Вы находитесь на странице: 1из 4

PRCTICA 4

DETERMINACION CUANTITATIVA DE RIBOFLAVINA


POR FLUORIMETRIA
1.- Introduccin terica
La fluorimetra es una tcnica que presenta sustanciales ventajas analticas, pues a su especificidad se une
su gran sensibilidad.
Los procesos de fluorescencia poseen una gran utilidad como base de tcnicas dirigidas a la determinacin
de la intensidad de la emisin fluorescente, dicha seal es funcin, segn Kavanagh, de la intensidad de la
emisin de la REM absorbida por el compuesto fluorescente:

sf = k ' ( I 0 I )

donde sf es la intensidad de la emisin fluorescente, k' una constante de proporcionalidad e I0 e I las intensidades
de la radiacin incidente y emergente, respectivamente.
Segn la ley de Lambert-Beer:

I
log 0 = bc
I

I = I 0 e 2.303bc

I = I 0 10 bc

Donde es el Coeficiente de absorcin Molar si b se expresa en cm y c en molL-1.


Por tanto la seal de fluorescencia, resulta:

sf = k ' I 0 I 0 e 2.303bc = k ' I 0 1 e 2.303bc

Teniendo en cuenta que e-2.303 bc equivale a una expresin del tipo e-x que puede desarrollarse en serie:

e 2.303bc = 1 2.303bc +

(2.303bc )2 (2.303bc )3 + .....


2!

3!

En una aproximacin razonablemente vlida, se podrn despreciar todos los trminos a partir del tercero,
siempre que bc < 0.05. As pues, la expresin correspondiente a la seal de fluorescencia ser:

sf = k ' I 0 [1 (1 2 . 303 bc )] = k ' I 0 2 . 303 bc


y agrupando trminos constantes para un mismo equipo instrumental y una determinacin dada resulta:
sf = k'' c
Segn esta ecuacin la seal de fluorescencia depende de la concentracin c y de factores instrumentales
(ngulo slido visto por el detector, f (); factor de conversin cuntico del detector, f (), paso ptico de la cubeta,
b, intensidad incidente de la radiacin excitadora (I0), as como de otros parmetros relacionados con la propia
sustancia (coeficiente de absorcin molar, ; eficacia cuntica de fluorescencia, ; todos ellos englobados en k'').
Y como la ecuacin sf=k''c, define la proporcionalidad lineal entre la seal y la concentracin, tenemos la
base del aspecto cuantitativo de la espectrofluorimetra, siempre y cuando el producto bc < 0.05.

Por tanto la linealidad sf y c se cumple para disoluciones diluidas. En efecto, s:


bc <0.05
bcmx. = 0.05

2.- Parte experimental


a) Instrumental y productos
1 Gradilla
10 Tubos de ensayo con tapn
1 Cubeta de cuarzo
1 Frasco lavador
2 Vasos de precipitados de 100 mL
1 Matraz aforado de 100 mL
1 Pera de goma
2 Pipetas de 10 mL
1 Soporte para pipetas
Espectrofotmetro Hitachi F-2000
Riboflavina solucin acuosa de 5 mg/L.
b) Procedimiento experimental
1. Realizar el espectro de excitacin y emisin siguiendo las instrucciones del instrumento.
2. Preparar a partir de una disolucin riboflavina de 5 mg/L, 100 mL de disolucin de 0.1 g/mL. A partir de esta
disolucin preparamos una serie de concentraciones patrn de 0.02, 0.04, 0.06, 0.08 y 0.10 g/mL (10 mL de
cada concentracin).
-Determinar la intensidad de fluorescencia (sf) de cada disolucin patrn (media de tres lecturas) y la de la
muestra problema
-Representar grficamente la intensidad de emisin de los patrones frente a sus respectivas concentraciones.
3. Interpolar la intensidad de fluorescencia de la muestra problema en la grfica anterior para determinar la
concentracin de riboflavina.
Datos, medidas y clculos