques a t dmontre dans des
solutions modles en utilisant des membranes avec diffrentes tailles de pores (5, 10, 20 et 50
kDa) et deux types de tensioactifs (anioniques et cationiques). La rtention sest rvle trs
leve et a atteint 95 % pour l'acide p-coumarique en utilisant 10 CMC du PCC (chlorure de
ctylpyridinium). La rtention a t diffrentielle en fonction de la structure molculaire des
composs phnoliques. L'agent tensioactif est rcupr de manire efficace (> 90%) partir
des flux de rtentt par prcipitation 5 C. La rcupration de lagent tensioactif partir du
permat et du rtentt rendra le procd plus conomique permettra de rduire toute pollution
secondaire. L'efficacit du traitement par UFAM pour lisolement et la concentration des
composs phnoliques des margines a permis des flux initiaux entre 25,7 et 44,5 l/m
2
.h sous
des pressions transmembranaires de 3,5 et 4,5 bar respectivement. Le taux de rtention des
polyphnols a atteint 74 %. LUFAM permet de grandes rductions de couleur (-88 %), et de
la DCO (-95 %). La distillation membranaire contact direct (DCMD) a galement t
tudie pour le traitement et la concentration des margines. Comparativement aux procds
membranaires classiques, la DCMD montre les avantages de la diminution de la temprature
de distillation et de la pression hydrostatique (les tempratures appliques dans DCMD sont
beaucoup plus basses que le point dbullition de l'eau tandis que la pression est proche de
l'atmosphre). En outre, DCMD est un processus non-destructif des composs phnoliques.
Conclusion Gnrale
173

Deux types de membranes ayant la mme taille de pores, le polyttrafluorothylne ( TF200 )
et de fluorure de polyvinylidne (GVHP) ont t tests sous une diffrence de temprature
transmembranaire de 20C. La TF200 de membrane a montr le facteur de sparation des
polyphnols le plus lev. Il est rest proche de 100% pendant 8 h de sparation alors que le
facteur de concentration a atteint 1,8. Le meilleur indice de performance a t obtenu pour la
TF1000 qui prsente la plus grande taille des pores. En outre, l'effet des tempratures leves
sur la teneur en composs phnoliques des margines, les tempratures utilises dans la DMCD
ont t prouves de ne pas altrer la capacit de ces antioxydants naturels piger les
radicaux libres (test au DPPH). Deux procds de prtraitement, la coagulation / floculation et
de microfiltration (MF), ont t valus. MF a t juge la meilleure pour tre intgre la
DCMD.
Si les solutions proposes dans cette thse sont prometteuses, elles suscitent nanmoins,
plusieurs questions scientifiques qui ouvrent la voie pour dautres travaux de recherches
visant ladaptation du procd aux conditions dune application industrielle. La slection des
membranes, ltude du colmatage, lvaluation des cots de nettoyage et des couts
nergtiques doivent tre valus et optimiss avant toute application industrielle. Il reste
galement mettre au point une mthode efficace de prtraitement qui rduit la charge
organique des margines en gardant leur contenu phnolique intacte. Tous ces lments
constituent autant de pistes de recherche qui mriteraient que lon sy attarde. Toutefois, toute
solution propose doit tenir compte des particularits de ce secteur (petites tailles des
entreprises, de leur dispersion et de la saisonnalit de la production).

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