BANDEO

CROMOSOMICO
CURSO:

Gentica I
INTEGRANTES:
Cachi Pia Isabelita

Gonzales Snchez Joslin

Gonzales Seclen Cristhian
Ramrez Ramrez Wilson
Zapata Daz Javier

DOCENTES:
MSc. Cesar Guzmn Vigo
Mag. Marco Guzmn Tello

CHICLAYO; 6 de abril del 2015

INTRODUCCIN
Los primeros cariotipos fueron tiles para contar los nmeros de cromosomas,
pero muchas veces las anomalas cromosmicas, como los reordenamientos
equilibrados o las pequeas deleciones cromosmicas, eran indetectables. En la
dcada de 1970 se desarrollaron las tcnicas de tincin para producir las bandas
cromosmicas caractersticas de los cariotipos modernos.
Las tcnicas de bandeo fluorescente, permitieron la completa individualizacin de
los cromosomas humanos, y se pudo comprobar que el cromosoma 21 asociado
al sndrome de Down, en realidad es ms pequeo que el 22, pero ambos
mantuvieron el nmero que primitivamente se les haba asignado.
Cada cromosoma en las clulas somticas humanas est formado por una serie
de bandas continuas. Las bandas se ubican en regiones a lo largo de los brazos
cromosmicos y las regiones tienen lmites definidos que pueden ser los extremos
de los brazos, los centrmeros y ciertas bandas.

OBJETIVOS
Conceptualizar el bandeo cromosmico y cules son las
bandas.
Identificar las tinciones o mtodos utilizados en los diferentes
tipos de bandeos o bandas.

NOMECLATURA DE BANDEOS MORFOLGICOS

En relacin con la nomenclatura para descubrir los diferentes bandeos

cromosmicos, se emplea un cdigo de tres letras: la primera, indica el tipo de
bandeo utilizado, la segunda, la tcnica de deteccin empleada y la tercera, el tipo
de tincin.
QFQ: Bandas Q por fluorescencia usando quinacrina.
GTG: Bandas G por tratamiento enzimtico con tripsina utilizando Giemsa.
RFA: Bandas R por fluorescencia usando naranja de acridina.
RHG: Bandas R mediante desnaturalizacin trmica utilizando Giemsa.
THG: Bandas T por desnaturalizacin trmica empleando Giemsa.
CBG: Bandas C por hidrxido de bario utilizando Giemsa.

Nomeclatura de bandeos dinmicos.

GBG: Bandas G por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.
RBA: Bandas R por incorporacin de BrdU empleando naranja de acridina.
RBG: Bandas R por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.
GB-AAu: Bandas G por incorporacin de BrdU empleando anticuerpos
especficos unidos a partculas de oro coloidal.
RB-AAu: Bandas R por incorporacin de BrdU usando anticuerpos especficos
unidos a partculas de oro coloidal.

Bandeo Cromosmico

Consiste en someter a los cromosomas a desnaturalizaciones, a digestin

enzimtica o a ambos, seguido de una tincin con colorante especfico para ADN.
Esto hace que los cromosomas se tian con una serie de bandas claras y oscuras.
Hay diversos tipos de bandeo:
Bandeo G
Los cromosomas son sometidos a digestin con la enzima tripsina de manera
controlada. Los cromosomas se desnaturalizan mediante calor en solucin salina
(esto desnaturalizar ADN con abundantes AT) y, a continuacin, se tien con
Giemsa que es un colorante qumico que enlaza ADN. Las bandas oscuras de
tincin positiva, son las bandas G. Las plidas son G negativas, se denominan
bandas R. Las regiones oscuras son las que se replican ms tarde en la fase S y
contienen cromatina ms condensada. Las bandas R suelen replicarse temprano
en la fase S y tienen menos condensada la cromatina. Los genes se concentran
sobre todo en esta banda, mientras que el ADN de las bandas G es menos activo
transcripcionalmente. Las bandas R son Q negativas.
Bandeo Q
Se tien los cromosomas con un colorante fluorescente que se enlaza
preferentemente a ADN abundante en AT y se observan mediante fluorescencia
UV. Las bandas fluorescentes indican los mismos segmentos que las bandas G.
Bandeo T
Identifica un subgrupo de bandas R que estn concentradas sobre todo en los
telmeros. Las bandas T son las R que se tieron de manera ms intensa.
Bandeo C
La tcnica de Banda C fue descubierta por casualidad y originada en un
experimento en donde ADN satlite marcado en ratn fue hibridizado in situ con
cromosomas de ratn. En este experimento, el ADN del cromosoma fue
desnaturalizado con NaOH y renaturalizado en buffer SSC. Los sitios hibridizados

fueron detectados por autoradiografa usando coloracin de Giemsa para

cromosomas. La prueba de hibridizacin preferencialmente fue en las regiones
centromericas de los cromosomas. Sin embargo tambin se not que el Giemsa
coloreo otras regiones en otros cromosomas.
Esta banda se caracteriza por teir aquellas regiones ricas en heterocromatina
constitutiva que corresponden a secuencias de ADN altamente repetitivas; se
encuentran principalmente en centrmero, telmeros y ADN satlite y en
ocasiones constricciones secundarias como son los NORs.
Mtodos dinmicos
Se aplica sobre las clulas en cultivo. Uno de ellos es aadir istopos radiactivo,
como la timidina tritiada, en un periodo temprano de la replicacin, para que se
vaya aadiendo al ADN. El resultado es un patrn de bandas de replicacin
temprana, que suele coincidir con las bandas R. Si se hubiese aadido la timidina
tritiada en un momento tardo de la replicacin, las bandas coincidirian con las G.
Bandeo R
Al tratar a los cromosomas antes de teirlos, con calor o productos qumicos
particulares, las bandas claras y oscuras que aparecen estn invertidas. Si las
bandas G y Q se tien mal, entonces el bandeo R se emplea para brindar un
contraste superior, permitiendo as que las bandas se lean ms fcilmente. Es la
inversa del bandeo C y tie las regiones no centromricas, preferiblemente a los
centrmeros.
Bandas Ag-NOR
Se

conoce

como

bandas Ag-NOR

aquella

que

colorea

las

Regiones

Organizadoras Nucleares (de ah la nomenclatura NOR) en ocasiones son

tambin llamadas Banda N, su coloracin es debido a la afinidad con el Nitrato de
Plata.

La Regin Organizadora Nucleolar es el sitio en donde estn localizados los genes

de ADNr; el nucleolo est compuesto por cinco componentes estructurales, el
centro fibrilar, el componente fibrilar, el componente granular, el intersticio
nucleolar, y la cromatina condensada asociada.
En eucariotas el organizador nucleolar consiste de mltiples repeticiones
arregladas en tandem, de las secuencias para ARN-r 18S y 28S intercalado con
secuencias espaciadoras. Los espacios pueden ser transcritos, pero su
transcripcin nunca incluye un ribosoma maduro. Usualmente se refiere a ADN
ribosomal (ADN-r) como una repeticin de genes con secciones en tamdem
arregladas y agrupadas dentro de uno o varias regiones del set de cromosomas.

Hibridacin genmica comparada (CGH)

La tcnica de CGH permite el rastreo de desequilibrios globales presentes en el

genoma en una nica hibridacin y sin necesidad de obtener clulas en divisin
(Kallionemi y col., 1992). Ha sido la primera tcnica combinada de citogentica e
hibridacin in situ fluorescente que ha permitido realizar un anlisis global del
genoma. Aunque inicialmente se describi como una valiosa tcnica para el
anlisis de desequilibrios en el nmero de copias de ADN en tumores, en la
actualidad es de gran utilidad para el anlisis de desequilibrios cromosmicos
constitucionales a partir de cualquier tipo de muestra.
Bsicamente, la tcnica consiste en marcar los ADNs genmicos de la muestra
problema y de un individuo control con fluorocromos distintos y cohibridarlos en
presencia de ADN Cot-1 sobre una preparacin cromosmica de un individuo
normal. Las seales fluorescentes son detectadas y analizadas mediante anlisis
digital haciendo uso de un software especfico. De este modo podemos analizar
las regiones de copia nica de cada cromosoma. A partir del anlisis de un mnimo

de 10-12 metafases se obtiene el valor promedio y se generan los perfiles de

ganancias.

Hibridacin ''in situ'' fluorescente (FISH)

Es una tcnica citogentica de marcaje de cromosomas mediante la cual se

localiza un determinado fragmento de la secuencia de los cidos nucleicos y pone
de manifiesto la presencia o ausencia de secuencias gnicas especficas.
Se puede aplicar sobre ncleos interfsicos de extensiones celulares o cortes de
tejido o directamente en cromosomas. La posibilidad de poder utilizar las tcnicas
de FISH sobre clulas que no estn dividindose es importante en aquellas
neoplasias con baja tasa de divisin celular, como en los sndromes
linfoproliferativos crnicos.
Esta tcnica permite la rpida determinacin de aneuploidas, microdeleciones,
duplicaciones, inversiones, as como la adjudicacin de un marcador gentico a un
cromosoma (cartografa gentica).
Los cromosomas que son usualmente analizados por FISH son los 13, 18, 21, X e
Y, que son los ms propensos a sufrir anomalas. Estn relacionados a
enfermedades como el sndrome de Patau (13), el sndrome de Edwards (18), el
sndrome de Down (21), el sndrome de Turner (X) y el sndrome del superhombre
(Y), entre otros.
FISH usa segmentos de una nica hebra de ADN que son tintados, etiquetados o
marcados, con molculas fluorescentes (fluorocromos que puede ligarse a un
cromosoma especfico; estos segmentos de ADN son llamados sondas.
-

Las molculas fluorescentes: son molculas que son sometidas a un

proceso de emisin llamado fluorescencia, en el cual las molculas son
excitadas por la absorcin de radiacin electromagntica. Las especies

excitadas se relajan al estado fundamental, liberando su exceso de energa

en forma de fotones. Los mtodos de fluorescencia se aplican mucho
menos debido al nmero relativamente limitado de sistemas qumicos que
se pueden hacer fluorescer. La biotina o fluorescena es una de las
molculas fluorescentes que se utiliza en la tcnica de FISH.
La tcnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, a
las cuales como ya hemos visto son llamadas sondas, que son complementarias
de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar. Estas sondas se
"marcan" con molculas fluorescentes que ya hemos definido anteriormente.
Estas sondas se hibridan o unen al DNA complementario y, como estn marcadas
con molculas fluorescentes, permiten localizar las secuencias en las que se
encuentran. A diferencia de otras pruebas utilizadas para estudiar los cromosomas
que requieren que las clulas se encuentren en divisin activa, la hibridacin
fluorescente in situ puede ser llevada a cabo en clulas no activas.
La FISH utiliza tres tipos de sonda:

Sondas de secuencia nica (locus especfico): estas sondas se hibridan a

una regin muy concreta o particular correspondiente a una banda
cromosmica o a un gen. Esta sonda es til cuando se ha aislado una
pequea parte de un gen y se quiere averiguar en qu cromosoma se
encuentra. Con estas sondas podemos visualizar alteraciones estructurales o
numricas tanto en ncleos en interfase como en metafase. Podemos detectar
la presencia de clulas tumorales residuales con una anomala caracterstica
de estirpe o subtipo, como la t(9;22) en la leucemia mieloide crnica, la
t(15;17) que afecta al PML/RAR en la leucemia mieloide aguda.

Sondas alfoides o centromricas: son sondas que contienen secuencias

complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los
centrmeros de los cromosomas. Como pueden utilizarse sondas de
diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta,

con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el nmero correcto de

cromosomas o si tiene un cromosoma extra.

Sondas para cromosomas completos: son colecciones de sondas de un

tamao reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente
a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas libreras de sondas, se
puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral. De esta
manera, se consiguen imgenes en color que permiten examinar los cariotipos
de una forma ms exacta que los tradicionales cariotipos basados en bandas
ms o menos oscuras. Esta tcnica es particularmente til para examinar
anormalidades

cromosmicas,

con

estas

sondas

podemos

detectar

alteraciones estructurales o numricas de los cromosomas, pero slo en

clulas en metafase. Es muy til cuando tenemos cromosomas de mala
calidad.

Para localizar las secuencias de inters, la sonda debe hibridar con la secuencia
de ADN de la muestra. El primer paso consiste en desnaturalizar las molculas de
ADN (separar las hebras complementarias de la estructura en doble hlice del
ADN), tanto la de la sonda como la de la muestra de estudio. Para ello elevamos
la temperatura hasta 70 C - 80 C, o variamos el pH, y de este modo se rompen
los puentes de hidrgeno que mantienen unidas las dos cadenas del ADN.
Despus se hibrida la sonda con su regin complementaria del ADN de la
muestra, se incuban a 37 C la sonda de inters con la muestra, y por
complementariedad de las bases se une la sonda de inters con la regin
complementaria del ADN de la muestra. Con un microscopio de fluorescencia se
observan las seales de la sonda.
Esta metodologa es til para cuantificar aberraciones numricas. Otra aplicacin
de la FISH es en el seguimiento de pacientes con un transplante alognico de
distinto sexo. As, si utilizamos sondas centromricas para los cromosomas

sexuales, tendremos una informacin rpida del porcentaje de clulas del donante
y clulas residuales del receptor.
La FISH, como complemento de la citogentica convencional, puede ser de
utilidad diagnstica y pronstica en el estudio de las neoplasias hematolgicas.
Ambas metodologas tienen limitaciones y ventajas. La citogentica requiere que
las clulas del clon neoplsico se estn dividiendo. Cuando los cromosomas son
de mala calidad su interpretacin es dudosa. Se analizan pocas clulas y tiene
una baja sensibilidad. Por el contrario la FISH se puede utilizar sobre ncleos en
interfase y sobre clulas en metafase, pudiendo analizarse ms clulas que con la
citogentica, siendo adems una tcnica con mayor sensibilidad. La informacin
que nos aporta la tcnica de FISH est limitada al reordenamiento buscado, es
decir a la sonda utilizada. Sin embargo, con la citogentica tenemos informacin
de todos los cromosomas. La tcnica de FISH tiene un mayor coste que la
citogentica.

Aplicaciones
Bueno algunas aplicaciones ya se han mencionado anteriormente en el texto, no
obstante tal vez algunos se mencionaran nuevamente. Esta tcnica ha resultado
ser muy til en el campo de la medicina reproductiva, con aplicacin en el
diagnstico gentico preimplantatorio (DGP). Resulta una forma muy precoz de
diagnstico que, apoyndose en las tcnicas de reproduccin asistida, posibilita el
estudio de embriones antes de ser transferidos al tero materno y, por
consiguiente, antes de que se lleve a cabo la implantacin embrionaria.
Para el anlisis de anomalas cromosmicas embrionarias, tanto numricas como
estructurales, puede utilizarse la tcnica DGP-FISH. Para este fin se requiere una
biopsia embrionaria, mediante la cual se extrae una clula del embrin en cultivo
"in vitro". Seguidamente, se procesa la muestra de tal manera que quede fijado el
ncleo en interfase y se hibrida con sondas especficas para el estudio
cromosmico de la patologa que se sospecha pueda estar presente en el
embrin.

Entre las anomalas cromosmicas que pueden ser analizadas, caben citarse:

Anomalas numricas:
-

Alteraciones en cromosomas sexuales: Alta frecuencia de mosaicismo

en pacientes implica que, en muchos casos, slo se den defectos leves en
el desarrollo. Gran relevancia en Medicina Reproductiva por ir asociado, en
mayor o menor grado, a problemas de fertilidad. Tales son los casos
de sndrome de Klinefelter, trisoma X y monosoma X.

Edad materna avanzada, aborto de repeticin de causa desconocida

y/o fallo de implantacin: Ms de la mitad de los casos son debidos a
alteraciones en los cromosomas 13, 16, 18, 21, 22, X e Y. En estos casos,
la seleccin de aquellos embriones normales para los cromosomas citados,
aumenta las probabilidades de conseguir una gestacin a trmino.

Factor masculino grave: Con este estudio embrionario, se pueden evitar

las alteraciones cromosmicas surgidas en la descendencia de aquellos
grupos de pacientes con calidad seminal baja y que tienen que recurrir a
la tcnica de microinyeccin intracitoplasmtica del espermatozoide (ICSI).

Anomalas estructurales:
Surgen espontneamente, en la mayora de los casos, como consecuencia
de un fallo de meiosis durante la oognesis o espermatognesis, en los
casos en que los padres presentan cariotipos normales. Algunas veces,
algn miembro de la pareja puede ser portador de una anomala estructural
equilibrada, que podra transmitir a su descendencia. De esta manera, por
medio del estudio gentico especfico de embriones de la pareja portadora,
podran distinguirse aquellos embriones desequilibrados cromosmicamente
de los equilibrados. Una vez hecha esta seleccin de embriones, podran
transferirse con total tranquilidad al tero materno los embriones que no
presentan la alteracin gnica. Para detectar translocaciones recprocas se
aplica un FISH en metafase usando sondas telomricas y centromricas, de

manera que la ausencia de una seal del telmero indica que existe una
translocacin, indistinguible con un FISH en interfase.
Una aplicacin adicional del FISH en interfase es obtener mayor informacin sobre
la organizacin de los cromosomas en el ncleo interfsico (los llamados territorios
cromosmicos).
Adems de ser til para realizar diagnsticos preimplantatorios, el FISH tiene
aplicacin en medicina para detectar enfermedades y determinar el pronstico de
las mismas, as como para evaluar la remisin de algunas enfermedades, como el
cncer. Con FISH es posible diagnosticar enfermedades incapaces de ser
detectadas por otros mtodos tradicionales que implicaban el anlisis de
cromosomas en metafase. Adems su utilizacin es mucho ms sencilla que los
mtodos citogenticos ms habituales, los cuales requieren clulas en divisin, as
como un mayor esfuerzo en tiempo y trabajo para la preparacin manual y anlisis
de las muestras.
Tambin puede utilizarse para la deteccin directa de patgenos a partir de sangre
o restos de tejidos de un paciente. Esto supone una gran ventaja teniendo en
cuenta que muchos microorganismos no son cultivables en condiciones de
laboratorio.
El FISH tambin se usa para comparar genomas de dos especies biolgicas y
deducir relaciones evolutivas. Asimismo, se puede usar en el rea de la Ecologa
Microbiana para identificar microorganismos dentro de un biofilm (ecosistema
microbiano organizado), as como para observar su distribucin y localizacin
dentro del biofilm o realizar ensayos de co localizacin utilizando sondas de
distinto color para cada microorganismo.

CONCLUISONES

El bandeo cromosmico consiste en someter a los cromosomas a

desnaturalizacin o digestin enzimtica o ambos, seguido de una tincin
con un colorante especifico de ADN, haciendo que los cromosomas se tian
en una serie de bandas, tanto claras como oscuras.

Hay diferentes tipos de bandas:

Bandas Q
Bandas G
Bandas R
Bandas T
Bandas C
Bandas NOR

Las tinciones o mtodos de las bandas son:

Bandas Q = tincin con quinacrina
Bandas G = tincin con Giemsa
Bandas R = varios mtodos
Bandas T = varios mtodos
Bandas C = tincin con Giemsa/ extraccin de ADN y protenas.
Bandas NOR = tincin con plata (Ag).

Las bandas cromosmicas han permitido formar mapas caracterizando

especies demostrando que cambios en estos patrones se pueden expresar
como una mutacin la que puede producir la muerte, prdida de capacidad
reproductiva o generar una enfermedad hereditaria.

BIBLIOGRAFIA
1. Juan Ramon Lacadena. CITOGENTICA. 1 Ed. Marzo 1996. EDITORIAL
COMPLUTENSE. Madrid- Espaa.

2. Jorde Carey Bamshad. GENTICA MDICA. 4Ed. 2010. EDITORIAL ELSEVIER.

Espaa

3. 3http://datateca.unad.edu.co/contenidos/203023/MATERIAL_EN_LINEA/CU
RSO%20203023/CIOTGENETICA%20APLICADA%20AL
%20MEJORAMIENTO/leccin_17_bandeo_cromosmico.html

4. http://morfocitologia.blogspot.com/2009/12/citogenetica-y-bandeocromosomico-la.html
http://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan%201997/temarios/671111darchivos/fundamentos/SEMINARIO%203.PDF
http://www.iqb.es/monografia/fichas/ficha033.htm
http://www.biocancer.com/journal/1379/422-hibridacion-in-situ-fluorescente-fish
http://es.wikipedia.org/wiki/Hibridaci%C3%B3n_fluorescente_in_situ
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001317.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Biopel%C3%ADcula