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Introducción ......................................................................................................................1
Marco Teórico...................................................................................................................2
Objetivos:..........................................................................................................................3
6.1 Objetivo General ..................................................................................................3
6.2 Objetivos Específicos ...........................................................................................3
Marco Metodológico.........................................................................................................3
7. 1 Toma de la muestra..............................................................................................3
7.2 Procesamiento de la muestra.................................................................................3
7.2.1 Determinación de pH..................................................................................3
7.2.2 Pre enriquecimiento y Aislamiento............................................................4
7.2.3 Caracterización Macro y Microscópica de las Colonias.............................4
7.3 Mejoramiento y Diseño de Medio ................................................................4
7.5 Determinación de actividad enzimática. Método p-nitrofenil fosfato...................5
Caracterización Macro y Microscópica de las Colonias........................................5
Bibliografía......................................................................................................................11
11.1 ANEXO I. Método de Determinación de pH ...................................................13
11.2 ANEXO II. Composición del Medio de Cultivo SMRS...................................14
ANEXO III. Método de determinación de actividad Enzimática p-nitro fenil fosfato
.....................................................................................................................................15
10.3.1 Curva Patrón...................................................................................................15
11.3.2 Preparación Buffer fosfato......................................................................15
Introducción
Es frecuente que en los suelos tropicales, los bajos niveles de nutrientes
disponibles para las plantas, principalmente aquellos indispensables como
el fósforo, condicionen la productividad de los cultivos; especialmente en las
regiones sometidas a temperaturas altas. El fósforo es un limitante del
crecimiento de las plantas en regiones como El Chaco, por lo que es muy
poco soluble. El fenómeno de fijación del fósforo en el suelo, (el que es
altamente dependiente del pH), causa una baja eficiencia de los fertilizantes
fosforados solubles, el cual tiende a precipitarse en forma de fosfato
dicálcico o fosfatos de aluminio y hierro; los microorganismos
solubilizadores de fosfatos son un componente del suelo, el cual puede
solubilizar fósforo precipitado y otros compuestos fosfatados.
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El muestreo del suelo se realizó en la provincia del Napo en la zona del
Chaco, la región tiene una temperatura aproximada de 23°C, el sector de
estudio abarca 1 hectárea y va a ser destinada para uso agrícola.
Por esta razón el suelo presenta una gran alternativa de solución a este
problema, pues su elevada carga enzimática y bacteriana aumenta la
solubilización de los nutrientes haciendo que puedan ser asimilables por las
raíces. De esta manera incrementar la viabilidad de fósforo en el suelo
ayudando a reducir la aplicación de fósforo en forma de fertilizantes
químicos, reduciendo la contaminación química en los suelos y promover
una agricultura sostenible.
Marco Teórico
IMPORTANCIA DEL FOSFORO
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pH
La disponibilidad del Fósforo depende del pH del suelo, porque solo puede
ser tomado como ion ortofosfato, el pH óptimo para que el ortofosfato sea
viable en el suelo es alrededor de 6.5 ya que la precipitación de los fosfatos
de aluminio y calcio disminuye.
Un pH alto o bajo puede desnaturalizar la enzima y por consiguiente
inactivarse. El pH del medio es importante para el crecimiento de los
microorganismos, la mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un
pH neutro, un inadecuado pH puede inhibir en crecimiento o alterar los
procesos metabólicos normales.
Objetivos:
6.1 Objetivo General
Marco Metodológico
7. 1 Toma de la muestra
7.2.1 Determinación de pH
El pH influye en el proceso del suelo debido a la acción que ejerce sobre los
microorganismos presentes; en los procesos el pH varía de acuerdo al
tiempo, en respuesta a los materiales que son utilizados, a los productos y
compuestos intermedios de la degradación de estos.
3
Se realiza la medición de pH de las muestras de suelo por el método de
pasta de saturación según el ICONTEC. (ANEXO I)
IS = A/B
Donde:
A = Diámetro total (diámetro de la colonia + diámetro del halo)
B = Diámetro de la colonia
Se escogen las placas que tienen colonias aisladas y además son menos de
40 colonias (entre 10 y 20) para realizar el recuento.
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TABLA I. Medio De SMRS TABLA II. Medio Diseñado
RESULTADOS
Una vez aisladas las cepas se prosigue a:
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Cepa 2 Cocos Gram positivos Colonias lisas, estrellada, blancas
(BSP2
Cepa 3 Cocos Gram negativos Colonias lisas, redondas, amarillas
Cladosporium
6
Acremonium
Aspergillus
Mucor
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Datos de la experimentación:
PARA HONGOS:
UP UP UP
HOR Concent (µmol/min Concentra (µmol/min Concentra (µmol/min
A ABS ración L) ABS ción L) ABS ción L)
muc muc
aspergillus umol/ml aspergillus or umol/ml mucor or umol/ml Mucor
0.03 0.01
0 0.041 0.053 0.879 0 0.040 0.674 0 0.018 0.302
0.05 0.05
0.5 0.077 0.093 1.550 0 0.063 1.047 0 0.063 1.047
0.08 0.06
1 0.098 0.116 1.941 7 0.104 1.736 8 0.083 1.379
0.09 0.09
1.5 0.111 0.131 2.183 9 0.118 1.960 8 0.116 1.932
0.10 0.11
2 0.120 0.141 2.351 0 0.119 1.978 3 0.133 2.221
0.10 0.12
4 0.147 0.171 2.854 3 0.122 2.034 8 0.150 2.500
0.14 0.15
6 0.160 0.186 3.096 0 0.163 2.724 0 0.175 2.910
0.22 0.24
8 0.245 0.281 4.680 5 0.258 4.307 0 0.275 4.587
0.10 0.29
10 0.357 0.406 6.766 0 0.119 1.978 0 0.331 5.518
8
PARA BACTERIAS:
UP UP
(µmol/min (µmol/min
ABS Concentración L) ABS Concentración L)
HORA BSP1 umol/ml BSP1 BSP2 umol/ml BSP2
0 0.020 0.029 0.488 0.015 0.024 0.395
0.5 0.036 0.047 0.786 0.030 0.040 0.674
1 0.057 0.071 1.177 0.067 0.082 1.364
1.5 0.079 0.095 1.587 0.089 0.106 1.774
2 0.100 0.119 1.978 0.099 0.118 1.960
4 0.134 0.157 2.612 0.103 0.122 2.034
6 0.159 0.185 3.078 0.140 0.163 2.724
8 0.200 0.230 3.841 0.183 0.211 3.525
10 0.234 0.268 4.475 0.100 0.119 1.978
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2. Preservación
HONGOS
Se conservaron aquellas cepas que presentaron mayor actividad enzimática
Aspergillus
Mucor
Cladosporium
En crioviales en agua esteril a temperatura de refrigeración
BACTERIAS
Se conservaron:
En crioviales en BHI con el 20% de glicerol
CONSLUSIONES
1. A partir del suelo de la región del Chaco provincia del Napo fue
posible aislar 3 cepas de hongos y 2 cepas bacterianas.
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5. Al comparar los resultados de actividad enzimática se determino que
los hongos aislados tienen mejor actividad frente a las bacterias, pues
los valores obtenidos son más altos.
RECOMENDACIONES
1. Realizar identificación bioquímica de hongos y bacterias aislada
Bibliografía
Direcciones Electrónicas
11
1. http://www.slideshare.net/desarrollo_sostenible/como-hacer-y-
usar-el-compost-1444481?src=related_normal&rel=1444478
2. http://www.uteq.edu.ec/u_investigacion/uict/guias/Triptico_Estudio
%20de%20Mercado_Poster.pdf
3. http://www.quito.cipotato.org/PRESENTACIONES/Resumenes/Articu
lo%20cientifico%20de%20Wilian%20Viera%20y%20Gustavo
%20Bernal.doc
4. http://ciat-
library.ciat.cgiar.org/Articulos_Ciat/Compostaje_Pescador.pdf
12
1. ANEXOS
pH (pasta saturado)
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11.2 ANEXO II. Composición del Medio de Cultivo SMRS
COMPONENTE g/L
Glucosa 10
Extracto de
0.5
Levadura
Púrpura de
0.1
Bromocresol
Ca3(PO4)2 5
Agar 15
Medio base: (NH4)2SO4 0,5 g; KCl 0,2 g; MgSO4.H2O 0,3 g; FeSO4.7H2O 0,004 g;
NaCl 0,2 g;
COMPONENTE g/L
Glucosa 10
Extracto de
0.5
Levadura
Cloranfenicol 0.1
Agar 18
Medio base: (NH4)2SO4, 0,5 g; KCl, 0,2 g; MgSO4.H2O, 0,3 g; MnSO4.H2O, 0.004 g;
FeSO4.7H2O, 0,002 g; NaCl, 0,2 g. en 900 ml de agua destilada
NOTA: Ajustar el pH del medio a 7.2 con una solución de NaOH 0.1 N
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ANEXO III. Método de determinación de actividad Enzimática
p-nitro fenil fosfato
C1V1 = C2V2
Donde:
C1 = p – nitro fenil 1umol/ml
V1 = volumen de nitro fenil requerido
C2 = concentración en umol/ml a la que se quiere llegar
V2 = volumen de muestra en cada tubo
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