Electroquimioluminiscencia ECL

Fundamento, sensibilidad, molculas utilizadas,

aplicaciones, ventajas, desventajas y limitaciones
Juan Carlos Sakihara
Mesa 3
Universidad Nacional Mayor De San Marcos

Universidad del Per, DECANA DE AMRICA
Facultad de Medicina
Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica
rea de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
Inmunologa y Vacunas
Fundamento de la Electroquimioluminiscencia.
Sensibilidad analtica.
Molculas utilizadas en los inmunoensayos.
Aplicaciones en pruebas inmunolgicas:
competitivos, sndwich y bridging.
Ventajas, desventajas y limitaciones.

Fundamento
Convertir energa elctrica en energa radiante
(luz).
Similar a fotoluminiscencia y
quimiolimuniscencia.
Mecanismos de Reaccin
ECL por Anihilacin (Rubrene,
Difenilantraceno)
ECL por Coreactante (Ru(bpy)
3
2+
/C
2
O
4
2-
,

Ru(bpy)
3
2+
/TPrA)
Luminiscencia Catdica (metales cubiertos de
xido)
Tipos de ensayo
Ensayo competitivo
Ensayo tipo sandwich
Ensayo puente
Sensibilidad
Lmite de deteccin entre picomolar (10
-12
) y
attomolar (10
-18
)
Depende de la metologa
Molculas utilizadas
Luminforos
Inorgnicos:
Quelatos de rutenio (Ru(bpy)
3
2+
, Ru(bpz)
3
2+
,
Ru-(bpy)
2
(CE-bpy)
2+
, (bpy)
2
Ru(AZAbpy)
2+
Complejos de osmio (Os(phen)
3
2+
, Os(bpy)
2
L
2+
)
Complejos de Iridio (Ir(ppy)
3
, )
Orgnicos:
Hidrocarbonos porliaromticos (Rubrene,
antraceno o (DPA)
steres de acridina (MFPA, BADE, SPBA)
Luminol (2,3-aminoftalhidrazida)
Polmeros orgnicos


Molculas utilizadas
Coreactantes
In oxalato (C
2
O
4
2-
)
Tris-n-propilamina (TPrA)
Guanina
S
2
O
8
2-

Aplicaciones
Ensayo Competitivo
Analitos de bajo peso molecular: fT
3
, fT
4
,
cortisol, testosterona, estradiol, etc.
Ensayo tipo Sandwich
Analitos de alto peso molecular: TSH, FSH, LH,
etc.
Ensayo tipo puente: Anticuerpos
Ventajas
Marcaje no isotpico muy estable
Gran sensibilidad
Rapidez
Amplio rango de deteccin
Aplicable a gran cantidad de analitos
Desventajas
Los metales de transicin (Ru, Ir, Os) tiene un
amplio espectro de emisin (dificulta los
multianlisis)
Costo
Limitaciones
Pueden haber problemas con la especificidad
para aminas. (coreactantes)
Hidrocarburos poliaromticos son poco
solubles.