El aislamiento en cultivos es imprescindible para establecer la identificacin de Candida al
nivel de gnero y especie, para efectuar las pruebas de susceptibilidad in vitro a los antifngicos, as como para llevar a cabo estudios moleculares (los cuales actualmente no se encuentran al alcance de los laboratorios de baja complejidad). Cabe recordar que la sola visualizacin microscpica de levaduras y/o seudomicelios en un material clnico no autoriza al operador a establecer siquiera la identificacin de las mismas al nivel de gnero, para lo cual se requiere, en primara instancia, del aislamiento y posterior identificacin mediante pruebas bioqumicas y fisiolgicas.
Microscopia en fresco y previa coloracin de levaduras y seudomiceliors de Candida
El agar glucosado de Sabouraud adicionado de antibiticos antibacterianos es un buen medio para el aislamiento primario a partir de diferentes muestras clnicas, pero teniendo en cuenta que la morfologa macro y microscpica de las colonias de las distintas especies es similar, es deseable el empleo de medios capaces de diferenciar las especies. Las especies de Candida desarrollan habitualmente en la gran mayora de los medios de cultivo empleados en los laboratorios de diagnstico microbiolgico (agar sangre, agar chocolate o inclusive aquellos usados para el aislamiento de bacilos gram negativos como el EMB o CLDE). CHROMagar Candida, es un medio cromognico que permite diferenciar en forma presuntiva las especies ms frecuentemente involucradas en patologa humana: C. albicans C. tropicalis y C. krusei las cuales desarrollan en l colonias de diferentes colores (verde,
azul metlico y rosado, respectivamente). Segn sus fabricantes, la especificidad en el
reconocimiento de estas 3 especies es cercana al 99%. Este medio es ideal para poner de manifiesto la presencia de ms de una especie de Candida en una muestra clnica. La produccin de tubos germinativos y de clamidosporas, son pruebas sencillas, econmicas y al alcance de todos los laboratorios para identificar a C. albicans. que es la especie mayormente relacionada con patologa fngica humana. La produccin de tubos germinativos es adems una prueba rpida (puede evaluarse tras 2 a 4 horas de incubacin) que puede emplearse como tamiz.
Desarrollo de colonias de C albicans en medio de Sabouraud y prueba de produccin de
tubos germinativos positiva. La produccin de clamidosporas en medio de agar harina de maz, agar Czapeck adicionado de Tween 80, agar arroz o agar patata-zanahoria, es ms rentable para la confirmacin de C. albicans cuando la prueba del tubo germinativo es negativa o presenta un resultado confuso, pero requiere un tiempo mayor para obtener los resultados. Actualmente, existen tcnicas de aglutinacin que ofrecen una buena alternativa diagnstica por su rapidez (5 minutos), sensibilidad y especificidad. As, el test Bichro Latex Albicans utiliza partculas de ltex recubiertas con anticuerpos monoclonales que reaccionan con antgenos de C. albicans. El test Krusei color va dirigido a la identificacin de C. krusei; una especia que adquiere relevancia como patgeno, teniendo en cuenta su resistencia al Fluconazol, droga antifngica de eleccin en el tratamiento de muchas formas clnicas de candidiasis.
El test Candida Check posibilita identificar las especies ms frecuentes en la prctica
clnica y detectar los serotipos A y B de C. albicans
Candida albicans, (blastoporas y clamidosporas) y diferentes especies de Candida en
medio cromognico
El estudio de la actividad enzimtica sobre sustratos concretos se ha aplicado desde hace
unos aos a la identificacin rpida de levaduras, sobre todo de C. albicans. Existen mtodos rpidos con sustratos fluorognicos y cromognicos, con una sensibilidad y especificidad similar a la prueba del tubo germinativo y ms rpidos que sta, pero menos especficos que la asimilacin de compuestos de carbono (auxanograma).
La determinacin de la susceptibilidad antifngica in vitro cuenta con varias
posibilidades actualmente: pruebas por dilucin en caldo (las cuales en general se reservan para laboratorios de elevada complejidad) y semicuantitativos como el E-test u otros que se realizan sobre medios slidos (agar).