Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
RevCubanaFarmv.41n.2CiudaddelaHabanaMayoago.2007
Resumen
Se desarroll y valid un mtodo analtico alternativo para el control de la calidad del
colirio de pilocarpina por espectrofotometra ultravioleta, ya que este mtodo resulta
ms rpido, sencillo y econmico. Adems, se valid el mtodo analtico reportado para
el estudio de estabilidad por cromatografa lquida de alta resolucin. Ambos mtodos
se compararon estadsticamente y resultaron especficos, lineales, precisos y exactos
en el rango de concentraciones estudiadas.
Palabras clave: Pilocarpina, cromatografa lquida de alta resolucin,
espectrofotometra ultravioleta.
El clorhidrato de pilocarpina es una amina terciaria, parasimpaticomimtica que
estimula directamente los receptores colinrgicos. Produce la contraccin del msculo
esfnter del iris, da lugar a la constriccin del msculo pupilar (miosis); constriccin del
msculo ciliar (acomodacin), lo que provoca el aumento de la acomodacin y una
reduccin de la presin intraocular, asociada con un incremento del flujo de salida y un
decremento del flujo de entrada del humor acuoso. Adems tambin puede inhibir la
secrecin del humor acuoso.1
La espectrofotometra ultravioleta es un poderoso instrumento en una variedad de
problemas analticos. Aunque en muchas oportunidades tiene el inconveniente de la
falta de especificidad, debido a la interferencia con los productos de degradacin, los
cuales en ocasiones pueden presentar un espectro idntico al componente sin
degradar, y en otras las concentraciones a determinar son muy pequeas y estn por
debajo del lmite de sensibilidad del mtodo o dentro de su error experimental.2
La cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR) le brinda la posibilidad al analista de
emplear esta herramienta para solucionar los inconvenientes de los mtodos
espectrofotomtricos en los estudios de estabilidad, pues adems de presentar una
alta sensibilidad y exactitud, es en esencia un mtodo separativo, lo que permite medir
con gran selectividad el compuesto deseado, siempre y cuando se encuentre un
sistema cromatogrfico que asegure una adecuada separacin.3
La validacin es el proceso establecido para la obtencin de pruebas documentadas de
El presente trabajo tiene como objetivo desarrollar un mtodo analtico alternativo para
el control de la calidad del colirio de pilocarpina y su validacin. Adems, demostrar si
existen diferencias significativas entre el mtodo desarrollado y el reportado en la
Farmacopea de los Estados Unidos, USP 27, previamente validado.
Mtodos
Las muestras del colirio de pilocarpina al 2 %, utilizadas para el desarrollo de este
trabajo fueron identificadas como lote 2004, fabricado en la Empresa Farmacutica
Julio Trigo.
Validacin del mtodo analtico para la cuantificacin por CLAR
Con el objetivo de realizar una comparacin estadstica entre los resultados por CLAR y
los obtenidos por el mtodo analtico alternativo desarrollado por espectrofotometra
ultravioleta se aplic el estadgrafo de la t de Student para determinar si existan
diferencias significativas entre los 2 mtodos.
Resultados
Fig. Resultados del estudio de especificidad del mtodo cromatogrfico. ICromatograma de la sustancia de referencia qumica. II- Cromatograma del producto
terminado (muestra). III- Cromatograma del placebo. IV- Cromatograma de la
muestra degradada por hidrlisis cida. V- Cromatograma de la muestra degradada por
hidrlisis bsica.
Simultneamente se realiz un scanning al pico correspondiente al principio activo en
un rango de 200 a 400 nm, para una pureza del 99,5 %.
En la tabla 1 se reportan los resultados del estudio de la linealidad del sistema y la
exactitud. Los resultados del estudio de precisin del mtodo desarrollado aparecen
reportados en la tabla 2.
Tabla 1. Resultados del estudio de la linealidad del sistema y exactitud
Parmetros
Linealidad del sistema
Exactitud
CLAR
y= 0,30663 X + 2,018
r = 0,99956
CVf= 0,94 %
tcalc= 2,03
ttab= 3,18
y= 1,14589 x - 0,89245
r= 0,99945
CVf= 1,58 %
R= 99,28 %
tcalc = 1,69
ttab = 2,57
UV
y= 23,677 x + 0,00193614
r= 0,99948.
CVf = 1,13 %
tcalc= 2,99
ttab= 3,18
y = 0,999788 x + 0,0138373
r= 0,99916
CVf= 2,17 %
R= 99,70 %
tcalc= 1,77
ttab= 3,18
Lmites
y= a x + b
r 0,99900
CVf 5,0 %
tcalc < ttab
y= a x + b
r 0,99000
CVf 5,0 %
R= 98,0 102,0 %
tcalc < ttab
Gcalc= 0,5879
Gtab = 0,9750
Gcalc= 0,8709
Gtab= 0,9750
Tabla 2. Resultados del estudio de la precisin del mtodo analtico por CLAR
Analista 1
Analista 2
Da 1
Da 2
Da 1
Da 2
103,5 %
102,2 %
102,8 %
102,9 %
102,8 %
102,0 %
102,7 %
102,5 %
102,5 %
102,1 %
103,8 %
102,4 %
102,5 %
102,0 %
102,5 %
103,6 %
103,0 %
102,4 %
102,8 %
103,0 %
103,0 %
102,4 %
103,0 %
102,6 %
CV = 0,33 %
CV = 0,16 %
CV = 0,40 %
CV = 0,39 %
Fcal= 2,52 Ftab (10,10 / 0,05)= 2,97
tcal= 1,59 ttab (22 / 0,05)= 2,07
Validacin del mtodo analtico para la cuantificacin por UV
Los resultados obtenidos en el estudio de especificidad del mtodo realizado a 215 nm,
al placebo, la sustancia de referencia qumica, y el colirio de pilocarpina se muestran
en la tabla 3.
Tabla 3. Estudio de especificidad por espectrofotometra ultravioleta
Muestra
Placebo
Sustancia de referencia qumica de
clorhidrato de pilocarpina
Colirio de pilocarpina 2 %
0,399
0,404
Analista 2
Da 2
99,8 %
98,9 %
100,8 %
100,8 %
101,7 %
Da 1
100,7 %
98,7 %
99,4 %
99,9 %
100,9 %
Da 2
99,3 %
99,6 %
100,5 %
100,9 %
98,1 %
101,9 %
CV= 0,80 %
99,7 %
CV= 0,90 %
101,2 %
CV= 0,88 %
tcal= 1,79
ttab= 2,33
99,6 %
CV= 0,98 %
Fcal= 2,45
Ftab= 5,05
Espectrofotometra
(%)
100,5
100,9
101,9
101,7
101,2
100,9
Media= 101,4 %
CV= 1,38 %
Tcal = 1,98
ttab= 2,33
CVf = 2,09
Lmites
CVf 5,0 %
tcal< ttab
Discusin
Como se puede apreciar en la figura el mtodo reportado por CLAR resulta especfico al
no detectarse interferencias de picos adicionales en la zona de elusin del producto
principal. El scanning realizado con el objetivo de determinar la pureza del pico de
pilocarpina, en el rango de 200 a 500 nm demostr que no exista solapamiento de
otros productos de degradacin.
Los resultados obtenidos en el estudio de especifidad del mtodo espectrofotomtrico,
reflejados en la tabla 3, al analizar muestras del placebo, la sustancia de referencia de
clorhidrato de pilocarpina y el producto terminado, indican que los excipientes no
interfieren en la determinacin del principio activo, lo que demuestra la especificidad
del mtodo para el control de la calidad al no observarse absorbancia del placebo a la
longitud de onda mxima del principio activo. Sin embargo, al analizar las muestras
sometidas a condiciones drsticas se observaron interferencias de los productos de
degradacin a la longitud de mxima absorbancia de la pilocarpina, lo que demuestra
que el mtodo no es especfico para el estudio de estabilidad del colirio.
Las curvas de calibracin de los mtodos validados para el control de la calidad y el
estudio de estabilidad del colirio de pilocarpina resultaron ser lineales. Al aplicar la
prueba del intercepto a cada uno de los mtodos, resultaron no significativos ya que
las t tab fueron mayores que las t cal, por lo que se rechaza la hiptesis nula de que el
intercepto es igual a cero, para ambos mtodos. En la prueba de linealidad mediante el
coeficiente de variacin de los factores de respuesta CVf, se obtuvieron coeficientes de
variacin menor del 5 % y se demostr el cumplimiento de la linealidad en el intervalo
de concentraciones estudiados para ambos mtodos validados.
En los estudios de repetibilidad se obtuvieron coeficientes de variacin adecuados,
menores que 1,5 % lo que demuestra la buena precisin de los mtodos. Los valores
obtenidos para los estudios de la precisin intermedia demostraron que no existen
diferencias significativas entre las precisiones alcanzadas por los analistas en diferentes
das para una probabilidad de 0,05 %, ya que los valores de F cal son menores que la F
tab. Al realizar las prueba de la t de Student para ambos mtodos, el valor calculado
result ser menor que el tabulado, lo cual demuestra que no existen diferencias
significativas entre las medias alcanzadas con un nivel de significacin del 5 %.
En los estudios de exactitud realizados para los 2 mtodos, los valores de porcentaje
de recobro estuvieron dentro de los lmites establecidos para los mtodos
espectrofotomtricos y cromatograficos (98-102 %), y los valores del coeficiente de
variacin para cada uno de los niveles de concentracin estudiados resultaron menores
que el 5 %. En la influencia del factor concentracin sobre la variabilidad de los
resultados de la exactitud al aplicar la prueba de Cochran, las concentraciones
empleadas son equivalentes, lo que indica que la concentracin no influye en la
variabilidad de estos. No existieron diferencias significativas entre las recuperaciones
medias y el 100 % de recuperacin al aplicar la prueba de la t de Student, ya que la t
cal fue menor que la t tab, por lo que el mtodo es exacto. La curva de recuperacin
reportada de mg tericos contra los mg prcticos demostr un comportamiento lineal.
La prueba de significacin del intercepto result no significativa y el valor de la
pendiente no difiere significativamente de la unidad. Los valores alcanzados de la
pendiente, el intercepto y el coeficiente de correlacin demostraron la exactitud y
linealidad del mtodo.
Al analizar estadsticamente los resultados obtenidos de los mtodos analticos por
CLAR y el desarrollado por espectrofotometra ultravioleta, para la cuantificacin del
colirio de pilocarpina 2 %, para el estudio de estabilidad y control de la calidad,
respectivamente, se pudo comprobar que no existen diferencias significativas entre los
resultados, al ser la t cal menor que la t tab.
Summary
Development of a analytical method for quality control of 2 % Pilocarpine eyedrops
A alternating and analytical method was developed and validated for quality control of
Pilocarpine eyedrops by UV spectrophotometry, since this method is more fast, simple,
and cheap. Also, for stability study by high performance liquid chromatography,
reported analytical method was validated. Both methods were statistically compared,
and were specific, linear, accurate, and in the rank of study concentrations.
Key words: Pilocarpine, high performance lilquid chromatography, UV
spectrophotometry.
Referencias bibliogrficas