Laporan Praktikum Hari/Tanggal : Jumat/ 29 November 2013

Struktur an !ung"i #iomolekul $aktu : 0%&00'11&00 $(#

PJP : (na Set)a*ati+ S&TP+ ,&Si
-"i"ten : Syahrul Mustofa
-nie"ti
.*i !au/ia0
Salmi
ASAM NUKLEAT
Penentuan Konsentrasi RNA dan DNA dalam Homogenat
Hati Tikus
1elompok 2 #
Lulu Atul !itriyah "#$%%&&''
3ma Lina*ati 4%2110010
.*i Nugra0a !& 4%2110056
-mellia 4%21100%7
DEPARTEMEN ()*K)M)A
!AKULTAS MATEMAT)KA DAN )LMU PEN"ETAHUAN ALAM
)NST)TUT PERTAN)AN (*"*R
(*"*R
+&%'
Pendahuluan
-"am nukleat aala0 makromolekul biokimia )ang komplek"+ berbobot
molekul tinggi+ an ter"u"un ata" rantai nukleotia )ang menganung in8orma"i
genetik& -"am nukleat )ang paling umum aala0 a"am eok"iribonukleat 9.N-:
an a"am ribonukleat 9;N-:& -"am nukleat itemukan paa "emua "el 0iup an
viru"& -"am nukleat beraa i alam inti 9nukleu": "el 9Ngili 2009:& -"am nukleat
merupakan biopolimer engan monomer pen)u"unn)a aala0 nukleotia& Setiap
nukleotia teriri ata" tiga komponen )aitu "ebua0 ba"a nitrogen+ gula pento"a+
an gugu" 8o"8at& #a"a nitrogen bera"al ari kolompok purin an pirimiin& Purin
utama a"am nukleat aala0 aenin an guanin+ "eangkan pirimiinn)a aala0
"ito"in+ timin+ an ura"il& Nukleotia merupakan nukleo"ia )ang gugu" gula paa
po"i"i 5'n)a mengikat gugu" 8o"8at engan ikatan e"ter& Nukleo"ia teriri ata"
pento"a 9eok"iribo"a atau ribo"a: )ang mengikat "uatu ba"a 9erivat purin atau
pirimiin: melalui ikatan gliko"ia& Nukleo"ia merupakan nukleotia )ang tiak
ter8o"8orila"i 9tiak berikatan engan 8o"8at: 9Ngili 2009:&
-"am nukleat alam "el aa ua <eni" )aitu .N- 9deoxyribonucleic acid :
atau a"am eok"iribonukleat an ;N- 9ribonucleic acid: atau a"am ribonukleat
)ang berikatan gana& .N- maupun ;N- berupa anion an paa umumn)a
terikat ole0 protein an ber"i8at ba"a+ mi"aln)a .N- alam inti "el terikat paa
0i"ton& Sen)a*a gabungan antara protein an a"am nukleat i"ebut nukleoprotein&
,olekul a"am nukleat merupakan polimer "eperti protein+ tetapi unit pen)u"unn)a
aala0 nukleotia& Sala0 "atu =onto0 nukleotia a"am nukleat beba" aala0 -TP
)ang ber8ung"i "ebagai pemba*a energi& >ntuk memperole0 a"am nukleat ari
<aringan'<aringan ter"ebut+ apat ilakukan ek"trak"i ter0aap nukleoprotein
terlebi0 a0ulu menggunakan larutan garam (,& Setela0 nukleoprotein terlarut+
apat iuraikan atau ipe=a0 men<ai protein'protein an a"am nukleat engan
menamba0 a"am'a"am lema0 atau alkali "e=ara 0ati'0ati+ atau engan menamba0
Na?l 0ingga <enu0 akan mengenapkan protein 9,urra) 2001:& ;N- atau a"am
ribonukleat teriri ata" benang pan<ang ribonukleotia& ,olekul ini <au0 lebi0
penek ari .N-+ ;N- itemukan alam <umla0 )ang <au0 lebi0 ban)ak i
alam keban)akan "el& Paa "el prokariotik an eukariotik+ ketiga golongan utama
;N- aala0 ;N- ata 9m;N-:+ ;N- ribo"om 9r;N-:+ an ;N- pemina0
9t;N-:& ,a"ing'ma"ing teriri ata" "atu untai ribonukleotia an mempun)ai
molekul urutan nukleotia "erta 8ung"i biologi" )ang k0a" 9Poe<iai 2002:&
,enurut "trukturn)a+ perbeaan keua ma=am a"am nukleat ini terletak
paa komponen gula pento"an)a& Paa ;N-+ gula pento"an)a aala0 ribo"a
"eangkan paa .N- gula pento"an)a mengalami ke0ilangan "atu atom @ paa
po"i"i ? nomor 2 "e0ingga inamakan gula 2'eok"iribo"a& Perbeaan "truktur
lainn)a antara .N- an ;N- aala0 paa ba"a N'n)a& #a"a N+ baik paa .N-
maupun paa ;N-+ mempun)ai "truktur berupa =in=in aromatik 0etero"iklik
9menganung ? an N: an apat ikelompokkan men<ai ua golongan+ )aitu
purin an pirimiin& #a"a purin mempun)ai ua bua0 =in=in 9bi"iklik: "eangkan
ba"a pirimiin 0an)a mempun)ai "atu =in=in 9mono"iklik:& Paa .N- an ;N-+
purin teriri ata" aenin 9-: an guanin 94:+ tetapi untuk pirimiin aa perbeaan
antara .N- an ;N- )aitu paa .N- ba"a pirimiin teriri ata" "ito"in 9?: an
timin 9T:+ paa ;N- tiak aa timin an "ebagai gantin)a terapat ura"il 9>:&
Timin berbea engan ura"il karena aan)a gugu" metil paa po"i"i nomor 5
"e0ingga timin apat <uga ikatakan "ebagai 5'metilura"il 9Le0ninger 2002:&
Hiroli"i" a"am nukleat akan meng0a"ilkan nukleotia& -pabila i0iroili"i" lagi
maka akan iapat nukleo"ia+ 8o"8at+ gula+ purin+ an pirimiin 9Poe<iai an
Supri)anti 2006:&
#eberapa 8ung"i penting a"am nukleat aala0 1&men)impan+
men"tran"mi"i+ an mentran"la"i in8orma"i genetik metaboli"me antara
9intermediary metabolism: an reak"i'reak"i in8orma"i energi+ 2&"ebagai koen/im
pemba*a energi+ 3&"ebagai koen/im pemina0 a"am a"etat+ /at gula+ "en)a*a
amino an biomolekul lainn)a+ an 2&"ebagai koen/im reak"i ok"ia"i reuk"i
9?ampbell et al. 2002:& Praktikum a"am nukleat ini bertu<uan mengi"ola"i an
meng0itung kanungan a"am eok"iribonukleat 9.N-: an kanungan a"am
ribonukleat 9;N-: alam "ampel 0ati&
Metode Praktikum
Praktikum "truktur an 8ung"i biomolekul mengenai a"am nukleat ini
ilakukan i Laboratorium #iokimia'.epartemen #iokimia !akulta" ,atematika
an (lmu Pengeta0uan -lam+ (n"titut Pertanian #ogor& $aktu pelak"anaan
praktikum )aitu paa 0ari Jumat+ tanggal 22 an 29 November 2013 pukul 0%&00'
11&00 $(#&
#eberapa alat an ba0an igunakan alam praktikum ini& -lat'alat )ang
igunakan alam praktikum aala0 bak e"+ gela" piala+ tabung "entri8u"+
"entri8ugator+ pipet ,o0r+ bulb+ penanga" air+ stopwatch+ lemari peningin+ pipet
tete"+ vorteA+ tabung mikro8u"+ mikro8ugator an "pektro8otometer+ "eangkan
ba0an'ba0an )ang igunakan alam praktikum meliputi 0omogenat 0ati+ e" batu+
larutan H?l@
2
0&7 ,+ larutan 1@H 0&3 ,+ larutan H?l@
2
1&2 ,+ akuae"+ larutan
H?l@
2
0&2 ,+ pereak"i or"inol+ larutan "tanar ;N- 125 Bg/mL alam T?- 10C+
pereak"i i8enilamin+ larutan T?- 10C+ an larutan "tanar 500 Bg/mL&
Penentuan konsentrasi RNA dalam homogenat hati, Seban)ak 2&5 mL
0omogenat 0ati "api ipipet an ima"ukkan ke alam tabung "entri8u" )ang tela0
iinginkan+ kemuian itamba0kan 2&5 mL larutan H?l@
2
0&7 , ingin& Setela0
iko=ok "ampai rata+ i"impan i alam bak beri"i e" batu "elama 10 menit lalu
i"entri8u" paa ke=epatan 5000 rpm "elama 10 menit& Supernatan )ang terbentuk
ibuang+ lalu pelet )ang terbentuk i"u"pen"ikan engan 2 mL 1@H 0&3 ,
kemuian ima"ukkan ke alam penanga" air paa "u0u 20
o
? "elama 20 menit&
Selan<utn)a irenam i alam e" "elama 5 menit+ lalu itamba0kan "eban)ak 2&5
mL larutan H?l@
2
1&2 ,& Setela0 itu iko=ok+ an i"impan i alam e" "elama
10 menit& Su"pen"i ter"ebut kemuian ipina0kan ke alam tabung "entri8u"
ingin an i"entri8u" paa ke=epatan 5000 rpm "elama 10 menit& Pelet )ang
terbentuk i"u"pen"ikan kembali engan 10 mL larutan H?l@
2
0&2 , ingin lalu
i"impan i alam lemari peningin paa "u0u '20
o
? untuk per=obaan
"elan<utn)a&
Langka0 "elan<utn)a+ "upernatan )ang terbentuk igunakan "ebagai
"ampel& Tabung reak"i i"iapkan "eban)ak 2 bua0& Tabung 1 ii"i engan 3 mL
pereak"i or"inol+ lalu ipana"kan paa "u0u 100
o
? "elama 20 menit an
itamba0kan akuae" "eban)ak 2 mL& Tabung 2 ii"i engan 0&2 mL "upernatan+ 3
mL pereak"i or"inol+ lalu ipana"kan paa "u0u 100
o
? "elama 20 menit an
itamba0kan akuae" "eban)ak 3&% mL akuae"& Tabung 3 ii"i engan 0&5 mL
"upernatan+ 3 mL pereak"i or"inol+ lalu ipana"kan paa "u0u 100
o
? "elama 20
menit an itamba0kan akuae" "eban)ak 3&5 mL& Tabung 2 ii"i engan 0&3 mL
larutan "tanar ;N-+ 3 mL pereak"i or"inol+ lalu ipana"kan paa "u0u 100
o
?
"elama 20 menit an itamba0kan akuae" "eban)ak 3&5 mL& 1emuian
iinginkan i alam e" "ebentar+ lalu iukur ab"orban"in)a engan menggunakan
"pektro8otometer paa pan<ang gelombang 770 nm engan tabung 1 "ebagai
blanko&
Penentuan konsentrasi DNA dari homogenate hati, Su"pen"i pelet )ang
i"impan paa per=obaan "ebelumn)a iambil ari lemari e" an i"entri8u" paa
ke=epatan 5000 rpm "elama 10 menit& Supernatan 0a"il ari "entri8u" ter"ebut
kemuian ibuang+ "eangkan pelet i"u"pen"ikan kembali engan 2 mL larutan
H?l@
2
0&2 , ingin lalu ima"ukkan ma"ing'ma"ing 1 mL ke alam tabung
mikro8u" untuk kemuian imikro8u" paa ke=epatan 12000 rpm "elama 10 menit&
Setela0 itu+ "upernatan )ang terbentuk ibuang+ "ementara peletn)a ima"ukkan
ke alam penanga" air paa "u0u 100
o
? "elama 10 menit& Pelet ter"ebut kemuian
itamba0kan ma"ing'ma"ing 1 mL larutan H?l@
2
0&2 , ingin an imikro8u"
kembali paa ke=epatan 12000 rpm "elama 10 menit& Supernatan )ang terbentuk
akan igunakan untuk penentuan kanungan .N-&
Langka0 "elan<utn)a+ i"eiakan 2 tabung reak"i& Tabung 1 ii"i engan 2
mL pereak"i i8enilamin an 2 mL larutan T?- 10C& Tabung 2 ii"i engan 0&5
mL "upernatan+ 2 mL pereak"i i8enilamin+ an 3&5 mL larutan T?- 10C& Tabung
3 ii"i engan 1 mL "upernatan+ 2 mL pereak"i i8enilamin+ an 3 mL larutan
T?- 10& Tabung 2 ii"i engan 2 mL pereak"i i8enilamin+ 3&5 mL larutan T?-
10C+ an 0&5 mL larutan "tanar .N-& ,a"ing'ma"ing tabung iko=ok "e=ara
rata lalu ima"ukkan ke alam penanga" air paa "u0u %0
o
? "elama 30 menit&
Selan<utn)a iinginkan i alam e" lalu iukur ab"orban"in)a engan
menggunakan "pektro8otometer paa pan<ang gelombang 700 nm engan tabung
1 "ebagai blanko&
Hasil dan Pem-ahasan
Per=obaan mengi"ola"i an meng0itung kon"entra"i ;N- an .N- alam
0omogenat 0ati menggunakan prin"ip ker<a "entri8uga"i engan menggunakan alat
"entri8u"& ,etoe )ang igunakan alam i"ola"i komponen .N- atau ;N- i
alam "el aala0 91:pembukaan "el paa "ampel untuk mengeluarkan a"am
nukleatn)a+ 92:memi"a0kan a"am nukleat ari komponen "el )ang lain+ an
93:pemurnian a"am nukleat& ("ola"i 8ragmen .N- atau ;N- "pe"i8ik ari genom
"uatu organi"me apat igunakan untuk menentukan "ekuen" ba"a an mengeta0ui
8ung"in)a& Ta0apan pertama )ang 0aru" ilakukan untuk mengi"ola"i .N- aala0
engan meru"ak "el terlebi0 a0ulu& Peru"akan "el ter"ebut apat ilakukan
engan =ara mekanik )aitu iblener atau menggunakan ba0an kimia untuk
menegraa"i an melarutkan komponen ining "el& .N- akan terpi"a0 men<ai
"uatu larutan an apat imurnikan 9ipuri8ika"i: melalui ua =ara )ang umum
ilakukan )aitu "entri8uga"i an ek"trak"i kimia 9Du"u8 2001:&
Sentri8u" merupakan alat )ang igunakan untuk pro"e" memi"a0kan "uatu
=airan ari komponen utaman)a atau "ub"tan"i bera"arkan berat molekul engan
=ara pemberian ga)a "entri8ugal "e0ingga "ub"tan"i )ang lebi0 berat akan beraa
i bagian ba*a0 9pelet: "eangkan )ang lebi0 ringan beraa i ata" 9"upernatan:&
Sentri8u" teriri ata" rotor'rotor "ebagai tempat men)impan tabung beri"i larutan
)ang akan i"entri8u"& ;otor'rotor ini berputar paa ke=epatan tinggi an
bentukn)a "eperti komii putar& Sentri8uga"i ter"ebut ilakukan i alam me"in
"entri8u" engan ke=epatan )ang bervaria"i+ =onto0n)a 2500 rpm 9rotation per
minute: atau 3000 rpm& Setela0 memperole0 .N-+ i0itung kon"entra"i .N-
ter"ebut& Hal itu apat ilakukan engan penentuan kon"entra"i "e=ara kualitati8
)aitu engan menggunakan elektro8ore"i" an "e=ara kuantitati8 engan
menggunakan "pektro8otometri "pektrum >E 9#intang 2010:&
Homogenat 0ati igunakan alam per=obaan a"am nukleat ini karena "el
0ati menganung berbagai ma=am organel+ terutama inti "el& (inti "el ban)ak
menganung a"am nukleat )ang akan igunakan alm per=obaan "e0ingga akan
lebi0 mua0 untuk menapatkan i"olatn)a& Selain itu+ 0ati mempun)ai 8ung"i
penting alam pro"e" metaboli"me tubu0 )aitu 0ati memiliki peranan alam
men"inte"i" protein& Paa organ 0ati+ "inte"i" proteinn)a tinggi "e0ingga tingkat
;N-n)a <uga tinggi& Selain itu+ i 0ati <uga ter<ai reak"i en/imati" 9Su<ai an
Siti 2006:& Homogenat 0ati i<aga tetap alam keaaan ingin engan tu<uan
untuk memperlambat gerakan termal molekul en/im )ang terapat paa 0ati
"e0ingga apat men=ega0 an meng0ambat reak"i en/imatik )ang terapat paa
0ati 9Le0ninger 2002:& Penamba0an larutan a"am ingin )aitu H?l@
2
ingin
ber8ung"i untuk pengenapan a"am nukleat )ang merupakan makromolekul alam
per=obaan&
Per=obaan penentuan kon"entra"i ;N- illakukan pula penamba0an
reagen or"inol )ang bertu<uan untuk menimbulkan komplek" *arna akibat reak"i
)ang terbentuk engan gula ribo"a paa ;N-& 1omplek" *arna biru )ang
terbentuk ini apat iba=a paa "pektro8otometer >E engan pan<ang gelombang
770 nm& Pan<ang gelombang )ang igunakan aala0 770 nm an 700 nm karena
*arna )ang terbentuk ari "ampel )ang bereak"i engan pereak"i aala0 0i<au an
biru& ,enurut teori+ pan<ang gelombang untuk ab"orp"i mak"imum baik ole0
.N- maupun ;N- aala0 270 nm& Hal ini i"ebabkan karena aan)a ba"a
nitrogen )ang ber"i8at aromatik+ "eangkan 8o"8at an gula tiak memberikan
kontribu"i alam ab"orp"i ultraviolet& Selain itu+ perlakuan pana" paa "u0u 20
0
?
igunakan untuk memper=epat reak"i 0iroli"i" ;N-+ tetapi tiak menenatura"i
;N- "eangkan pemana"an paa "u0u 100F? ilakukan engan tu<uan
menegraa"i pelet 91oolman an ;oe0m 2005:&
Penentuan kon"entar"i ;N- engan menggunakan empat "ampel )ang
teriri ata" blanko+ "ampel 0&2 mL+ "ampel 0&3 mL+ an "tanar& #era"arkan 0a"il
pengukuran engan menggunakan "pektro8otometri iperole0 ab"orban"i ari
ma"ing'ma"ing "ampel )ang akan igunakan untuk meng0itung kon"entra"i ari
ma"ing'ma"ing "ampel& Ha"il ab"orban"i an kon"entra"i ter"ebut apat ili0at
paa Tabel 1 an Tabel 2&
Tabel 1 .ata kurva "tanar ;N-
Eolume Stanar 9mL: - Terukur - Terkorek"i G;N-H 9Bg/mL:
0 0&000 0&000 0
0&1 0&706 0&706 12&50
0&2 0&%95 0&%95 25&00
0&3 1&029 1&029 36&50
0&2 1&13% 1&13% 50&00
0&5 1&1%0 1&1%0 72&50
0&7 1&3%0 1&3%0 65&00
?onto0 per0itungan:
E1 A ,1 I E
2
A ,
2
0&1 mL A 500 Bg/mL I 2 mL A ,
2
,
2
I I 12&50 Bg/mL
4ambar 1 1urva "tanar kon"entra"i ;N-
Tabel 2 1on"entra"i ;N- 0ati a)am
Eolume "ampel
9mL:
- terukur - terkorek"i
G;N-H 9Bg/mL:
Penggunaan kurva
"tanar
Penggunaan "tanar
tunggal
0&2 0&1%6 0&1%5 2&0070 76&02%0
0&3 0&276 0&275 2&0326 97&0125
?onto0 per0itungan paa "ampel 0&2 mL:
a& 1on"entra"i ;N- engan penggunaan kurva "tanar
) I a J bA
-
terkorek"i
I a J bA
0&1%5 I ' 10&751 J 52&111 A
A I 0&2003
!P I I 20
G;N-H I A
&
!P
G;N-H I 0&2003
&
20 I 2&0070 Bg/mL
G;N- rata'rataH I 9 : Bg/mL I 2&0202 Bg/mL
b& 1on"entra"i ;N- engan penggunaan "tanar tunggal
I
I
G"ampelHI I 3&3512 Bg/mL
G;N-H I 1on"entra"i "ampel A !P
I 3&3512 A 20
I 76&02%0 Bg/mL
G;N- rata'rataH I 9 : Bg/mL I %1&5213 Bg/mL
#era"arkan per=obaan+ kaar ;N- i0itung engan per"amaan kurva
"tanar ) I 52&111A ' 10&751 engan nilai ;K "ebe"ar 0&%52% "e0ingga iperole0
kaar ;N- 0ati paa "ampel 2 an "ampel 3 berturut'turut )aitu 2&0070 Bg/mL
an 2&0326 Bg/mL "erta G;N-Hrata'ratan)a aala0 2&0202 Bg/mL "eangkan
0a"il per0itungan engan "tanar tunggal "ebe"ar 76&02%0 Bg/mL an 97&0125
Bg/mL engan G;N-Hrata'ratan)a "ebe"ar %1&5213 Bg/mL& Ha"il kurva "tanar
menun<ukkan "emakin ban)ak volume "ampel maka kon"entra"i ;N- "emakin
ban)ak karena volume an kon"entra"i berbaning luru" "e0ingga ab"orban"in)a
<uga "emakin be"ar&
Penentuan kon"entar"i .N- menggunakan empat "ampel )ang teriri ata"
blanko+ "ampel 0&5 mL+ "ampel 1&0 mL+ an "tanar& #era"arkan 0a"il
pengukuran engan menggunakan "pektro8otometri iperole0 ab"orban"i ari
ma"ing'ma"ing "ampel )ang akan igunakan untuk meng0itung kon"entra"i ari
ma"ing'ma"ing "ampel& Ha"il ab"orban"i an kon"entra"i ter"ebut apat ili0at
paa Tabel 3 an Tabel 2&
Tabel 3 1urva "tanar .N-
Sampel 9mL: -b"orban"i terukur -b"orban"i terkorek"i G.N-H 9Bg/mL:
0 9blanko: 0&001 0&000 0
0&2 0&075 0&072 25&00
0&2 0&075 0&072 50&00
0&5 0&069 0&06% 72&50
0&7 0&102 0&103 65&00
0&% 0&129 0&12% 100&00
1&0 0&167 0&165 125&00
?onto0 per0itungan:
E1 A ,1 I E
2
A ,
2
0&2 mL A 250 Bg/mL I 2 mL A ,
2
,
2
I
,
2
I 12&50 Bg/mL
Tabel 2 1on"entra"i .N- 0ati a)am
Eolume "ampel
9mL:
-terukur -terkorek"i
G.N-H 9Bg/mL:
Penggunaan kurva
"tanar
Penggunaan "tanar
tunggal
0&5 0&195 0&192 37%0 1030&0229
1&0 0&323 0&320 7220 1617&63%2
?onto0 per0itungan paa "ampel 0&5 mL:
a& 1on"entra"i .N- engan penggunaan kurva "tanar
) I a J bA
-
terkorek"i
I 0&00% J 0&001 A
0&192 I 0&00% J 0&001 A
A I 1%2
!P I I 20
G.N-H I A
&
!P
G.N-H I 1%2
&
20 I 37%0 Bg/mL
G.N- rata'rataH I 9 : Bg/mL I 2970 Bg/mL
b& 1on"entra"i .N- engan penggunaan "tanar tunggal
I
I
1on"entra"i "ampel I I 51&5021
G.N-H I 1on"entra"i "ampel A !P
I 51&5021 Bg/mL A 20
I 1030&0229 Bg/mL
G.N- rata'rataH I 9 : Bg/mL I 1363&3907 Bg/mL
;atio ;N-/.N-
kurva "tanar
I 9;ata'rata ;N-/rata'rata .N-: A 100C
I 92&0202/2970: Lg/mL A 100C
I 0&0%11 C
;atio ;N-/.N-
"tanar tunggal
I 9;ata'rata ;N-/rata'rata .N-: A 100C
I 9%1&5213/1363&3907: Lg/mL A 100C
I 5&935% C
#era"arkan per=obaan+ per"amaan kurva "tanar .N- aala0 ) I 0&001A
J 0&00% engan nilai ;K "ebe"ar 0&950 "e0ingga iperole0 kaar .N- 0ati paa
"ampel 0&5 mL an "ampel 1&0 mL berturut'turut aala0 37%0 Bg/mL an 7220
Bg/mL serta G.N-Hrata'ratan)a aala0 2970 Bg/mL "eangkan 0a"il per0itungan
engan "tanar tunggal "ebe"ar 1030&0229 Bg/mL an 1617&63%2 Bg/mL serta
G.N-Hrata'ratan)a aala0 1363&3907 Bg/mL& 1aar .N- alam 0ati lebi0 be"ar
aripaa kaar ;N-& 1on"entra"i .N- lebi0 be"ar aripaa ;N- karena i
alam "el <umla0 .N- lebi0 ban)ak aripaa ;N- an .N- ban)ak itemukan
i "el tubu0+ "eperti mitokonria an inti "el 9?ampbell et al& 2002:& #era"arkan
per0itungan <uga iketa0ui ba0*a ra"io ;N- engan .N- alam 0ati "ebe"ar
0&0%11 C paa per0itungan kurva "tanar an 5&935% C engan "tanar tunggal&
Ha"il per0itungan engan "tanar tunggal an kurva "tanar "angat berbea&
Per0itungan engan "tanar tunggal lebi0 "tabil ibaningkan engan kurva
"tanar& Hal ini ikarenakan paa per0itungan "tanar tunggal 0an)a
menggunakan "atu "tanar )ang iukur ab"orban"in)a untuk ibaningkan engan
"ampel "eangkan paa kurva "tanar "emua "tanar iukur terlebi0 a0ulu+ lalu
ibuat kurva "tanar "e0ingga ke"ala0an ari pengukuran kurva "tanar lebi0
be"ar&
,etoe lain untuk pemi"a0an .N- )aitu poliakrilamia an
agaro"a& Poliakrilamia memiliki kapa"ita" re"olu"i )ang lebi0 tinggi+ tetapi gel
poliakrilamia apat memi"a0kan .N- 0an)a alam rentang ukuran .N- )ang
"empit atau "atu pa"ang ba"a& 4el agaro"a memiliki re"olu"i )ang lebi0 rena0+
tetapi apat memi"a0kan .N- )ang berukuran "ampai pulu0an kilo pa"ang ba"a&
-garo"e merupakan poli"akaria )ang iek"trak ari rumput laut& >kuran pori
agaro"e "e"uai untuk pemi"a0an polimer a"am nukleat )ang ter"u"un ari ratu"an
nukleotia& Selain itu+ apat engan menggunakan pereak"i #ra8or& Si8at reagen
ini lebi0 prakti" an "en"iti8+ "elain itu <uga menganung /at *arna Coomassine
Brilliant Blue 4250 9?##4:& ;eagen ini akan mengikat protein "e=ara lang"ung
paa rantai "amping aromatik )ang menganung a"am amino tiro"ina+ tripto8an+
an 8enilalanina atau ber"i8at ba"a )aitu arginina+ 0i"tiina+ an leu"in 9#ra8or
1967:& 1aar protein terban)ak )ang terapat paa 0omogenat i"ebabkan karena
paa 0omogenat komponen "eln)a ma"i0 lengkap& @rganel'organel ma"i0 ban)ak
)ang terkanung alam 0omogenat "e0ingga memiliki kanungan protein paling
be"ar&
Sim.ulan
#era"arkan per=obaan iperole0 kaar ;N- alam 0ati paa "ampel 0&2
mL an "ampel 0&3 mL berturut'turut "ebe"ar 2&0070 Bg/mL an 2&0326 Bg/mL
"erta G;N-Hrata'ratan)a aala0 2&0202 Bg/mL "eangkan 0a"il per0itungan
engan "tanar tunggal "ebe"ar 76&02%0 Bg/mL an 97&0125 Bg/mL engan
G;N-Hrata'ratan)a "ebe"ar %1&5213 Bg/mL& 1aar .N- 0ati paa "ampel 0&5 mL
an "ampel 1&0 mL berturut'turut aala0 37%0 Bg/mL an 7220 Bg/mL "erta
G.N-Hrata'ratan)a aala0 2970 Bg/mL "eangkan 0a"il per0itungan engan
"tanar tunggal "ebe"ar 1030&0229 Bg/mL an 1617&63%2 Bg/mL "erta G.N-Hrata'
ratan)a aala0 1363&3907 Bg/mL "e0ingga kaar .N- lebi0 be"ar aripaa kaar
;N-& #era"arkan per0itungan+ iketa0ui pula ra"io ;N- engan .N- alam
0ati "ebe"ar 0&0%11 C paa per0itungan kurva "tanar an 5&935% C engan
"tanar tunggal&
Daftar Pustaka
#intang& 2010& Biokimia: Teknik Penelitian& Jakarta: 3rlangga&
#ra8or ,,& 1967& - ;api an Sen"itive ,et0o 8or t0e Muanti8i=ation o8
,i=rogram Muantitie" o8 Protein >tili/ing t0e Prin=iple o8 Protein')e
#ining& Journal of Analytical Biochemistry 62: 22%'252&
?ampbell N-+ ;ee=e',it=0ell&2002& Biologi disi !elima"Jilid #& Penerbit:
3rlangga
1oolman J an ;oe0m 1H& 2005& Colour Atlas of Biochemistry $
nd
d& Ne* Dork:
T0ieme&
Le0ninger -L& 2002& %asar"%asar Biokimia Jilid #& ,agg) T0ena*i<a<a+
pener<ema0& Jakarta: 3rlangga& Ter<ema0an ari: Principles of
Biochemistry&
,urra) ;& 2001& &arper's (e)iew of Biochemistry disi $*& 34?: Jakarta&
Ngili D& 2009& Biokimia: +truktur dan ,ungsi Biomolekul. Dog)akarta: 4ra0a
(lmu&
Poe<iai -& 2002& %asar"%asar Biokimia& Jakarta: >( Pre""&
Poe<iai - an Supri)anti !T& 2006& %asar"%asar Biokimia& Jakarta: >( Pre""&
Su<ai # an Siti L& 2006& Biologi -& Jakarta: Du0i"tira&
Du"u8 ,& 2001& .enetika %asar& Jakarta: ?E Sagung Seto&