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Directora
MSc. ZULMA LORENA DURAN HERNANDEZ
JUNIO 2014
Justificacin de la prctica
Competencias a desarrollar
Duracin de la prctica
Mecanismo mediante el cual se
evaluar la prctica:
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba esttica
de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se pueden evaluar los efectos
fitotxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinacin de
las semillas y en el desarrollo de las plntulas durante los primeros das de crecimiento. A
continuacin se describe el procedimiento.
2.1 METODOLOGIA
A. Actividades a desarrollar
Obtencin de la muestra
Si su tema de proyecto es la contaminacin de algn cuerpo de agua con txicos podr
recolectar una muestra de esta agua para utilizarla en el bioensayo. Si el proyecto que estn
trabajando es sobre contaminacin de suelo o lodos, deben tomar una muestra y llevarla a
un laboratorio de aguas o suelos de su ciudad y solicitar que se haga un proceso de
centrifugacin para extraer una solucin liquida a partir de ese suelo o lodo, que pueda
utilizarse en el bioensayo, el tamao de la muestra lquida debe ser de 500mL.
Si el desarrollo de este procedimiento no es posible o su tema de proyecto no es ninguno de
los mencionados anteriormente entonces igual deber tomar una muestra de agua de
cualquier sitio que se presuma est contaminado para efectos del desarrollo la prctica.
Toma de muestra de agua
Los materiales requeridos para el muestreo dependern del lugar donde se planee
recolectar la muestra. Se recomienda seguir el protocolo establecido por el Ideam en la gua
de monitoreo de vertimientos, aguas superficiales y subterrneas, disponible en el link
http://www.corponor.gov.co/control_calidad/2014/Guia_monitoreo_IDEAM.pdf y tambin en los
archivos del curso.
El muestreo que harn es puntual, pero debern seguir las indicaciones para preparacin del
recipiente, llenado de la botella, marcacin, preservacin y transporte de la muestra hasta el
CEAD el da que tengan su prctica. Sin embargo, como materiales generales se
recomienda llevar para el muestreo: balde, soga, un recipiente limpio para recolectar 1Litro
de muestra (pueden ser botellas de agua lavadas y desocupadas), toalla para secar, cinta de
enmascarar para marcar el recipiente donde se pondr la muestra, marcador sharpie, nevera
de icopor con hielo, guantes de caucho, formato de campo para recolectar informacin del
sitio como nombre del lugar, del cuerpo de agua, hora, fecha, etc. (En la gua del Ideam
encontrarn ejemplos de estos formatos), importante tambin tomar fotos del sitio de
muestreo y no ir solos a tomar la muestra.
Las bolsas ziploc deben estar adecuadamente rotuladas con el nombre de quien toma la
muestra, tipo de sistema agrcola o cobertura vegetal que hubiera tenido, hora y fecha de
muestreo.
Una vez tomada la muestra deber dirigirse a un laboratorio de aguas o suelos de su ciudad
donde sea posible hacer una extraccin lquida de la muestra, ya que solo de esta manera
podr ser usada en la prctica.
Nota: Recuerde que si este procedimiento no es posible de realizarlo, deber hacer el
bioensayo entonces con una muestra de agua.
Ejecucin del ensayo
A. Preparacin de las soluciones
Solucin de control positivo:
Las soluciones de control positivo estn diseadas para obtener resultados similares de los
que se obtendran con agua contaminada. Esta solucin le permitir observar cmo
reaccionan las semillas al agua contaminada.
Primero se deber preparar una solucin madre de NaCl (sal de cocina), para esto se debe
aadir 11gramos (2 cucharaditas a ras) de sal (NaCl) al recipiente de 1.5 litros. Luego
aada 1 litro de agua de botella sin gas al recipiente. Utilizando la probeta graduada
(cilindro graduado), aada otros 100 ml de agua de botella sin gas al recipiente de 1.5 litros.
Cierre con la tapa, agite bien, y etiquete como "Solucin madre NaCl 10 g/L". Almacnela al
resguardo de la luz solar directa o del calor extremo.
Despus de preparar la solucin madre de NaCl se procede a preparar el control positivo
para el bioensayo, utilice un recipiente limpio de al menos 500 mL, con tapa no metlica,
luego aada 250mL de la solucin madre de NaCl y dilyala con agua de botella o destilada
hasta completar los 500mL.
Tape, agite bien, y etiquete como "Control (+) 5g/L", marque la fecha de preparacin.
Solucin de control negativo
Sera una muestra de agua sin gas y sin saborizante, alistar mnimo 500mL para el
bioensayo.
1
Soluciones
de muestras contaminadas
Colocar 4mL de cada solucin en la caja de petri correspondiente, saturar el papel filtro
dispersando homogneamente la solucin sobre ste evitando que se formen bolsas de aire.
Utilizar pipetas (o goteros o jeringas) distintos para la muestra y los controles positivos y
negativos.
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas (cinco hileras de cuatro
semillas, o cuatro hileras de cinco semillas), dejando espacio suficiente entre las semillas
para permitir la elongacin de las races. Seleccione semillas de tamao, forma y color
similar.
1
Ilustracin
3. Caja de Petri con semillas de lechuga
Tapar las cpsulas, dado que algunas variedades de semillas de lechuga requieren
oscuridad para que se produzca la germinacin (semillas fotoblsticas negativas), las cajas
de Petri deben cubrirse de la luz inmediatamente despus de colocar las semillas en su
interior; para esto debe envolverse cada caja de Petri con papel aluminio.
Repetir el procedimiento pero utilizando el agua embotellada (control negativo) y la solucin
de NaCl como control positivo.
Marcar con cinta de enmascarar cada caja de Petri envuelta con papel aluminio. El control
negativo se marcar como C (-), el control positivo con una C(+), la muestra como M y la
repeticin correspondiente.
Asegrese de no voltear (no dar vuelta) las placas boca abajo, etiquetando "Parte de arriba"
en cada placa envuelta.
Colocar las placas de Petri envueltas en papel aluminio dentro de una bolsa plstica (ziploc)
para prevenir que se escape la humedad.
Colocar las placas en un lugar seguro, a temperatura ambiente por cinco das, a resguardo
de la luz solar directa.
C. Ejecucin de las observaciones y mediciones
Despus de cinco das, o aproximadamente 120 horas:
Cada punto final se evala comparando el efecto generado en los organismos expuestos a
la muestra con respecto a la respuesta en los organismos del control negativo, sujetos a las
mismas condiciones de ensayo, excepto por la ausencia de la muestra contaminada.
Desenvolver cuidadosamente cada placa Petri, luego se deber contar y apuntar el
nmero de semillas germinadas en cada placa.
1
Ilustracin
4. Semillas de lechuga germinadas
1 Antes de retirar las plntulas de las cajas petri para evaluar el efecto en los puntos
1 Expresin de resultados
D.
Muestra contaminada
M - R1
M - R2
Control
negativo
Control
positivo
C (-)
C (+)
M - R3
Elongacin
radcula Er
(cm)
Promedio Er
(cm)
Desviacin
estndar Er
Elongacin
hipocotilo Eh
(cm)
Promedio Eh
Desviacin
estndar Eh
R1: Repeticin 1
R2: Repeticin 2
R3: Repeticin 3
Variable
Muestra contaminada
M- R1
M-R2
Control
negativo
Control
positivo
C(-)
C(+)
M- R3
Numero
de
semillas
germinadas (Sg)
Promedio Sg
R1: Repeticin 1
R2: Repeticin 2
R3: Repeticin 3
1 sobre de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) (Que no sean tan antiguas, ver
fecha de lote).
5 cajas de Petri (de vidrio o plstico, de 100 mm de dimetro).
1-
BIBLIOGRAFIA
-
IDRC-CDRI.
Aquatox
2000.
(2000).
bnc.idrc.ca/dspace/bitstream/10625/31600/1/118283.pdf
Disponible
en
http://idl-
C. Productos a entregar
Informe de mximo 10 hojas, letra Arial 12, espacio 1.15, con fotografas del experimento
(mximo 6).
Las partes del informe sern:
- Portada
- Introduccin
- Un mapa conceptual sobre los tipos de bioensayos y bioindicadores utilizados en
toxicologa ambiental.
- Diagrama de flujo del laboratorio elaborado
- Descripcin de la muestra llevada al bioensayo.
- Resultados
- Anlisis de resultados
- Conclusiones
- Bibliografa
Los estudiantes deben subir individualmente el informe en el entorno de Evaluacin y
seguimiento. Previo a subir el documento debern participar en el foro practica
toxicologa ambiental donde intercambiaran sus ideas e inquietudes sobre los resultados
obtenidos en la prctica y as podrn colaborarse mutuamente en el desarrollo del
informe, aunque este es de carcter individual y cada uno deber subirlo solo en el
entorno de evaluacin y seguimiento, no en el foro.
Valoracin
Valoracin
Valoracin
baja
Media
Alta
Evaluacin director de curso o tutor virtual
El estudiante
El estudiante
participo en el foro
El estudiante
nunca particip
pero no realizo
particip de manera
del trabajo dentro
discusiones sobre
pertinente con la
del foro asignado
ninguna de las
actividad
inquietudes
(Puntos = 0)
planteadas en el foro.
(Puntos = 50)
(Puntos = 25)
El estudiante no
subi el informe
de prctica a la
plataforma segn
lo solicitado
No Aplica
El estudiante
subi el informe
de prctica a la
plataforma del
curso segn lo
solicitado
Mximo
Puntaje
50
10
(Puntos = 0)
Desarrollo del
bioensayo.
El estudiante no
desarrollo la
prctica completa.
(Puntos = 0)
Desarrollo de
competencias
Presentacin del
informe
El estudiante no
logr desarrollar
las competencias
planteadas en la
actividad
(Puntos = 0)
El estudiante no
entreg el informe
de la actividad
planteada
(Puntos = 0)
Total Puntos calificados
El estudiante
desarrolla la prctica
completa pero no
obtiene los
resultados
esperados.
(Puntos =10)
El estudiante
desarrolla la
prctica y obtiene
los datos completos
y los resultados
esperados.
(Puntos = 30)
(Puntos =15)
El estudiante logr
desarrollar
parcialmente las
competencias
planteadas en la
actividad
(Puntos = 15)
El informe no aborda
totalmente los puntos
solicitados
El estudiante logr
desarrollar
satisfactoriamente
las competencias
planteadas para la
actividad
(Puntos = 30)
El informe cumple
con lo solicitado
por el curso
(Puntos = 15)
(Puntos = 30)
30
30
30
150