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Pomme de terre
200 g
Eau distille
700 ml
Laver, couper en morceaux les pommes de terre, les faire cuir, ensuite filtrer et
ajouter les ingrdients suivants :
-
Succrose
20 g
Agar
15 g
Puis ajuster la quantit deau 1000 ml par leau distille. Autoclaver pendant 20
min 120C et conserver pour lemploi ultrieurement.
Agar
15 g
Eau distille
1000 ml
Sol
500 g
Eau ditille
1000 ml
Glucose
10 g
Agar
15 g
Puis ajuster la quantit deau 1000 ml par leau distille. Autoclaver pendant 20 min
120C et conserver pour lemploi ultrieurement.
Nb : De prfrence utilise le sol du mme nature du sol chantillons (sol tudi).
CDA (Czapek Dextrose Agar)
-
NaNO3
3g
MgSO4
0,5 g
KH2PO4
1,5 g
FeSO4
0,05 g
KCl
0,5 g
Succrose
30 g
Agar
15 g
Puis ajuster la quantit deau 1000 ml par leau distille. Autoclaver pendant 20 min
120C
2-Prparation des colorants : les colorants sont utiliss pour lobservation microscopique
des champignons. Le colorant possder obligatoirement est le bleu coton. Ce colorant, on
peut le trouver sous deux formes
* Bleu coton au lactophenol : Utilis pour les prparations conserves.
0.1 g
Eau distille
20 ml
Acide lactique
20ml
Aprs trois jours dincubation vous coulez les milieux de culture (PDAac et CDA) dans
des boites de Petri ensuite, aprs solidification de ces milieux, vous transfrez les morceaux
des (Feuilles, Tiges, Fruits et Racine). Vous incubez les boites pendant 3 5 jours en 28 C.
Concernant le sol, rcuprez-le sol adhrent aux racines, Schez-le 30 C dans des
fonds de boite de Petri et Broyez le dans un mortier strile. Dispersez une quantit de terre (5
15 mg) dans des boites de Petri striles, ensuite ajoutez 1 2 gouttes deau distille strile,
par la suite vous coulez les milieux de culture (PDAac, CDA et SGA). Vous agitez les boites
de Petri doucement avant solidification et incubez-les 28 C pendant 5 Jours.
TP n4 : Observation Microscopique
Identification microscopique :
* La microculture : Aprs incubation vous transfrez les lamelles sur dautres
lames striles contenant quelques gouttes du bleu coton. * La mthode de scotch :
vous crasez un morceau de scotch sur une colonie fongique pure et ensuite vous
le transfrez sur une lame strile contenant quelques gouttes du bleu coton
* Observation microscopique : Vous observez au microscope grossissement
10, 40 et 100. Vous comparez les observations par celles dcrites par Barnett
(1972).