LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL II

DETERMINACIN DE ACIDO BENZOICO Y ACIDO SORBICO

Fundamento terico: Se realiza una extraccin de los conservantes desde el alimento,
posterior filtracin y cuantificacin por cromatografa lquida de alta resolucin
utilizando un detector UV a 232 nm.
Campo de aplicacin: Bebidas, jugos, productos de confitera, salsas, derivados lcteos,
etc.
Material y equipo:
-

Balanza analtica
Cromatgrafo lquido de alta resolucin
Columna rp-18
Detector UV con lmpara de deuterio a 232 nm
Bomba a un flujo de 1,2 mL/min
Equipo para filtracin de muestras y estndares
Membrana filtrante Millipore GVWP, 47 mm de dimetro y 0,22 um de poro,
para fase mvil
Membrana filtrante Millipore GVWP, 13 mm de dimetro y 0,22 um de poro,
para muestras y estndares.
Material usual de laboratorio

Reactivos
-

Reactivo de Carrez I: Pesar 36 g de hexaciano ferrato de potasio trihidratado y

diluir a 1 L
Reactivo de Carrez II: Pesar 72 g de sulfato de cinc heptahidratado y diluir a 1 L
Metanol grado HPLC
Tampn fosfato pH 6,5. Disolver 1,9 g de fosfato cido de potasio trihidrato y
2,5 g de fosfato dicido de potasio, ajustar a pH 6,5 com cido fosfrico al 5%
em gua y enrasar a 1 L.
Fase mvil:
Mezclar el tampn fosfato com el metanol em proporciones de 95:5
Pasar la solucin a travs de filtro millipore GVWP de 0,22 um de dimetro para
desairear y retener partculas
Solucin estndar de 1000 ppm de cada conservante:
Pesar exactamente 100 mg de estndar de cido srbico, disolver y enrasar a 100
mL con agua destilada
Soluciones estndares intermedias de 100 ppm de cada conservante:
Se toma una alcuota de 10 mL del estndar de 1000 ppm y se diluye a 100 mL
con aguad estilada
Solucin de mezclas estndares de trabajo de cido benzoico y cido srbico: es
una solucin de mezcla estndar de trabajo de 10 ppm de cido benzoico y 5
ppm de cido srbico:

Se toman 10 mL de la solucin estndar intermedia de cido benzoico de 100

ppm, 5 mL de la solucin estndar intermedia de cido srbico de 100 ppm y se
diluye a 100 mL con agua destilada.
Solucin de mezcla estndar de trabajo de 20 ppm de cido benzoico y 10 ppm
de cido srbico:
Se toman 20 mL de la solucin estndar intermedia de cido benzoico de 100
ppm, 10 mL de la solucin estndar intermedia de cido srbico de 100 ppm y se
diluye a 100 mL con agua destilada.
Solucin de mezcla estndar de trabajo de 40 ppm de cido benzoico y 20 ppm
de cido srbico:
Se toman 40 mL de la solucin estndar de cido benzoico de 100 ppm, 20 mL
de la solucin estndar intermedia de cido srbico de 100 ppm y se diluye a
100 mL con agua destilada.
Pasar cada mezcla por filtro Millipore GVW 0,22 mm de dimetro; estas
soluciones pueden permanecer refrigeradas a 4C por 1 mes.

PROCEDIMIENTO.
a) Preparacin de la muestra.
-

Pesar exactamente alrededor de 5 g de muestra previamente homogeneizada en

el caso de muestras slidas o semislidas 10 mL si son muestras lquidas.
Disolver la muestra en un matraz Erlenmeyer o vaso de precipitados y aadir 20
mL de agua.
Colocar el vaso o matraz en un bao de agua a 60 C por 30 minutos, enfriar y
poner durante 10 minutos en bao ultrasonido y enfriar.
Pasar el lquido a un matraz de aforo de 100 mL, en forma cuantitativa, pero sin
aforar.
Agregar 10 mL de reactivo de Carrez I y 10 mL del reactivo de Carrez II
sucesivamente, luego enrasar la muestra a 100 mL y agitar vigorosamente.
Filtrar la solucin a travs de papel filtro.
El filtrado, para ser inyectado, se debe filtrar en membrana filtrante.

b) Determinacin cromatogrfica.
-

Estabilizar el equipo con fase mvil durante 10 minutos a un flujo de 1,2 mL /

min y con el detector UV a 232 nm
Inyectar 20 uL de cada mezcla estndar con 3 repeticiones en cada caso.
Hacer la curva de calibracin correspondiente, utilizando el mtodo de clculo
con estndar externo del integrador, considerando los tiempos de retencin 6,6 y
9,1 minutos para cido benzoico y cido srbico, respectivamente
Inyectar 20 uL de la muestra, efectuando 3 repeticiones y comparar con la curva
de calibracin.

c) Expresin de resultados.
-

Informar las partes por milln de cada compuesto.

Promediar los valores y expresar el resultado con un decimal
Repetitividad: la diferencia de los resultados no debe ser superior al 5% del
promedio.

Nota: como reactivos patrones pueden usarse tambin las sales sdicas y potsicas
de los cidos benzoico y srbico

MZG / MEPA 2006