PRCTICA N 05

FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS:

CONCENTRACIN DEL SUSTRATO, CONCENTRACIN DE LA ENZIMA, COFACTORES, pH,
TEMPERATURA, TIEMPO
1. GENERALIDADES
En general todas las enzimas, cualquiera sea el tipo de reaccin en que intervenga,
presentan caractersticas comunes, en cuanto a los factores que participan favoreciendo,
retardando o impidiendo su actividad. Dichos factores se investigan teniendo en cuenta la
velocidad de accin enzimtica sobre un sustrato adecuado y en determinadas condiciones.
Tomando una determinada enzima como patrn, es posible tener una idea ms o menos
clara de la influencia de los factores (tiempo, temperatura, concentracin de enzima, pH,
etc.) sobre la serie infinita de enzima que se conocen este patrn general como se
comprender vara en forma caracterstica para cada enzima en particular.
Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan
constantes, de tal manera que la investigacin del factor variable no se vea afectado por la
variacin que puedan sufrir los otros.
OBJETIVO:
Estudiar algunos de los factores que inciden en la velocidad de una reaccin enzimtica,
utilizando como ejemplo la amilasa salival, controlando la actividad enzimtica por medio
del sustrato no transformado o por los productos de la reaccin formados (azcar
reductor).
2. REACTIVOS
- Solucin de almidn al 1%
- Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
- Buffer fosfato 0.1M pH 4.6
- Buffer fosfato 0.1M pH 9
- Solucin de cloruro de sodio al 0.2%
- Amilasa salival al 0.25% dializada

- cido clorhdrico 0.05N

- Solucin yodada: Yoduro de potasio
0.5% y yodato de potasio 0.367 mg%
- Solucin cprico alcalina
- Solucin fosfomolbdica

3. PROCEDIMIENTO
Batera de tubos (1)
Tubos
Reactivos
Sol. almidn al 1% (ml)
Buffer fosfato 0.1M (pH 4.6)
Buffer fosfato 0.1M (pH 6.8)
Buffer fosfato 0.1M (pH 9.0)
Sol. NaCl 0.2%
Agua destilada
-

1
5
1.4
2.0

1
5
1.4
2.0

1
5
1.4
2.0

1
5
1.4
2.0

1
5
1.4
2.0

1
5
3.4

1
5
1.4
2.0

1
5
1.4
2.0

0.6

0.6

0.6

1.5
5
1.4
1.5

Homogenizar bien cada tubo.

Llevar los tubos N 01 al 07 a bao mara a 37C por 5 minutos.
Llevar el tubo N 08 a bao mara de 0C por 5 minutos.
Llevar el tubo N 09 a bao mara de 100C por 5 minutos.
Agregar la solucin enzimtica como indica el cuadro:
Tubos
Reactivos
Sol. enzimtica al 0.25%

0.0

0.6

0.6

0.6

0.2

6
0.6

- Mezclar bien c/tubo sin retirarlo del bao mara correspondiente.

- Continuar la incubacin, considerando un control de 20 minutos, desde el momento en
que el preparado enzimtico fue agregado a cada tubo.

- Cumplido el tiempo exacto (20 minutos), tomar de cada tubo 0.5 ml y agregarlo sobre una
segunda batera de tubos que contienen lo que se indica en el cuadro:
Batera de tubos (2)
Tubos
Reactivos
Sol. HCl 0.05N (ml)
Solucin yodada yodurada (ml)
Incubado anterior
-

2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5

Mezclar, observar e interpretar los resultados.

4. RESULTADOS

5. DISCUSIN

6. RESUMEN Y CONCLUSIONES

6
2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5

2.5
0.5
0.5