Вы находитесь на странице: 1из 24

Copyright « « » & «A K -C »

fi-b64%?

ДАНИЛЕНКО Елена Дмитриевна

ВЛИЯНИЕ ИНДУКЦИИ ИНТЕРФЕРОНА НА ФУНКЦИЮ СИСТЕМ, РЕГУЛИРУЮЩИХ ГОМЕОСТАЗ ГЛЮКОЗЫ

03.00.13 — физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск — 2006

Copyright « « » & «A K -C »

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки «Госу­ дарственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Масычева Валентина Ивановна

Официальные оппоненты: доктор биологических паук, профессор Дементьева Тамара Александровна

кандидат биологических наук Агафонов Александр Петрович

Ведущая организация: ГУ Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН

Защита состоится 20 июня 2006 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220.048.04 при ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет» но адресу: 630039, г. 11овосибирск-39, ул. Добролюбова, 160.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Новосибир­ ский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан « 4-3»

ил

QJL

Учёный секретарь диссертационного совета

2006 г.

СП. Князев

Copyright « « » & «A K -C »

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Несмотря на значительные успехи, достигнутые в лечении инфекционных заболеваний, инфекции по-прежнему представляют собой угрозу здоровью человека и сельскохозяйственных животных. Особенно острой является проблема данных заболеваний в период беременности. Известно, что вирусные и бактериальные агенты способны оказывать отрицательное воздейс­ твие иа развитие плода, исход беременности сельскохозяйственных животных и последующее развитие приплода (Митрофанов П.М., 1983, 1985; Ноздри и Г.Л., Допченко Л.С., 1997; Шкиль Н А и др., 1998; Згсбин И.И., Смирнов П.Н., 2001). Инфицирование матери служит причиной врожденной патологии се потомков:

сердечно-сосудистой патологии, аномалий гемоиозза, нарушения функции им­ мунной системы, ночек, центральной нервной системы (Контяева И.Б. и др., 1995; Терских И.И., Казанцев Ш1., 2000). К перспективным средствам лечения перинатальных инфекций можно отнести индукторы иитерферонаиаоснове двуспиральных РНК (дсРНК). В настоящее время препараты дсРНК, такие как ридостин, полудан, полигуацил, ларифан, использу­ ются в ветеринарии и медицине в качестве противовирусных, антибактериальных и иммуномодулирующих средств (Чекнев СБ. и др., 1994; Ершов Ф.И., 1996; Ершов Ф.И., Тазулахова Э.Б., 1999; Донченко Л.С, 2003; Масычева В.И. и др., 200-1; Alikin Yu.S. etal., 1995). В то же время вопрос о возможности их применения для антиин­ фекционной терапии в период беременности по-прежнему остается открытым. Есть основания полагать, что необходимым компонентом исследования перс­ пективных терапевтических средств, в том числе, средств лечения перинатальных инфекций должна быть оценка функционального состояния эндокринных систем потомков. Это объясняется ключевой ролью нейро-гуморальных механизмов в регу­ ляции физиологических функций и различных форм поведения. К числу таких систем следует отнести системы, обеспечивающие поддержание гомеостаза глюкозы: пшота- ламо-пшофизарно-надпочечниковую систему (ГГНС) и поджелудочную железу. Установлено, что воздействие факторов различной природы в период пре- натального развития способно вызывать длительно сохраняющиеся изменения функции ГГНС и поджелудочной железы взрослых потомков (Дыгало II,П., 1993; Осадчук Л.В. и др., 2004; Pollard I., 1984; Dorncr G. et al., 1988; Takao F. et al., 1990; Takaliashi L.K. et al., 1990; Dorner G., Plagemann A., 1994; Dorner G., 2000; Weinstock M. et al., 1998, 2005). Есть данные об участии в медиировании этих процессов гор­ монов коры надпочечников и глюкозы матери (Дыгало П.П., Паумспко Е.Б., 1983, 1988; Dorner G. et al., 1988; Weinstock M., 2005). В беременной самки для функционального созревания эндокринных систем потомс­ тва до сих пор не исследовался. Слабо изучены и вопросы, касающиеся влияния индукторов интерферона на общее физическое развитие и функцию центральной нервной системы потомков. Установлено, что дсРНК повышают синтез интерферона.И-акц№нветъ''ТТяда~ других факторов системы неспецифической ургШЧивости#£Л¥г^гСеС al., 2000;

время вопрос о последствиях индукции интерферона и организме

то же

\

имени К.А.

IHWF

\ No

Г'У dJxL~Z£0~~r~~~

Copyright « « » & «A K -C »

Gem J.E. et a]., 2003; Maggi LU.Jr. et al., 2003; Whitmore M.M. ct al„ 2004). Воздейс­ твию дсРНК подвержены и системы регуляции гомеостаза глюкозы (ГГНС, под­ желудочная железа) (Поляк Р.Я. и др., 1995; Blalock J.E., Harp С, 1981; Matsuguchi M.etal., 1985; Milton N.G. eta!., 1992; Sec D.M.TillesJ.G., 1995). Однако вопрос о динамике активации комплекса факторов неспецифической устойчивости под действием дсРНК и их взаимодействии в ходе этого процесса до настоящего времени не исследовался. Неясно также, является ли изменение функ­ ции ГГНС и поджелудочной железы обязательным компонентом неспецифической защитной реакции, которая формируется под действием индуктора интерферона. Открытым остается вопрос о влиянии дсРИК на синтез интерферон», активность ГГНС и поджелудочной железы беременных животных. В то же время, очевидно, что эти сведения важны для понимания механизмов реализации эффекта индуктора интерферона, введенного матерям в период беременности, на физическое развитие

и функциональное созревание данных эндокринных систем их потомков. Цель исследования: установить характер влияния индуктора интерферона, препарата двуспиральной РНК, на функцию эндокринных систем, регулирующих гомеостаз глюкозы, у взрослых животных и их потомков. В качестве объекта исследования были выбраны два вида лабораторных жи­ вотных — мыши и крысы. Мыши являются биологическим объектом, для которого доказана высокая чувствительность к действию дсРНК, крысы — классическим объектом исследования различных аспектов индивидуального развития. Задачи исследований:

1. Провести сравнительное исследование динамики изменения активности

факторов неспецифической резистентности, уровня кортикостеропдных гормонов

и глюкозы крови в процессе индукции интерферона иод действием дсРНК у мышей

и крыс.

2. Изучить динамику интерфероногенеза, изменения содержания глюкозы и

гормонов, регулирующих ее уровень (кортикостсрон, инсулин), в крови беремен­ ных самок крыс при введении препарата дсРНК в течение всей беременности или последней ее трети.

3. Исследовать влияние введения дсРНК беременным самкам крыс на физи­

ческое развитие и становление рефлекторной деятельности их потомков в ностна- тальном онтогенезе. А. Оценить уровень кортикостсрона, инсулина и глюкозы крови в покос и в условиях стресса у взрослых крыс, матерям которых вводили дсРП К в течение всей беременности или последней ее трети.

5. Исследовать алиянне дсРНК при длительном и кратковременном введении

в период беременности на состояние периферических и центральных звеньев ГГНС

взрослых потомков. Научная новизна. В работе впервые установлено:

1. Повышение активности факторов неспецифической защиты (интерферон,

макрофаги, нейтрофилы, моноциты, температура тела) иод действием препарата дсРНК в фармакологической дозе (5 мг/кг) сопровождается повышением актив­ ности ГГНС и снижением глюкозы крови. Синхронность обнаруженных изменений

4

Copyright « « » & «A K -C »

и появление новых корреляционных связей между факторами свидетельствует о их взаимосвязи и взаимной индукции.

2. И сравнительном эксперименте на мышах и крысах продемонстрирована

однотипность реакции животных разных видов на введение препарата дсРНК в фармакологической дозе, что проявлялось в повышении титров интерферона, характерных изменениях морфологического состава крови и активации ГГНС.

3. На беременных самках крыс установлена зависимость уровня продукции

интерферона под действием дсРНК от фазы беременности. Показано, что препарат дсР11К в фармакологической и субтоксической дозах (5 и 20 мг/кг, соответственно) способен изменять уровень глюкозы и контррегуляторных гормонов (коршкос- терон, инсулин) в крови беременных крыс. Эффект препарата зависит от дозы и длительности его введения.

4. Установлена зависимость показателей постнаталыюй смертности, массы тела,

изменений фонового и стрессорного уровня глюкозы, кортикостерона и инсулина потомков от дозы и длительности введения дсРНК их матерям.

5. Показано, что введение дсРНК самкам крыс с 1 по 19 день беременности не

вызывает изменения периферических звеньев ГШС их потомков, но способствует снижению содержания норадреналина в структурахголовногомозга. G. Установлено, что введение препарата дсРНК в фармакологической дозе бере­ менным самкам крыс в последней трети беременности (с 1G по 18 день) не оказывает влияния па физическое и рефлекторное развитие, функцию ГГНС, поджелудочной железы и обмен глюкозы взрослых потомков.

Практическая значимость работы. 13 результате проведенного исследования охарактеризованы отдаленные последствия применения препарата дсРНК в период пренаталыюго развития, установлены временные и дозовые зависимости модифика­ ции систем, регулирующих гомеостаз глюкозы, у взрослых потомков крыс. Определен период беременности, который является оптимальным для введения двуспиралыюго индуктора интерферона с точки зрения безопасности его применения. Основные положения, выносимые на защиту

1. Введение препарата двуспиралыюй РНК мышам н крысам в фармакологи­

ческой дозе (5 мг/кг) вызывает активацию комплекса факторов системы неспеци­

фической устойчивости организма: повышение титров интерферона, показателей фагоцитарной, метаболической активности иеритонеальных макрофагов и нейтро- филов крови, температуры тела, иейтрофилез, лейко- и лимфопсиию, увеличение массы тимуса и селезенки. Впервые показано, что компонентом этого процесса является модификация активности гипоталамо-пшофизарпо-падпочечниковой системы и обмена глюкозы.

2. Индукция интерферона у беременных самок крыс при длительном приме­

нении дсРНК в фармакологической и субтокснческой дозах (5 и 20 мг/кг, с 1 по 19 день беременности) приводит к изменению функциональной активности систем, регулирующих гомеостаз глюкозы — пиюталамо-гипофизарно-надпочечниковой

системы и поджелудочной железы. Трехкратное введение препарата дсРНК в послед­ ней трети беременности вызывает повышение синтеза интерферона без изменения функции данных эндокринных систем.

5

Copyright « « » & «A K -C »

3. Повышение продукции интерферона, изменение активности ГГНС и под­

желудочной железы беременных самок крыс при длительном введении препарата дсР1 i К (5 и 20 мг/кг, с 1 но 19 день беременности) не приводят к изменению показа­ телен рождаемости, физического и рефлекторного развития их потомков. Препарат оказывает разнонаправленное действие на показатели ранней постнатадыюй смер­ тности: увеличивает выживаемость потомства при введении в фармакологической дозе, снижает — в субтоксической дозе.

4. Отдаленные последствия длительного введения препарата дсРП К беремен­

ным самкам крыс (5 и 20 мг/кг, с 1 по 19 день беременности) выражаются в снижении

массы тела, изменении акт ивиоети 111 1С и поджелудочной железы, компенсаторном изменении уровня глюкозы крови взрослых потомков. Модификация функции ГГНС потомков не связана с нарушением периферических отделов системы, но может быть результатом изменения центральных механизмов ее регуляции.

5. Введение препарата дс ГНК в фармакологической дозе (5 мг/кг) самкам крыс

с 16 но 18 день беременности не приводит к изменению функциональною состо­

яния систем, регулирующих глюкозный гомеостаз, не отражается на показателях рождаемости, постнаталыюй смертности, физическом и рефлекторном развитии их потомков. Апробация работы. Материалы исследований но теме диссертации были представлены на следующих российских и международных конференциях: I и II съезды физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1987, 1995), на­ учно-практическая конференция «Инфекционной службе г. Новосибирска — !)() лет» (Новосибирск, 1994), Юбилейная 5-я научно-практическая конференция врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 1995), I научно-практическая конференция факультета ветеринарной медицины ИГЛУ «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 1997), 11 научная конференция с международным участием, посвященная 80-летию со дня рождения проф. М.Г. Кол- накова «Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии» (Новосибирск, 2002), международный мультидисциплинариый конгресс «Прогресс в фундаментальных и прикладных науках для здоровья человека» (Судак, 2004), международный междисциплинарный симпозиум «Отэкспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине» (Судак, 2005). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литера­ туры, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литера­ туры. Работа изложепаиа 150 страницах машинописного текста, проиллюстрирована 22 рисунками и 13 таблицами. Список литературы содержит 195 ссылок, из них 156 — на зарубежные источники.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследование проведено на 1052 лабораторных животных, в том числе: 84 по­ ловозрелых самках мышей линии СВА/Са массой 17-20 г; 415 самках крыс линии Wistar с массой тела 200-240 г; 553 самцах крыс линии Wistar массой 190-240 г.

6

Copyright « « » & «A K -C »

В экспериментах использовали препарат двуспиральной РНК, выделенной из киллер- ного штамма дрожжей Saccharomyc.es cerevisiae по методу (Дужак Л. Б. и др., 1985). Методы оценки показателей неспецифической устойчивости, уровня корти- костероидных гормонов и глюкозы крови мышей и крыс. Препарат дсРНК вводили однократно внутримышечно (в/м) в фармакологической дозе (5 мг/кг). В качестве контроля использовали животных, которым вводили в эквивалентном объеме фи­ зиологический раствор, и интактных животных. Череп 0,5; 1, 3, 6 и 24 ч после инъекции препарата мышам проводили замер температуры тела животных и взятие биологического материала (кровь, перитоне- альный экссудат, надпочечники, тимус, селезенка). Надпочечники и лимфоидные органы взвешивали и рассчитывали их относительную массу. В крови животных определяли титр интерферона (Носик Н.11. и др., 1982), фагоцитарную и окисли­ тельно-восстановительную активность нейтрофилов (Pereira H.A., Hosking C.S., 1984; Rook G.A.W. et al., 1985), содержание глюкозы (Колб В.Г, Камышников B.C., 1976), лнзоцима (Титов Л.И., 1975), общее число лейкоцитов и морфологический состав крови (Меньшиков В.В., 1987). В плазме крови и надпочечниках измеряли содержание 11-оксикортикостероидов (11-ОКС) (Резников А.П, 1980), оценивали фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов и активность внутриклеточ­ ной кислой фосфатазы (Кост Е.Л., Стенки М.И., 1975; Меньшиков В.В., 1987). В пробах крови крыс, взятых через 1,3,5 и 24 ч после инъекции, проводили под­ счет общего количества лейкоцитов крови, их морфологических форм, определяли титр интерферона, содержание глюкозы и 11-ОКС. Методы оценки уровня продукции интерферона и активности эндокринных систем, регулирующих гомеостал глюкозы, у беременных самок крыс. В эксперименте использовали половозрелых самцов и самок крыс линии Wistar 3-3,5-месячпого возраста. Беременность устанавливали методом влагалищного мазка. Эффекты препарата дсРПКоцснивали при его применении в разных дозах и при разной длительности введения. Препарат вводили внутримышечно в дозе 5 мг/кг и и дозе, в 4 раза ее превышающей (20 мг/кг). Как было показано в предварительных экспериментах, доза 20 мг/кг вызывала ряд отклонений в состоянии внутренних ор­ ганов крыс, выходящих за границы физиологической нормы, и была определена как субтоксическая. Препарат вводили однократно, либо многократно, в течение всего

периода беременности (с 1 по 19 день) или в ее последней трети (на

Сроки введения были выбраны в соответствии с данными о критических периодах развит ия ГП 1С и поджелудочной железы, а также длительной модификации ГП1С

потомков крыс, матери которых подвергались действию неспецифических факторов

в эти периоды беременности (Pollard 1

al., 1996). Контрольным животным в те же сроки вводили физиологический раствор. В качестве дополнительного контроля были использованы интактные крысы. Через 5 и 24 ч после однократного или окончания трехкратного введения, а так­ же через 5 ч после каждой инъекции в случае многократного введения у животных отбирали образцы крови из хвостовой вены, в которых определяли титр интерферона (Носик Н.Н. и др., 1982).

Maccari S. etal., 1995; Barbazanges Л. et

16,17 и 18 день).

1984;

/

Copyright « « » & «A K -C »

Через 1,5 и 24 ч после однократной инъекции, либо через 24 ч после окончания многократных инъекции крыс декантировали, отбирали на анализ образцы крови и надпочечники. Для оценки уровня продукции кортикостерона надпочечники инкубировали в растворе Кребс-Рингсра (Fenskc M., 1985). Содержание инсулина

в сыворотке крови, кортикостерона в плазме крови и инкубатах надпочечников опре­

делял и радиоиммунным методом с помощью набора реактивов «Рио-ИНС-ПГ- 125 1» (Институт биоорганической химии ЛИ Белоруссии, г. Минск) и «РИН-В-'Н» (НИИ экспериментальной патологии и терапии РЛМИ, г. Москва). Концентрацию глюкозы крови оценивали глюколоокендазным методом с использованием набора реактивов «Новоглюк» (ЛО « Вектор-Бсп>, шт. Кольцово Новосибирской обл.). Методы оценки показателей постнаталыюго развития и гормонально-мета­ болического статуса потомков, матерям которых в период беременности вводили дсРНК. Исследование проводили на половозрелых потомках крыс, самцах, матерям которых препарат дсРНК (или физиологический раствор) вводили с 1 но 19 день, либо с 16 но 18 день беременности. Исследование физического и рефлекторного развития потомков проводили от момента родов до достижения животными половой зрелости (2 месяца). В ходе исследования регистрировали следующие показатели:

продолжительность беременности, количество новорожденных в помете, гибель по­ томства в послеродовом периоде, динамика формирования условных и безусловных рефлексов, масса тела, мышечная сила и работоспособность. Становление безусловно-рефлекторной деятельности оценивали по времени возникновения рефлексов «переворачивание на плоскости», «отрицательный гео­ таксис», «избегание обрыва», «обонятельная реакция». Процессы формирования, сохранения и воспроизведения условных рефлексов оценивали у крысят в тесте УРПИ (условная реакция пассивного избегания) (Кругликов НИ., Долганов I". М., 1972). Ориентировочно-исследовательскую реакцию животных исследовали в тесте «открытое поле» (Штемберг Л.С, 1982). При статистической обработке данных в качестве независимой переменной использовали среднеезначение соответствующего показателя для отдельного помета. Оценку функционального состояния ГШС и поджелудочной железы потомков проводили по достижении животными возраста 4-4,5 месяцев. Тестирование вклю­ чало определение содержания инсулина, кортикостерона и глюкозы крови крыс в покос и в условиях эмоционального стресса, вызванного 30-минутным ограничением подвижности животных в цилиндрах из металлической сетки. Для оценки нренаталыюго воздействия дсР11К на функцию периферического звена ГШС потомков определяли уровень продукции кортикостерона надпочеч­ никами in vitro (Fenske М., 1985) и их чувствительность к ЛКТГ в дексаметазоно- вом тесте (Vernikas J. et al., 1982). Состояние моноаминергическнх систем мозга, участвующих в регуляции функции ГШС, оценивали по уровню норадреналина

в продолговатом, заднем и среднем отделах головного мозга крыс методом (De

Saint B.C. etal., 1987). Статистическая обработка данных. Статистическую обработку эксперимен­ тальных данных и их корреляционный анализ проводили с помощью пакета ком­ пьютерных программ «Stat^raphics, Vers.5.0» (Statistical Graphics Corp., USA). Для

8

Copyright « « » & «A K -C »

каждого исследуемого признака методами описательной статистики определяли показатели среднего арифметического (М), стандартного отклонения (сг) и стандарт­ ной ошибки (т) . Достоверность полученных различий оценивали с использованием t-критерия Стьюдента. Различия считались достоверными при уровне значимости, равном либо превышающем 95%.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Особенности фармакологического действия двуспиральной РНК на организм мышей и крыс

Изучение влияния препарата дсР11К в дозе 5 мг/кг на показатели неспсцифичсс- кой защиты мышей линии СИЛ позволила установить, что изменения затрагивали весь комплекс исследованных факторов. Препарат вызывал повышение титра интерферона, температуры тела, функ­ циональной активности нейтрофилов крови (рис. 1Л-1В) и макрофагов нери- тонеального экссудата. Увеличение способности к фагоцитозу сопровождалось повышением метаболической и секреторной активности фагоцитов: увеличением числа ИСТ-ноложитсльных нейтрофилов (в два раза, по сравнению с контрольным уровнем), активности кислой фосфатазы макрофагов (на 72%) и уровня лизоцима крови (на 12%). В крови животных было отмечено повышение абсолютного количества нейтро­ филов и моноцитов (на 78% и 107%) при снижении числа лимфоцитов и лейкоцитов (на 52 и 23%, соответственно). Данные изменения носили, по-видимому, перерасп­ ределительный характер, о чем свидетельствует повышение относительной массы тимуса и селезенки (на 48 и 38%, соответственно). Воздействие индуктора интерферона приводило к модификации гормональ­ но-метаболического фона организма, что проявлялось в повышении в крови уровня кортикостероидных гормонов (рис. 2) и снижении — глюкозы (на 26%). Полученные данные согласуются с представленными в литературе сведениями об усилении под действием дсРНК синтеза интерферонаа- и р-типа (Дужак A.M. и др., 1985; Калиберов С.Л. и др., 1995), повышении активности фагоцитов (Фадина В.Л., Разворотнев В.Л., 1988), развитии пнрогенной и лейкопенической реакции (Won S.J., Lin M.T., 1988; Milton N.G. et al., 1993, Salzaz-Mather T.P. ct al., 1996), а также активации коры надпочечников (Milton N.G. et al., 1992; Wong J.Y. et al., 1993). Изменения показателей в наших экспериментах наблюдались, преимуществен­ но, через 3-6 часов после введения индуктора, на лике продукции интерферона. Их синхронность позволила предположить возможность взаимодействия и взаимной индукции данных факторов в процессе интерфероногенеза, что было подтверждено результатами корреляционного анализа. Подсчет парных коэффициентов корреляций показал, что воздействие препа­ ратом дсРН К вызывало формирование сложных корреляционных зависимостей в системе факторов неспецнфической устойчивости.

9

Copyright « « » & «A K -C »

«Ч

1400

 

S

1200

 

/ \ "

s .

1000

 

°- 0 5

800

•е.

2

400

200 }

 

1

0

 

0,5

24

Время после введения, ч

Время после введения, ч

 

-

-«-Физиологический раствор;

-

дсРНК, 5 мг/кг

_

Рис.1. Влияние дсРНК (5 мг/кг, в/м) на титр ИФН крови (А), температуру тела (Б) и фагоцитарную актишюсть нейтрофнлои крови (В) мышей. * — Различия с контролем (физ. раствор) достоверны, р<0,05.

10

Copyright « « » & «A K -C »

250

•§200

X

I

о

о

9

150

*100

50

0

1

3

6

Время после введения, ч

•- Без воздействия -* - дсРНК, 5 мг/кг

-* -

Физиологический раствор

Рис. 2. Влияние введения дсРНК (5 мг/кг, в/м) на содержание 11-ОКС в крови мышей. Различия достоверны: * — по сравнению с показателями мышей, которым вводи­ ли физиологический раствор, р<0,05; # — по сравнению с показателями интактных животных, р<0,05.

К отличительным особенностям опытной группы можно отнести возникнове­ ние больших), чем в контроле, числа связей между исследуемыми показателями с максимальным усложнением корреляционной решетки через 6 часов после введения. Важным отличием является также появление корреляционных ветвей,

связывающих интерферон с различными фракциями лейкоцитов, с одной стороны,

и с гормонами коры надпочечников и глюкозой — с другой. Эти данные свидетельс­ твуют о регулирующем влиянии интерферона на функциональное состояние ГГНС

и обмен глюкозы.

Однократная инъекция препарата крысам в дозе 5 мг/кг усиливала продукцию ин­ терферона (до 890 ИЕзд/0,2 мл), повышала уровень кортиюхггероидных гормонов крови (на 19%) и вызывалахарактерные изменения клеточногосоставапериферической крови:

развитое лимфоиенической реакции (снижение абсолютного числа клеток на 45%) и сегментоядерного нейтрофилеза (повышение числа клеток более, чем в 3 раза). Межвидовые различия касались интенсивности реакции па дсРНК и ее дина­ мики. Изменение таких показателей, как титр интерферона, содержание 11-ОКС и снижение числа лимфоцитов в крови крыс было менее выраженным, чем у мышей,

и наблюдалось в более ранние сроки, в то время как увеличение числа нейтрофилов

крови крыс было более значительным. В отличие от мышей, инъекция препарата крысам ие приводила к изменению общего числа лейкоцитов и не влияла на уровень глюкозы крови, что может быть связано с кратковременностью и/или меньшей интенсивностью реакции на препарат у животных данного вида. Полученные ре­ зультаты согласуются с данными авторов работы (Смородинцев Л.А. и др., 1978) о разной чувствительности мышей и крыс к воздействию индукторов интерферона.

11

Copyright « « » & «A K -C »

Таким образом, на двух видах лабораторных животных показано, что введение препарата двуспиралыюй РНК в фармакологической дозе, помимо индукции ин­ терферона, способствуют активации комплекса факторов системы нсспецифической устойчивости организма. Одним из компонентов этого процесса является модификация гормонально-метаболического фока, которая заключается в изменении уровняглюкозы и/или кортикостероидных гормонов крови.

Влияние препарата двуспиралыюй РНК на организм беременных самок крыс

Как однократное, так и многократное введение препарата дсРНК в фармако­ логической дозе (5 мг/кг) беременным самкам крыс вызывало повышение уровня интерферона крови. Н условиях ежедневного введения препарата с 1 по 19 день беременности процесс носил двухфазный характер, с четко выраженными пиками продукции на 2-6 и 12-13 дни (рис. 3). Последняя треть беременности (15-19 дни) отличалась менее интенсивным синтезом интерферона в ответ на введение индуктора.

1400

2 с 1200

о*

|юоо

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

16

19

Время после оплодотворения, сут

[-•-Физиологический раствор -"-ДсРНК,_5 мг/кг|

Рис. 3. Динамика изменения титров ИФП в сыворотке крови беременных крыс на фоне ежедневного введения дсРПК (5 мг/кг, в/м) или физиологического раствора.

Данные, представленные на рис. 4, свидетельствуют о том, что инъекция препа­ рата дсРПК в дозах 5 и 20 мг/кг самкам крыс на второй день после оплодотворения вызывала повышение в сыворотке крови содержания кортикостерона, но сравнению с показателями контрольных и интактных животных. Эффект дсРНК был отмечен в первые часы после инъекции, носил кратковременный характер, и усиливался при увеличении дозы препарата.

12

Copyright « « » & «A K -C »

1

5

24

Время после введения препарата, ч

Без воздействия

•Я ДсРНК. 5 мг/кг

: Физиологический раствор (III ДсРНК.2Сl мг/кг

Рис. 4. Изменение уровня кортикостерона крови беременных самок крыс линии Wistar (2-е сутки после оплодотворения) в ответ на однократное введение дсРНК

в разных дозах. Различия достоверны: * — но сравнению с показателями мышеи, которым вводили физиологический раствор, р<0,0Л; ## — но сравнению с показателями иитактных животных, р<0,01.

Инъекция препарата в субтоксичегкоп дозе повышала в крови животных уро­ вень глюкозы (до 6,61+0,39 ммоль/л при .4,8110,26 ммоль/л в контроле, различия достоверны, р<0,05.21 ч после введения), чего не наблюдалось при введении дсР1 IK

в фармакологической дозе. Введение препарата дсРНК с 1 по 19 день беременности приводило к повыше­ нию активности ГГ11С беременных крыс через сутки после последней инъекции, что проявлялось в увеличении массы надпочечников (ц ответ па введение дсР11К в дозах 5 и 20 мг/кг) и усилении продукции кортикостерона (5 мг/кг) (табл.). В то же время стойкого изменения уровня кортикостерона крови ни в одной ил опытных групп не обнаружено. Препарат дсРНК в субтоксическон дозе (20 мг/кг, с 1 по 19 день беременности) вызывал снижение уровня инсулина в периферической крови (на 40%) и повышение содержания глюкозы (на 30%). Фармакологическая доза препарата подобным эффектом не обладала. Трехкратное введение препарата дсРНК с 16 по 18 день беременности не приводило к длительно сохраняющемуся изменению уровня глюкозы, инсулина и кортикостерона крови, отличному от контрольных или интактпых показателей. Таким образом, введение препарата дсРНК в период беременности, как одно-, так и многократное, приводило к изменению активности систем матери, которые, возможно, способны оказывать модифицирующее воздействие на эмбрион: системы интерферона, ГШС и поджелудочной железы. Препарат усиливал синтез интерфе­ рона, повышал активность ГГНС и снижал функцию поджелудочной железы, что сопровождалось повышением уровня глюкозы крови.

13

Copyright « « » & «A K -C »

Таблица

Показатели функции ГГНС беременных самок крыс линии Wistar через сутки после окончания введения дсРНК

(5 и 20

мг/кг, в/м, с 1 но 19 день беременности)

Группа живошых

Г>сз нозлсйстьия

Физиологический рас­

твор

ДсРНК,

5 мг/кг

1>сз воздействия

Физиологический рас­

твор

ЛсРПК,

20 мг/кг

Масса надпочеч­ ников, мг/100 г

21,2±0,96

(6)

21,2 + 1,46

(7)

25,0±0,73

(7) й# *

22,2+0,80

<0>)

24,311,80

(5)

31,5+1,80

(6)*

Продукция кортикоптроиа удельная, нг/мг/ч

суммарная,

МК[/Ч

603,3+69,3

(6)

692,5+86,7

(7)

1013,8+131.9

(7)#

584,2+153,4

(7)

775,8+169,0

(7)

569,1+194,6

(6)

42,78±4.65

49,84+4,56

(7)

81,63+12,62

(7)#*

39,94+10,15

(7)

50,88+8,39

(7)

51,51±15,62

(6)

Кортикостсрон

кропи, т/мл

378,0-21,8

(6)

267,Ш2,9

(7)#

320,0±39.8

(6)

258,2+67,9

(«)

303,3133,8

(6)

299,0±79,3

(6)

Различия достоверны: по сравнению с показателями интактпых животных (# — р<(),05, ## — р<0,01); по сравнению с показателями крыс, которым вводили физиологический раствор (* — р<0,05)

Следует отметить тот факт, что эффект дсРН К на функциональную активность эндокринных систем, регулирующих обмен глюкозы, зависел от его дозы и дли­ тельности введения. Наиболее разнообразные и интенсивные изменения показате­ лей вызывал препарат в высокой дозе (20 мг/кг) при его введении в течение всей беременности; менее значимыми были эффекты дсРНК в дозе 5 мг/кг. Инъекции дсРНК в последней трети беременности не вызывали существенных изменений исследованных показателей.

Особенности физического развития и гормонально-метаболический статус крыс, подвергшихся пренатальному воздействию препарата дсРНК

Данные о влиянии пренатального воздействия дсРНК на физическое развитие и становление функций ЦНС крыс в раннем постнатальном онтогенезе Инъекции дсРНК в дозе 5 мг/кг самкам крыс I опытной группы в течение всего периода беременности не отражались на ее продолжительности. В группе самок, получавших препарат в дозе 20 мг/кг (II опытная группа), беременность удлинялась, в среднем, на сутки. Частота гибели крысят I опытной группы в первые два дня жизни существенно не отличалась от контрольного уровня, тогда как количество погибших во И опытной

14

Copyright « « » & «A K -C »

группе более, чем в 2 раза, превышало уровень контроля. В последующие сроки наблюдения (с 3-го дня жизни и до конца предцубсртатного периода) процент погибших крысят во II опытной группе соответствовал контрольным значениям. Выживаемость потомства, вскормленного матерями 1 опытной группы, вэтотпериод была в 2,7 раза выше, чем в контроле. Процесс формирования безусловных рефлексов у крысят, рожденных матерями

I и II опытных групп, по своим временным характеристикам мало отличался от его динамики в контрольной и иптактнои группе животных. Показатели формирования

и воспроизведения условной реакции пассивного избегания у крысят опытных фупн

в возрасте 7 недель и 2 месяцев также, в основном, соответствовали контрольным показателям. Не обнаружено существенных отличий в показателях мышечной силы

и работоспособности, уровне двигательной и исследовательской активности крысят всех экспериментальных групп. В то же время пренатальное воздействие препаратом дсРНК

приводило к слабо выраженному, но статистически значимому снижению массы тела потомков. Значения данного показателя у крысят I и II опытных групп в возрасте 45 дней были, соответственно, на 7 и 11 % ниже контрольного уровня, и эта закономерность сохранялась в двухмесячном возрасте. Введение ирепаратадсРНК в дозе 5 мг/кгс 1С по 18 день беременности не оказы­ вало существенного влияния на показатели рождаемости, постнаталыюй смертности, физическое развитие и становление рефлекторной деятельности потомков. Таким образом, инъекции дсР11К в фармакологической дозе беременным самкам крыс при разной длительности введения не оказывали влияния на физическое и рефлекторное развитие потомков. Длительное введение препарата в субтоксической дозе приводило к увеличению постнатальной смертности, в фармакологической дозе снижало уровень показателя. Введение дсР11К в обеих использованных дозах в тече­ ние всей беременности приводило к умеренному снижению массы тела потомков.

Данные об уровне функционирования ГП 1С и поджелудочной железы взрос­ лых потомков крыс, матерям которых в течение всего периода беременности вводили препарат дсРНК Исследование показало, что введение препарата дсРНК беременным самкам крыс с 1 но 19 день беременности приводило к изменению функционального со­ стояния ГП 1С их взрослых потомков. 11реиарат в обеих использованных дозах (5 и 20 мг/кг) вызывал снижение фонового и стрессорного уровня кортпкостерондных гормонов в крови крыс опытных групп, по сравнению с показателями контрольных и иитактных животных. 11ри этом степень увеличения гормонов коры надпочечников

в ответ на эмоциональный стресс в опытных группах возрастала (рис. 5). Введение дсРНК в дозе 5 мг/кг беременным самкам крыс, не оказывало влияния на синтез и секрецию в кровь инсулина в состоянии покоя их потомков (рис. 6). Воз­ действие более высокой дозой препарата (20 мг/кг) приводило к повышению уровня инсулина крови. Препарат дсРНК в обеих использованных дозах ослаблял реакцию поджелудочной железы на иммобилизациоиный стресс.

15

Copyright « « » & «A K -C »

D Без воздействия

Я ДсРНК, 5 мг/кг

• Физиологический раствор

111 ДсРНК, 20 мг/кг

Рис. 5. Содержание кортикостерона в периферической крови в покое и при стрессе у взрослых самцов крыс, матерям которых с 1 по 19 день беременности вводили препарат дсРНК (5 и 20 мг/кг, в/м). Различия достоверны: по сравнению с показателями интактных животных (# — р<0,05) и показателями крыс, которым вводили физиологический раствор

(*-р<ОД);***-р<0,001).

Фоновый уровень

Стрессорный уровень

• Физиологический раствор

Без воздействия |иДсРЩ^ 5 мг/кг

ШДсР.НК, 20 мг/кг

I

Рис. 6. Содержание инсулина в периферической крови в покое и при стрессе у взрослых самцов крыс, матерям которых с 1 по 19 день беременности вводили препарат дсРНК (5 и 20 мг/кг, в/м). Различия достоверны: по сравнению с показателями интактных животных (# — р<0,05; ## — р<0,01; ### — р<0,001) и показателями крыс, которым вводили физиологический раствор (* — р<0,05; *** — р<0,001).

16

Copyright « « » & «A K -C »

Пренаталыюе воздействие препаратом дсРНК в дозе 5 мг/кг не изменяло фонового уровня глюкозы крови взрослых потомков, но приводило к снижению стрессорной реакции. Введение препарата в субтоксической дозе (20 мг/кг) вы­ зывало значительное и длительно сохраняющееся изменение обмена глюкозы у их потомков, которое проявлялось в снижении фонового уровня показателя и ослаб­ лении его реакции на стресс (рис. 7). Сравнительный анализ свидетельствует о параллелизме изменения уровня глюкозы, кортикостеропа и инсулина в крови потомков, матерям которых вводили препарат дсР11 К. Ппсдсние дсР11К п субтоксической дозе вызывало снижение уров­ ня глюкозы крови животных, которое сопровождалось повышением содержания инсулина и снижением — кортикостеропа. Воздействие препарата дсРН К в обеих использованных дозах усиливало реак­ цию на стресс ГПIС потомков и ослабляло — поджелудочной железы. Как результат, менее интенсивным было снижение в ответ на стрессирование уровня глюкозы. Эти данные свидетельствуют об изменении в результате пренатального воз­ действия дсРНК функционального состояния систем, продуцирующих гормоны- антагонисты. Модификации, по-видимому, могут подвергаться как периферические, так и центральные регуляторные звенья данных систем.

|П Без воздействия

П Физиологический раствор!

^ДсРН_К,_5мг/кг

П1 ДсРНК, 20 мг/кг

j

Рис. 7. Содержание глюкозы в периферической крови в покое и при стрессе у взрослых самцов крыс, матерям которых с 1 но 19 день беременности вводили препарат дсРПК (5 и 20 мг/кг, в/м). Различия достоверны: по сравнению с показателями пнтактных животных (# — р<0,05; ### — р<0,001) и показателями крыс, которым вводили физиологи­ ческий раствор (** — р<0,01).

17

Copyright « « » & «A K -C »

Q Без воздействия ИДсРНК, S мг/кг

• Физиологический раствор ШДсРНК, 20 мг/кг

Рис. 8. Содержание норадреналина в структурах головного мозга (I — средний мозг, II — задний мозг, Ш — продолговатый мозг) самцов крыс, матерям которых с 1 по 19 день беременности вводили препарат дсРН К (5 и 20 мг/кг, в/м). Различия достоверны: по сравнению с показателями интактпых животных (## — р<0,()1; ### — р«),001) и показателями крыс, которым вводили физиологи­ ческий раствор (* — р<0,05).

Для выяснения этого вопроса было проведено исследование функции перифери­ ческих и центральных звеньев ГГНС потомков крыс, подвергнутых пренатальному воздействию дсРНК. Эксперименты с инкубацией надпочечниковых желез in vitro показали, что введение матерям дсРН К не вызывало изменения продукции кортикостерона корой надпочечников их потомков. Не обнаружено статистически значимых различий и в уровне реакции на АКТГ надпочечников крыс разных экспериментальных групп на фоне дексаметазоновой блокады. Эти факты позволяют исключить изменение на уровне надпочечников в качестве возможной причины снижения фонового уровня и повышения стрессорной реактивности ГГНС. 15 то же время содержание норадреналина в структурах головного мозга, содержащих скопления иерикариоиов норадренергических нейронов (средний, задний, продолговатый мозг), крыс обеих опытных групп было достоверно ниже показателей контрольных и интактных животных (рис. 8). Наиболее выраженное падение норадреналина наблюдали в среднем мозге, в меньшей степени изменения затрагивали продолговатый мозг. Известно, что норадреналин способен оказывать прямое ингибирующее действие на кортикостероидные рецепторы гиппокампа и усиливать секреции) глюкокортакои- дов (Maccari S. et al., 1992). Повышенная реакция коры надпочечников на эмоциональ­ ный стресс является следствием усиления синтеза и высвобождения норадреналина в

18

Copyright « « » & «A K -C »

терминалях нейронов гипоталамуса, либо повышения чувствительности к нему сина- итических рецепторов (Хухо Ф., 1990). Возможно, снижение уровня норадрспалина в головном мозге крыс, подвергшихся пренатальному воздействию дс РНК, способно приводить к повышению чувствительности глюкокортикоидных рецепторов мозга и, как следствие, снижению в крови концентрации кортикоотроидных гормонов. В свою очередь, одной из причин повышения реакции на стресс ГП 1С может бытьувеличенне числа адренершческих рецепторов или их связывающей способности. То есть, введение препарата дсРНК в фармакологической и субтоксической дозах самкам крыс и течение всего периода беременности приводило к длительной модификации функции ГП 1С, поджелудочной железы и обмена глюкозы их взрос­ лых потомков. Пренаталыше воздействие препаратом не оказывало нлияния на функцию периферических звеньев ГП 1С потомков, но вызывало снижение, уровня норадрспалина в структурах головного мозга, что позволяет говорить о возможности изменения центральных регуляторных звеньев данной системы.

Данные об уровне функционирования ГГНС и поджелудочной железы у взрослых потомков крыс, матерям которых с 16 по 18 день беременности вводили препарат дсРНК Исследование показало, что фоновый уровень глюкозы крови потомков крыс, подвергшихся воздействию дсРНК в дозе 5 мг/кг в последней трети беременности, был достоверно выше, чем у интактных животных, по не отличался от показателей контроля. Введение препарата не приводило к изменению фонового уровня инсу­ лина крови, продукции кортнкостерона надпочечниками, их реакции на ЛК'ГГ и содержания кортнкостерона в крови взрослых потомков. Уровень кортнкостерона и инсулина при стрессе, вызванном иммобилизацией, в крови крыс опытной группы не отличался от показателей контрольных групп. Со­ держание глюкозы крови животных опытной фуппы по окончании стрессирования было достоверно ниже, чем у крыс, матерям которых вводили физиологический раствор, но не отличалось от показателей ннтактных животных. Таким образом, введение препарата дсРНК самкам крыс с 16 по 18 день бере­ менности не приводило к изменению функциональной активности ГГНС, подже­ лудочной железы и обмена глюкозы их взрослых потомков. Полученные данные позволяют заключить, что изменение функционального состояния ГГНС и поджелудочной железы потомков вызывает лишь длительное введение дсРНК их матерям в течение всего периода беременности. Глубина и раз­ нообразие изменений зависят от дозы препарата и коррелируют с интенсивностью модификации функции данных эндокринных систем матерей н процессе индукции интерферона. Следовательно, есть основания полагать, что изменение функции ГГНС и поджелудочной железы потомков может быть обусловлено как прямым действием препарата дсРПК на формирующиеся эндокринные системы плода, так и являться результатом его опосредованного воздействия, через изменение уровня гормонов и глюкозы в крови матери в процессе интерфероногеиеза.

19

Copyright « « » & «A K -C »

выводы

1. Установлено, что активация факторов неспецифической резистентности

(интерферон, макрофаги, нейтрофилы, моноциты, температура тела) иод действием

двуспиралышй РНК в фармакологической дозе (5 мг/кг) у мышей сопровождается повышением активности пшоталамо-гинофизарно-надпочечниковой системы и сни­ жением уровня глюкозы крови. Данные корреляционного анализа свидетельствуют о взаимосвязи между изменением показателей интерферона, 11-оксикортикостеро- ндов и глюкозы в крови экспериментальных животных.

2. 1$ сравнительном эксперименте показано, что реакция па однократную инъ­

екцию препарата двуспиралышй РНК в фармакологической дозе у мышей и крыс, в целом, однотипна. Результатом введения препарата крысам является развитие неспецифической реакции (повышение продукции интерферона, нейтрофилез, лимфопении), ассоциированной с усилением активности гиноталамо-пшофизарно- надпочечниковой системы.

3. Индукция интерферона под действием двуспиралышй РНК у беременных

самок крыс при длительном применении препарата (с 1 но 19 день беременности) приводит к изменению функции систем, регулирующих гомеостаз глюкозы. Эффект дсРНК зависит от величины использованной дозы: препарат в фармакологической (5 мг/кг) и субтоксической (20 мг/кг) дозах усиливает активность ГГНС, в дозе 20 мг/кг ослабляет активность поджелудочной железы, что приводит к повышению уровня глюкозы крови. Введение дсРНК в фармакологической дозе с 16 по 18 день беременности усиливает продукцию интерферона, не вызывая изменения функци­ онального состояния ГГНС и поджелудочной железы самок крыс.

А. Введение препарата дсРШ(идизс 5 мг/кг беременным крысам с 1 но Ц)деиь беременности не оказывает существенного влияния на показатели рождаемости, постнатальной смертности, физического развития и становление рефлекторной деятельности их потомков. Препарат в фармакологической дозе снижает показа­

тели ранней постнатальной смертности, в субтоксической дозе увеличивает этот показатель.

5. Отдаленные последствия индукции интерферона, модификации функции

ГГНС и поджелудочной железы беременных самок крыс в ответ на длительное введение препарата дсРНК (5 и 20 мг/кг, с 1 по 19 день беременности) выража­

ются в снижении массы тела и разнонаправленном изменении активности данных эндокринных систем взрослых потомков. Эффект препарата носит дозозависимый характер и проявляется в снижении уровня кортикостероиа, повышении уровня инсулина крови в покос, усилении реакции ГГНС и ослаблении — поджелудочной железы в условиях стресса, что сопровождается компенсаторным снижением фо­ нового уровня глюкозы и ослаблением ее стрессорной реакции.

6. Изменение функции ГГНС взрослых потомков крыс, матерям которых с 1 но

19 день беременности вводили препарат дсРНК в дозах 5 и 20 мг/кг, не связано с нарушением функции периферических отделов системы, но может быть результа­ том модификации центральных механизмов ее регуляции, о чем свидетельствует снижение уровня норадреналина в структурах головного мозга потомков.

20

Copyright « « » & «A K -C »

7. Введение препарата дсРНК в дозе 5 мг/кг беременным самкам крыс, с lfi

по 18 день беременности не оказывает влияния на показатели рождаемости, иост- натальной смертности, физического и рефлекторного развития, функцию ГГНС н обмен глюкозы взрослых потомков. Следовательно, данный период беременности являетгя оптимальным для введения индуктора интерферона г точки зрения отда­ ленных последствий его применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Данные, полученные в ходе проведенного исследования, свидетельствуют в пользу возможности применения препарата двусниральной дрожжевой РНК для профилактики и лечения перинатальных инфекций животных. Препарат дсРНК может быть рекомендован для введения сельскохозяйственным животным в ка­ честве профилактического и лечебного средства при вирусном и бактериальном инфицировании матерей; лабораторным животным — в качестве профилактического средства в инфекционном очаге н с целью получения безвирусных племенных ядер животных при их селекции. Результаты исследований могут быть использованы для оформления отчетов о доклинических испытаниях при представлении докумен­ тации в Ветфармсовст РФ с целью получения разрешении на производственные испытания препарата.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иммуно-эндокрипные взаимодействия при индукции интерферона у ла­

бораторных животных / К.Н. Веревкина, Л.Н. Костомаха, Е.Д.Даниленко и др. / / Актуальные проблемы физиол. и с.труктурно-функц. основ жизнедеят.: Науч. тр. 1 съезда физиол. Сибири. Новосибирск, 1987. С. 3G-37.

2. Изменение показателей неспецифической защиты организма мышей при

введении двуеинралииок РП 1С из дрожжей Sacvhanmyces сегпшае/ КЛI. Веревкина, А.Н. Костомаха, Е.Д.Даниленко и др. / / Вонр. вирусологии. 1989. № 1. С. 69-72.

3. Даниленко Е.Д. Функция коры надпочечников в процессе формирования

состояния антиинфекциониой устойчивости под действием препарата ридостин / Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева// Инфекционной службе 11овосибирска — 90 лет:

Сб. материалов науч.-ирактич. конф. Новосибирск, 1991 С. 82-81

•1 Даниленко Е.Д. 11оиск новых экспериментальных подходов к оценке последс­ твий патогенного воздействия в период ирснаталыюгоразвития/ Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева / / Актуальные вопросы современной медицины: Тез. докл. Юбилей­ ной 5-и науч.-практич. конф. врачей. Новосибирск, 1995. Т.2. С. 126-127.

5. Даниленко Е.Д. Влияние индукции интерферона в период внутриутробного

развития па гормональный статус взрослых крыс/Е.Д. Данилепко, В.И. Масычева// 2-й съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока: Тез. науч. сообщений. 11опоси- бирск, 1995. Ч.1.С. 12Й-127.

6. Даниленко Е.Д. Некоторые закономерности применения индукторов интер­

ферона в раннем онтогенезе млекопитающих/ Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева / /

21

Copyright « « » & «A K -C »

Актуальные вопросы ветеринарии: Тез. докл. 1-й науч.- практич. конф. факультета ветеринар, медицины ИГЛУ. Новосибирск, 1997. С. 10-11.

7. Создание средств стимуляции системы неснецифической резистент­

ности / В.И. Масычева, Е.Д. Даниленко, Н.М. Пустошилова и др. / / Вестник РАМН. 1998. Л 1 » 1С. 13-17.

8. Даниленко Е.Д. Влияние индукции интерферона у беременных крыс на гормо­

нальный статус их взрослых потомков / Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева / / Эндок­ ринная регуляция физиологических функций в норме и патологии: 2-я науч. конф. с междуиар. участием, посвященная 80-летшо со дня рождения проф. М.Г. Колпакопа:

Тез. докл. Новосибирск, 2002. С. 45.

9. Изучение отдаленных последствий применения индуктора интерферона в

период внутриутробного развития / Е.Д. Даниленко, Л.В. Батеиева, Л.Ю. Сизова и др. / / Прогресс в фундаментал. н прикладных науках для здоровья человека:

Междунар. мультидисциплинар. конгресс; дискус. научн. клуб, Судак, Крым, 10-21 июня 2004 г.: Тез. докл. М., 2004. С. 91-93. 10. Даниленко Е.Д. Исследование роли двуспиральных PI IK в онтогенезе систем гормональной регуляции / Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева// От эксперимент, биол. к превентивной и интегративной мед.: Междунар. междисциплинар. симп., Судак, Крым, 24 сентября — 3 октября 2005 г.: Сб. тр. Новосибирск, 2005. С. 35-36.

11. Сысоева Г.М. Перспективы использования индукторов интерферона в лечении и профилактике гриппа и ОРВИ /

Г.М. Сысоева, В.И. Масычева, Е.Д. Даниленко// Вестник РАМП. 2004.Т.П. С. 33-38. 12. Даниленко Е.Д. Влияние индукции интерферона в период нреиаталыюго раз­ вития на гормональный статус взрослых крыс/ Е.Д. Даниленко, Л.В. Батеиева, В.И. Масычева / / Вестник биотехнологии и физико-химической биологии. 2005. Т. 1, № 2. С. 30-35.

22

Copyright « « » & «A K -C »

в печать 16 мая 2006 г. Объем 1,0 усл. исч. л .

Бумага офсетная. Гарнитура «Petersburg». Заказ № 252. Тираж 100 экз.

Подписано

Формат 60x84

11счатное издательство «Агро-Сибирь» г. Новосибирск, ул. Никитина, 155, тел.: (383) 267-19-90,264-00-72

Copyright « « » & «A K -C »

Copyright « « » & «A K -C »