RESI STANCE TO THE TI CK Bo o p h i l u s mi c r o p l u s

ON CATTLE I K COLOHBI A: SKI N TESTI NG TO SELECT

KESI STANT CATTLE UNDER TROPI CAL CONDI TI ONS
Ef r a i n Vi c e n t e BENAVI DES
Do c t o r o f Ph i l o s o p h y
Un i v e r s i t y o f Ed i n b u r g h
1989
DBCLASATI OH
E f r a i n Vi c e n t e Be n a v i d e s , d e c l a r e t h a t
t h i s t h e s i s wa s c ompos e d by m,
a n d t h a t t h e wo r k d e s c r l b e d
t b e r e i n wa s n y own .
T h i s t h e s i s i s d e d i c a t e d t o
n y w l f e Di a n a Ha r c e l a ,
w l t h l e v e , g r a t i t u d e a n d a p p r e c i a t i o n
f o r h e r p a t l e n c e t o l e r a n c e a n d s u p p o r t .
TABLE QF OCr r ENTS
Pa ge
LI ST OF FI GDSES i
LI S T OF TABLES vi
ABBREVI ATI ONS i x
ABSTSACT Xi
CSAPTER 1 GENERAL I NTRODDCTI C ? 1
C3I APTER 2 LI TERATUSE REVZEW 10
2. 1. Ti c k s a nd t i c k - b o r ne di s e a s e s 10
2. 1. 1. P r e l i mi na r y r e ma r k s
2. 1. 2. Co nt r o l o f t i c k s i n La t n Ame r i c a 13
2. 2. Re s i s t a nc e t o t i c k s 15
2. 2. 1. De f i n i t i o n 15
2. 2. 2. Me c ha ni s ms o f r e s i s t a nc e t o mi c r o p l u s
i n c a t t l e 16
2. 2. 3. He c ha ni s r a s o f r e s i s t a nc e t o o t h e r
s p e c i e s o f t i c k s 17
2. 3. T i c k c o n t r o l u s i ng r e s i s t a n t a ni m i s 20
2. 3. 1. l e a s u r e me nt o f r e s i s t a nc e 20
2. 3. 2. Fa c t o r s a f f e c t i n g t i c k nu mb e r s i n t h e
f i e l d 22
2. 3. 3. Ef f e c t s o f t h e u s e o f r e s i s t a n t a ni m i s
o n t i c k p o p u l a t i o ns 23
2. 3. 4. Fa c t o r s a f f e c t i n g r e s i s t a nc e 24
2. 4 . Ge ne t i c a s p e c t s o f r e s i s t a nc e 27
2. 4 . 1. H e r i t a b i l i t y 27
2. 4. 2. Cr e a t i o n o f t i c k r e s i s t a n t b r e e ds o f
c a t t l e 28
2. 4 . 3. Ne g a t i v e a s p e c t s o f s e l e c t i o n f o r
r e s i s t a nc e a nd g e ne t i c r aar k er s 30
2. 5. S k i n t e s t t o s e l e c t a ni m i s r e s i s t a n t t o t h e
t i c k 33
2. 5. 1. Hi s t o r y a nd p r i n c i p i e s o f t h e s k i n t e s t 33
2. 5. 2. Hy p e r s e n s i t i v i t y r e s p o ns e s a nd t i c k
i n f e s t a t i o n 36
CHAPTER 3 GENERAL NATERI ALS AND HETHODS 38
3 , 1. La b o r a t o r y c o l o ny o f t h e t i c k Bo o p h i l u s
mi c r o p l u s 38
3. 1. 1. Ba s i c c o l o ny 38
3. 1. 2. P r o c e d u r e t o e l i ml n a t e t he i n f e c t i o n
w l t h ha e mo p a r a s i t e s f r o m t he t i c k c o l o n y 41
3. 1. 3. De t e r mi n a t i o n o f s u s c e p t i b i l i t y t o
mi c r o p l u s t i c k s 42
3 . 2 . P r o t e i n e s t i ma t l o n 43
3 . 2 - 1 . The B r a d f o r d p r o t e i n a s s a y me t ho d 44
3. 2. 2. The Be a r d e n p r o t e i n a s s a y me t ho d 44
3. 3. P r e p a r a t i o n o f s a l i v a r y g l a n d ho mo g e n a t e s f r o m
f e ma l e t i c k s 46
3 . 3 . 1 . Di s s e c t i o n o f s a l i v a r y g l a n d s 46
3. 3. 2. S a l i v a r y g l a n d ho mo g e n a t e s ( GSG) 46
3. 3. 3. P ho s p ha t e B u f f e r e d S a l i n e ( PBS ) 47
3 . 4. P o l y a c r y l a mi d e g e l e l e c t r o p ho r e s i s ( SDS- PAGE) 47
3 . 4. 1 . S e p a r a t i n g g e l 47
3. 4. 2. Co o ma s s i e b l u e s t a l n 48
3. 4. 3. S i l v e r s t a i n 48
3. 4. 4. Ca l c u l a t i o n o f p r o t e i n Mo l e c u l a r We i g ht s 49
3 . 5 . I d e n t i f i c a t i o n o f t i c k a n t i g e n s u s i n g We s t e r n
b l o t t i n g 49
3 . 6. En zy me l i n k e d i mmu n o s o r b e n t a s s a y ( ELI S A) 5 0
3 . 6. 1 , Ge n e r a l p r o t o c o 1 f o r t he t e s t 5 1
3 . 6. 2 , Co n c e n t r a t i o n o f a n t i g e n u s e d i n t he
ELI S A t e s t 5 2
3 . 6. 3 . P o s i t i v e a n d n e g a t i v e r e f e r e n c e s e r a
a n d t hr e s ho l d c u t - o f f f o r p o s i t i v e
v a l e s 5 3
3. 6. 4. Ca l c u l a t i o n o f e n d p o i n t t i t r e s u s i n g a
r e f e r e n c e c u r v e 5 5
3. 7. P r o c e s s i n g o f s k i n b i o p s i e s c t nd c e l l c o i mt s 5 6
3 . 8. Te c hn i q u e s f o r d l a l y s i s a n d c o n c e n t r a t i o n o f
p r o t e i n s 5 6
3. 9. Ge n e r a l s t a t l s t i c a l me t ho d s 5 8
CHAPTER4 FARTI AL VUSLITICATICM ANDCHASACTERI ZATI ON OF
TI CK DERI VED PROTEI NS USI NG CHRCmTOGRAPHI C
HETHODS 60
Summa r y 60
4. 1 . I n t r o d u c t i o n 60
4. 2 . Ma t e r i a l s a n d me t ho d s 62
4. 2 . 1 . Ti c k s 62
4. 2 . 2 , P r e p a r a t i o n o f c r u d e e x t r a c t s 62
4. 2 . 2 . 1 . P r e l i mi n a r y d e v e l o p me n t s a t CTVM 62
4. 2 . 2 . 2 . P r e p a r a t i o n o f mi c r o p l u s
l a r v a l e x t r a c t s a t LI HV 67
t i c k homoge na t e s u s i n g
c h r o ma t o g r a p h i c
a t
4 . 2 . 3 . S e p a r a t i o n o f
a n i o n - e x c h a n g e
t e c h n i q u e s
4 . 2 . 3 . 1 . P r e l i mi n a r y d e v e l o p me n t s a t CTVH
4 . 2 . 3 . 2 . Ch r o ma t o g r a p h i c s e p a r a t i o n s
LI HV
4 . 2 . 4 . P r o t e i n E s t i ma t l o n
4. 2. 5 P a r t i a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f
s e p a r a t e d p r o t e i n s u s i n g
e l e c t r o p h o r e s i s a n d t h e r e c o g n i t i o n
a n t i g e n s h y i mmu ne s e r a
t h e
g e l
o f
4 . 3 . R e s u l t s
4 . 3 . 1 . F r a c t i o n a t i o n o f p r o t e i n s f r o m ^
a p p e n d i c u l a t u s l a r v a l e x t r a c t s a n d
s a l i v a r y g l a n d h o mo g e n a t e s
4 . 3 . 2 . F r a c t i o n a t i o n o f mi c r o p l u s l a r v a l
e x t r a c t s
4 . 3 . 2 . 1 . Ch r o ma t o g r a p h i c s e p a r a t i o n s
p e r f o r me d a t CTVM
4 . 3 . 2 . 2 . Ch r o ma t o g r a p h i c s e p a r a t i o n s
p e r f o r me d a t LI MV
4 . 4 . Di s c u s s i o n
67
69
69
70
70
7 1
7 1
77
77
83
93
CHAPTER 5 PRELI MI NARY E VALUATI C ! OF S KI N TEST METHODS
USI NG A S MAU ANI MAL HQDEL AND A THREE- HOST
TI CK 98
Su mma r y
5 . 1 . I n t r o d u c t i o n
98
99
5 . 2 . Ma t e r i a l s a n d me t hod s
5 . 2 . 1 . R a b b i t s
5 . 2 . 2 . Ti c k s
5 . 2 . 3 . De t e r mi n a t i o n o f t i c k f e e d i n g s u c c e s s
5. 2. 4. S k i n t e s t
5 . 2 . 4 . 1 . P r o t e i n s u s e d a s i n o c u l a
5 . 2 . 4 . 2 . P r o t o c o l u s e d f o r t h e s k i n t e s t
5 . 2 . 5 . S k i n b i o p s i e s
5. 2. 6. E x a mi n a t i o n o f s e r a f o r a n t i b o d i e s
s a l i v a r y a n t i g e n b y ELI S A
t o
5 . 3 . R e s u l t s
5 . 3 . 1 . Ti c k f e e d i n g p e r f o r ma n c e
5 . 3 . 2 . S k i n h y p e r s e n s i t i v i t y r e a c t i o n s
5 . 3 . 2 . 1 . P a t t e m o f t h e e v o l u t i o n i n t i me a n d
c o mp a r i s o n o f t h e p a r a me t e r s u s e d t o
me a s u r e t h e r e a c t i o n s
5 . 3 . 2 . 2 . Co mp a r i s o n o f t h e r e a c t i v i t y t o e a c h
o f t h e ma t e r i a l s a c c o r d i n g t o t h e
t y p e o f p r e v l o u s e x p o s u r e t o t i c k s
o f t h e r a b b i t s
1 01
1 01
1 0 1
1 06
1 06
1 07
1 08
108
1 09
1 09
1 1 8
1 1 8
1 21
5 . 3 . 2 . 3 . C e l l u l a r c h a n g e s a s s o c i a t e d w i t h
t h e h y p e r s e n s i t i v i t y r e s p o n s e s
5. 3. 3. S t u d y o f t h e r e l a t i o n s h i p b e t we e n s k i n
h y p e r s e n s i t i v i t y r e s p o n s e s a n d t h e l e v e l
o f r e s t r i c t i o n o f t h e f e e d i n g o f t h e
t i c k s o n i n d i v i d u a l r a b b i t s
5. 3. 4. An t i b o d y l e v i s t o t h e s a l i v a r y g l a n d
h o mo g e n a t e , a n d t h e i r r e l a t i o n s h i p w i t h
t i c k r e s i s t a n c e a n d w i t h t h e r e s p o n s e s
i n t h e s k i n t e s t
5 . 4. Di s c u s s i o n
5 . 5 . C o n c l u s i o n s
125
129
134
135
138
CHAPTER6 PSELI HI MASY EVALUATI CXf OF THE RESFCffSES
I MDDCED B TBE I NOCDLATI ON OF LARVAL
Bo o p h i l u s mi c r o p l u s ANTI GEMS PRI FI ED BYANI ON-
EXCHANGE CHRONATOGRAPHY
Su mma r y
6. 1 . I n t r o d u c t i o n
6. 2 . Ma t e r i a l s a n d me t h o d s
6. 2 . 1 . Ex p e r i me n t a l d e s i g n a n d c h r o n o l o g y o f
t h e s k i n t e s t
6. 2 . 2 . Ex p e r i me n t a l a n i m i s
6. 2 . 3 . S k i n t e s t s
6. 2 . 4 . A c q u i s i t i o n o f d a t a o n s u s c e p t i b i l i t y
t o t h e t i c k i n t h e e x p e r i me n t a l a n i m i s
6. 3 . Re s u l t s
6. 3 . 1 . Dy n a mi c s o f s k i n r e a c t i o n s e i i c i t e d b y
t h e a n t i g e n s
6. 3 . 2 . Re l a t i o n s h i p o f t h e r e s p o n s e s i n t h e
s k i n t e s t a n d t h e d a t a o n s u s c e p t i b i l i t y
t o t h e t i c k
6. 3 . 3 . Ef f e c t o f d i f f e r e n t d o s e s o f t h e
a n t i g e n s o n t h e s k i n t e s t r e s p o n s e s a n d
o n t h e i r c o r r e l a t i o n w i t h t i c k
s u s c e p t i b i l i t y , me a s u r e d i n a g r o u p o f
12 Ho l s t e i n c a l v e s
6. 4 . Di s c u s s i o n
6. 5 . C o n c l u s i o n s
CHAPTER7 ACQDI SI TI ? OF RESI STANCE TO Bo o p h i l u s
mi c r o p l u s I NYEARLI NGS AND ASSOCI ATED CHANGES
I N THEDERHAL RESPCXI SES TOTI CK ANTI GENS
Su mma r y
7. 1 . I n t r o d u c t i o n
140
140
140
141
141
142
142
145
146
146
149
151
155
161
162
162
162
7 . 2 . Ma t e r i a l s a nd me t h o ds 164
7 . 2 . 1. E x p e r i me nt a l a ni m i s 164
7 . 2 . 2 . E x p e r i me nt a l de s i g n 164
7 . 2 . 3 . Me a s ur e me nt o f s u s c e p t i b i 1 i t y t o t h e
t i c k 166
7 . 2 . 4. S k i n t e s t 169
7 . 2 . 5 . De t e r mi na t i o n o f a n t i b o d i e s t o s a l i v a r y
a nt i g e ns a f t e r r e p e a t e d e x p o s u r e o f t h e
a ni m i s t o t h e t i c k 170
7 . 2 . 6. S t a t i s t i c a i a n a l y s i s 170
7 . 3 . Re s u l t s 17 1
7 . 3 . 1. A c q u i s i t i o n o f r e s i s t a n c e a f t e r r e p e a t e d
e x p o s u r e t o t h e t i c k 17 1
7 . 3 . 2 . E v o l u t i o n o f t h e s k i n r e a c t i v i t y t o t h e
i n j e c t e d a nt i g e ns a f t e r r e p e a t e d
e x p o s u r e o f t h e c a l v e s t o t h e t i c k 173
7 . 3 . 3 . De v e l o p me nt o f a n t i - t i c k a n t i b o d i e s on
t h e c a l v e s r e p e a t e dl y s k i n t e s t e d a nd
e x p o s e d t o t h e t i c k 176
7 . 3 . 4. S t u dy o f t h e r e l a t i o n s h i p b e t we e n t h e
a c q u i r e d r e s i s t a n c e t o t h e t i c k ^ t h e
de r ma l r e s p o ns e s i n t h e s k i n t e s t a nd
t h e l e v e l o f a n t i - t i c k a n t i b o d i e s i n t h e
a ni m i s 178
7 . 4. Di s c u s s i o n 184
7 . 5 . Co nc l u s i o ns 191
CHAPTER 8 EVALUATI OT OF THE S KI TEST RE ACTI VI T QF
DI FFERS r r FROTEI NACBODS MATERI ALS FDRI FI ED BY
CHR( mTOGRAFHY CI DEAE- SEPHADEX FBO LARVAE
OF THE TI CK Bo o p h i l u s mi c r o p l u s 194
Summa r y 194
8. 1. I n t r o d u c t i o n 194
8. 2 . Ma t e r i a l s a nd me t h o ds 195
8. 2 . 1. De s i g n o f t h e e x p e r i me nt s 195
8. 2 . 2 . E x p e r i me nt a l a ni m i s a nd p a s t u r e s 198
8. 2 . 3 . S k i n t e s t s 200
8. 2 . 4. Ti c k c o u nt s 2 01
8. 3 . Re s u l t s 202
8. 3 . 1. S k i n t e s t r e s p o ns e s 202
8. 3 . 2 . Me a s ur e me nt o f s u s c e p t i b i l i t y t o t h e
t i c k 204
8. 3 . 3 . R e l a t i o n s h i p b e t we e n s k i n t e s t r e s p o ns e s
a nd t h e s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k 207
8. 4. Di s c u s s i o n 216
8 . 5 . Co n c l u s i o n s 222
CHATSR 9 COSPASI SCm QF THSEE EI BODS TO EVALUATE THE
RESI STANCE TO Bo o p h i l u s mi c r o p l u s ON
CR05SBSED CATTLE UNDERFI KLD CONDI TI ONS 226
Su mmar y 226
9 . 1 . I n t r o d u c t i o n 226
9. 2. Ma t e r i a l s a n d me t h o d s 227
9. 2. 1 . Ex p e r i me n t a l a n i m i s a n d p a s t u r e s 227
9. 2. 2. Ex p e r i me n t a l d e s i g n 228
9. 2. 3 . Ti c k c o u n t s 229
9. 2. 3 . 1 . Ti c k c o u n t s f r o m a r t i f i c i a l a n d
f i e l d i n f e s t a t i o n s o f t h e a n i m i s 229
9. 2. 3 . 2. Es t i ma t l o n o f t h e l e v e l o f
c o n t a mi n a t i o n o f t h e p a s t u r e s w i t h
t i c k l a r v a e 231
9. 2. 4 . Sk i n t e s t 233
9. 2. 5 . De t e r mi n a t i o n o f a n t i b o d i e s t o s a l i v a r y
a n t i g e n s o f t h e t i c k 234
9. 2. 6. Me t e o r o l o g i c a l r e c o r d s 234
9. 3 . Re s u l t s 234
9. 3 . 1 . Su s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k 234
9. 3 . 2. Sk i n t e s t r e s p o n s e s 238
9. 3 . 3 . An t i - t i c k a n t i b o d i e s i n t h e e x p e r i me n t a l
a n i m i s a n d c h a n g e s i n t h e t i t r e s i n t h e
v a r i o u s t e s t 242
9. 3 . 4 . An a l y s i s o f t h e c o r r e l a t i o n s h i p b e t we e n
1 e v e 1 s o f r e s i s t a n c e t o t h e t i c k ,
r e s p o n s e s i n t h e s k i n t e s t s a n d t i t r e o f
a n t i - t i c k a n t i b o d i e s 24 4
9. 3 . 5 . Me t e o r o l g i c a ! r e c o r d s 25 1
9. 4 . Di s c u s s i o n 25 1
9. 5 . Co n c l u s i o n s 256
CHAPTER 1 0 GENERAL DI SCUSSI ON 258
ACKN0HLED3I ENTS 269
REFEREKCES 271
APFEHDI X 284
i
LI S T OF FI GBE S
Pa ge
FI GUSE 1 . 1 . Hap o f t h e R e p i i b l i c o f Col or a b i a s h owi n g t h e
ma j or e c o l o g i c a l r e a s o f t h e c o u n t r y
FI GDI E 1 . 2. L o c a t i o n o f La L i b e r t a d , T i b a i t a t A a n d LI HV
FI GURE 1 . 3. Ge n e r a l c h r o n o l o g y o f t h e e x pe r i me n t s
c on d u c t e d i n t h i s t h e s i s
FI GURE 3 . 1 . Fe e d i n g a n d o v i p o s i t i n g pe r f or ma n c e o f t h e
l a b o r a t o r y c o l o n y o f Bo o p h i l u s mi c r o p l u s
FI GURE 3. 2. C a l i b r a t i o n c u r v e s t o e s t ma t e p r o t e i n
c o n c e n t r a t i o n i n mi c r og r a ms c o n c e n t r a t i o n s
FI GURE 3. 3. T i t r a t i o n o f kn own p o s i t i v e a n d n e g a t i v e s e r a
t o d e t e r mi n e t h e o p t i ma l c o n c e n t r a t i o n o f
a n t i g e n i n t h e ELI SA t e s t
FI GURE 3. 4 . P r e p a r a t i o n o f a s t a n d a r d c u r v e t o c a l c l a t e
t h e e n d p o i n t t i t r e o f s e r a b a s e d on t h e
a b s or b a n c e a t t h e wo r k i n g d i l u t i o n
FI GURE 4 . 1 . He t h od s f o r p r e p a r a t i o n a n d f r a c t i o n a t i o n o f
l a r v a l e x t r a c t f r o m t i c k s
a ) P r e p a r a t i o n o f t h e c r u d e l a r v a l e x t r a c t s
b ) F r a c t i o n a t i o n b y p r e c i p i t a t i o n a t d i f f e r e n t
c o n c e n t r a t i o n s o f ammon i u m s u l p h a t e
FI GURE 4 . 2. Ch r oma t ogr a m o f R^ a p p e n d i c u l a t u s l a r v a l
e x t r a c t s i n DE- 52
FI GURE 4 . 3. SDS- PAGE p r o t e i n p r o f i l e s o f R.
a ppe n d i c l a t u s - d e r i v e d ma t e r i a l s s e p a r a t e d b y
c h r oma t og r a ph y
Chr ot RaX- ogr am o i " k^ a p i p e n L c >\ l at u s
g l a n d h omoge n a t e s i n . DE- b 2.
a a l i v a r y
4 0
4 5
54
57
6 3
6 4
7 2
7 3
7 5
FI GURE 4 . 6 .
FI GUSE 4. 7.
FI GOSS 4. 6.
o f f r a c t i o n a t i o n u s i n g DE- 52 ^
f r o m' f h f ? ' ' ^ f d i f f e r e n t ma t e r i a l s e x t r a c t a d
f r om t h e t i c k R^ a p p e n d i c u l a t w
n^'l^lT^- ^ I c r o e l s l a r v a i e x t r a c t s
SDS- PAGE pr ot e i n pr of i l e of mi cr opl us
7 6
78
8 0
i i
l a r v a l e x t r a c t s a t d i f f e r e n t s t a g e s of
f r a c t i o n a t i o n 8 1
F I GE 4. 9.
FI GUBE 4. 1 0.
FI GUSE 4 . 1 1 .
FI GUSE 4. 1 2.
FI GUSE 4. 1 3.
We s t e r n b l o t of d i f f e r e n t ma t e r i a l s e x t r a c t e d
f r om t he t i c k a p p e n d i c u l a t u s b y
c hr oma t og r a p hy i n DE- 52 82
Chr oma t og r a m of mi c r op l u s l i r v a l e x t r a c t s
( 6 5% ASP) i n DEAE- Se p ha d e x A- 50 8 4
Chr oma t og r a m of B^ mi c r op l u s l a r v a l e x t r a c t s
( 35% ASP) i n DEAE- Se p ha d e x A- 50 85
SDS- PAGE p r o t e i n p r o f i l e of v a r i ou s i s o l a t e s
of t he ma t e r i a l D2 a n d d e n d r og r a m of t he
I n d i c e s of s l m i l a r i t y 8 9
De n d r og r a ms of t he I n d i c e s of s i m i l a r i t y
b e t we e n v a r i ou s i s o l a t e s of t he ma t e r i a l s P l ,
P3 a n d P4 90
FI GUSE 4. 1 4. De n d r og r a ms of t he I n d i c e s of s i m i l a r i t y
b e t we e n v a r i ou s i s o l a t e s of t he ma t e r i a l s P5,
P6 a n d D2 91
FI GUSE 4. 1 5. SDS- PAGE p r o t e i n p r o f i l e of ma t e r i a l s p u r i f i e d
f r om B^ mi c r op l u s l a r v a e b y c hr oma t og r a p hy i n
DEAE- Se p ha d e x A- 50 a n d We s t e r n b l o t of t he
s a me ma t e r i a l s 92
FI GURE 5 . 1 . Comp a r i s on of R^ a p p e n d i c u l a t u s t i c k s f e d on
n a i v e or r e s i s t a n t r a b b i t s 1 1 2
FI GURE 5. 2. T i c k f e e d i n g s u c c e s p a r a me t e r s of Rj _
a p p e n d i c u l a t u s f e d on r a b b i t s p r e v i ou s l y
e x p os e d t o d i f f e r e n t i n s t a r s of t he t i c k 115
FI GURE 5. 3. Gr a p hi c t e s t of n or ma l d i s t r i b u t i o n of
f e e d i n g s u c c e s s p a r a me t e r s
t i c k
1 1 7
FI GURE 5. 4. H y p e r s e n s i t i v i t y r e s p on s e s t o p r o t e i n s d e r l v e d
f r om R^ a p p e n d i c u l a t u s i n t he s k i n of a
r e s i s t a n t r a b b i t 1 1 9
FI GURE 5. 5. Dyn a mi c s of t he s k i n t e s t r e a c t i on s t o
a p p e n d i c u l a t u s - d e r i v e d p r o t e i n s i n r a b b i t s
p r e v i ou s l y e x p os e d t o t he t i c k 1 20
FI GURE 5. 6 . Sk i n h y p e r s e n s i t i v i t y r e a c t i on s t ot he
a p p e n d i c u l a t u s - d e r i v e d ma t e r i a l s PKl , PK2 a n d
GSG i n r a b b i t s e x p os e d t o t he t i c k , a n d
q u ot e d a s t o t a l r e a c t i o n 1 22
i i i
FI GURE 5. 7.
FI GURE 5. 8.
FI GURE 5. 9.
FI GURE 5. 10.
FI GURE 6 . 1 .
FI GURE 6. 2.
Dy n a mi c s o f s k i n t e s t r e a c t i o n s t o GSG i n
r a b b i t s e x p os e d t o d i f f e r e n t i n s t a r s o f R.
a p p e n d i c u l a t u s 123
Comp a r i s on o f 3 p a r a me t e r s t o me a s u r e t h e s k i n
t e s t r e a c t i o n s i n r a J a b i t s e x p os e d t o d i f f e r e n t
i n s t a r s o f R^ a p p e n d i c u l a t u s 124
Dy n a mi c s o f s k i n t e s t r e a c t i o n s t o GSG, PKl
a n d FK2 me a s u r e d a s t o t a l r e a c t i o n i n r a b b i t s
e x p os e d t o d i f f e r e n t i n s t a r s o f R^
a p p e n d i c u l a t u s 126
Di f f e r e n t i a l c e l l c o i mt s i n s k i n b i o p s i e s t a k e n
a t t h e s k i n t e s t i n g s i t e s i n a n i mmxu i e r a b b i t 128
Pe r f or ma n c e o f t h e s k i n t e s t on c a l v e s 143
Dyna mi c s o f t h e s k i n r e s p on s e s t o B.
mi c r o p l u s - d e r l v e d a n t i g e n s i n 21 H o l s t e i n
c a l v e s a n d 5 c r i o l l o c ows 147
FI GURE 6. 3, Dy n a mi c s o f t h e s k i n t e s t r e s p on s e s t o c r u d e
e x t r a c t s o f e i t h e r l a r v a e o f s a l i v a r y g l a n d i n
21 H o l s t e i n c a l v e s a n d 5 c r i o l l o c ows 148
FI GURE 6. 4, Gr a p hi c t e s t f o r n or ma l d i s t r i b u t i o n f o r t h e
s u s c e p t i b i 1 i t y t o t h e t i c k B^ mi c r o p l u s
me a s u r e d on 26 a n i m i s p r e v i o u s l y e x p os e d t o
t h e t i c k 150
FI GURE 6. 5. J o i n t d i s t r i b u t i o n o f me a s u r e s o f
s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k B. mi c r op l u s a n d
s k i n t e s t r e a c t i o n t o ma t e r i a l s PK3 a n d GSG 153
FI GURE 6, 6. Re l a t i o n s h i p b e t we e n s i z e o f t h e s k i n t e s t
r e a c t i o n a n d t h e d i l u t i o n o f t h e a n t i g e n ,
me a s u r e d i n 12 H o l s t e i n c a l v e s 154
FI GURE 6. 7. Ef f e c t s on t h e c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t wi t h
s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k B^ mi c r o p l u s o f
d i f f e r e n t p a r a me t e r s u s e d t o me a s u r e t h e s k i n
r e a c t i o n 159
FI GURE 7 . 1 . Ex p e r i me n t a l s i t e a n d a n i m i s u s e d t o s t u d y
t h e a c q u i s i t i o n o f r e s i s t a n c e t o B^ mi c r o p l u s
a n d t h e a s s o c i a t e d c ha n g e s i n t h e s k i n t e s t
r e s p on s e s 165
FI GURE 7. 2. Ar r a y o f t h e e x p e r i me n t " a c q u i s i t i o n o f
r e s i s t a n c e t o B^ mi c r o p l u s i n y e a r l i n g s a n d
a s s o c i a t e d c ha n g e s t o d e r ma l r e s p on s e s t o t i c k
a n t i g e n s " 167
i v
FI GDHE 7 . 3 . C u r v i l i n e a r r e g r e s s i o n o f t h e s u s c e p t i b i l i t y
t o t h e t i c k o n c a l v e s r e p e a t e d l y e x p o s e d t o
l a r v a e 1 72
FI GURE 7 . 4 . S k i n r e a c t i v i t y t o a n t i g e n s d e r i v e d f r o m
mi c r o p l u s o n c a l v e s i n c r e a s i n g l y e x p o s e d t o
t i c k l a r v a e . Di a me t e r o f r e a c t i o n 1 74
FI GURE 7. 5.
FI GURE 7. 6.
FI GURE 7 . 7 .
FI GURE 7 . 8.
FI GURE 8 . 1 .
S k i n r e a c t i v i t y t o a n t i g e n s d e r i v e d f r o m
mi c r o p l u s o n c a l v e s i n c r e a s i n g l y e x p o s e d t o
t i c k l a r v a e . C o mp i l e d r e a c t i o n
Re g r e s s i o n o f t h e s k i n r e s p o n s e s a t 30 mi n u t e s
t o l a r v a l d e r i v e d a n t i g e n s o n c a l v e s
r e p e a t e d l y e x p o s e d t o B^ mi c r o p l u s
Ev o l u t i o n o f a n t i b o d y t i t r e s t o GSG o n c a l v e s
s e q u e n t i a l l y e x p o s e d t o B^ mi c r o p l u s l a r v a e
Re g r e s s i o n t o p r e d i c t t h e n o r ma l s k i n
t h i c k n e s s o n c a l v e s r e p e a t e d l y e x p o s e d t o t h e
t i c k B^ mi c r o p l u s
Ex p e r i me n t a l a n i m i s a n d
r e s e a r c h c e n t r e La Li b e r t a d
p a s t u r e s a t t h e
1 75
1 77
1 79
1 85
1 9 9
FI GURE 8. 2 . De r ma l r e a c t i o n s i n c a t t l e t o t h e i n o c u l a t i o n
o f a n t i g e n s d e r i v e d o f B^ mi c r o p l u s l a r v a e .
( Ma t e r i a l s p u r i f i e d a t LI MV) ' 2 03
FI GURE 8. 3 . Di s t r i b u t i o n o f c o u n t s o f s t a n d a r d B^
mi c r o p l u s t i c k s o n t wo g r o u p o f c a t t l e e x p o s e d
t o t h e t i c k u n d e r n a t u r a l c o n d i t i o n s .
( Ex p e r i me n t o n e ) 2 06
FI GURE 8. 4 . Di s t r i b u t i o n o f c o u n t s o f s t a n d a r d B^
mi c r o p l u s t i c k s o n t wo g r o u p s o f c a t t l e
e x p o s e d t o t h e t i c k u n d e r n a t u r a l
c o n d i t i o n s . ( Ex p e r i me n t t wo ) 2 08
FI GURE 8. 5. Co mp a r i s o n o f d i s c r i mi n a t i v e e f f i c i e n c y o f
s k i n t e s t t o d e t e c t c a t t l e whi c h d i s p l a y
r e s i s t a n c e t o t h e t i c k mi c r o p l u s .
( Ex p e r i me n t o n e ) 2 1 7
FI GURE 8. 6. Co mp a r i s o n o f d i s c r i mi n a t i v e e f f i c i e n c y o f
s k i n t e s t t o d e t e c t c a t t l e whi c h d i s p l a y
r e s i s t a n c e t o t h e t i c k B^ mi c r o p l u s .
( Ex p e r i me n t t wo ) 2 1 8
FI GURE 8. 7 . Me a s u r e me n t o f s k i n t e s t r e a c t i o n s o n c a t t l e
wi t h d i f f e r e n t d e g r e e s o f r e s i s t a n c e t o t h e
t i c k 2 2 3
V
FI GUSE 9 . 1 . Ar r a n g e r a e n t s t o e s t ma t e n umbe r s o f t i c k
l a r v a e on t h e e x p e r i me n t a l p a d d oc k a t La
Li b e r t a d 2 3 2
FI GUSE 9 . 2 . Ke a n l e v i s o f s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k
mi c r o p l u s on 3 3 c a t t l e g r a z e d u n d e r t r o p i c a l
c o n d i t i o n s a n d a s s e s s e d r e p e a t e d l y 2 3 5
FI GUSE 9 , 3 . Sk i n t e s t r e s p on s e s on c a t t l e r e p e a t e d l y
t e s t e d u n d e r f i e l d c o n d i t i o n s . Di a me t e r o f
r e a c t i o n 2 3 9
FI GUSE 9 , 4 . Comp a r i s on o f t wo p a r a me t e r s u s e d t o me a s ur e
d e l a y e d h y p e r s e n s i t i v i t y r e a c t i o n s t o t i c k
d e r i v e d a n t i g e n s on c a t t l e r e p e a t e d l y t e s t e d
FI GURE 9 . 5. Comp a r i s on o f r e a c t i v i t y i n t h e s k i n t e s t
a c c o r d i n g t o t h e b r e e d on c a t t l e r e p e a t e d l y
t e s t e d a t f i v e we e k i n t e r v a l s
2 4 1
2 4 3
FI GUSE 9 . 6 , He t e o r o l o g i c a l d a t a a t La Li b e r t a d r e s e a r c h
c e n t r e . V i l l a v i c e n c i o 2 52
v i
LI ST OF TABLES
P a g
TABLE 4 . 1 . P r e p a r a t i o n o f e x t r a c t s f r o m a p p e n d i c u l a t u s
a n d B^ mi c r o p l u s t i c k s a t CTVH
TABLE 4 . 2 . P r e p a r a t i o n o f e x t r a c t s f r o m B^ mi c r o p l u s
l a r v a e a t LI HV
6 5
6 8
TABLE 4 . 3 . P r o t e i n c o n c e n t r a t i o n o f f r a c t i o n s o f B^
mi c r o p l u s l a r v a l e x t r a c t s a f t e r c h r o ma t o g r a p h y
o n DEAE- Se p ha d e x A- 5 0 8 6
TABLE 5 . 1 . R g i me n o f e x p o s u r e t o t i c k s t o i mmu n i z e
r a b b i t s a g a i n s t d i f f e r e n t i n s t a r s o f R^
a p p e n d i c u l a t u s 1 02
TABLE 5 . 2 . Ch r o n o l o g y o f t h e e x p e r i me n t , " p r e l i mi n a r y
e v a l u a t i o n o f s k i n t e s t me t h o d s u s i n g a s ma l l
a n i m i s mo d e l a n d a t h r e e - h o s t t i c k " 1 03
TABLE 5 . 3 . Fe e d i n g p e r f o r ma n c e o f n y mp h s o f R^^
a p p e n d i c u l a t u s o n r s b i t s p r e v i o u s l y e x p o s e d
t o t h e t i c k 1 1 0
TABLE 5 . 4 . Fe e d i n g p e r f o r ma n c e o f a d u l t s o f R^
a p p e n d i c u l a t u s o n r a b b i t s p r e v i o u s l y e x p o s e d
t o t h e t i c k 1 1 1
TABLE 5 . 5 . T i c k f e e d i n g s u c c e s s p a r a me t e r s o f n y mp h s a n d
a d u l t s o f R^ a p p e n d i c u l a t u s f e d o n r a b b i t s
e x p o s e d t o d i f f e r e n t i n s t a r s o f t h e t i c k 1 1 3
TABLE 5 . 6 . Co r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s b e t we e n s k i n t e s t
r e s p o n s e s ( r e a o r t h i c k n e s s ) a n d t h e t i c k
f e e d i n g s u c c e s o f R^ a p p e n d 1 c u 1 a t u s o n r a b b i t s
wi t h d i f f e r e n t l e v i s o f r e s i s t a n c e 1 3 0
TABLE 5 . 7 . Co r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s b e t we e n s k i n t e s t
r e s p o n s e s ( c o mp i l e d p a r a me t e r ) a n d t h e t i c k
f e e d i n g s u c c e s o f R^ a p p e n d i c u l a t u s o n r a b b i t s
wi t h d i f f e r e n t l e v i s o f r e s i s t a j i c e 1 3 2
TABLE 5 . 8 . M l t i p l e r e g r e s s i o n mo d e l s b a s e d o n s k i n t e s t
r e s p o n s e s t o me a s u r e t h e f e e d i n g c a p a b i l i t y o f
R^ a p p e n d i c u l a t u s t i c k s o n r e s i s t a n t r a b b i t s 1 3 3
TABLE 6 . 1 . Co r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s b e t we e n
s u s c e p t i b i l i t y t o B^ mi c r o p l u s a n d r e s p o n s e s
i n t h e s k i n t e s t i n 2 6 a n i m i s g r a z e d u n d e r
t r o p i c a l c o n d i t i o n s 1 5 2
v i i
TABLE 6 . 2 . Co mp a r i s o n o f t h e s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k
B. mi c r o p l u s a n d o n t h e s k i n t e s t r e s p o n s e s o n
1 2 c a l v e s r e p e a t e d l y t e s t e d 1 56
TABLE 7 . 1 . Chr o n o l o g y o f t h e e x p e r i me n t " a c q u i s i t i o n o f
r e s i s t a n c e t o B^ mi c r o p l u s i n y e a r l i n g s o n
a s s o c i a t e d c ha n g e s t o de r ma l r e s p o n s e s t o t i c k
a n t i g e n s " 1 6 8
TABLE 7 . 2 . R e l a t i o n s h i p b e t we e n s u s c e p t i b i 1 i t y t o t h e
t i c k a n d s k i n t e s t r e a c t i o n s o n c a l v e s
r e p e a t e d l y e x p o s e d t o t h e t i c k B^ mi c r o p l u s 1 80
TAH. E 7 . 3 . R e l a t i o n s h i p b e t we e n s k i n t e s t r e a c t i o n s a n d
a n t i b o d y l e v i s t o GSG i n t h e s e r a o f c a l v e s 1 83
TABLE 8 . 1 . Chr o n o l o g y o f t h e a c t i v i t i e s f o r t h e s k i n t e s t
e v a l u a t i o n o f t h e p r o d u c t s a f t e r
c hr o ma t o g r a p hy o f e x t r a c t s L2 - 6 5 a n d L4- 6 5 1 97
TABLE 8. 2 . Sk i n t e s t r e a c t i o n s a t 3 0 mi n u t e s p o s t
i n j e c t i o n o f d i f f e r e n t ma t e r i a l s i n o c u l a t e d o n
e i t h e r Ho l s t e i n o r c r o s s b r e d a n i m i s 2 05
TABLE 8. 3 . Co r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s b e t we e n
s u s c e p t i b i l i t y t o B^ mi c r o p l u s a n d s k i n t e s t
r e s p o n s e s ( L2 - 6 5 ma t e r i a l s ) 2 1 0
TABLE 8. 4 . Co r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s b e t we e n
s u s c e p t i b i l i t y t o mi c r o p l u s a n d s k i n t e s t
r e s p o n s e s ( L4 - 6 5 ma t e r i a l s ) 2 1 1
TABLE 8. 5. R a n k i n g o n s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k o n
Ho l s t e i n a n d c r o s s b r e d a n i m i s p r e v i o u s l y
e x p o s e d t o t h e t i c k . ( Ex p e r i me n t o n e ) 2 1 4
TABLE 8. 6 . R a n k i n g o n s u s c e p t i b i l i t y t o t h e t i c k o n
Ho 1 s t e i n a n d c r o s s b r e d a n i ma l s p r e v i o u s 1 y
e x p o s e d t o t h e t i c k . ( Ex p e r i me n t t wo ) 2 1 5
TABLE 9 . 1 . Chr o n o l o g y o f t h e e x p e r i me n t " c o mp a r i s o n o f
t h r e e me t ho ds t o e v a l a t e t h e r e s i s t a n c e t o B.
mi c r o p l u s o n c r o s s b r e d c a t t l e u n de r f i e l d
c o n d i t i o n s " 2 3 0
TABLE 9. 2 . Co mp a r i s o n o f t h e r a n k s o f s u s c e p t i b i l i t y t o
t h e t i c k B^ mi c r o p l u s o n a n i m i s r e p e a t e d l y
t e s t e d 2 3 7
TABLE 9. 3 . Co r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s b e t we e n t i c k n u mb er s
a n d s k i n t e s t r e a c t i o n s o n a n i m i s p r e v i o u s l y
e x p o s e d t o t h e t i c k 2 45
v i i
Tf t BLE 9. 4. Spe a r ma n r a n k c o r r e l a t i o n b e t we e n t i c k
numb e r s a nd s k i n t e s t r e a c t i o n s o n a n i m i s
p r e v i o u s l y e x po s e d t o t h e t i c k 247
TABLE 9. 5. Ke n d a l l ' s c o e f f i c i e n t o f c o nc o r da nc e o f s k i n
r e a c t i o n s t o d i f f e r e n t a n t i g e n s o n 33 c a t t l e
i mmune t o t h e t i c k 249
TABLE 9. 6. R e l a t i o n s h i p b e t we e n t h e r a n k s o n t i c k
nu mb e r s , g e n e r a l r e a c t i v i t y i n t h e s k i n t e s t
a nd a n t i - t i c k a n t i b o d y t i t r e o n 33 c a t t l e
i mmune t o t h e t i c k 250
i x
Af i HRVI ATI CrS
AFZ Au s t r a l i a n F r i e s i a n S a h i wa l
AI S Au s t r a l i a n I l l a w a r r a S h o r t h o m
AHZ Au s t r a l i a n Hi l k i n g Ze b
ASP a n on on i u m s u l p h a t e p r e c i p t a t e
BOOM Bo o p h i l u s mi c r o p l u s
CTVH Ce n t r e f o r Tr o p i c a l Ve t e r i n a r y He d i c i n e
0EAE d i e t h y l a mi n o e t h y l
EDTA e t h y l e n e d i c u n i n e t e t r a a c e t i c a c i d
ELI SA En zy me Li n k e d I mmu n o s o r b e n t As s a y
c e n t r i f u g a l f o r c
GSG s a l i v a r y g l a n d h o mo g e n a t e
HPI h o u r s p o s t i n j e c t i o n
I CA I n s t i t u t o Co l o mb i a n o Ag r o p e c u a r i o
I CE I n d e x o f c o n v e r s i n e f f i c i e n c y
I g E i mmu n o g l o b u l i n E
I g G i mmu n o g l o b u l i n G
Kc / s k i l o c y c l e s p e r s e c o n d
k D k i l o d a l t o n s
LI HV La b o r a t o r i o d e I n v e s t i g a c i o n e s H d i c a s Ve t e r i n a r i a s
m a . 5 . 1 . me t r e s a b o v e s e a l e v e l
P p r o b a b i l i t y o v e r t h e n u i l h y p o t h e s i s
PBS p h o s p h a t e b u f f e r e d s a l i n e
p s i p o u n d s p e r s q u a r e i n c h
r
c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t ( Pe a r s o n ' s )
r ' Sp e a r ma n ' s c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t
RAPP Rh i p i c e p h a l u s a p p e n d i c u l a t u s
X
SDS-PAGE s o d i u m d o d e c y l s u l p h a t e - p o l y a c r y l a mi d e g e l
e l e c t r o p h o r e s i s
T I t e s t o n e
T 2 t e s t t wo
T 3 t e s t t h r e e
T 4 t e s t f o u r
TBS T r i s b u f f e r e d s a l i n e
W Ke n d a l l ' s c o e f f i c i e n t o f c o n c o r d a n c e