03 de Octubre del 2012 Universidad Nacional Agraria La Molina

OSMORREGULACIN
CASTILLO
1
, M. HUASASQUICHE
2
, L. PALACIOS
3
, M. ROJAS
4
, A. SALAZAR
5
, C. VELSQUEZ
6
, P.
1, 2, 3, 4, 5, 6 Estudiantes de 4 ciclo de la carrera de Biologa, UNALM. 20110127@lamolina.edu.pe

Resumen
Se realizaron una serie de procedimientos a una muestra de orina recin colectada para evidenciar algn mal
funcionamiento del rin en el organismo. Para esto se observaron propiedades organolpticas: la muestra era de
color amarillo claro, transparente y de olor suave. Adems, se midieron la densidad mediante un urinmetro, esta
densidad result 1,008 gr/mL; y el pH, utilizando tiras de pH, que fue 6,5 aproximadamente, es decir, ligeramente
cido. Igualmente se determinaron la presencia de glcidos mediante la reaccin de Benedict, encontrndose casi
nula presencia de estos; la presencia de protenas mediante la reaccin de Biuret y una desnaturalizacin, no
hallando presencia de estas, pero s de fosfatos; y la presencia de cristales, centrifugando una pequea muestra y
llevndola luego al microscopio, logrando observar cristales de tirosina, fosfato de calcio y carbonato de calcio. Se
concluy que las variables medidas se encuentran en un rango normal, exceptuando la densidad y la presencia de
cristales de tirosina, lo cual significa una ligera deshidratacin del organismo y problemas a nivel del hgado e
incluso alguna enfermedad renal.

Introduccin
Para determinar evidencias de algn mal
funcionamiento del rin en una muestra de orina,
objetivo de la presente prctica de laboratorio, es
necesario revisar bibliografa al respecto y conocer
una serie de conceptos. El principal concepto es la
osmorregulacin, capacidad de un animal de regular
la composicin qumica de sus lquidos corporales, lo
cual depende en gran medida del equilibrio entre la
captacin y prdida de solutos y agua, es decir, del
movimiento controlado de solutos entre los lquidos
internos y el ambiente externo (Campbell, et. al.;
2005), este proceso controla la regulacin de agua
con la finalidad de que los lquidos no estn ni
demasiado diluidos ni muy concentrados (Solomon
et. al.; 2008).
En este sentido, los sistemas excretores de los
animales han evolucionado para actuar en la
osmorregulacin y en la eliminacin de los desechos
metablicos. Estructuras como el rin, en
vertebrados, mantiene los equilibrios hdrico y
electroltico y excreta los desechos metablicos
(Solomon et. al.; 2008).
Las funciones del rin son: la filtracin, la
reabsorcin y la secrecin. La filtracin glomerular
consiste en filtrar plasma tras el flujo de sangre a muy
alta presin en los capilares glomerulares,
permitiendo el paso de sustancias de tamao
molecular pequeo disueltas en el plasma, como
nutrientes, sales y rea desde la sangre hacia la
cpsula de Bowman, pero impidiendo el paso de
clulas sanguneas, plaquetas y protenas
plasmticas. En los tbulos renales se reabsorbe a la
sangre, alrededor del 99% del filtrado de la etapa
anterior, donde sustancias de desecho y en exceso
permanecen en el filtrado y nutrientes como glucosa
y aminocidos retornan a la sangre. Por ltimo, la
secrecin tubular es en direccin opuesta a la
reabsorcin, en donde pasan sustancias a travs del
epitelio tubular. Iones potasio, hidrgeno y amonio, y
otros iones orgnicos as como determinados
frmacos, son secretados al filtrado (Solomon et. al.;
2008).
Estos procesos son regulados por una hormona
llamada hormona diurtica que se produce en el
hipotlamo del cerebro, se libera a la sangre y llega al
rin. Se vincula a la osmolaridad de la sangre y a la
reabsorcin de agua en el rin, adems, su accin se
ve alterada por la ingesta de alcohol, en donde el
organismo tiende a perder mucha agua en la orina
(Campbell, et. al.; 2005).
Cualquier disfuncin o alteracin en estos procesos,
debido a problemas a nivel de tejidos del rin,
conllevarn a anormalidades en la concentracin y
diversidad de elementos en la orina, que son algunas
veces observadas o determinadas en un anlisis de
una muestra de esta.
En el anlisis realizado, se observaron propiedades
organolpticas, se midieron el pH y la densidad, y se
determinaron la presencia de
glcidos, protenas y cristales.

Materiales
o Tiras de pH
o Urinmetro
o Hornilla elctrica
o Reactivo de Biuret
- NaOH al 40%
- CuSO4 al 1%
o Reactivo de Benedict
o cido Actico
o Centrfuga
o Tubo de centrfuga
o Tubos de ensayo
o Goteros
o Pipetas graduadas
o Probeta
o Beaker
o Vaso precipitado

Metodologa
Se determin el pH, la densidad, la presencia de
protenas, glucosa y cristales en una muestra de
orina. Para esto se realizaron seis pequeas
experiencias:
1. Primero se reconocieron las caractersticas
organolpticas de la muestra de orina: color,
transparencia (visualmente, frente a una fuente
de luz) y olor, principalmente.
2. Para la determinacin de pH, se coloc en el
vaso precipitado un volumen de orina suficiente
para sumergir la tira de pH. Luego, se mantuvo
esta tira durante 30 segundos dentro del vaso. Al
retirarla se compar los colores obtenidos con la
leyenda de pH.
3. Para la determinacin de la densidad, la probeta
se llen con la muestra de orina,
aproximadamente hasta la mitad. Luego, se dej
caer verticalmente el urinmetro dentro de sta
(como se muestra en la Imagen 1.)y se esper a
que se estabilice. Por ltimo, se anot la lectura
obtenida por el urinmetro (temperatura de
calibracin: 15C) y de acuerdo a la temperatura
ambiente del da de la prctica, se cambi la
lectura (por cada 3C ms se aade 0.001
unidades a la lectura de densidad)
4. Para la determinacin de presencia de protenas,
se realizaron dos experiencias: una reaccin de
Biuret y una de desnaturalizacin. En la reaccin
de Biuret, se colocaron 10 gotas de orina en un
tubo de ensayo y seguidamente 10 gotas de
NaOH 40% (cumpliendo la relacin 1:1 en la
reaccin de Biuret). Por ltimo se agregaron 2
gotas de CuSO4 1% al tubo. En la reaccin de
desnaturalizacin se llev un tubo de ensayo
(llenado con orina hasta su cuarta parte) al
beaker con agua, calentndose en la hornilla
elctrica. Se dej el tubo por cinco minutos y al
retirarlo se le agregaron 2 gotas de cido
actico.
5. Para la determinacin de presencia de glucosa,
se colocaron 10 gotas de muestra en un tubo de
ensayo y 20 gotas de reactivo de Benedict
(cumpliendo la relacin 1:2 en la reaccin de
Benedict). Luego, se llev el tubo a calentar por
cinco minutos en la hornilla elctrica.
6. Para la determinacin de presencia de cristales,
se agreg al tubo de centrfuga
aproximadamente 2 ml de orina y se lo llev a la
centrfuga por 15 minutos al 100%. Pasado el
tiempo, se retir el tubo y se extrajo una gota de
la parte inferior del lquido. Se coloc la gota en
un portaobjeto y se observ a travs del
microscopio.

Resultados
1. Caractersticas organolpticas
- Color: Present un amarillo de tonalidad clara
(Tabla 1.)
- Olor: Suave
- Transparencia: S
2. pH
- Entre 6 y 7. Ligeramente cido, (Imagen 2.)



Imagen 2.
Comparacin de
los colores
obtenidos en la
tira de pH con la
leyenda.



Imagen1.
Urinmetro
representando una
lectura de densidad.
3. Densidad
- 1,006 g/ml a 15C. La temperatura en el da de la
prctica fue de 21C. Aplicando el factor de
correccin, la densidad final es de 1,008 g/ml
4. Protenas
- En el proceso de desnaturalizacin (bao mara)
se volvi ligeramente turbio. Luego de agregar 2
gotas de cido actico se volvi transparente.
- Reaccin de Biuret: Present un color celeste de
tonalidad clara (Tabla 1.)
5. Glucosa
- Reaccin de Benedict: Present un color turquesa
(Tabla 1.)
6. Cristales
Tras la utilizacin del microscopio, se observaron
claramente tres tipos de cristales.
a) Cristales de tirosina
1
observados en la muestra
de orina centrifugada, alargados, muy parecidos
a agujas, como se aprecia en la Imagen 3. Estos
elementos fueron los ms abundantes en la
muestra observada









b) Cristales de carbonato de calcio, mostrados en la
Imagen 4., que se observaron como un nico y
gran montculo de elementos.







1
Segn la informacin consultada en La orina al
microscopio Cristales. Disponible en:
http://www.sepeap.org/archivos/libros/NEFRO/ORINA/CRI
STALES.pdf
c) Y el tercer tipo de cristales observados fueron
los de fosfato de calcio (Anlisis de orina,
Editorial Mdica Panamericana; 1987),
encontrados en diversas zonas de la muestra
como agrupaciones dispuestas como se muestra
en la figura 5.




Tabla 1. Colores obtenidos en las experiencias 1
(organolptico), 4 (Biuret) y 5 (Benedict)


Organolptico
(Visual)
Reaccin
de Biuret
Reaccin de
Benedict
COLOR


Discusiones

Anlisis Organolptico
El color de la orina vara de incoloro a negro. Estas
variaciones pueden deberse a funciones
metablicas normales, actividad fsica, sustancias
ingeridas o a situaciones patolgicas (STRASINGER y
DI LORENZO, 2010). Normalmente posee un color
amarillo, sobre todo debido al urocromo; el tono
del color amarillo vara del paja plido al mbar
oscuro. Un color diferente al amarillo, en la orina,
puede indicar la presencia de clulas, biomolculas
o sustancias que no deberan encontrarse en la
orina. Por ejemplo, la orina rojiza por lo general se
debe a eritrocitos presentes, la orina negra puede
ser causada por la melanina, la orina marrn se
debe a la alcaptonuria al dejarla reposar. Sin
embargo, muchos de los colores no habituales
hallados en la orina derivan de fuentes exgenas,
como la comida o drogas, un ejemplo de estos
casos puede ser la ingesta de remolacha que origina
un color rojo en la orina, especialmente en nios
pequeos (GENNARO, 2003). Al observar la muestra
de orina, se distingui rpidamente que
predominaba un color amarillo claro, es decir, sta
se encontraba dentro del rango normal de color.
Imagen 3.
Cristales de
tirosina
Imagen 4. Cristales de carbonato
de calcio.
Imagen 5. Cristales
de fosfato de calcio.
En cuanto al aspecto, se entiende claridad como un
trmino general que se refiere a la transparencia o
turbidez de una muestra de orina. La terminologa
comn utilizada para informar la claridad es:
lmpida, brumosa, nebulosa, turbia y lechosa. La
orina recin emitida suele ser lmpida, la presencia
de eritrocitos, leucocitos, bacterias, levaduras,
lpidos, entre otros, pueden causar turbidez en la
orina. Sin embargo, existen causas no patolgicas
de turbidez como cantidades grandes de moco y
clulas epiteliales escamosas, generalmente, y en
menor frecuencia, presencia de semen,
contaminacin fecal, talco o cremas vaginales. Es
importante tambin recordar que la orina lmpida
no siempre es normal, a medida que aumenta la
sensibilidad de las pruebas qumicas utilizadas, la
mayora de las alteraciones en la orina lmpida se
detectarn antes del anlisis microscpico.
(STRASINGER y DI LORENZO, 2010). Al observar la
muestra de orina a trasluz no se not turbidez
alguna, incluso se coloc un texto detrs de la
probeta y las letras se distinguieron con claridad,
esto indica que, aparentemente, no existe presencia
de clulas anormales en ella, para eso se continu
con las pruebas qumicas.
Por ltimo, aunque no tiene mucha importancia
clnica y no es parte del anlisis clnico habitual, el
olor de la orina es una propiedad fsica perceptible.
Normalmente, una orina recin emitida posee un
olor aromtico dbil y bastante caracterstico que
se intensifica en muestras concentradas. Las causas
de olores no habituales incluyen las infecciones
bacterianas (olor fuerte y desagradable), las cetonas
diabticas (olor dulce o frutal), la ingesta de ciertos
alimentos, entre otros. Al vaciar la muestra de orina
a la probeta se percibi un olor suave caracterstico
de la orina, es decir el donador no presenta alguna
infeccin patolgica.

Determinacin de pH
El pH de la muestra estudiada se encuentra en el
rango de 6 a 7(aproximadamente 6,5). Los valores
normales de pH de la orina se encuentran en el
rango de 4,5 a 8. Este amplio rango se da debido a
que, al ser los riones reguladores de pH en los
organismos, estos varan los niveles de pH de la
orina con la finalidad de mantener constantes los
valores de pH de la sangre. Es por esto que es de
suponer que, si los valores de pH de la orina se
encuentran bajos (cido), existi una gran cantidad
de hidrogeniones en la sangre que fueron
eliminados a travs de la orina (STRASINGER y DI
LORENZO, 2010). En este caso, se puede inferir que
los valores de pH de la sangre se mantuvieron
constantes y, que adems, la cantidad de iones
hidrgeno que haba en esta no era muy elevada,
por lo que la orina es ligeramente acida.
El valor normal promedio calculado para el pH de la
orina es de 6; es decir, la orina normalmente es
ligeramente acida, esto es debido a que el
metabolismo normal produce un exceso de cidos.
Adems, una alimentacin con alto contenido
proteico y el consumo de algunas frutas generan
que el nivel de acidez aumente (GRAFF, 1987). Esta
es una posible explicacin del nivel de pH
encontrado, ya que, al haber sido extrada la orina
luego de la ingesta del desayuno, estos alimentos
podran haber aumentado la acidez de la muestra.
Dficits en los niveles de potasio tambin ocasionan
la formacin de orina ligeramente acida, por lo que
sta tambin podra ser una posible explicacin
para los niveles de pH de la muestra. Adems,
existen otras causas por las que el pH se podra
encontrar acido en la orina, pero estas son causas
originadas por estados patolgicos como: acidosis
respiratoria (retencin de CO2) y acidosis
metablica (en estados de cetosis). Finalmente,
infecciones en el tracto urinario originadas por la
Escherichia coli tambin producen orinas cidas
(GRAFF, 1987).Tanto los estados patolgicos como
las infecciones son poco frecuentes en la formacin
de orina acida, sin embargo, estas tambin podran
ser causas a evaluar en el presente estudio.

Determinacin de la densidad
La densidad vara en proporcin directa de la
cantidad de slidos que contiene en solucin e
inversamente al volumen. Los valores normales
oscilan entre 1,010 y 1,030.
La densidad aumentada se presenta en diabetes
mellitus, fiebre, deshidratacin, etc.
La densidad disminuida se presenta en diabetes
inspida nefrognica, glomerulonefritis, transtornos
nerviosos, funcionales, etc.
Debe existir correlacin entre la densidad y el color
de la orina, la desproporcin entre ellos
generalmente sirve como indicio de la presencia de
enfermedades renales. Orina oscura y densidad
baja se presenta despus de alguna reaccin a la
transfusin de sangre. Orina muy clara y densidad
elevada puede indicar glucosuria, que hace pensar
en la existencia de diabetes mellitus.
La densidad tambin aumenta por la presencia de
protenas. Por cada gramo de protena que se
encuentre en 100 ml de orina debe restarse 0,003
de la cifra de densidad encontrada, para obtener
aproximadamente la densidad real (DAZ et al,
1997).
Al colocar el urinmetro en la muestra, este arroj
una lectura de 1,008; por ser esta la primera orina
del da, esta debera tener una densidad mayor a
1,024(esto depende del estado de hidratacin de la
persona) (GORDILLO Et al., 2003). Esto indica que el
valor obtenido en la muestra se encuentra muy por
debajo de lo normal, por lo que es de suponer que
el donador se podra encontrar en una situacin de
ligera deshidratacin; adems, al no existir la
correlacin entre color y densidad, se podra
suponer que el donador presenta alguna
enfermedad renal.

Determinacin de presencia de protenas
La presencia de proteinuria a menudo se asocia con
enfermedad renal temprana. Una pequea cantidad
de protenas est presente en la orina obtenida de
personas normales (menos de 10 mg/dL), aunque la
cantidad no es suficiente para dar positiva con las
pruebas que se realizan para reconocer protenas
(GENNARO, 2003).
La turbidez que se observ al llevar la muestra de
orina a bao mara puede ser causada a la
desnaturalizacin de protenas presentes
(proteinuria) o a la precipitacin de fosfatos
amorfos y carbonatos (STRASINGER y DI LORENZO,
2010), encontrndose este ltimo caso dentro del
rango de claridad normal. Las sales de fosfato, con
frecuencia, estn presentes en la orina de forma no
cristalina, es decir como sustancias amorfas, stas
son solubles en cido actico al igual que los
carbonatos (GRAFF, 1987). Es por esta razn, que
para evitar confusin en el anlisis, se le agregaron
dos gotas de cido actico a la muestra,
observndose la desaparicin de esa turbidez (los
fosfatos se diluyeron en el cido). Se puede decir
entonces, que no exista presencia de protenas en
la muestra, pues la nubosidad fue causada por
precipitacin de fosfatos y no por desnaturalizacin.
Se realiz otra prueba paralela para determinar la
presencia de protenas en la muestra de orina. La
reaccin de Biuret da un resultado positivo en todos
los compuestos que tengan dos o ms enlaces
peptdicos consecutivos en sus molculas,
caracterstica propia de las cadenas de aminocidos
que conforman las protenas. Cuando una protena
se pone en contacto con un lcali concentrado se
forma una sustancia compleja denominada Biuret y
que precipita una coloracin violeta
2
.
La muestra de orina no dio un precipitado color
violeta; el color observado en el tubo fue celeste de
tonalidad clara, por lo que se puede afirmar que no
contena protenas.

Determinacin de presencia de glucosa
Por lo general, se puede decir que no existe glucosa
en la orina hasta que se superen los 160-180 mg/dl
(rangos normales) de glucosa en esta; normalmente
este nivel no es sobrepasado aun despus de la
ingesta de grandes cantidades de glcidos, aunque
puede existir una pequea cantidad de glucosa en la
orina que va desde 2 a 20 mg por 100ml de orina
(GRAFF, 1987) o desde los 10 a 30 mg por cada 100
ml. de orina (DIAZ Et al., 1997).
La presencia de cantidades significativas de glucosa
en la orina se denomina glicosuria, cuya principal
causa es un elevado nivel de glucemia; la diabetes
mellitus es la enfermedad ms comn que se
acompaa de hiperglucemia, esta tambin puede
deberse a una ingesta abundante de carbohidratos,
stress o ansiedad (GENNARO, 2003).
La solucin clsica de Benedict ayuda a notar la
presencia de azucares reductores en la orina. El
mtodo consiste en la reduccin del cobre por parte
de los azucares en donde se produce un cambio
progresivo de color azul, al verde, amarillo y
anaranjado cuando tiene lugar a la reaccin.
(STRASINGER, DI LORENZO, 2010). Segn la muestra
obtenida en la experiencia, se not una ligera
variacin en el color azul, caracterstico del reactivo,
lo cual indicara que hay una mnima presencia de
azcar reductor (glucosa); esto estara dentro de los
valores normales por las razones antes
mencionadas.

Determinacin de cristales
Los cristales observados en la muestra corresponden
tanto a elementos comunes en la orina, como a
elementos asociados a cuadros patolgicos.
La imagen 3 ilustra los cristales de tirosina,
asociados a enfermedades hepticas, lo que hara
suponer algn cuadro pasado o actual de hepatitis,
lesin en el hgado o trastornos hereditarios del

2
Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas,
Universidad Nacional de la Plata, Argentina. Revisado el da
2 de Octubre de 2012.
<http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.
pdf>
metabolismo de aminocidos o inclusos alguna
enfermedad heptica grave (GRAFF; 1987) .Estos
cristales estn presentes en orinas entre cidas y
neutras, como es el caso de la muestra que se
trabaj.
En segundo lugar, la imagen 4 ilustra los cristales de
carbonato de calcio, que se observan como
pequeas esferas agrupadas en formas amorfas, que
no poseen importancia clnica puesto que su
presencia es comn en la orina. Son ms abundantes
en medios alcalinos, por lo que se entiende su
presencia poco abundante en esta muestra, que es
ligeramente cida (STRASINGER, DI LORENZO; 2010).
Por ltimo, la imagen 5 corresponde a los cristales
de fosfato de calcio, tambin elementos comunes en
la orina, por lo que carecen de importancia clnica,
aunque el fosfato de calcio es un constituyente de
los clculos renales. Se encuentran normalmente en
orinas de pH neutro o ligeramente alcalino, lo que
explica su baja presencia en la muestra, pero
superior a los cristales de carbonato de calcio
(STRASINGER, DI LORENZO; 2008)

Conclusiones

Las variables medidas se encuentran en un rango
normal, exceptuando la densidad y la presencia
de cristales de tirosina, lo cual significa una
ligera deshidratacin del organismo y problemas
a nivel del hgado e incluso alguna enfermedad
renal.

Recomendaciones

Obtener diversas muestras de orinas para
compararlas y poder realizar un anlisis ms
completo de estas.
Implementar refractmetros para obtener
lecturas de densidad ms precisas.
Usar potencimetros para una correcta
medicin de pH.

Bibliografa

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Biologa. 2005. Sptima edicin. Editorial Mdica
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o GENNARO, Alfonso R. Remington Farmacia Tomo
I. 2003. 20 Edicin. Editorial Medica
Panamericana. Buenos Aires, Argentina. 1408
pp. ISBN: 950-06-1866-4
o GORDILLO, Gustavo; EXENI, Ramn; DE LA CRUZ,
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Octava Edicin. Mc Graw Hill-Interamericana.
Mxico.
o SEAP (Sociedad espaola de pediatra
extrahospitalaria y atencin primaria).
Microscopa de la orina. Cristales.

Investigaciones Posteriores

Investigar qu tipo de reactivos podran indicar
la presencia de patgenos, tales como bacterias
extraas, y que tengan un mecanismo similar a
Benedict y Biuret, sencillos y rpidos.
Investigar qu alimentos son los ms
antidiurticos y as implementarlos en la dieta de
pacientes con afecciones renales.