1-MIO

Fundamento:
La reaccin positiva a la ornitina esta dada por la fermentacin de la glucosa se
reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de
pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia de acidez, otorga
condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la
cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el
medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura.
El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que
contienen la enzima triptofanasa. Luego de agregar unas gotas de reactivo de
Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo
Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su
movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de indol.
Procedimiento: se realiza a partir de un cultivo puro del microorganismo en
estudio, Incubacin
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C. inocular por puncin
profunda con ansa recta.
InterpretacionMovilidad:
-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de
siembra.
-Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.
Ornitina decarboxilasa:
-Resultado positivo: color prpura.
-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color
violceo en la superficie del medio.
Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la
prueba de ornitina.
-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloroamarillento.

2 -SIM (SULFHDRICO INDOL MOVILIDAD)

Fundamento: Es un medio semi-slido transparente que pone en evidencia la
movilidad, la produccin de triptofanasa y de SH2. Contiene: Triptofano: la
enzima triptofanasa, lo desdobla, produce indol, que se pone de manifiesto con
el reactivo de Erlich o Kovac
Citrato de hierro y amonio: los microorganismos productores de SH2
ennegrecen el medio de cultivo
Si los microorganismos son mviles, al ser ste un medio semi-slido se
produce enturbiamiento del medio de cultivo, caso contrario solo crece en la
puncin.
Procedimiento: se inocula el microorganismo por puncin con ansa de
punta. Se deja incubar a 35C durante 24hs. y luego de este tiempo se
agregan unas gotas del reactivo de Erlich o Kovac dejndolo resbalar por las
paredes del tubo.
Interpretacin:
Triptfano (+): observar la interfase, la aparicin de un color rojo fucsia
brillante por la formacin de un complejo entre el indol y el pdimetilaminobenzaldehido.
M (+) / SH2 (-) enturbiamiento del medio
M (+) / SH2 (+), se ennegrece todo el medio
M (-) / SH2 (-) se observa crecimiento solamente en la estra
M (-) / SH2 (+), se observa precipitado negro alrededor de la estra (pero no
ennegreciendo de todo el medio).

3-(KIA) Agar Hierro de Kligler

Fundamento: En presencia de tiosulfato en el medio o la degradacin de
protenas liberando aminocidos azufrados, algunos microorganismos forman
H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cistena
desulfurilasa. El gas incoloro H2S se forma en condiciones cidas y reacciona

con el citrato de amonio frrico para producir un precipitado negro insoluble

desulfuro ferroso metlico.
Procedimiento: indicadores Rojo de fenol y sales de Fe2+, Tcnica de
sembrado por picadura con aza de punta, en medio agar de Kligler
Interpretacion:
No fermentadoras: Las bacterias incapaces de fermentar utilizan las
peptonas y liberan aminas que alcalinizan todo el medio. A ROJO
No fermentadoras de lactosa: Las bacterias que solo fermentan la glucosa,
inicialmente tambin utilizan aerbicamente la glucosa. Debido a la baja
concentracin de glucosa (0.1%), metabolizan las peptonas alcalinizando la
superficie del medio. A AMARILLO
Fermentadoras de Lactosa: Las bacterias fermentadoras de glucosa y
lactosa, fermentan la glucosa 0.1% y al trmino de esta, fermentan la lactosa
1%, permitiendo la acidificacin completa del medio a amarillo

4- (LIA) Lisina Hierro Agar

Fundamento- La lisina puede ser descarboxilada por microorganismos LD
positivasque la transforman en la amina cadaverina. Esto produce un viraje al
violeta del indicador de pH prpura de bromocresol, puesto que la
descarboxilacin slo tiene lugar en medio cido (pH inferior a6.0).
Procedimiento-Es necesario que se produzca previamente la acidificacin del
medio decultivo, por fermentacin de la glucosa. Este medio de cultivo solo
puede utilizarse para la diferenciacin de bacterias que fermentan glucosa.
Se utiliza a para la identificacin de enterobacterias, lisina decarboxilasa(LD) y
de la formacin de hidrogeno sulfurado (H2S), mtodo de sembrado por
picadura
Interpretacion:
LD positivas - Esto produce un viraje al violeta
LD negativos, pero fermentadores de la glucosa, producen un viraje al
amarillo
La formacin de H2S produce una coloracin negra debido al sulfuro de
hierro producido.

5- CITRATO
Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos microorganismos que
utilizan el citrato como nica fuente de carbono, el indicador es azul de bromo
timol. La citritasa acta sobre el citrato produciendo acido oxalacetico y
acetato; productos que son convertidos enzimaticamente a piruvato y dixido
de carbono. Durante esta reaccin el medio comienza a alcalinizarse por el
CO2 que se genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar
Carbonato un producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce
el cambio de color del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro
(indicador: azul de bromotimol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El
medio incluye citrato como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como
nica fuente de nitrgeno.
Procedimiento: El color original del medio es verde, y se encuentra
fraccionado en pico de flauta, la siembra se hace por estra, se incuba 2472hs a 35C.
Interpretacin: Si el microorganismo utiliza citrato, se produce alcalinizacin
del medio de cultivo pasando ste a color azul intenso, lo cual indica prueba
positiva para el citrato.

6- Malonato
Fundamento-El malonato de sodio, es una sal orgnica que es utilizada por
las bacterias como nica fuente de carbono con formaron de productos
alcalinos que se evidencia por un viraje de verde a azul del indicador del
medio, azul de Bromotimol. Si un microorganismo es capaz de utilizar el
malonato de sodio como nica fuente de carbono, al mismo tiempo que utilizar
el sulfato de amonio como fuente de nitrgeno, se produce un aumento de la
alcalinidad que se debe a la formacin de Hidrxido de sodio (NaOH).
Procedimiento- inocular 1-2 asadas del microorganismo en el Caldo
Malonato, incubar a 37 C por 24 horas.
Interpretacin- El cambio de color de verde a azul indica una prueba positiva.
Organismo manolato positiv

7- Nitratos
Fundamento: En esta prueba se detecta una respiracin anaerobia: la que
utiliza nitrato como aceptor final de electrones. Los nitratos se reducen a

nitritos y algunas bacterias reducen los nitritos a productos gaseosos ( N2 y

N2O). Las enzimas responsables de ambas reducciones se denominan nitrato y
nitrito reductasa, respectivamente.
Procedimiento: se lleva a cabo en un medio liquido (caldo de nitratos) y
sembrado por picadura 1-2 asadas.
Interpretacin:
Nitrato reductasa- coloracin roja tras la adicin de reactivos
Nitrito reductasa- incolora tras la adicin de reactivos

8- FENIL-ALANINA-DESAMINASA:
Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos microorganismo que
poseen la enzima FENIL-ALANINA-DESAMINASA. El medio se prepara con un
pico de flauta largo, pues la lectura se hace sobre la superficie del medio de
cultivo.
El aminocido fenilalanina sufre la desaminacin oxidativa catalizada por la
enzima fenilalanina deaminasa (es una flavoprotena), para producir cido
fenilpirvico y amonaco. La presencia del cido fenilpirvico se demuestra con
el agregado de cloruro frrico en medio cido, con el cual se forma un quelato
de color verdoso entre el cido fenil pirvico y los iones Fe3+.
Procedimiento: Se siembra sobre la superficie del medio solamente, se
incuba 24 hs a 35 C, se revela con cloruro frrico.
Interpretacin: El color original es amarillo, si el microorganismo es productor
de la enzima, al agregar sobre el medio cloruro frrico, sta se pone de
manifiesto, dando a la superficie un color verde intenso.

Referencias Formato APA xD

http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm

Ah hay mas pruebas amor espero que te sirva Te Quiero :*