Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
10
........................................................................................................ ..16
(2008)........................ ..17
................................18
1.
.......................................................................... ......21
1.1. .........................................21
1.2. ............................................................. .22
1.3. .................................... .49
1.4. ................................................................................ .56
1.5. .............................................................................58
1.6. .........................................................................................62
1.7. .................................................................66
1.8. ........................................................................ .76
1.9. .................................................. ................82
1.10. . ................................. .85
1.11. .................................................................................... 90
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2.1. ................... .............................100
2.1.1. ...........................................100
2.1.2.
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2.1.3. .................................... 104
2.1.4. .........................................104
2.1.5. ,
, , ,
................................................................107
2.1.6. ...................... 108
8
2.1.7. ........108
2.1.8. , ...................
110
2.2. ..............................................................................110
2.3. ,
............................................................. 110
2.4.
................................................................111
2.5. ..................................................................... 116
2.6. .................................................................116
2.7. ................................................................117
2.8. .............................................. 118
2.9. .................................. 122
2.10.
..................................................................... 125
2.11. ........................................126
2.12. ......................................................... 128
2.13. ..................................................................... 129
2.14. ........133
2.14.1.
............................................................ 133
2.14.2.
........................................................................ 134
2.14.3.
134
2.14.4. .................................................. 136
2.15. ......................... 137
2.16. in vitro............................................138
2.16.1. .................................... 139
2.16.2.
( )........................................................... 140
2.16.3.
....................................................157
2.16.4.
....................... 165
2.16.5. .....................171
3. ()............... 180
3.1. ...................................................................... 182
3.2. ................................................................................. 187
3.3. ( )..........187
3.4. ( )..... 199
3.5. ( )....................203
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9
10
II : 1 PN, 2 .
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zona pellucida.
zona
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zona pellucida.
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11
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8
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- ,
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, ,
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zonapellucida
Cumulus
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Expanded blastocyst
Full (expanded) blastocyst
FISH
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()
GV
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HEPES-
, HEPES
(N- {2-hydroxyethyl}piperazine-N-{2-ethane- sul
fonic acide}),
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,
,
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I-e
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14
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PZD
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SpermWash
TDT
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,
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I-
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1,2- Pr
Partial zona dissection
Quality control
Universal IVF Medium
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,
.
3 .
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,
.
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1995 . ,
( , 1996 ., 2,
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1995 . (
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1996 .
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2.1.
2.1.1.
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O2
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9
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2
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1000-2000 .
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2.
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2.1.4.
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11.
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.
12.
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13.
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.
,
.
14.
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. ,
,
.
.
.
15.
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2.1.
2.1.5.
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1. ,
,
,
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,
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, .
2.
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.
3. , , ,
, , , ,
, , , ,
.
4. ,
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5.
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1 .
2.
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,
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9.
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10. ,
,
.
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2 .
2.1.6.
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2.1.7.
1.
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2.1.
2.
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.
3. , ,
.
4.
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5.
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.
6. (
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.
7. ,
, .. , 30-40 .
.
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2) 1% ;
3) 1% ;
4) (70 , , ..);
5) 5% ;
6) ;
7) (26 .)
1,0 (2 .);
8) , ;
9) , ;
10) -
6 . .
109
2.
.
.
2.1.8. ,
,
(
2.1.7.728-99 ,
- ).
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, ( ) .
.
2.2.
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Cohen.
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2.3. ,
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,
110
2.4.
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.
.
.
,
(. 2.1.3.
),
2.4 .
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-
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. , ,
.
, ,
.
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2.
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, ,
.
ex consillio .
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,
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1,5 .
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2.4.
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(
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(Flushing Medium, SynVitro Flush, ),
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,
;
,
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(),
( 810 );
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(Liquid Paraffin, ),
( ) 1,2
(
);
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), 0,7
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;
113
2.
2.4.
,
, ,
;
;
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, ,
;
;
.
.
2.8. 2.9.
.
1015 (. 2.1 , , ).
. 2.1 .) ; )
2.
2.5.
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.
2.6.
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in vitro, 2.16.1.
. . 2.16.2.
( ).
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,
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,
, ;
,
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;
,
;
:
, , ;
.
116
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2.7.
,
.
,
,
1998 .
:
.
(Quality control QC) .
,
.
in vitro
(
, ).
,
24 48 .
. ,
.
Origio () (www.origio.com)
, ,
.
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, .
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LifeGlobal, SAGE,
.
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,
, 117
2.
,
.
, Global
Blastocyst (LifeGlobal) 10% .
,
, .
.
2.8 .
,
( 10 ).
, .
.
.
.
.
: 30 , 17GA.
: Laboratoire CC D , Fr; Gynetics Fertipro N.V. Belgium;
Cook, USA.
,
. ,
,
. 510%
.
.
. ,
.
,
118
2.8.
, ;
37 .
,
(. 2.2, , ).
,
.
1 (. 2.3).
. 2 . 2 , , .
2.
. 2 .3 . --
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.
.
(60 15 )
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( 25 50).
,
.
,
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45 1 3 (. 2.4, ).
,
- .
, , 2 .
,
2 4 .
120
2.8.
. 2.4 , .
45 . ,
.
,
(37 ) pH .
,
(. 2.4, ).
. 2 .4 , . ,
2.
2.9.
-: ,
(corona radiata).
- ,
.
.
( ,
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(. 2.5).
, ,
(MI).
MI . in
vitro
.
. 2 .5 . GV
-, , (
),
, ,
. -
, .
.
2.9.
- (. 2.6).
. 2 .6 .
()
, .
.
(. 2.7).
,
8.
. 2 .7 .
,
-
.
,
123
2.
.
,
(. 2.82.11).
. 2 .8 . II,
. 2 .9 . II,
. 2.10. II,
2.10.
. 2 .1 1 . ,
( ,
, -)
. ,
, ,
.
2.10.
in vivo
( )
,
,
.
. ,
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,
, .
125
2.
.
- ( swim-up)
.
.
, ..
.
, SupraSperm , Isolate .
, swim-up,
(Sperm Preparation Medium
), .
1 (uIVF,
)
37 3060 .
,
, .
2.11.
1)
2 - 4 (
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2) , ,
2 .
, , ,
.
3)
.
,
2.11.
4)
5)
6)
7)
8)
9)
10)
,
. ,
.
, ..
.
.
,
( 37
20 ) .
,
, ,
, .
, ,
.
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.
, :
) (. );
)
;
) .
,
.
, .
,
, .
2.
11) ,
( .. ,
) , ,
. ,
.
.
12)
,
,
24 .
, ,
,
, ,
.
, ,
.
2.12.
1) (
30 ) (,
, , ,
)
.
2) ,
(5 ) 18-
.
.
.
3)
(~ 1020 l)
2.13.
;
,
.
4) ,
,
10 .
, ,
, .
100
10.
,
.
:
Grade 4 (1 - 2 ) ;
Grade 3 (23 ) ;
Grade 2 (34 )
;
Grade 1 (> 4 ) , .
2.13.
,
, SupraSperm 90% (
), Isolate 90% (Irvine Scientific).
:
1) 1,5 (Supra
Sperm, Isolate)
, .
1015
37 .
2) 1,5 SupraSperm
. ,
(HTF 5%)
(. 2.12-2.14).
129
2.
. 2 .1 2 .
. 2 .1 3 . a SupraSperm
. 2.14.
2.13.
3) 15002000 /
15 (. 2.15).
. 2.15.
4) ,
0,5 ,
.
,
.
,
, ,
, .
5)
SupraSperm ,
2 (Sperm
Preparation Medium, , SpermWash),
5 (. 2.16).
2.
. 2.16.
6)
, ,
1 (H TF 5%
uIVF).
7)
.
,
1 5 106 1 ,
- :
46 1 (SupraSperm,
Isolate .), ,
;
2 ,
,
,
;
, ,
2 ,
; -
2.14.
;
, ,
;
,
, ;
, ,
,
ICSI.
2.14.
2.14.1.
,
: (MESA); (TESE):
(PESA); (TESA); (SPAS); (RETA).
/
, .
23 . /
(
).
,
,
,
. ,
.
133
2.
2.14.2.
1) 1
,
5
2000 /. ,
0,5 .
2)
.
(. . 2.16.5).
2.14.3.
,
3 HTF Hepes,
37 . (
) .
,
( ).
,
+37
.
,
. .
1) 2
60 15 (. 2.17).
2)
(. 2.18).
1 .
2.14.
. 2.17.
. 2.18.
3) 5
.
4) 5
700 /.
5) ,
1
.
6)
35x15
20 (. 2.19).
135
2.
. 2 .1 9 .
7)
,
,
.
8)
(. . 2.16.5).
2.14.4.
, 1 ,
.
,
.
,
(
!)
2.15.
.
.
2.15.
.
.
.
.
.
,
.
.
1. 10 25 .
2. .
3. 15 50 .
4. .
5. .
6. -.
7. .
8. IVF .
.
1.
24 : 4 ( 1 ) 4 .
- ,
.
2. .
, 8
( , ). 8-
2.
.
.
3.
pH
. pH 6,58,5.
28090 mOsm.
,
, 15
pH .
, .
4. pH
, ,
, .
5.
500 g 20 .
6. ,
, 4
.
500 g 10 .
7. 1 ,
,
.
.
;
.
2.16. IN VITRO
:
( ).
,
.
2.16. in vitro
2.16.1.
.
, .
30
(. 2.4.
).
Nunc, -
- ,
2 4.
.
1 .
, ,
( 0,1
1 )
100 000150 000
1 .
in vitro, ,
100 000
1 ,
: (
1 ),
-
,
.
( 45 )
Nunc.
4 0,8
(Liquid Paraffin, ).
1-
2
( 0,1 ).
2.
(. 2.20).
. 2 .2 0 .
2.16.2.
()
.
,
,
. ,
,
.
ex consillio,
.
:
1) 1 5 -
;
2) (
4 );
2.16. in vitro
3) 5%
(
);
4)
80%;
5)
(
);
6)
;
7) (MAR-
50%);
8) (
20%) ;
9) ().
.
:
.
(ScanLaf, )
.
.
:
1) ,
;
:
(Hoffman modulation
contrast, ),
(differenciation interferented contrast,
DIC), (Nomarsky D IC);
2)
(10 20 ,
);
3)
(.. ),
2.
;
;
4) .
,
,
Nikon, Olympus, Karl Zeiss, Leica.
.
2 (
).
,
.
.
,
.
.
.
-- ,
(. 2.21).
. Narishige, Eppendorf, Research
Instruments (Integra).
(holdingpipette) . 75100 ,
1520 .
3035.
/
(ICSI pipette),
. 78 ,
5-5,5 .
2.16. in vitro
. 2 .2 1 .
(spike)
.
(COOK, HU M AG EN,
Swemed, Research Instrument .)
.
,
.
:
( ),
.
.
:
1)
HTF, Albumine (5%),
uIVF ( ) .;
143
2.
2) polyvinylprolidone (PVP);
3)
;
4) ,
(
1,0 );
5) Nunc
.
.
.
.
.
.
,
. (Origio, LifeGlobal,
VitroLife .)
, , HEPES,
pH
.
, ,
. 1 3
Nunc 0,7 ,
0,7 .
0,3 .
,
HEPESa.
20 -.
HEPES-,
2.16. in vitro
,
.
,
-
( 3 ). -
20 ( - 1 ,
), 1 3
.
10 -.
- ,
2 4, 30
3 ,
(. 2.22). 30
120
130 m (Midatlantic, ).
4.
. 2.22.
,
:
145
2.
2.16. in vitro
, ).
PVP. PVP
23 ,
.
, (22,5 ).
, ,
pH
.
1520
pH.
,
,
,
.
PVP
,
(. 2.14.
).
,
.
-
0,1 /
(
), PVP.
PVP
,
,
.
/
,
( ),
.
2.
.
.
,
,
.
.
( 10).
:
;
;
10
( ).
10. ,
35 45;
,
;
- ,
, , ,
.
.
.
.
PVP
.
2.16. in vitro
PVP ,
.
,
.
.
.
PVP 23 ,
.
,
( 200).
,
. ,
,
.
,
.
.
.
-
. ,
, .
.
. .
PVP (
),
.
.
.
2.
,
.
,
PVP/ .
(. 2.232.26)
. 2 . 2 3 .
. 2 .2 4 .
2.16. in vitro
. 2 .2 5 . ICSI
. 2 .2 6 . ICSI
. ,
.
(),
(,
)
, .
151
2.
,
, 6 12
.
, ..
(. . 2.23).
.
.
,
.
34 (
2/ 3 ,
).
, , ,
.
, .
, (. . 2.24).
,
,
. ,
. ,
,
.
, PVP,
, , ..
.
,
.
.
12 .
2.16. in vitro
.
(
3 ).
.
-
/ 0,1 /
( ),
.
,
.
(
)
.
PVP.
, PVP.
(3 -4 )
15 (
pH, HEPES-)
.
/
,
,
.
( s
). ,
,
PVP,
.
.
153
2.
,
.
.
().
.
,
.
.
(
).
.
35% .
.
,
(
).
PVP
.
,
.
1618
(. 2, 3).
. ,
2.16. in vitro
2
( ., 2002)
> 65 %
< 10%
1 PN
< 10%
3 PN
< 6-7%
5-6
(, 2002)
1.
PVP
2.
)
PV
)
3.
)
)
)
)
4.
1 PN
,
PV
5.
3 PN
) DNA
)
6.
7.
)
)
)
155
2.
.
( assisted heatching).
:
(pH 2,22,5) (Acidified Tyrodes Solution, );
;
(PZD
, ).
.
3- (68 ).
,
.
:
,
;
,
;
, ,
,
,
zona pellucida;
,
,
30 ;
,
;
.
,
.
2.16. in vitro
2.16.3.
.
, .
4- Nunc
,
.
(8 1
). 0,9
. 1, 2
3 0,9
2 ( 0,050,1 ) (ISM1,
EmbryoAssist, ). 4
,
.
O2-.
(. 2.10.
) (. 2.16.
in vitro).
(1- )
1. 1618
. (< 16 )
(> 20 )
- ,
,
.
,
( )
2.
.
,
.
,
.
2.
.
.
(Denuding pipetts). (~ 160m)
.
,
, ,
.
3.
,
.
.
4.
(10).
, ,
.
, /.
.
.
2.16. in vitro
, .
/.
(2PN) ,
, (2)
.
1. :
, PN (3PN, 4PN
) 2 .
2. (Polygynic): 2 PN 1 (
, ..
, , ,
PN).
2-
:
: 1 PN, 2 ;
: 2 PN, 1 .
II,
GV MI (. 2.27, -).
:
, ,
zona pellucida, , ;
,
,
, ;
pH /
;
(
2 ).
,
.
159
2.
. 2 .2 7 . : ) ,
; ) , ;
) , ; ) ,
, 2-
1.
160
48
.
.
) :
,
(, ,
).
(. 2.28, ).
) :
2 22-44 ;
4 3650 .
2 . 16. in vitro
. 2 . 2 8 . : ) ,
20%; ) ; )
(< 10%); ) ();
) , ; ) ,
50%; -) ( )
2 4
.
2.
,
.
161
2.
3. 2-
, 3-, .
4-
2
(BlastAssist, ).
3 .
, 3-
72
Grade
(. 2.29, a - ).
Grade 1 68 ,
,
.
.
Grade 2 6 ,
, 10%.
Grade 3 4 ,
, 30%.
Grade 4 ,
, 50%.
,
.
.
5 , 3
.
.
, 4-
3 .
4
, . -
2.16. in vitro
. 2 .2 9 . : ) ,
10%; ) ( ); )
, ; )
(); )
( 5%); ) , 50%;
- ) ( )
,
.
,
5-
5
163
2.
/ .
,
/ .
, ..
(dr. D.K. Gardner):
( 1 6) (, , ) .
: ,
.
:
1 :
(1).
2 :
(1 2).
3 :
(1 ).
4 :
; zona pellucida (1 4,
1 5).
5 :
zona pellucida (h. 15) (. 2.30)
6 :
- zona pellucida (full h. Bl).
. 2 .3 0 . (h. Bl5AA)
2.16. in vitro
( / I).
A. .
B. .
C. , .
:
A. , ()
B. , .
C. (23) .
,
pH . ,
,
(), .
(
: ,
..). 5- ( 120
)
, 4.
2.16.4.
1993 .
4872 48
3 - 4 . 1994 .
3 ,
4 , ,
. ,
,
5 2 .
(Grade 12),
.
2.
3- 34
/
(Grade 34).
1
.
.
,
,
,
.
.
:
, ,
, (. 4).
.
,
, .
,
,
. ,
,
. ,
,
.
.
:
;
, , 1 ;
.
166
2.16. in vitro
4
Wallace
Portex Limited UK
-01
Biomedical LTD,
1- , SFM
Hospital Products Gm bH, .
.
(UTM, ),
( ) ,
.
.
. ,
,
(3 5 ).
3
(13 ). 4
, ,
45- .
,
.
8 -1 0
5- ,
.
,
; ex consillio ,
.
48 ( 2- )
.
,
. ,
167
2.
,
, , ..
.
( ). -,
4
0,6 (UTM , )
.
. -,
(
):
35 10 , 1 (
, )
;
60 15 , 2,55,0 H TF
.
.
(.
, 3
). 3-
2- , 5- 12 .
.
,
.
,
.
,
(, .),
2.16. in vitro
.
,
.
, .
,
. , ,
.
.
.
.
.
,
,
, .
.
(-)
.
.
, .
.
,
,
, ,
.
.
.
70% .
. 1015
2.
4
.
:
35 15 ;
1 ;
, ;
.
, :
, ;
.
, ,
-, ,
, .
50 (. ).
.
,
.
,
, .
, ,
. ,
,
.
:
12 ,
(12 ), (1 )
(1 -2 ).
, ,
.
, ,
(-) (-), .
, ,
, (-) (-)
.
170
2.16. in vitro
, . ,
,
.
, .
.
.
.
:
;
;
30 2 ,
,
;
;
.
, ,
. ,
.
( )
. ,
, .
(-) (-),
.
2.16.5.
.
-
.
171
2.
: (
) ().
,
.
, ,
.
,
.
, .
( ),
,
,
.
(/),
(,
.).
,
/ .
/.
,
.
,
,
.
(, ),
.
Sperm Freezing Medium
(FertiPro, )
(CryoSperm, Sperm Freezing Medium, ).
3 :
172
2.16. in vitro
;
;
(
).
.
,
, ,
.
, ,
. ,
2.10.
2.14.1.
.
.
,
(. 2.10.
), :
();
.
:
1)
;
2) 5 10 ;
3) ;
4) 1,0 1,82,0
0,5 ;
5) ;
6) .
I) , ,
2030 ,
173
2.
,
.
2)
;
.
3) ,
,
90% ( 1
), (: ..
30.01.2007) ;
4) 30 (
), 30 +4 30 ;
5) 1
( );
6) ,
,
, ,
-
, .
.
-
(2030 ) 37
(1015 ).
.
, , ..
(SupraSperm, PureSperm, Isolate, SillSelect
.), 15 (2000 /),
, 2 SpermWash (. 2.10.
).
1 (-196 ).
.
, ,
.
174
2.16. in vitro
.
-
. - .
,
() ().
/.
,
, , (SpermFreeze)
.
.
HTF/Hepes,
.
,
(SpermFreeze), .
.
() ()
, .
1.
,
(SupraSperm, Isolate
.) ,
-
.
2. (
) ,
2 , 2 SpermWash,
5 (2000 /),
, 0,050,1 ,
.
175
2.
.
, ,
.
(
).
:
( CryoLogic
-);
- ;
Nunc;
0,25 133 ;
;
1 , 5 , 10 ;
;
(uIVF,Origio);
;
1 ;
;
.
. ,
,
.
,
.
,
,
(OocyteFreeze MediCult
Vitrification Cooling, ).
+37 .
Kitazato, .
()
( ),
().
176
2.16. in vitro
Origio BlastFreeze
(. 2.31).
. 2 .3 1 .
BlastFreeze (Origio)
17 7
2.
,
, ..
.
( ),
.
.
. 2 .3 2 .
BlastThaw
178
2.16. in vitro
,
.
.
1
2 (BlastThaw, Cat#10542010,
Origio) .
(. 2.32).
, 2 - 5 .
.
( )
- .
(),
,
(),
.
(
, , )
.
.
in vitro
.
()
(, )
.
180
3. ()
.
XX (
, )
,
(19432009).
2005 ,
, - (the Queen
Elizabeth Hall)
(Preimplantation
Genetic Diagnosis International Society).
2-
.
,
,
(. ).
:
, , ,
, 19 2005 .
3. ()
in situ
(FISH) ( /PC R ).
(array comparative genomic
hybridization a-C G H ). a-C G H
,
. :
.
a-C G H , , -,
.
.
,
. 3 .1. ,
,
.
3.1.
6 .
.
,
:
(-, -,
X- Y-), (
). ,
. ,
.
.
, : I82
3.1.
,
, .
.
:
35
;
,
( );
,
, - ;
(
;
).
,
,
(
3 4 ).
,
,
.
(/PG S).
FISH
9 -1 2 .
,
: 8, 9, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 21, 22, X, Y.
,
90%
. 5
(13, 18, 21, X, Y) 2831%
41 %
, .
183
3. ()
3.1.
. 3 .1 .
3. ( )
,
,
, ,
.
,
.
( ),
,
.
, ,
,
. ,
, ,
.
-
(53), (RB1), ().
1 (NF1) II (NF2),
(BRCA1, BRCA2), -
(ATM), . ,
, RB 1,
,
90%.
,
.. .
,
. 10
. ,
. 3
,
.
/
186
3.3. ( )
LA- /,
.
.
,
, ,
.
200 ,
.
.
social sexing.
.
,
, .
3.2.
:
1) ,
, ;
2)
;
; FISH
;
3) - -
.
3.3.
( )
. .
187
3. ( )
35 . 2
.
(
10 ) :
, ,
,
.
.
2
60 (. 3.2).
. 3 .2 . /:
; /;
/; 035 ;
0 6 0 .
, 0,1 .
-
,
.
.
, 2+ Mg2+(, BiopsyMedium,
Origio),
.
3.3. ( )
, ,
.
Nunc,
.
.
, ,
(
).
,
.
.
PZD (partial zona dissection, HUM AGEN,
)
.
,
.
,
/,
.
1516 ,
2530 .
.
()
; ,
.
3035 .
,
,
.
189
3. ( )
( 10 20).
:
,
, ;
,
PZD ;
PZD
1,5 /.
, ,
, (
Pb Cat#K-PBBP-2535, Cat#K -PZD P1035, Cat#K-EBPH-3535)
Humagen ( Pb Cat#M AH-SM -35,
PZD-35,
MBB-FP-M-35).
.
FISH.
FISH I II , ,
1518 .
.
.
,
(. 3.3, ).
,
12 (. 3.3, ),
,
.
, 12
1011
190
3.3. ( )
. 3 .3 , -.
(. 3.3, , ). .
, ,
,
,
. ,
.
.
,
12 .
. ,
,
(. 3.4, , ),
,
(. 3.4, ).
,
P b l, .
- ,
(. 3.4, ). .
191
3. ( )
. 3 .4 , -. , ( )
,
, .
, ,
Nunc
.
FISH .
, , in vitro
( 72 )
.
.
-, V- -
,
.
- . ,
12 , (. 3.5, )
( -
3.3. ( )
. 3 .5 , - .
( )
) (. 3.5, , ).
,
12 (. 3.5, ),
. -
(. 3.5, ).
V- . V-
,
12
( ) ,
.
.
193
3. ( )
1011 .
- . ,
12 .
( ),
12 .
,
1 -2
1011 .
.
3
(. 3.6, ).
,
.
(. 3.6, ). ,
,
(. 3.6, )
,
(. 3.6, ).
,
(. 3.6, ). .
.
,
,
(. 3.6, ).
. -
,
. :
;
;
20 .
194
3.3. ( )
. 3 .6 , - . ( )
45 ,
, 1618
.
,
.
.
(. 2.16.2.
()), 3040
.
,
6 (. 3.7, ), -
3. ()
. 3.7, -. ( )
( ),
(. 3.7, , ).
, 45
7 - 8 (. 3.7, ).
(. 3.7, , ).
,
,
5 (. 3.7, , ).
, 196
3.3. ( )
. 3 .7 , -. ( )
,
(. 3.7, , ).
,
(. 3.7, ).
.
,
,
(. 3.7, ).
, ,
.
197
3. ( )
,
.
.
:
,
3 (. 3.8, , ).
(. 3.8, , ).
.
.
(. 3.9, -).
.
FISH.
, ,
.
. 3 .8 , -.
( )
3.4. ( )
. 3 .9 , - . : - )
; -)
, ;
)
3.4.
( )
FISH.
.
,
100.
3 : 1 ,
2 - 20 .
-
3. ()
SuperFrost ,
, ,
( / ),
.
.
4050 .
, .
.
.
.
2 , ,
1 ,
.
,
.
, .
, ,
.
.
,
( 5 ).
.
.
12 ,
.
.
- 2 0 ,
,
.
200
3.4. ( )
.
- : 60
100 ,
4050 .
1% ,
0,6% BSA (bovine serum albumin
).
0,2 +2
+8 .
35 ,
23 .
.
5 .
, .
(
), .
, .
,
,
. ,
,
.
.
.
12 , .
, .
.
201
3. ( )
5
, .
50 ,
100 .
.
- .
, ,
, 2 .
/. ,
(P b1, Pb2, 1).
.
,
.
.
,
,
.
( , ).
. /
-
.
.
/
(, 1b2 1;
,
).
, ,
12 ,
202
3.5. ( )
,
.
, -20
.
3.5.
( )
3.5.1. FISH
FISH
.
, ,
.
FISH
, ,
()
.
FISH
.
.
FISH
,
,
(),
.
FISH :
;
;
in situ;
203
3. ( )
;
DAPI (
Blue DAPI )
,
.
,
FIS H :
1. 0,1 200
(Sartorius, Ohaus).
2.
(Olympus, Nikon, CarlZeiss, Leica),
. (. 5):
Blue ( Spectrum
Blue)
Aqua ( Spectrum
Aqua)
Green ( Spectrum
Green)
Yellow ( Spectrum
Gold)
Red ( Spectrum
Red)
DAPI ( DAP1)
3. (MRc, MRm CarlZeiss).
4.
(CarlZeiss AxioVision Software + AxioVision 4 Module
Multichannel Fluorescence).
5. /
(HYBrite) (ABBOTT).
6. - (MEMM ERT).
7. - FV-2400 (BioSan).
8. ST-3 (ELM1).
9. .
10. - 20 .
3.5. ( )
5
A B B O TT Mollecular
,
Spectrum Red
Spectrum Gold
Spectrum Green
Spectrum Aqua
Spectrum Blue
nm
592
530
497
433
400
nm
FWHM
35
37
30
53
61
612
555
524
480
450
FWHM
39
45
56
55
50
3. ( )
6
FISH
(Abbott Molecular, Kreatech Diagnostics)
,
: antifade II solution, DAPI II
counterstainig (Abbott Molecular)
Vectashield Mounting Medium (Vector Laboratories)
(SIGMA)
(SIGMA)
-20 (SIGMA)
(MERCK)
() (SIGMA)
NaOH 10N (SIGMA)
96
-2 0 ,
-2 0 ',
-2 0
,
,
,
F IS H
1.
20xSSC (3 NaCl, 0,3 Na, pH 7,0).
175,3 NaCl 88,2 800
, pH 7,0 0,5 NaOH.
1000 .
.
. 6
, .
2xSSC. 100 20xSSC 900
, pH,
pH 7,0 0,5 NaOH.
. .
1xSSC. 50 20xSSC 950
, pH,
206
3.5. ( )
FISH (.
),
(95% 70% ). 70%
74 95%- 26
. 95 70%
23-
FISH.
.
2. :
12
FISH
-
.
46,XY.
3. ( )
(-) .
FISH.
, +60
(G M H 3230)
.
- 100
, 100 1xSSC /0,1%
-20 100 1xSSC.
30
-
.
- +37 0,5 .
30
.
+37 0,5 .
,
.
FISH. FISH.
FISH, ,
, , ,
.
,
, .
-
.
, Abbott Molecular,
( http://www.abbottmolccular.com/) Kreatech Diagnostics,
(http://www.kreatech.com/).
.
3.5. ( )
, 22ql 1.2
( ), 15q11-q 13 (
) .
.
-
. ,
,
( 13, 16, 18, 21, 22 ),
24 .
,
( 2 9 ).
. ( 0,5 )
,
.
1. LSI - , ,
(TelVysion) .
()
,
. :
(
0,5 ) 7 L Hybridization Buffer, 1 L ,
2 L ;
13 ;
45 1
10 ;
.
2. , MultiVysion M ulti
Vysion PGT (Abbott Molecular) ,
: LSI, , TelVysion,
209
3. ( )
MultiVysion MultiVysion PG T
70% .
.
,
(),
-.
(
) ,
+60 1 , 1 .
: 70 25 ,
96 1 .
+60 1 .
: 100
, +37 1
-, 85
60100
, .
1xSSC,
+37 1 -, 5
.
,
12 ,
5 (
); 5 .
1xSSC,
+37 1 -, 5
.
1%
1015 ( )
.
1xSSC,
+37 1 -, 5
.
210
3.5. ( )
( ).
: 70 25 ,
96 1 .
+60 1 .
,
.
,
, (
56 ) .
+371 .
1,5
, ,
(
12 ),
,
.
, ,
.
( ).
+74 5 ,
510 . ,
(
).
211
3. ( )
(+37 )
+37 1
.
/
.
+37 1 .
1 ( )
,
, .
.
2xSSC
.
1xSSC / 0,1% -20 1xSSC
+47 0,5 2
-.
.
: 70 25 ,
96 1 .
42 .
3 L ,
- ,
24 24 ,
( ,
40 + 2 ).
()
.
5
.
212
3.5. ( )
: 70 510 ,
96 510 .
. F ISH
,
, ,
(
).
( )
, .
- .
-,
( ), ,
LSI .
.
,
, (
).
FISH
(
). (
)
.
.
, .
, .
2 ,
-
(. 3.10, 1a).
,
3. ( )
. 3 .1 0 . FISH : ) ; ) 2
(. 3.10, 2).
,
.
1
. ,
1
(. 3.10, 1, 2).
2
(. 3.11). (
) ,..
, ,
.
:
1) ,
( );
2) ,
, (
); ()
- ;
3) ,
,
().
21 4
3.5. ( )
215
3. ( )
- /
, ,
,
,
, ,
(. 7).
7
,
, /
/
/
( )
*
*
()
*
() .
3.5.2.
,
in vitro,
,
(
) .
.
3.5. ( )
,
, :
-, - ,
.
, ,
.
, ,
, .
,
, .
,
( ),
.
, , ,
. ,
, ,
.
,
, , .
,
.
.
,
, , ,
, .
:
;
, -
-,
;
;
217
3. ( )
, ,
,
;
DNA Contaminant Removal
Solution (DNA-OFF);
,
.
,
,
.
( , ..).
,
. ,
,
, ,
,
.
,
.
,
.
,
1.
2.
3.
4.
5.
218
(Applied biosystems).
(Applied biosystems, Bio-Rad).
.
- FV-2400 (BioSan).
- (BioRad).
3.5. ( )
6. (BioRad).
7. (Eppendorf).
8. 0,5
10 , 220 , 20-100 , 100-1000 (Eppendorf).
9. 8- (Finnpipette).
10. (Biometra).
11. (Bio-Rad, UVItec).
12. .
13. .
14. .
15. .
16. .
17. - 2 0 .
18. 0,6 ,
- - .
19. 0,6 , .
20. 1,5 .
21. 2 .
22. 0,2 , 96 .
23. .
24. , 20 , ,
- -
.
25. , 200 , ,
- -
.
26. , 1000 , ,
- -
.
27. 20 .
28. 200 .
29. 1000 .
30. .
31. .
219
3. ( )
FISH
1. ,
- - .
2 . 20 /.
3. Taq -.
4. MgCl250 mM.
5. 10 N H 4 .
6 . dNTPs 2,5 .
7. .
8. .
9. .
10. .
1 1 . N ,N ---.
12. TEM ED.
13. 0,625 /.
14. (N H 4)2S2O8
15. , .
16. FF.
17. .
18. (DMSO).
19. Tween 20.
20 . Triton X -100.
2 1 . DN A-OFF .
1. ( Nested ),
-.
2.
5 , .
3. 12 .
4. .
.
5. 15 45
.
220
3.5. ( )
6.
20
96 ,
( ),
7. 72 45 ,
, MgCl, dNTPs,
,
, -
.
,
, .
8. 30 , 10
72 ".
9. 25 , ,
, .
10. 2
-.
11. 1 .
12. 30 (
;
).
13. 5
.
14.
(
).
.
ADO
(Allele Drop Out).
.