FAMILIA VIBRIONACEAE.

MICROBIOLOGIA
I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
HOLEREI
Familia: Vibrionaceae
Genuri: Vibrio
Aeromonas (inf de plag, diaree, septicemii)
Plesiomonas (gastroenterite, septicemii,
meningite)
Caractere generale: bastonae G-, drepte sau
ncurbate, mobile sau imobile, reduc nitraii n nitrii,
fermenteaz glucidele, oxidazo+, catalazo+
GENUL VIBRIO
Bastonae G-, ncurbate, nesporogene,
necapsulate, mobile monotriche
Clasificarea:
- Vibrio cholerae (agenii holerei i diareelor
vibriogene)
- Vibrioni halofili V.parahaemolyticus,
V.alginolyticus, V.anguilarum, V.vulnificus
(cauzeaz toxiinfecii alimentare, septicemii,
meningite, supuraii)
- Vibrioni free life (saprofii)
VIBRIO CHOLERAE
Clasificare :
Vibrio cholerae O1, O2, ... O140
- V.cholerae O1 i V.cholerae O139 Bengal
agenii cauzali ai holerei
- V.cholerae non O1/non O139 (O2, O3,... etc,
vibrioni NAG) responsabili de sindrom
holeriform, diaree vibriogen, toxiinfecii
alimentare
HOLERA
Agenii cauzali:
V.cholerae O1 (b/v Clasic i El Tor; s/v Ogawa, Inaba,
Hikojima), V.cholerae O139 Bengal
Caractere de cultur
Anaerobi facultativi, temperatura optim de cultivare -- 37
grade. Cresc pe medii simple, dar prefer pH alcalin (8-9) i
concentraii de 3% NaCl. Sensibili la pH acid
Mediu de mbogire Apa peptonat alcalin 1%
Medii de izolare a culturii pure Geloza alcalin (mediu electiv-
selectiv)
Mediul TCBS (tiosulfat-citrat-bil-saharoz) DD i selectiv

Manifestarea creterii
AP peste 6 ore de incubare vl fin la
suprafaa mediului
GA peste 12 ore colonii S (R atipice),
transparente, cu nuan albstrie
TCBS peste 12 ore colonii S, opace,
galbene (fermentarea saharozei)
Caractere biochimice: V.cholerae este
catalaza+ i oxidaza+, reduce nitraii n
nitrii, produce indol, posed gelatinaz i
LCD, fermenteaz glucoza pn la acid.
Conform activitii glicolitice V.cholerae
aparine grupului I Heiberg
(fermenteaz zaharoza i manoza, nu
fermenteaz arabinoza)
Se disting 2 biotipuri (variante) de
V.cholerae: clasic (V.cholerae cholerae)
i El Tor (V.cholerae El Tor), identice
morfologic i antigenic.



Diferenierea biovariantelor

Caractere V.cholerae
cholerae
V.cholerae
eltor
Aglutinarea
eritrocitelor de gin
- +
Hemoliza eritrocitelor
de berbec
- +
Producerea acetoinei
(test VP)
- +
Liza cu bacteriofagi C ET
Creterea pe mediu cu
polimixin
- +
STRUCTURA ANTIGENIC
A VIBRIO CHOLERAE
Antigenul O (140 serogrupe - O1, O2....O140)
Ag O1 este constituit din 3 fracii - A,B,C
Respectiv se disting 3 serovariante ale
V.cholerae: Ogawa (A,B), Inaba (A, C) i
Hikojima (A; B; C)
Ag H, comun pentru V.cholerae
FACTORI DE PATOGENITATE
Factori de adeziune (pili)
Enzime de patogenitate (mucinaza, neuraminidaza, LDC)
Enterotoxina (toxina holeric, holeragen), constituit din 2
subuniti A i 5 subuniti B.
Mecanismul de aciune: Subunitile B servesc la fixarea de
receptorul gangliozidic GM1 de pe membrana
enterocitului, A2 asigur ptrunderea intracelular a
fragmentului A1. Acesta activeaz adenilatciclaza
celular, ce duce la creterea concentraiei de AMPc
intracelular i secreia exagerat a cloridului i
bicarbonatului. Apa i electroliii (Na
+
i K
+
) se acumuleaz
n lumenul intestinal. Rezult deshidratare extracelular
intens cu hemoconcentraie, oc hipovolemic i acidoz
metabolic.
PATOGENEZA HOLEREI I
MANIFESTRILE CLINICE
HOLERA toxiinfecie intestinal acut,
strict uman.
Agentul cauzal V.cholerae O1/O139
Sursa de infecie bolnav, convalescent,
purttor sntos (crustacee acvatice?)
Mecanismul de transmitere fecal-oral
- Contact direct
- Alimentar (apa, alimente)
Doza infectant 10
9
UFC (10
4
pentru
persoane cu hipoaciditate gastric)
Vibrionii care au supravieuit nimeresc n intestinul
subire. Local mucinaza descompune mucusul, ce
permite adeziunea i multiplicarea vibrionilor
(colonizarea) i secreia toxinei.
Evoluia clinic a holerei:
I - perioada de incubaie (2-3 zile)
II enterita holeric (scaune frecvente, abundente,
apoase, aspect zeam de orez)
III gastro-enterita (scaune frecvente 20 ori pe zi
vome abundente. Consecine deshidratare,
carene de sruri, acidoz, hipoxie tisular,
hipotensiune, contracii (crampe) musculare.
IV - Algida holeric (stare extrem de grav,
hipotermie, asfixie, colaps, com, deces)

Imunitatea umoral (IgAs, IgG),
antibacterian i antitoxic, de scurt
durat (2 ani), reinfecii sunt posibile
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREI
Prelevate: mase vomitive, materii fecale, bil (purttori)
de la cadavru 3 fragmente din intestinul subire i
vezica biliar.
Metode de diagnostic
1. Diagnosticul rapid
- Studierea mobilitii (preparate native bacterii mobile,
ncurbate, grupate n bancuri de peti sau pescrui n
zbor
- Frotiu Gram (bacterii G-, ncurbate)
- Imobilizarea vibrionilor cu serul anti-O1
- Imobilizarea vibrionilor cu bacteriofagi C i ET
- RIF
2. Examenul bacteriologic (de baz)
- Prelevatele se nsemneaz n AP I
(mbogire) i GA I (TCBS) (izolarea culturii
pure) termostat
- Peste 6 ore se examineaz cultura din AP
(vl la suprafa), utilizat pentru
diagnosticul rapid, apoi se rensemneaz
pe AP II i GA II.
- Peste 12 ore se examineaz coloniile de pe
GA sau TCBS. Coloniile suspecte (plate i
transparente cu nuan albstrie pe GA,
galbene pe TCBS) sunt expuse
diagnosticului rapid (5 teste), apoi repicate
pe mediul cu lactoz i zaharoz pentru
acumularea culturii pure i difereniere
primar.
- Culturile lactoza-/saharoza+ sunt
identificate morfologic, cultural, biochimic,
serologic (cu ser O1 polivalent, apoi cu
seruri monospecifice Ogawa i Inaba),
diferenierea biovariantelor
3. Serodiagnostic (retrospectiv)
Anticorpii (aglutinine, vibriocine) apar dup 10-
15 zile de boal
- RA (serul bolnavului + diagnostic din
V.cholerae O1 (titrul diagnostic 1/80)
- RHAI (serul bolnavului + diagnostic eritrocitar)
- Reacia de vibrioliz (serul bolnavului +
cultur de vibrioni + complement)
Titrul diagnostic 10
-4
TRATAMENTUL I PROFILAXIA HOLEREI
Tratament
- Antibiotice (tetraciclin, sulfanilamide)
- Rehidratare
- Tratament simptomatic
Profilaxie
- Igiena individual i colectiv
- Vaccinarea (vaccin inactivat, vaccin
subunitar, holerigen-anatoxin)
Imunitatea pn la 6 luni
VIBRIONII HALOFILI
V. parahaemolyticus toxiinfecii
alimentare, consecutive utilizrii fructelor
de mare
V. vulnificus, V. alginolyticus procese
supurative (otite, conjunctivite, infecii de
plag, etc)