MDULO 5

CROMATOGRAFA







PROFESOR ELISEO AVELLA MORENO






GRUPO 4
Lady Viviana Carreo
25151537
Jessika Andrea Arguello
1052397301

















UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA I
BOGOTA D.C
2014
OBJETIVOS

- Separar los componentes de mezclas binarias o ternarias de compuestos
coloreados o de compuestos incoloros, mediante cromatografa en capa delgada
de fase normal y analizar el comportamiento de separacin, en funcin de las
caractersticas de los solutos y de las fases mvil y estacionaria.
- Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la seleccin
adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
- Comprender el funcionamiento y caractersticas de una cromatografa en
columna mediante la separacin de los componentes de una mezcla binaria.



INTRODUCCIN

La tcnica de cromatografa se basa en el principio general de distribucin de un
compuesto entre dos fases, una fase fija y la otra mvil.
Se le puede ver como la remocin selectiva de los componentes de una mezcla
por accin de la fase mvil que fluye a travs de la fase estacionaria donde se
encuentran. Esta tcnica se emplea no solo para separar los componentes de una
mezcla, sino tambin como criterio de pureza e identificacin bajo ciertas
circunstancias.



MARCO TERICO
















SECCIN EXPERIMENTAL

Cromatografa en capa delgada (CCD)
En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El solvente ascender, por
capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta
produciendo "manchas" de los componentes de una mezcla.
En la cromatografa en capa delgada, el grado de elucin de las sustancias
depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del solvente utilizado y
de las caractersticas de la fase estacionaria.

Para la preparacin de una placa cromatogrfica, en una fina placa de cristal o
portaobjetos se gotearon 10 gotas de silica gel disuelta en agua y se extendi a lo
largo de esta, procurando cubrir muy bien toda la placa, y que sea uniforme el
grosor de la capa de silica gel.

Ensayos para la seleccin de la fase mvil

Se realizaron algunas siembras en la placa, y posterior a esto se le aplicaron
diferentes disolventes, como fue ter de petrleo, metanol, acetato de etilo, con el
fin de observar a grandes rasgos el poder de elusin de cada uno de estos, en
estado puro.

Fig 1. Ensayos de seleccin de la fase mvil.

Luego de observar que el ter de petrleo no presentaba poder de elusin alguno,
y que por el contrario el acetato de etilo tena un poder de elusin muy alto, se
procedi a realizar mezclas de estos dos, en diferentes proporciones, con el
objetivo de encontrar una proporcin adecuada, y con esto obtener una resolucin
ptima de los componentes de la mezcla.




Fig.2 Cromatografa en capa delgada e inactiva de con diferentes proporciones de la fase
mvil.


El montaje, como se observa en la imagen, se realiz mediante los componentes
del sistema cromatogrfico, estos son la cmara cromatografica, la fase mvil
(disolvente), la fase estacionaria (la placa); una vez se realizaron las siembras de
la muestra en la placa, con un capilar, y habiendo puesto a saturar de disolvente
la cmara cromatografica (con anterioridad ), siendo de ayuda para esto un trozo
de papel filtro y aislando este ambiente , se introdujo luego con cuidado la placa
dentro de la cmara, que contena la fase mvil y que estaba ya saturada, as con
precaucin de no mover el sistema y no perturbar el ascenso de la fase mvil por
la fase estacionaria

Segn lo anterior, y como podemos observar en la figura #2 en la placa 2 se
logr una mejor resolucin, lo que fue evidenciado por la distancia entre las
manchas , siendo la diferencia entre el Rf de la mancha roja y el Rf de la mancha
amarilla apreciablemente grande, esta placa, tena una proporcin de 8:2 ter de
petrleo, y acetato de etilo respectivamente; de esta manera, mediante la pruebas
con diferentes proporciones se escogi una, la cual se usara posteriormente para
cromatografa en columna.

Cromatografa de mezcla incolora
La cromatografa de mezcla incolora se realiz siguiendo el procedimiento descrito
para colorantes activos con una mezcla de 3 componentes, con la nica diferencia
que luego de que el solvente llega al frente de solvente adecuado, fue necesario
hacer un revelado con lmpara de luz ultravioleta y en cmara de Iodo.
Luego como criterio de identificacin del orden de los componentes, se compar
con la cromatografa de una muestra pura de uno de los colorantes.


Placa activada
La slice activada, cuando se expone al aire adsorbe agua y de esta forma pierde
gran parte de su actividad. Aunque esta slice desactivada puede ser adecuada
para solutos polares que tienden a sorberse fuertemente, en la mayora de casos
no es el sustrato cromatogrfico ms efectivo; por esto en la prctica se hizo un
ensayo aparte, con la proporcin que fue considerada conveniente, y teniendo la
placa con anterioridad en una estufa, donde se activara, el procedimiento fue muy
parecido solo que con la precaucin de realizar las siembras en el menor tiempo
posible para introducir la placa en la cmara cromatografica, antes de que se
adsorbiera agua del ambiente con la placa.

Cromatografa en columna Luego de haber escogido la mezcla con la que se
obtiene una mejor resolucin de los componentes de la mezcla, con esta misma y
sabiendo el poder de elusin con cada colorantes, se procede a realizar la
cromatografa en columna




Fig. 3. Cromatografa en capa delgada
con placa activada.


Preparacin de la columna: Primero se pone una mota de algodn en la salida
de la columna de cromatografa, para evitar el paso de residuos de Silica gel (fase
estacionaria) hacia el robinete o llave de control de la salida del lquido. Con todos
los materiales bien secos, medimos la cantidad de slica con la que se llena la
mitad la columna de cromatografa y la cantidad de mezcla de ter y acetato para
cubrir la columna hasta un poco ms de la mitad de su altura; En un vaso de
precipitado se mezcl muy bien con ayuda de un agitador la silica y la mezcla de
solventes, y rpidamente se procede a llenar la columna con la mezcla. Luego de
eso se observ que en el vaso de precipitado quedan trazas de slice con solvente
y en las paredes de la columna, con un poco del mismo solvente utilizado para
llenar la columna se arrastran estos residuos.
Siembra de la muestra y se deja correr el solvente, a la columna lista se le agrega
solvente hasta que quede 1 cm por encima de la arena, luego se agreg la mezcla
en polvo a separar con cuidado, y se dej correr el solvente hasta que los
colorantes empezaron a verse sobre la slica, se puso otra mota de algodn sobre
la silica para evitar que la presin del solvente afecte la separacin y se agreg
solvente hasta llenar completamente la columna y se dej correr ahora si la
cromatografa, cuidando de mantener el nivel de solvente igual hasta el final de la
cromatografa.


Fig. 4 Montaje cromatografa en columna












DATOS Y RESULTADOS

Los colorantes que constituan la mezcla fueron:



. Sudan III (rojo) m-nitroanilina (amarillo)


Para la seleccin de la fase mvil se realiz la cromatografa para dicha mezcla
con las siguientes mezclas de ter de petrleo y acetato de etilo en las siguientes
proporciones, a las que se les calcul su respectivo Rf para cada colorante,
(mancha amarilla(A) y roja(R))


Mezcla Composicin ndice de retencin (Rf)
1 50:50 A 0,12 R 0,36
2 80:20 A 0,10 R 0,38
3 70:30 A 0,31 R 0,50
4 60:40 A 0.05 R 0,52
Tabla 1. Mezclas de ter y acetato de etilo utilizadas en la seleccin de la fase mvil.


Mezcla Incolora
La mezcla estaba compuesta por

- Naftol Benzoato de etilo Para aminoacetofenona

El revelado con luz ultravioleta se realiz con dos longitudes de onda, una de
mayor energa de 254 nm y otra de 360 nm obteniendo los siguientes valores de
Rf.

Placa N 1
Mancha 1: 0,21
2: 0,45
3: 0,63

Placa N 2
Mancha 1: 0,10
2: 0,33
3: 0,57

Fig. 5 Revelado cromatografa con mezcla incolora


Placa N 1
7:3
Placa N 2
8:2

azul
360nm
2 2
verde
564nm
3 3
Tabla 2. Resultado revelado con luz ultravioleta.






CROMATOGRAFA EN COLUMNA

El resultado de la cromatografa en columna fueron 8 fracciones, a las cuales se
les realiz CCD para corroborar si fue efectiva la separacin de los colorantes.
En la fraccin N 6 se encontr an la presencia de ambos componentes de la
mezcla inicial.

Fig. 6 Fracciones resultantes de la cromatografa en columna






ANLISIS

- Como podemos ver en las placas se observ mejor resolucin con la mezcla de
ter de petrleo y acetato de etilo 7:3, ya que se separan de manera adecuada
las manchas de los componentes y ninguna queda retenida, esta fue la mezcla
escogida para separar en la columna, con una cromatografa isocrtica.
- La identificacin del orden de los componentes en la cromatografa se realiz a
partir de las estructuras y la manera en que podan interactuar con la fase
estacionaria, con esto se propuso la siguiente hiptesis:
Como la para aminoacetofenona tiene un grupo donor de puentes de hidrgeno
(CH3 O) y uno aceptor de puentes de hidrgeno (NH2) se concluy que teniendo
dos extremos capaces de enlazarse mediante puentes de hidrgeno. Este poda
ser retenido con ms fuerza por la fase estacionaria.
Enseguida se consider la capacidad de hacer puentes de hidrgeno entre el b-
naftol y el benzoato de etilo, y ya que el primero contiene un enlace O-H capaz de
interaccionar fuertemente con la estructura de la silica a travs de puentes de
hidrogeno, se determina que este compuesto (B-naftol) ser el segundo en
retenerse ms por la fase estacionaria, y por ltimo, el benzoato de etilo el cual
debe tener por lo tanto un Rf mayor.


Fig. 7 Placa con muestra de la mezcla en paralelo con el patrn indicado.

Como se puede observar en la figura 7 se realizaron dos siembra en la placa, una
de la mezcla de compuestos, y la otra del patrn que se requiri, el cual fue B-
naftol; segn la hiptesis formulada, el patrn deba quedar continuo en la placa,
con la segunda mancha, es decir sus Rf deban ser iguales; se comprob
efectivamente que, el desplazamiento de los compuestos en la placa obedecan a
las interacciones entre estos dos componentes, la silica gel de carcter polar, y
cada uno de los compuestos de la mezcla, segn sus capacidades de formar
puentes de hidrgeno con la slica.

Rf patrn: 0,292
Rf componente mezcla: 0,292



- La CCD de las fracciones resultantes de la cromatografa en columna mostraron
pureza de las fracciones 2,3, 4 y 5 de Sudan III de color Rojo (Dato registrado en
literatura) y 7 y 8 de m-nitroanilina de color amarillo, mientras que la fraccin 6 an
contenia trazas de ambos compuestos.
con esto se concluyo que una cromatografa isotropica no era la ms conveniente
para separar esta mezcla, volviendo a los resultados obtenidos en la CCD inicial,
se observa que la mezcla 8:2 deja buena resolucin de los componentes pero la
m-nitroanilina es retenida por la fase estacionaria, con base en esto se propone
una cromatografa en columna en gradiente, con una mezcla de ter de petrleo y
acetato de etilo 8:2 hasta retirar completamente el Sudan III, luego agregar un
disolvente ms polar para retirar la m-nitroanilina pura.

CONCLUSIONES

-Se realizaron CCD con placa activa e inactiva exitosamente, llegando a una mejor
comprensin del fenmeno con el que nos encontramos all, lo que nos brinda
herramientas en el diseo de separaciones de mezclas de compuestos coloreados
mediante cromatografa en columna.
- la separacin de mezclas coloreadas puede llegar a ser ms efectiva con una
desarrollo cromatogrfico en gradiente por pasos.
- La CCD constituye un mtodo sencillo, prctico y econmico para la
identificacin del grado de pureza de sustancias trabajadas en el laboratorio.



Bibliografa
-GALAGOVSKY, L.R. (...) Qumica Orgnica. Fundamentos Terico Prcticos para el
laboratorio, 5.ed., Ediciones Zorro siglo XXI, Buenos Aires.
- Techniques for Chemical Engineers (Schweitzer, Ed.), McGraw-Hill, New York, 1979,