ALCOOL

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr

(ETHANOL)

FABRICANT :
BIOLABO SA,

Ractif pour le dosage quantitatif de lalcool

dans le srum, le plasma, le sang total ou lurine humaine.

02160, Maizy, France

REF 99029 R1 10 x 10 mL R2 1 x 5 mL
REF 99059 R1 2 x 100 mL R2 1 x 10 mL

CODE CNQ : AX

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES

Tel : (33) 03 23 25 15 50

IVD USAGE IN VITRO

Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1)

PREPARATION DES REACTIFS

La plupart des toxicologues considrent que lthanol est la substance

chimique la plus souvent consomme de manire abusive. Par
consquent, la mesure de lthanol est un des tests les plus
frquemment raliss dans les laboratoires de toxicologie. Bien que
moins couramment rencontr, il est important dinclure le mthanol,
lisopropanol et lactone (mtabolite de lisopropanol) dans lvaluation
(chromatographie en phase gazeuse) dune intoxication aigu par alcool.

REF 99029 (flacon R1) : Utiliser un objet non coupant pour enlever la
capsule aluminium.
Ajouter sans dlai au contenu du flacon R1 (enzyme-coenzyme) la
quantit d'eau dminralise indique sur l'tiquette.
Agiter doucement jusqu complte dissolution avant dutiliser le ractif
(environ 10 minutes).

STABILITE ET CONSERVATION

PRINCIPE (4)
Technique enzymatique dcrite par Gadsen R. H. et al. Le schma de la
raction est le suivant :
+

Ethanol + NAD

ADH

Actaldehyde + NADH + H

Le rapport ADH et NAD / Alcool est maintenu lev de manire ce que

lquilibre soit atteint assez rapidement. Lthanol est rapidement
transform en actaldhyde et NADH. La raction est dplace presque
en totalit vers la droite par lutilisation dun agent pigeant
lactaldhyde au fur et mesure de sa formation.
Labsorbance du NADH, proportionnelle la concentration en alcool
dans le spcimen, est mesure 340 nm en point final.

REACTIFS
flacon R1

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (1) (2)

ENZYME COENZYME

> 2,4
mmol/L
NAD
(Nicotinamide adenine dinuclotide)
ADH
> 25 000 U/L
(Alcool dshydrognase)
Tampon TRIS
pH 8,65 + 0,1 25 C
Stabilisant
Conservateur
flacon R2

Stocker 2-8C dans le flacon dorigine bien bouch et labri de la

lumire.
Etalon (flacon R2) : transfrer par versement la quantit ncessaire,
bien reboucher le flacon et stocker 2-8 C
Utiliss et stocks comme indiqus, le ractif (flacon R1) avant
ouverture et le standard (flacon R2) sont stables jusqu' la date de
premption indique sur ltiquette.
Aprs reconstitution :
Le ractif de travail (flacon R1) est stable 7 jours en labsence de
contamination.
Ne pas utiliser le ractif (flacon R1) sil est trouble ou si labsorbance
340 nm est > 0,500.
Ne pas utiliser le ractif de travail (flacon R1) aprs la date de
premption indique sur ltiquette du coffret).

ETALON

Ethanol : environ 1,00 g/L (21,7 mmol/L)

Voir ltiquette du flacon R2 pour connatre la concentration exacte.

PRECAUTIONS
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
Les ractifs contiennent de lazide de sodium (concentration < 0,1%)
qui peut ragir avec les mtaux tel que le cuivre ou le plomb des
canalisations. Rincer abondamment.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.
Version : FT 99029 28 08 2008

Urines. Srum, plasma, sang total (utiliser un agent dsinfectant non

alcoolis lors de la ponction veineuse). Les anticoagulants utilisables
sont lhparine, loxalate de Potassium, lE.D.T.A., le citrate ou le fluorure
de Sodium.
Stabilit dans le sang total : (sans fluorure de sodium)
2 jours 18-25 C.
2 semaines 2-8 C.
4 semaines 15 C.
Stabilit dans le sang total : (avec fluorure de sodium)
2 semaines 18-25 C.
3 mois 2-8 C.
6 mois 15 C.
Les tubes prlvement doivent tre hermtiquement bouchs pour
viter une diminution de la teneur en alcool par vaporation.

INTERFERENCES (1) (3)

Les srums ou plasmas troubles, ictriques ou fortement hmolyss
doivent tre dprotiniss avant dosage ( MODE OPERATOIRE).
Urines : Il est recommand de raliser un blanc chantillon (10 LL
dchantillon + 3 mL deau, lu contre leau). Dduire ensuite labsorbance
du blanc chantillon de labsorbance obtenue pour lessai (lu contre le
blanc ractif).
Certains alcools interfrent avec la technique de dosage mais ragissent
plus lentement que lthanol (respecter les temps dincubation indiqus
dans le mode opratoire) :
Substance
Ethanol
n-Butanol
Isopropanol
Mthanol
Ethylne glycol
Actone

% approximatif de ractivit
100
28
4
0,3
1,6
0

Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le dosage.

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

1.
2.
3.
4.

Porter le ractif et les spcimens temprature ambiante.

Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.

Contrles normaux et pathologiques.
Eau dminralise pour la reconstitution du ractif.
TCA (Acide trichloroactique) 62,5 g/L

Procdure n1 : Sans dprotinisation

(srums, plasmas, urines) :
Mesurer dans des tubes essais de 5 mL :

Blanc

Etalon

Dosage

CALIBRATION

Ractif de Travail (flacon R1)

3 mL

3 mL

3 mL

Eau dminralise

10 LL

Etalon du coffret (flacon R2).

Ou tout calibrant raccord sur une mthode ou un matriau de
rfrence.
La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
des conditions de conservation du ractif.
Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de ractif.
2. Aprs opration de maintenance sur lanalyseur.
3. Les valeurs de contrle obtenues sortent des limites de confiance,
mme aprs utilisation dun nouveau flacon de contrle.

CONTRLE DE QUALITE

CODE CNQ : AX

Tout contrle titr pour cette mthode.

Programme externe de contrle de la qualit.

Il est recommand de contrler dans les cas suivants :

Au moins un contrle par srie.

Au moins un contrle par 24 heures.

Changement de flacon de ractif.

Aprs opration de maintenance sur lanalyseur.

Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter lopration en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un nouveau
flacon de contrle et rpter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
calibrant et rpter le test.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer nouveau
en utilisant un autre flacon de ractif et rpter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le
service technique BIOLABO ou le revendeur local.

Stades dinfluence alcoolique

SANG TOTAL :
g/L
mmol/L
0,50-1,00
10,9-21,7
> 1,00
> 4,00

> 21,7
> 86,8

10 LL

Mlanger. Incuber 10 minutes 37 C ou 15 minutes 30 C ou 30 minutes

temprature ambiante.
Lire les absorbances 340 nm (ou Hg 334) contre le blanc ractif.
La raction est stable 2 heures (voir INTERFERENCES).

Procdure n2 : Avec dprotinisation

(sang total, plasma ou srum troubles, hmolyss ou ictriques) :
1- Prparation du surnageant
Etalon

Spcimen

Solution TCA 62,5 g/L

1,8 mL

1,8 mL

Etalon (flacon R2)

200 LL

Introduire dans des tubes centrifuger :

Spcimen

200 LL

Bien boucher. Agiter vigoureusement. Laisser reposer 5 minutes.

Centrifuger 5 minutes 2000-3000 TPM (le tube Etalon na pas besoin dtre
centrifug).

2- Dosage
Mesurer dans des tubes essais de 5 mL
Ractif de Travail (flacon R1)
Eau dminralise

Blanc

Etalon

Dosage

3 mL

3 mL

3 mL

100 LL

Etalon dilu dans TCA

100 LL

Surnageant

100 LL

Rougeurs, ralentissement des rflexes, perte dacuit

visuelle
Dpression du systme nerveux central (SNC)
Dcs pouvant survenir par arrt respiratoire

Remarque :
Des procdures spcifiques sont disponibles pour les analyseurs
automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.

CALCUL
Le rsultat est dtermin daprs la formule suivante :

URINES: Les valeurs aprs absorption sont similaires celles du srum

SERUM:

10 LL

Spcimen

Mlanger. Incuber 10 minutes 37 C ou 15 minutes 30 C ou 30 minutes

temprature ambiante.
Lire les absorbances 340 nm (ou Hg 334) contre le blanc ractif.
La raction est stable 2 heures (voir INTERFERENCES).

SIGNES CLINIQUES (2) (3)

Concentration
en alcool thylique

Etalon (flacon R2)

Rsultat =

Multiplier par 1,2 1,3 les valeurs donnes pour le sang total.

Abs (Dosage)
x concentration de lEtalon
Abs (Etalon)

La concentration en alcool est virtuellement indtectable chez le sujet abstinant.

Pour un mme taux dalcool, on observe des variations importantes du degr de
dysfonctionnement du SNC en fonction des individus. La concentration lgalement
acceptable pour conduire un vhicule est diffrente en fonction du pays considr.

Taux
faible

(1)
(2)
(3)

PERFORMANCES
Intra-srie
N = 20

REFERENCES

Taux
lev

Inter-srie
N = 20

Taux
faible

Taux
lev

Moyenne g/L

0,412

1,083

Moyenne g/L

0,416

1,095

S.D. g/L

0,0087

0,0141

S.D. g/L

0,016

0,013

C.V. %

2,1

1,3

C.V. %

3,97

1,23

(4)

TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 922-927.
rd
Clinical Guide to Laboratory Test, 3 Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 224-225.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3251- 3-253
GADSDEN R.H., TAYLOR E.H., STEINDEL S.J. et al : Ethanol in Biological
Fluids by Enzymic Analysis. In : Selected Methods of Emergency Toxicology.
C.S. Frings, W.R. Faulkner, Eds. Vol 11. Selected Methods of Clinical
Chemistry, Washington DC, AACC Press, 1986, p. 63-65.

Limite de dtection : environ 0,10 g/L

Sensibilit pour 1 g/L : environ 0,430 Abs 340 nm.
Comparaison avec ractif du commerce :
y = 1,0069 x 0,0021
r = 0,9987

Made in France
Version : FT 99029 28 08 2008

LIMITE DE LINEARITE
La raction est linaire jusqu 3 g/L (65 mmol/L).
Au-del, diluer le spcimen avec une solution NaCl 9 g/L et refaire le
dosage en tenant compte de la dilution dans le calcul du rsultat. La
limite de linarit dpend du rapport de dilution spcimen/ractif.

Fabricant

Date de premption

IVD

Usage in vitro

Temprature de conservation

REF

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LOT

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