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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS


DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
LABORATORIO DE BIOQUMICA MICROBIANA
PRCTICA 1: TRANSPORTE DE GLUCOSA EN LEVADURAS
ALUMNOS
Hernndez Basilio Jos Ral
Oliva Nava Martha Alejandra

Grupo 5V1
Seccin: 2
Equipo: 8

PROFESORAS
Carlos Martnez Canseco
Elisa Rivera Prez
Alma Mara Rodrguez Olvera
CALIFICACIN
MIN-MAX
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.2 PUNTOS

ASPECTO
Hiptesis
Objetivo
Resultados
finales
(tabla
grafica)
Discusin de resultados
Conclusiones
Bibliografa
Total

0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.5 PUNTOS
0.0-0.3PUNTOS
0.0-0.1PUNTOS
0.0-15.0 PUNTOS

CALIFICACIN

Fecha de entrega: 28-Agosto-2014


Firma del profesor:
________________HIPOTESIS Y DISEO EXPERIMENTAL

Si la temperatura afecta el transporte, entonces a 4C no se dar el transporte de


glucosa en Saccharomyces cerevisiae.
Si nuestro material biolgico, Saccharomyces cerevisiae, se encuentra en buen
estado para su estudio, entonces al trabajar bajo las condiciones normales de
crecimiento el transporte de glucosa ser el ptimo.
Si el 2,4 dinitrofenol (DNF) es un agente qumico, des acoplador, que equilibra el
gradiente de protones, entonces se ver inhibido el transporte activo de glucosa en
Saccharomyces cerevisiae.
Si la N-etilmaleimida (NEM) interacta con las protenas intermembranales
afectando su conformacin, entonces se ver afectado el transporte mediado de la
glucosa en Saccharomyces cerevisiae.
Si no se le suministra glucosa al sistema en estudio, entonces Saccharomyces
cerevisiae no tendr fuente de carbono alguna que transportar.

OBJETIVOS

Determinar el tipo de transporte que efecta Saccharomyces cerevisiae para el


transporte de glucosa.
Observar el efecto de la temperatura en el transporte de glucosa para
Saccharomyces cerevisiae.
Observar el efecto de inhibidores en el transporte de glucosa en Saccharomyces
cerevisiae.

REGISTRO DE DATOS

Elaboracin de la curva tipo


g de glucosa
Absorbancia (540nm)
0
0
100
0.101
200
0.263
300
0.423
400
0.623
500
0.758
Tabla 1. Datos de absorbancia para curva tipo

Curva tipo por el metodo del DNS de 0 a 500 g de glucosa


0.8
f(x) = 0x - 0.03
R = 0.99

0.7
0.6
0.5

Absorbancia (540nm)

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

100

200

300

g de glucosa

400

500

600

Determinacin de Glucosa residual

Absorbancia (540nm)
Matraz No.
0 min
10min
20min
30min
1
0.538
0.513
0.535
0.485
2
0.647
0.279
0.058
0.008
3
0.513
0.344
0.272
0.200
4
0.515
0.480
0.477
0.478
5
0.005(0)
0.0040)
0.006(0)
0.003(0)
Tabla 2. Datos de absorbancia para la determinacin de glucosa residual

Matraz No.
1
2
3
4
5

Concentracin g de glucosa
0 min
10min
20min
362.098139
346.235195
360.19459
431.260575
197.758037
57.529611
346.235195
239.001692
193.31641
347.50423
325.296108
323.39255

30min
328.4687
25.803723
147.63113
324.02707

Tabla 3. Concentracin de glucosa en microgramos

mg de glucosa/ml
Matra
z No.

0.3620981
4
0.4312605
8
0.3462351
9
0.3475042
3

2
3
4
5

Residual
10
0.3462351
9
0.1977580
4
0.2390016
9
0.3252961
1

Consumida
20

20

30

10

0.360194
6
0.057529
6
0.193316
4
0.323392
6

0.328468
7
0.025803
7
0.147631
1
0.324027
1

0.01586294
4
0.23350253
8
0.10723350
3
0.02220812
2

0
0
0
0

0.0019035
5
0.3737309
6
0.1529187
8
0.0241116
8

30
0.0336294
4
0.4054568
5
0.1986040
6
0.0234771
6

Transporte de Glucosa por la levadura de Sacharomyces cerevisiae en diferentes condiciones.


0.45

Matraz 1

f(x) = 0.01x + 0.05


0.4 (Matraz
Linear
1)
Matraz 2
R = 0.9

Linear (Matraz 2)

0.35
0.3
0.25

Glucosa Matraz
Consumida(mg/ml)
3
Linear
0.2 (Matraz 3)
0.15

f(x) = 0.01x + 0.02


R = 0.95

Matraz 4

Linear (Matraz 4)

0.1
Matraz 5

0.05
Linear (Matraz 5)
0 f(x)
f(x) =
= 0x
0x +
- 00.01
f(x)
R =
==0.64
0.52
0 R
5
10
R = 0

15

20

25

30

35

Tiempo (min)

Tabla 4. Datos de glucosa residual y consumida.

DISCUSIN DE RESULTADOS
En esta prctica elaboramos distintos experimentos a fin de verificar que tipo de
transporte es el que utiliza Saccharomyces cerevisiae para transportar glucosa. Una vez
obtenidos los resultados de la grfica 2 de transporte de glucosa en Saccharomyces
cerevisiae podemos concluir sobre el mecanismo de transporte de glucosa en dicha
levadura.
Saccharomyces cerevisiae es una levadura unicelular del filo Ascomycota7 la cual es un
microorganismo mesfilo, tambin es un microorganismo quimioheterotrofo, 8 es decir que
su temperatura ptima de crecimiento se encuentra entre los 25C y 40C y que requiere
de una fuente de carbono diferente a CO2 adems de utilizar una fuente qumica de

energa.
La primera prueba consisti en trabajar con un sistema a una temperatura de 4C, lo cual
afecta la rigidez membranal, haciendo que la fluidez y permeabilidad disminuyan, ya que
la membrana citoplasmtica est formada de una bicapa de fosfolpidos constituida por
grupos acilo grasos no polares9, estos al no estar ramificados presentan un punto de
ebullicin y tambin de fusin altos10, es decir que con una baja temperatura estos pueden
pasar de lquido a slido y con esto son menos permeables a solutos por un transporte no
mediado. Mientras que todas las protenas sufren ligeros cambios de conformacin
atribuibles al debilitamiento de sus enlaces hidrfobos, la importancia que tiene una
conformacin es por el funcionamiento de protenas integrales, etc. 11; con esto a su vez
descartamos el transporte mediado. Esto lo podemos ver muy claramente en la grfica de
glucosa consumida pues el transporte de glucosa a travs de los distintos tiempos (0, 10,
20 y 30 min) no aument considerablemente; el no haber mantenido el sistema bien
recubierto con hielo pudo haber ocasionado alguna fluctuacin en nuestros datos.
Comparamos el sistema uno contra el sistema dos, el cual era nuestro sistema de
referencia pues se trabaj bajo condiciones ptimas para el transporte.
Ahora bien, en el sistema nmero tres adicionamos 2,4-dinitrofenol (DNF), el cual es un
agente desacoplante que interfiere con el transporte activo pues equilibra el gradiente de
protones lo cual interrumpe la sntesis de la principal fuente de energa para la clula, el
ATP.
Para el cuarto sistema agregamos N-etilmaleimida (NEM) ya que este reactivo interacta
con las protenas adhirindole grupos SH lo cual bloqueara el cambio de conformacin
de las protenas para que entre las glucosas, afectando as el transporte mediado. El NEM
es un agente alquilante de la cistena y protenas que tienen en su conformacin dicho
aminocido.7 Es decir que al ser un agente alquilante de grupos proteicos est alterando
as el transporte mediado puesto que requieren de protena para hacer la difusin de un
soluto.
Ya que en el sistema nmero cinco no se s uministr glucosa 4mg/mL en la grfica
podemos ver que no hubo transporte alguno que la clula pudiera realizar.
En la grfica de glucosa consumida podemos observar que el sistema al cual se le
agrego DNF no se vio muy afectado el transporte pues al contrastarlo con el sistema de
referencia (matraz 2) y el sistema nmero cinco, tiene ms similitud con el sistema dos,
deduciendo as que el transporte no se vio afectado significativamente. Por el contrario en
el sistema al que le agregamos NEM si se vio afectado el transporte considerablemente
pues podemos apreciar en la grfica que su tendencia es ms parecida a la del sistema
cinco (matraz 5, el cual nos indica que no existe transporte), con lo que podemos decir
que se vio afectado el transporte.
As deducimos que el transporte que Saccharomyces cerevisiae realiza, es un transporte
pasivo, (pues no afect el DNF el cual fue el reactivo que utilizamos para poner de

manifiesto el transporte activo) y que necesita tambin hacer uso del transporte mediado
(pues las dems pruebas nos mostraron que si se vean afectadas las protenas se vea
afectado el transporte).
1. CONCLUSIONES

La temperatura influye en el transporte de glucosa en levaduras.


Los factores fsicos influyen ms que los factores qumicos en el transporte de
glucosa.
El transporte que realiza Saccharomyces cerevisiae es de tipo pasivo mediado.
El 2,4 Dinitrofenol no inhibe completamente el transporte de glucosa.
La N-etilmaleimida inhibe considerablemente el transporte de glucosa.

2. BIBLIOGRAFA
1.
2.
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http://www.dbbmf.es/files/fck/Leccion%2020%20Lipidos(2).pdf diapositiva 17.
http://flagellum.wordpress.com/tag/mitocondria/
http://es-mx.invitrogen.com/site/mx/es/home/References/Molecular-Probes-TheHandbook/Thiol-Reactive-Probes/Introduction-to-Thiol-Modification-andDetection.html#head1

6. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1087585/
7. Tortora. Funke. Case. (2007). Introduccin a la microbiologa. Editorial Mdica
Panamericana. Buenos Aires-Argentina. 9 Edicin. Pp 290.
8. Roger Y. Stanier. John L. Ingraham. Mark L. Wheelis. Page R. Painter. (1992).
Microbiologa. Editorial Revert. Barcelona-Espaa. 2 Edicin. Pp 29.
9. Lodish. Berk. Matsudaria. Kaiser. Krieger. Scott. Zipursky. Darnell. (2005). Biologa
celular y molecular. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires-Argentina. 5
Edicin. Pp 45.
10. Morrison y Boyd. (1990). Qumica Orgnica. Editorial Pearson Addison Wesley.
Massachuset-EUA. 5 Edicin. Pp 30.
11. Roger Y. Stanier. John L. Ingraham. Mark L. Wheelis. Page R. Painter. (1992).
Microbiologa. Editorial Revert. Barcelona-Espaa. 2 Edicin. Pp 224.

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