SDS PAGE

Electroforesis en Gel de
Poliacrilamida SDS.
Mg Sc Blgo. Jimmy Ibarra Trujillo.
La Electroforesis es la migracin de molculas cargadas en solucin en
respuesta a un campo elctrico.
En los aos 60 fue desarrollada una versin modificada de este
mtodo, la cual es conocida como Electroforesis en Gel de
Poliacrilamida-Dodecil Sulfato de Sodio (SDS-PAGE).
ANALISIS DE PROTEINAS
MEDIANTE SDS-PAGE
SDS es un ingrediente comn en
detergentes
Otros nombres para SDS incluyen el
Lauril sulfato y Lauril sulfato de sodio
El SDS destruye la protena secundaria,
terciaria y la estructura Cuaternaria
Dodecil Sulfato de Sodio
Esto produce protenas de forma lineal
La carga negativa de los grupos sulfato del SDS enmascara
cualquier carga en la protena
Polar
Cabeza Hidrofilica
No-polar
Cola Hidrofobica
SDS
Dodecil Sulfato de SodioSodium
H-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-O-S-O
-
Na
+
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
O
O
C
12
H
25
NaO
4
S
Como esto es anfiptico, SDS es un detergente potente
SDS tambin puede ser llamado Lauril Sulfato de sodio y es
un ingrediente comn de detergente de lavandera de champ
y otros productos de limpieza
SDS y Proteinas
SDS
Proteina
SDS y Proteinas
Geles de Poliacrilamida
La Poliacrilamida es un polmero hecho de acrilamida (C
3
H
5
NO)
y bis-acrilamida (N, la N '-metilen-bis-acrilamida C
7
H
10
N
2
O
2
)
O
CH CH
2
NH
2
C
Acrylamide
O
CH
CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
CH
2
bis-Acrylamide
Acrylamide
Acrylamide
O
CH
CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
CH
2
bis-Acrylamide
Geles de Poliacrilamida
O
CH CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
SO
4
-.
La Acrilamida polimeriza en presencia de radicales libres
tpicamente suministrados por persulfato de amonio
TMED (la N, la N, la N ', la N '-tetramethylethylenediamine)
sirve como un catalizador en la reaccin.
Polyacrylamide Gels
O
CH CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C NH
2
O
CH CH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
bis-Acrylamide
O
CH
CH
2
NH
2
C
O
CH CH
2
NH
2
C
CH
2
Geles de Poliacrilamida
El tamao de poro en geles puede ser variado por
variando la proporcin de acrylamide a otra!-
acrylamide Las separaciones de protena tpicamente
usan un 29:1 o 37.5:1 acrylamide a otra! la
proporcin
Geles de Poliacrilamida
Lots of bis-acrylamide Little bis-acrylamide
1 2 3
SDS-PAGE
Addition of SDS
2
3
1
Protein becomes rod-
shaped with uniform
charge distribution
La protena se hace formada de barra con la distribucin de
precio(carga) uniforme
Protein becomes rod-
shaped with uniform
charge distribution
Bandas mas finas
equivalen a menor
cantidad de proteina
Bandas mas gruesas
equivalen a mayor
cantidad de proteina
Las proteinas
ms pequeas
quedan abajo
Las proteinas ms
grandes migran
hacia el otro
extremo
tampn
gel
tampn
Lmina de gel de
poliacrilamida
Muestra problema
Electroforesis en Gel de Poliacrilamida-SDS (SDS-PAGE)
Revestimiento
de plstico
Protein Color
MW (daltons) on
Tris HCl gel
Myosin Blue 204,649
B-galactosidase Magenta 127,511
Bovine serum albumin Green 85,130
Carbonic anhydrase Violet 37,830
Soybean trypsin inhibitor Orange 30,906
Lysozyme Red 27,230
Aprotinin Blue 6,638
Actina y Miosina
Myosin blue
b-galactosidase magenta
Bovine serum albumin green
Carbonic anhydrase violet
Soybean trypsin inhibitor orange
Lysozyme red
Aprotinin - blue
GRACIAS