INCLUSION, PROCESADO,

INCLUSION EN PARAFINA Y
CORTE ENFOCADO A LA
INMUNOHISTOQUIMICA.
LCDA REBECA ARRUE,
TECNOLOGA MEDICA
HISTOTECNOLOGA
SERVICIO DE PATOLOGIA

VENCE EL MAL
HACIENDO EL BIEN,
NO TE CANSES DE
HACER EL BIEN A
TU PRJIMO.

INCLUSION DE LA MUESTRA
LA MUESTRA SE RECIBE EN EL LABORATORIO
DE PATOLOGIA UNA VEZ QUE ES EXTRAIDA.
SE CUENTA CON UN CUARTO DE CORTE QUE
ES EL AREA DESIGNADA PARA RECIBIR,
REGISTRAR,
FOTOGRAFIAR,
DISECAR
Y
TALLAR LA MUESTRA.
EN EL LABORATORIO DE PATOLOGIA SE
COLOCA LA MUESTRA EN LA FORMALINA
BUFFERIZADA 10% PARA SU FIJACION.
LA FIJACION DEBE INICIAR ANTES DE LOS 30
MINUTOS.

INCLUSION DE LA MUESTRA

YA QUE SI EL TEJIDO PERMANECE MUCHO

TIEMPO
SIN FORMALINA EMPIEZA LOS
PROCESOS DE AUTOLISIS (por accin de
las
enzimas
intracelulares),
PUTREFACCION (por accin bacteriana).

ES IMPORTANTE UNA VEZ QUE SE RECIBE LA

MUESTRA
(PIEZA
QUIRURGICA),
EL
PATOLOGO DEBE SECCIONAR LA PIEZA PARA
QUE HAYA UNA MEJOR PENETRACION DEL
FIJADOR AL TEJIDO.

SELECCION DEL FIJADOR

TIPO DE FORMALINA
INFLUYE EN LOS
ESTUDIOS DE H&E, INMUNOHISTOQUIMICA Y
TECNICAS MOLECULARES.
SI ES UNA FORMALINA QUE SE PREPARA EN EL
LABORATORIO Y NO SE LE AGREGAN LOS
FOSFATOS VAMOS A TENER UNA FORMALINA
ACIDA.
LA
FORMALINA
ACIDA
PRODUCE
UN
PRECIPITADO COLOR NEGRO/MARRON EN LA
TINCION DE H&E.
SU
EFECTO
MAYOR
ES
SOBRE
LAS
PROTEINAS, ACIDOS NUCLEICOS(ADN Y
RNA), LIPIDOS Y CARBOHIDRATOS.

FIJACION
SI LA FORMALINA ESTA MUY
CONCENTRADA ESTA VA A DAAR EL
TEJIDO.
EL TEJIDO SE VA A ENDURECER Y SE VA A
ENCOGER.
SI EL TEJIDO NO TIENE EL VOLUMEN
ADECUADO DE FORMALINA ESTE NO SE VA
FIJAR. (MAL FIJADO).
LA TEMPERATURA OPTIMA DE FIJACION ES
A TEMPERATURA AMBIENTE.

FIJACION

EL AUMENTO DE LA TEMPERATURA
INCREMENTA LA VELOCIDAD DE FIJACION Y
EL TEJIDO SE QUEMA.
SI EL TEJIDO VIENE CON LA FORMALINA
BUFFERIZADA AL 10% Y ES UN TEJIDO
RICO EN SANGRE
Y SI
NO SE TIENE EL CUIDADO DE
CAMBIAR LA FORMALINA, ESTA SE OXIDA
Y SE PRODUCE ACIDO FORMICO.
Y VA A PRODUCIR UN PRECIPITADO QUE
ES DERIVADO DE LA HEMATINA
Y EL PH DISMINUYE A 6

INCLUSION DE LA MUESTRA
(FIJACION)
LA
MUESTRA
SE
COLOCA
EN
UN
VOLUMEN
DE
10
VECES SU TAMAO.
FIJACIN
DEBE
ESTAR EN UN RANGO
DE
6-24HORAS/2448 HORAS
DEPENDE
DEL
TAMAO
DE
LA
MUESTRA.

INCLUSION DE LA MUESTRA

SOBREFIJACION DE LA MUESTRA
LA SOBREFIJACION ENMASCARA EL EPITOPE
PORQUE SE VAN A FORMAR MAS PUENTES DE
METILENO.
DEBIDO
A
QUE
EL
FORMALDEHIDO
PERTENECE AL GRUPO DE LOS ALDEHIDOS Y
ESTE GRUPO SE HIDRATA Y SE FORMAN LOS
PUENTES
DE
METILENO
CON
LOS
AMINOACIDOS DEL TEJIDO.
A
LA
HORA
DE
LA
RECUPERACION
ANTIGENICA NO SE LOGRA DESENMASCARAR
EL EPITOPE POR LA GRAN CANTIDAD DE
PUENTES DE METILENO.

LA SOBREFIJACION PRODUCE UNA

TINCION DEBIL (SEAL) O NADA DE
SEAL.
ARTEFACTOS LOS PROCESOS DE FIJACIN
PUEDEN
ACARREAR
ALTERACIONES
TISULARES
COMO
VARIACIONES
MORFOLGICAS,
CRISTALIZACIN
DE
COMPUESTOS,
DESPLAZAMIENTO
DE
SUSTANCIAS, ETCTERA.
ESTOS CAMBIOS PUEDEN PRODUCIRSE POR
LAS CARACTERSTICAS DEL FIJADOR O
POR UN MAL USO DE STE.

SI EL TEJIDO ESTA SOBREFIJADO O POCO

FIJADO A LA HORA DE LA INTERPRETACION
DEL CASO TE VAS A ENCONTRAR CON
BACKGROUND.
TIPO DE FIJADOR VA A PRODUCIR UNA
REACCION
CRUZADA
NO
PROTEINICA
(AMINOACIDOS).
VOLUMEN
Y
CONCENTRACION
INADECUADOS DEL FIJADOR PRODUCE UNA
TINCION HETEROGENEA.
TIEMPO
EN
EL
FIJADOR
PRODUCE
BACKGROUND, TINCION NO ESPECIFICA,
BACKGROUND CON TINCION NO ESPECIFICA.

SI EL FORMALDEHIDO REACCIONA CON

LOS
AMINOACIDOS
DENTRO
DEL
EPITOPE, EL ANTICUERPO SERA INCAPAZ
DE UNIRSE.
SI HAY CAMBIOS CONFORMACIONALES
QUE RESULTEN DE LA REACCION DEL
FORMALDEHIDO
CON
LOS
AMINOACIDOS
ADYACENTES
AL
EPITOPE ESTOS PUEDEN REVERTIRSE A
MENUDO CON LA DIGESTION ENZIMATICA
O LA
RECUPERACION ANTIGENICA POR
CALOR.

ANTES DE COLOCAR UN TEJIDO

EN DECAL ESTE DEBE ESTAR
FIJADO 24 HORAS.
LUEGO SE COLOCA EN LA
SOLUCION DECALCIFICANTE.
ESTA SOLUCION PRODUCE
DEGRADACION DEL EPITOPE.

CUARTO DE CORTE

DESCRIPCION MACROSCOPICA DE LA
BIOPSIA O PIEZA QUIRURGICA.
MUESTREO TISULAR SI EL PATOLOGO
SELECCIONA EL AREA INCORRECTA
OBVIAMENTE A LA HORA DE LA LECTURA
NO VA ENCONTRAR NADA.
MANEJO ADECUADO DE LAS MUESTRAS.
SI LAS MUESTRAS NO SE FIJAN ANTES DE
ENTRAR AL PROCESADOR SE CORRE EL
RIESGO DE QUE QUEDEN MAL FIJADAS.

INCLUSION
(FIJACION)

DE

LA

MUESTRA

LAS SECCIONES DE TEJIDO SELECCIONADAS NO

DEBEN SUPERAR LOS 3MM DE ESPESOR DEBIDO
A QUE SE NECESITA QUE ESA SECCION SE FIJE.
GROSOR DEL TEJIDO A INCLUIR: 2-3MM
SABEMOS QUE LA FIJACION SE HACE A
TEMPERATURA AMBIENTE Y QUE LA
VELOCIDAD DE PENETRACION ES DE
1MM/HORA.

INCLUSION
(FIJACION)

DE

LA

MUESTRA

SI EL ESPESOR O GROSOR DEL TEJIDO ES

MAYOR DE 3MM
ESTO
AFECTA LA FIJACION DEL TEJIDO
PORQUE LA VELOCIDAD DE PENETRACION
DEL TEJIDO ES DE 1MM/HORA
SI EL TEJIDO NO SE FIJA EN EL CENTRO A LA
HORA DE HACER EL CORTE NO VA HABER
TEJIDO EN ESA AREA.
EL
LARGO DEL TEJIDO NO DEBE
SOBREPASAR
LOS
MARGENES
DE
INCLUSION.

INCLUSION DE LA MUESTRA
(FIJACION)
LAS
SECCIONES
DE
MUESTRAS
SELECCIONADAS SE COLOCAN EN SUS
RESPECTIVOS CASSETTES DE INCLUSION.
SE CUENTA CON BAOS DE FORMALINA
BUFFERIZADA 10 % Y UN BAO DE
FORMALINA ALCOHOLICA.
LA
FORMALINA
ALCOHOLICA
(FORMALINA+ETANOL)
ES
PARA
PRESERVAR MEJOR LOS CARBOHIDRATOS,
CAUSA MENOS ACHICAMIENTO CELULAR
Y MENOS ENDURECIMIENTO.
SI EL TEJIDO ESTA MAL FIJADO NO VA HABER
UNA BUENA RECUPERACIN ANTIGENICA.

PROCESADO DEL TEJIDO

ES IMPORTANTE EL PROCESAMIENTO DEL
TEJIDO.
PASO 1. FIJACIN
PASO 2. DEHIDRATACIN
DEPENDE DE LA CALIDAD DEL ETANOL.
LA CONCENTRACION DEL ETANOL.
PASO 3. ACLARAMIENTO
DEPENDE DE LA CALIDAD DEL SOLVENTE.
PASO 4. INFILTRACION
DEPENDE DE LA CALIDAD DE LA PARAFINA.

PROCESADO DEL TEJIDO

PASO 2.
DESHIDRATACION

YA SEA QUE LAS CONCENTRACIONES DE

ALCOHOL ESTEN MUY CONCENTRADAS O
CON UNA CONCENTRACION MENOR, NO
SE VA A REMOVER TODA EL AGUA QUE SE
ENCUENTRA
EN
LOS
ESPACIOS
INTRACELULARES Y EXTRACELULARES
DEL TEJIDO.

PROCESADO DEL TEJIDO

AL NO REMOVER TODA EL AGUA DEL

TEJIDO,
POSTERIORMENTE
LA
INFILTRACION POR PARAFINA NO SE VA
HACER ADECUADAMENTE YA QUE EL
AGUA NO ES MISCIBLE CON LA
PARAFINA.

ES IMPORTANTE MENCIONAR QUE EL TEJIDO SE

TERMINA DE FIJARSE EN
LOS ALCOHOLES.

PROCESADO DEL TEJIDO

LA DESHIDRATACION PROLONGADA CAUSA:

RESEQUEDAD

ENDURECIMIENTO DEL TEJIDO

CAMBIA LA CONFIGURACION DE LAS

PROTEINAS EN EL TEJIDO.

PROCESADO DEL TEJIDO

PASO 3. ACLARAMIENTO
SE USA XILOL EL CUAL ES UN SOLVENTE.
HIDROCARBURO.
ANILLO BENCENICO
COMPUESTO POR UNA MEZCLA DE
ISOMEROS META, PARA Y ORTO.
EN ESTE PASO EL AGENTE ACLARANTE
ELIMINA EL ALCOHOL DEL TEJIDO.

PROCESADO DEL TEJIDO

SI

EL TEJIDO SE DEJA MUCHO

TIEMPO EN EL XILOL ESTE SOLVENTE
HACE QUE EL TEJIDO SE VUELVA
QUEBRADIZO
AL ENDURECERSE ESTE SE VUELVE
QUEBRADIZO.
EL TEJIDO SE RESECA.
DEGENERA LAS MOLECULAS DEL
TEJIDO.

PROCESADO DEL TEJIDO

PASO 4. INFITRACION POR PARAFINA
LA
PARAFINA
ES
UNA
SUSTANCIA
CONFORMADA
POR
HIDROCARBUROS
SATURADOS DE CADENAS LARGAS.
EL
PUNTO
DE
FUSIN
PERMITE
LA
CATEGORIZACIN DE LAS MISMA.
TIPOS DE PARAFINA:
BLANDAS
DURAS

PROCESADO DE TEJIDO
LA INFILTRACION DEPENDE DE LA CALIDAD DE
LA PARAFINA Y SU PUNTO DE FUSION.
YA QUE SI UTILIZAMOS UNA PARAFINA CON UN
PUNTO DE FUSION MAYOR DE 60C ESTO
VA A PRODUCIR QUE LOS EPITOPES SE
PIERDAN EN LOS BAOS DE PARAFINA.
YA
QUE SE VA A REQUERIR DE UNA
TEMPERATURA ALTA PARA QUE ESTA SE
DERRITA.
LAS TEMPERATURAS ALTAS DEGENERAN LA
PUREZA DE LAS MOLECULAS DE PARAFINA POR
MUY BUENA QUE SEA LA PARAFINA.(58-60C)

PROCESADO DEL TEJIDO

LA TEMPERATURA ALTA EN LOS BAOS DE

PARAFINA DEL PROCESADOR DE TEJIDOS
DESTRUYE EL EPITOPE DEL TEJIDO.

AL
HABER
UN
MAL
PROCESAMIENTO EL EPITOPE
O
LOS
EPITOPES
SE
DEGRADAN
POR
CONSIGUIENTE VA A HABER
UNA MALA RECUPERACION
ANTIGENICA.

EMBEBIDO EN PARAFINA
(BLOQUEO)
TIPO DE
PARAFINA

PUNTO DE
FUSION

CORTE

BLANDA

50-52C

GRUESO

BLANDA

53-55C

GRUESO

DURA*

56-58C

FINO

DURA

60-68C

FINO

EMBEBIDO EN PARAFINA
(BLOQUEO)

CENTRO DE
BLOQUEO

SI
LA
PLANCHA
CALIENTE
DEL
CENTRO
DE
BLOQUEO
TIENE
UNA TEMPERATURA
MAYOR DE 60C.
EL
CALOR
DESTRUYE
EL
EPITOPE.
AL QUEMAR LOS
TEJIDOS CAMBIA LA
CONFIGURACION DE
LAS PROTEINAS.

CORTE HISTOLOGICO

PARA
INMUNOHISTOQUIMI
CA SE REQUIERE
QUE
SE
HAGAN
CORTES
DE
4
MICRAS.

PARA
TECNICAS
MOLECULARES
(FISH,
CISH)
CORTES
DE
4
MICRAS.
LA PARAFINA QUE
SE
USE
EN
LA
CONFECCION
DEL
BLOQUE DEBE SER
IDEAL PARA QUE A
LA HORA DE HACER
EL CORTE ESTA SE
EXPANDA BIEN EN
EL BAO FLOTADOR.

CORTE HISTOLOGICO

LA TEMPERATURA
DEL BAO DEBE
OSCILAR ENTRE 4244C PARA QUE EL
TEJIDO SE EXPANDA
BIEN.

PARA QUE NO HAYA

ARRUGAS SOBRE EL
TEJIDO.
LAS ARRUGAS EN EL
TEJIDO ENMASCARA
EL EPITOPE.
SI
EL
TEJIDO
DE
ESTUDIO SE COLOCA
ENCIMA
DE
LA
PARAFINA
DEL
CONTROL ESA PARTE
SE VA A CAER EN EL
PASO
DE
DESPARAFINAR.

CORTE HISTOLOGICO
AL AGUA DEL BAO NO
SE LE DEBE COLOCAR
NINGUN ADITIVO.
YA
QUE ESTO PUEDE
PRODUCIR
UNA
REACCION
INESPECIFICA.

BURBUJAS EN EL
BAO.
A LA HORA DE
PESCAR EL TEJIDO
EN EL BAO NO
DEBE HABER
BURBUJAS
LAS
BURBUJAS
SOBRE EL TEJIDO
ENMASCARA
AL
EPITOPE.

CORTE HISTOLOGICO

LAS
LAMINAS
DEBEN
TENER
CARGAS + PARA
QUE EL TEJIDO SE
ADHIERA Y NO SE
CAIGA.

NO USAR LAMINAS
PREPARADA EN EL
LABORATORIO.
PORQUE EL TEJIDO
SE CAE.

LAS CAJAS DE LAS

LAMINAS
DEBEN
PERMANECER
CERRADAS UNA VEZ
QUE SE USAN.
YA
QUE
LA
HUMEDAD
HACE
QUE SE PIERDA LAS
CARGAS + DE LA
LAMINA.

EL CORTE TIENE
UN
VENCIMIENTO.
SI EL CORTE DEL
CONTROL YA ESTA
PRECORTADO.

SI EL CONTROL
POSITIVO
NO
MARCA
PUEDE
DEBERSE A QUE
ESTADO
MUCHO
TIEMPO
YA
PRECORTADO.

CORTES
A
4
MICRAS
PARA
QUE EL TEJIDO NO
SE CAIGA, Y QUE
SE
PUEDA
OBSERVAR
MEJOR
LA
SEAL.
RECOMENDACIO
N DEL COLEGIO
AMERICANO DE
PATLOGOS
ES
QUE NO ESTN
MS
DE
6

PASO DE DESPARAFINAR EN EL
HORNO
EL HORNO DEBE TENER
UNA TEMPERATURA DE
55-56C
SE
PUEDE
DEJAR
OVERNIGHT
O UNA HORA.

UNA TEMPERATURA
MAYOR
PRODUCE
QUE EL EPITOPE SE
DESTRUYA
POR
CONSIGUIENTE
SE
PIERDE.

GRACIAS