OBTENCION DE CULTIVOS PUROS

TRABAJO PRCTICO No. 11

Al estudiar la microbiota del cuerpo, suelo o cualquier otro ambiente, descubrimos que los
microorganismos existen en poblaciones mixtas; en raras ocasiones como especies aisladas.

Para estudiar las caractersticas culturales, morfolgicas y fisiolgicas de una especie, es

necesario separarla de otros microorganismos que comparten su hbitat, en otras palabras,
debemos obtener un cultivo puro.

Entre los mtodos frecuentemente utilizados para la obtencin de un cultivo puro se

encuentran las tcnicas de rayado y vaciado; ambas involucran la disminucin en
concentracin de los microorganismos para seleccionar la especie de inters.

MTODOS
o

MTODO POR VACIADO

Consiste en diluir la cantidad de bacterias contenidas en un volumen determinado.

Colocando un mililitro de la suspensin de bacterias en una caja de Petri y
posteriormente agregando agar nutritivo fundido y enfriado a 45C. Con la finalidad de
obtener colonias aisladas para purificarse posteriormente.
o

MTODO DE RAYADO

Este mtodo es til cuando se desea economizar tiempo y materiales, requiere de

cierta habilidad y destreza, las que se adquieren con la experiencia

Punto de inoculacin.
Sentido del rayado.

Otro factor importante para la obtencin de cultivos puros es emplear diversos medios de
cultivo, con la finalidad de aislar, almacenar e identificar microorganismos.

Entre estos

medios podemos mencionar:

o

Medios de cultivo enriquecido: cuya funcin es ayudar al crecimiento de los

microorganismos, entre los que se encuentran agar nutritivo, agar tipticasa soya y caldo
BHI.

Medios de cultivo selectivos: permiten el crecimiento de ciertas las bacterias, basndose

en condiciones en las cuales las dems no pueden crecer, como agar manitol sal y agar
Mc Conkey; en el primero se obtiene el crecimiento de microorganismos Gram positivo
como Staphylococcus aureus y en el segundo se obtiene crecimiento de microorganismos
Gram negativo, adems en este medio de cultivo permite diferenciar las bacterias Gram
negativo que utilizan o no la lactosa como Escherichea coli que presenta una colonia de
color rosado o fucsia.

Medios de cultivo de identificacin: se utilizan para la determinacin de la presencia de

ciertas enzimas, o la utilizacin de algunos compuestos, permitiendo con ello determinar
cual es la caracterstica que presenta la bacteria al unir varios de ellos.

MATERIALES

Soporte
Cajas de Petri estriles
Asas bacteriolgicas
Marcador o crayn graso
Agar nutritivo
Agar sangre
Agar Manitol sal
Agar Mc Conkey
Tubos con 20ml de agar nutritivo fundido
Cultivo mixto de 24 horas de incubacin en caldo tripticasa soya de:
o

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Chromobacterium violaceum

Como complemento de la prctica y para interpretar los resultados de la misma, investigar:

a) Composicin

b) Interpretacin

c) Aplicacin de cada uno de los medios de cultivo

inoculados y presentarlos en cuadro, se recomienda investigar imgenes a color.

PROCEDIMIENTO
1. Preparar la mesa de trabajo, desinfectando la superficie
2. Etiquetar la superficie del fondo de una caja de Petri estril con nombre, fecha y

material sembrado, etc.

o

METODO DE VACIADO

1. Tomar 1.0ml de la muestra y agregarlo a la caja de Petri

2. Licuar un tubo de Agar nutritivo y enfriar dentro de 40 a 45C (que no queme el dorso

de la mano o la mejilla). Verter en una caja de Petri estril en forma asptica, rotando
luego la caja para que quede homogneamente distribuida. Dejar reposar hasta que

el Agar endurezca e invertir la caja de Petri e incubar a 37oC por 24-48 horas. Es
necesario esperar que el Agar enfre (45C) para evitar la formacin de vapor de
condensacin en la tapadero debido a que este puede caer sobre la superficie del
medio provocando contaminacin.
o

METODO RAYADO

1. Tomar una azada de la muestra.

2. Tomar una caja de agar nutritivo y rayar cerca del mechero, siguiendo uno de los

mtodos detallados por su instructor.

3. Incubar la caja en posicin invertida a 37C por 24-48 horas.
4. Siguiendo los pasos anteriores, sembrando una caja de agar sangre, agar manitol sal,

agar Mc Conkey.

RESULTADOS
A. MTODO DE RAYADO

AGAR SANGRE DE CARNERO

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INTERPRETACIN:_____________________________________________________
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AGAR NUTRITIVO
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INTERPRETACIN:_____________________________________________________
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AGAR MANITOL SAL

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AGAR Mc Conkey
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INTERPRETACIN:_____________________________________________________
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DIFERENTES TECNICAS DE RAYADO