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Resumen

En esta prctica se tuvo como objetivo principal aislar cada fraccin


de protenas del arroz tomando como fundamento principal la
solubilidad de cada uno para luego determinar su concentracin de
manera cuantitativa, para la cual, se hizo uso del mtodo de biuret
realizando una curva de calibracin dando como resultado: 2.3636,
1.0550, 0.5966 y 28.6990 mg/ml para

albuminas, globulinas,

prolaminas y glutelinas respectivamente. Y su composicin de


manera

cualitativa,

mediante

distintas

pruebas:

Xantoproteica,

Sakaguchi, Biuret y Acree-Rosemheim, resultando que ninguna de las


fracciones posee de triptfano; todas las fracciones poseen cistena
y/o metionina; la concentracin mas grande la tienen las glutelinas y
poseen arginina las albuminas, glutelinas y en mayor proporcin las
globulinas.
Introduccin:
Las protenas son componentes fundamentales de la materia viva. Su
diversidad de funciones va desde la regulacin de procesos de
membrana

hasta

la

catlisis

de

reacciones

cinticamente

desfavorables. Por esta razn conocer tcnicas apropiadas para su


identificacin y cuantificacin toma importancia para cualquiera que
trabaje en el campo de la bioqumica.
Existe un criterio que permite separar a las protenas segn su
afinidad por determinados solventes. As, dependiendo del tipo de
aminocidos que conforman su estructura se tendrn aquellas que
simplemente

son

solubles

en

agua

(albminas),

en

medio

moderadamente salino (globulinas), ligeramente polar (prolinas) y en


solucin cida o bsica (glutelinas).
En funcin de esta clasificacin, la presente prctica tuvo por objetivo
aplicar un esquema de separacin que permiti el anlisis qumico de

las fracciones proteicas en una muestra de arroz comercial.


Metodologa.
Se parti de una muestra de arroz comercial (Mary Esmeralda). Esta
fue llevada hasta una consistencia de harina empleando una
licuadora de cocina. Un aproximado de 2g de la muestra se disolvi
en 10mL de agua destilada, se agit mecnicamente por 10min y se
centrifug por 3min, a 2550rpm. Despus de separar el sedimento y
el sobrenadante el proceso se repite.
Despus de extraer la fraccin acuosa el sedimento fue tratado dos
veces con cloruro de sodio al 1%, etanol al 75% (60C) e hidrxido de
sodio 0,1N. Finalmente cada fraccin se llev a un volumen de 25mL.
Posteriormente se tomaron medidas de absorcin a 540nm en
diferentes soluciones de albmina srica bovina (ABS), mezclada con
3 ml del reactivo de Biuret y partiendo de una concentracin inicial de
3,014. (Ver tabla 3).
Finalmente, se midi la absorbancia de cada fraccin tratada con el
reactivo de Biuret (ver tabla 4). Adems de eso se realizaron pruebas
cualitativas para el reconocimiento de ciertos aminocidos en cada
fraccin, cuyos resultados se muestran en la tabla 5.
TABLAS DE DATOS
Tabla 1. Tipo de muestra y su masa.
Muestra
Masa (m0,0001)g
HARINA DE ARROZ
(MARY Esmeralda)

2,0280

Tabla 2. Volmenes de cada fraccin proteica extrada.


Fraccion
Solvente
Volumen
Vtotal
sobrenadante
(v 1 ) ml
(v 0,04 )
ml

Albuminas
Globulinas
Prolaminas
Glutelinas

H2O
NaCl (0,1 %)
Etanol (70 %)
NaOH 0,1 N

16
20
20
12

25

Tabla 3. Datos para la determinacin cuantitativa de protenas por el


mtodo de biuret
Tubo
Volumen de
Volumen de
Volumen de
Abs
disolucin
agua
biuret aadido
(545n
estndar de
destilada
(v 0,03 )ml
m)
BSA
(v 0,01 )
(v 0,01 ) ml
ml
B
0
2
0,000
1
0,3
1,7
0,034
2
0,4
1,6
0,069
3
3
0,6
1,4
0,118
4
0,8
1,2
0,134
5
1,2
0,8
0,199
6
2
0
0,303

Concentracin BSA: 3,014 mg/ml

Tabla 4. Absorbancias de cada fraccin proteica extrada.


Fraccion
Volumen
Volumen de
Abs
fraccion
biuret aadido
(545nm)
(v 0,01) ml
(v 0,03 )ml
Albuminas
0,261
Globulinas
0,114
2
3
Prolaminas
0,066
Glutelinas
0,304
Tabla 5. Reacciones de reconocimiento de aminocidos.
REACCION
Sakaguchi

Albuminas
Levemente
coloracin
roja

Globulinas
Fuertement
e roja

Prolaminas
Sin
coloracin

(+)
Biuret

(+)
Coloracin
Azul tenue

Coloracin
Azul tenue

Glutelinas
Rosado
Fuerte
(+)

(-)
Coloracin
Azul tenue

Coloracin
morado
intenso

Xantoprot
eica

Sulfidacio
n

Acreerosenheim

Sin cambios

Sin cambios

Sin cambios

Sin cambios

(-)

(-)

(-)

(-)

Precipitado
gris/negro

Precipitado
gris/negro

Precipitado
gris/negro

Precipitado
gris/negro

(+)

(+)

(+)

(+)

Sin cambios

Sin cambios

Sin cambios

Sin cambios

(-)

(-)

(-)

(-)

RESULTADOS
Tabla 6. Datos para la curva patrn de BSA.
Concentracin
(mg/ml)
Tubo
B
1
2
3
4
5
6

0
0,4521
0,6028
0,9042
1,2056
1,8084
3,0140

Absorbancia
0
0,034
0,069
0,118
0,134
0,199
0,307

Curva Patrn BSA


0.4
0.3
Absorbancia

0.2
0.1
0
0

0.5

1.5

2.5

Concentracin (mg/ml)

Figura 1. Curva patrn BSA.


Ecuacin de la Recta
||0,1033C +0,005 1; R 2=0,9865

Tabla 7. Valores o btenidos de concentracin para cada


fraccin extraida.
Fraccin
Concentracin (mg/ml)
(C 0,1377 )mg/ml
Albuminas

2,3636

Globulinas

1,0550

Prolaminas
Glutelinas

0,5966
28,6990

3.5