Microbiologia

Prof. Jesiel Lima

Sumrio P4:

Observao de bactrias do biofilme oral

Preparao de esfregao
Tcnicas de colorao:

Coloraes simples (azul de metileno)

Coloraes diferenciais (Colorao de Gram)

Tcnicas de colorao
o Permitem revelar a forma, a dimenso e os
componentes das clulas bacterianas, bem como, os
aspetos bioqumicos da sua estrutura.

o Permitem observar clulas bacterianas em

microscopia de campo claro.

o Como o ndice de refrao do protoplasma

bacteriano difere muito pouco do meio circundante,
difcil o exame direto de preparaes no coradas, a
no ser que se utilizem tcnicas especiais de iluminao.
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Tcnicas de colorao

Preparao do esfregao

Fixao do esfregao

Colorao

Observao ao microscpio

Preparao e fixao do esfregao

o Preparado sobre uma gota de gua
abrangendo uma superfcie de 1 cm2
o As lminas usadas devem ser lavadas com uma
mistura de lcool-ter (1:1)
o Fixao pelo calor em movimentos circulares.
o Evitar aquecer demasiado a preparao para
no destruir as clulas

Em caso de incndio.
Manter a calma!! os movimentos rpidos alimentam
a combusto
Tapar o frasco
e a lamparina

NO APAGAR O FOGO
COM GUA

Cobertor

Extintor

Azul de metileno
Mtodo de colorao simples utilizao de um nico
corante.
Corante bsico ou catinico - fixado pelas estruturas
mais negativas da clula como os cidos nucleicos e
a parede celular das bactrias

Colorao com azul de metileno

1. Corar com azul de metileno durante 1 minuto
2. Lavar com gua
3. Secar com cuidado e observar ao microscpio

http://www.bigroom.org/wordpress/?m=200704

Colorao de Gram
Colorao diferencial
Distingue bactrias Gram + de bactrias Gram Indispensvel na identificao bacteriana

Gram +

Gram -

http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm

Bactrias Gram+ e Gram

Composio diferente da parede celular

Gram+: Parede homognea e espessa, formada

essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem
de lipoprotenas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina,

camada externa complexa, formada por lipoprotenas e
polissacardeos

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Colorao de Gram

dH2O

dH2O

Violeta de
cristal

Lugol
(iodo)

lcool

Safranina

1 minuto

1 minuto

30-60 segundos

30-60 segundos

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Trabalho a realizar:
oIsolamento de colnias (biofilme oral):
Repicagem (riscado em placa)

oPreparao de esfregao a partir de meio lquido e

slido
oTcnicas de colorao:
Colorao de Gram

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