DETERMINACIN DE ETANOL POR EL MTODO DE WINNICK

LIZETH BURGOS SEZ

MAIRA LAMBRAO
SAIRA MARTELO GENES
WHITNEY BARRIOS
CARLOS SUREZ

PROFESOR:
ING. DEIVIS LUJAN RHENALS, PH.D.

UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA DE ALIMENTOS
ASIGNATURA DE BIOTECNOLOGA ALIMENTARIA
27-09-2013

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Aplicar una tcnica rpida y sencilla para la determinacin de etanol en caldos de
fermentacin alcohlica.
OBJETIVOS ESPECIFICOS

Realizar cinco diluciones a concentraciones de 0, 1, 2, 3, y 4% de etanol a partir

de etanol absoluto para determinar experimentalmente el contenido de etanol

Investigar otros mtodos para determinar el alcohol etlico

RESULTADOS
Clculo de etanol de las cinco muestras diluidas:
En la determinacin del contenido de etanol por el mtodo de Winnick, inicialmente se
prepararon 5 muestras (tubos) de 10 mL, con concentraciones de 0, 1, 2, 3, y 4% de
etanol, cada uno; partiendo de una muestra de etanol con concentracin del 100%. Para
determinar la cantidad de muestra necesaria para preparar cada una de las
concentraciones antes mencionadas, se hicieron los siguientes clculos:
Muestra estndar:

C1 =100%P /V

Se sabe que:

C1 V 1=C 2 V 2

Por tanto:

V 1=

C2 V 2
C1

Dnde:

C1 = Concentracin solucin estndar

V 1 = Volumen de solucin estndar (ml)
C2 = Concentracin final del tubo
V 2 = Volumen final del tubo (ml)

Tubo 0 (Blanco): Para preparar una muestra con 0% etanol, simplemente, se llen
todo el tubo con 10 mL de agua destilada y no se tom nada de etanol:

V 1=

0 10 mL
=0 mL etanol
100

Tubo 1: El volumen de muestra necesario para preparar una muestra con 1%

etanol, fue:

V 1=

110 mL
=0,1 mL etanol
100

 Tubo 2: El volumen de muestra necesario para preparar una muestra con 2%

etanol, fue:

V 1=

2 10 mL
=0,2 mL etanol
100

Tubo 3: El volumen de muestra necesario para preparar una muestra con 3%

etanol, fue:

V 1=

3 10 mL
=0,3 mL etanol
100

Tubo 4: El volumen de muestra necesario para preparar una muestra con 4%

etanol, fue:

V 1=

4 10 mL
=0,4 mL etanol
100

Luego de preparar las soluciones se realiz una dilucin 1:50 (0.2 mL muestra: 9.8 mL
agua destilada) para cada tubo.
Posteriormente, se adicionaron 2 mL de Dicromato de potasio 0.4 N en H 2SO4 10 N en un
Erlenmeyer y se aadi 1 mL de la solucin a estudiar, dejndola mezcla en reposo
durante 5 minutos a temperatura ambiente. Despus de transcurrido este tiempo se
agregaron 2 mL de solucin de yoduro de potasio 3N, se mezcl, se adicionaron 2 gotas
de solucin de reactivo de almidn soluble y se titul con Tiosulfato de sodio 0.1 N hasta
obtener un cambio ntido hacia un color azul marino como se aprecia en la figura 1. Este
procedimiento se hizo para cada uno de los tubos, la cantidad de agente titulante gastado
en cada caso fueron registrados en la tabla 1.

Figura 1. Coloracin azul marino de la titulacin.

Tabla 1. Concentraciones de cada muestra analizada y el gasto de agente titulante.

mL de
Tiosulfato de
PRIMERA DILUCIN
Sodio 0,1 N
gastados en la
Tubos
titulacin
mL de
mL de
Concentracin
agua
etanol
(%P/V)
destilada
0
0
10
0
8,3
1
0,1
9,9
1
7,8
2
0,2
9,8
2
7,7
3
0,3
9,7
3
7,4
4
0,4
9,6
4
7,1
Conociendo el gasto del agente titulante en cada caso y del blanco se determin el
porcentaje de etanol experimental, por medio de la ecuacin de Winnick, adaptada:

Etanol( g /100 mL)=

[ (VbVm )( 1,152 )100]

[mL muestra1000]

Dnde:
Vb = mL de tiosulfato gastados por el blanco
Vm = mL de tiosulfato gastados por la muestra
1,152 = Cantidad en mg de etanol que reaccionan con 1 mL de tiosulfato 0.1N
Adems, se multiplic por el factor de dilucin 1:50 para llegar a la concentracin original
de cada tubo (tabla 2):
Para el tubo 0 (Blanco):

Etanol

)( 1,152 )100 ]
=0
( 100g mL)= [ ( 8,38,3
[ 1 muestra1000 ]

Multiplicando por el Factor de Dilucin:

Etanol

( 100g mL)=050=0

Para el tubo 1:

Etanol

[ ( 8,37,8 )( 1,152 )100 ] =0,0576

g
mL =
100
[ 1 muestra1000 ]

Multiplicando por el Factor de Dilucin:

Etanol

( 100g mL)=0,057650=2,88

Para el tubo 2:

Etanol

)( 1,152 )100 ]
=0,06912
( 100g mL)= [ ( 8,37,7
[ 1 muestra1000 ]

Multiplicando por el Factor de Dilucin:

Etanol

( 100g mL)=0,0691250=3,456

Para el tubo 3:

Etanol

)( 1,152 )100 ]
=0,10368
( 100g mL)= [ ( 8,37,4
[ 1 muestra1000 ]

Multiplicando por el Factor de Dilucin:

Etanol

( 100g mL)=0,1036850=5,184

Para el tubo 4:

Etanol

[ ( 8,37,1 )( 1,152 )100 ] =0,13824

g
mL =
100
[ 1 muestra1000 ]

Multiplicando por el Factor de Dilucin:

Etanol

( 100g mL)=0,1382450=6,912
Tabla 2. Concentracin de etanol experimental.

# Tubo

% Etanol (g/100 mL) en el tubo respectivo

0
1
2
3
4

0
2,88
3,456
5,184
6,912

Calculo del porcentaje de etanol de la muestra problema: Para calcular el porcentaje

de etanol de la muestra problema se tuvo en cuenta que este porcentaje en un vino
comercial oscila entre 5%-16%, por tanto se asumi una concentracin del 14% de etanol
y se calcul la cantidad de muestra a tomar para poder llevar la muestra a 3%, as:

V 1=

3 10 mL
=2,14 mL muestra
14

Esta cantidad de muestra se agreg en un tubo de ensayo, se afor hasta 10 mL con

agua destilada y luego se hizo la dilucin 1:50 para finalmente titular, pero los resultados
no fueron los esperados ya que durante la titulacin de la dicha muestra no se alcanz a
obtener un resultado, debido a que se hizo un gasto grande de Tiosulfato de Sodio (12 mL
aproximadamente), incluso mayor que el blanco y aun no cambiaba la coloracin de la
muestra, luego se concentr ms la solucin, teniendo una dilucin de 25:50. Pero se
gast un volumen mayor de Tiosulfato de Sodio que en el blanco, lo que indica que al
aplicar la frmula de Winnick se obtendra un resultado negativo lo que no correspondera
a un porcentaje de etanol incorrecto.

ANALISIS DE RESULTADOS
Al realizar la comparacin de las concentraciones obtenidas experimentalmente con las
reales (la figura 2), se pudo apreciar una desviacin de los datos experimentales con
respecto a los reales, sin embargo, aun los valores reales no son tan fidedignos, debido a
errores propios del mtodo, como por ejemplo, la falta de precisin y exactitud entre un
instrumentos de medida para las mediciones en las diluciones, diferencia entre un analista
y otro, errores en las preparaciones de las soluciones que pudo afectar las
concentraciones en cada tubo.
En cuanto al porcentaje etanol obtenido experimentalmente se pueden tener errores en
las mediciones volumtricas de la titulacin lo que pudo haber afectado la magnitud del
porcentaje de etanol en cada dilucin. De esta manera se puede decir que se cometieron
errores aleatorios pues fueron errores inevitables que se produjeron por eventos nicos
con dificultad de controlar durante el proceso de medicin y casi no se pueden identificar
o sus efectos no pueden corregirse del todo. Este error ocurre o est dado por el azar.
Ejemplo: Errores de apreciacin, tales como el cambio de color en la titulacin, que
depende del observador y su capacidad en cuanto al lmite de la misma. (Duffau et. al
2010). Como otro parmetro se habla de la exactitud que hace referencia a la capacidad
del mtodo analtico para obtener resultados lo ms prximos posibles al valor verdadero
(Castillo 1996). Lo que indica que el mtodo de Winnick es poco exacto segn los valores
hallados experimentalmente, pero estos datos no son muy confiables debido a los errores
mencionados anteriormente.
La titulacin de la muestra problema se repiti, diluyendo menos la solucin, pues se
infiri la hiptesis que la muestra estaba muy diluida, pero aun as, no se obtuvo ningn
resultado valedero pues el porcentaje de etanol debe expresarse en la escala de los
nmeros naturales; concluyendo al final, una posible contaminacin en la muestra o
evaporacin del etanol presente en esta, por descuido de dejarla destapada.

CONSULTA
Compare los resultados de concentracin en etanol experimentales con respecto a
los reales. Grafique la comparacin.

Figura 2. Comparacin de concentraciones reales y experimentales de etanol.

Consulte otros mtodos para determinar alcohol etlico. Explique las ventajas y
desventajas para su uso.
RTA/
Para la determinacin de alcohol etlico, hay diversidad de mtodos, en la norma NTC
3952 estable la metodologa para cada mtodo de determinacin de alcohol en la
cerveza. Sin embargo, Lilia Masson (1997) tambin describe otros mtodos para
determinar alcohol etlico en los alimentos. Algunos de estos mtodos son los siguientes:
1. Mtodo Densimtrico
Debido a la diferencia de densidades entre el agua y el etanol, se puede determinar el
contenido de alcohol a travs de la medida de su densidad; cuanto ms elevado sea el
contenido en etanol de una bebida ms baja ser su densidad (Sierra,). ste se basa en
la determinacin de la densidad de una solucin hidroalcohlica obtenida previamente por
destilacin. Para medir la densidad se utiliza un equipo especial, el ms usado es el
hidrmetro (hidrometra) pero existen otros como el alcoholmetro.

Hidrometra: El contenido de etanol se puede medir en el destilado a partir de un

volumen de la muestra exactamente medido. Los azcares reductores no son
destilables, interfieren el SO2 y el cido actico, por esta razn las muestras deben
neutralizarse antes de la destilacin. La determinacin se efecta por medio de un
hidrmetro calibrado y se registra la temperatura. El porcentaje de etanol en volumen
se obtiene de tablas especficas. Tambin se puede determinar el porcentaje de
etanol en volumen con hidrmetros que miden el peso especfico y consultar
posteriormente las tablas pertinentes. (Masson 1997)

Alcoholimetra: No es ms que un densmetro cuya escala expresa directamente el

contenido de alcohol por lo que no es necesario el uso de tablas. Su fundamento es
exactamente el mismo del hidrmetro (vino de fruta.com). (Masson. 1997)

2. Mtodo Refractomtrico
Ocupa el refractmetro de inmersin. Para el anlisis seguro de una mezcla es requisito
que el sistema a cuantificar presente una curva de composicin-ndice de refraccin casi
lineal para componentes de inters. Generalmente esta condicin se cumple para rangos
pequeos de concentracin y componente qumicamente similares; sin embargo, algunos
sistemas presentan mximos o mnimos. Debe tenerse un muy buen control de la
temperatura a 15,56C. A temperaturas diferentes se aplican factores de correccin.
(Masson. 1997)
3. Determinacin del etanol en peso.
Se utiliza el mtodo del picnmetro. Se debe tener la precaucin de un buen control de
peso del picnmetro y bien calibrado, y un muy buen control de temperatura. (Masson.
1997)
4. Anlisis de etanol por cromatografa gas-lquido (GLC).
El etanol presente en vinos, cervezas, jugos se puede separar de otros componentes por
GLC. Para mejorar los aspectos cuantitativos se usa 2-propanol como estndar interno.
La relacin de rea de ambos picos se compara con la de una solucin patrn de etanol y
2-propanol. Se pueden emplear columnas empacadas de acero inoxidable o vidrio de 2 m
rellenas con Porapack QS, Carbowax 0,2 % 1500 sobre Carbopack C 80 -100 mesh,
Chromosorb 103. Se recomienda determinar el porcentaje de etanol en volumen por un
mtodo oficial para efectos de control. (Masson. 1997)

Fuente: NTC 3952

Figura 3. Determinacin del contenido de etanol por cromatografa de gases.
5. Mtodo enzimtico: El etanol se puede oxidar a acetaldehdo por el NAD en
presencia de la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) para producir NADH. Es una
reaccin esteoquiomtrica en condiciones experimentales adecuadas. El NADH
producido se determina espectrofotomtricamente a 334, 340 o 360 nm. (Masson.
1997)

+
+ ADH Acetaldehido+ NADH + H

Etanol+ NAD
Actualmente se dispone de mezclas preparadas. Debe tenerse precaucin en la
medicin cuantitativa de volmenes muy pequeos de reactivo y muestra. La reaccin
se desplaza a la derecha en medio alcalino, atrapando el acetaldehdo formado y luego
oxidndolo a cido actico en presencia de aldehdo deshidrogenasa.

+
++ H 2 O ALDH Acido acetico+ NADH + H

Acetaldehido+ NAD
Dependiendo de la longitud de onda que se elija, se debe tener la precaucin de que la
concentracin de etanol sea de 0,01 a 0,12g/l (365 nm) o de 0,005 a 0,06g/l (340334nm). En general en alimentos lquidos se recomienda clarificar y filtrar.
En la tabla 3, se muestran las ventajas y desventajas de cada mtodo de
determinacin de alcohol etlico.

Tabla 3. Ventajas y desventajas de los mtodos de determinacin de alcohol etlico.

MTODO
VENTAJAS
DESVENTAJAS
Los resultados expresan la Este mtodo requiere bastante
masa o peso de la solucin por experiencia
y
cuidados
Densitomtrico:
unidad de volumen (densidad o extremos en todo el proceso de
Hidrmetro
peso
especfico).
Mediante neutralizacin,
destilacin,
tablas esta densidad puede ser medicin
y
control
de
relacionada con el contenido de temperatura.
alcohol y expresarse entonces
como porcentaje o grado GayLussac (G.L.)
La concentracin de alcohol Es importante la limpieza del
etlico (CH3CH2-OH) pueden refractmetro despus de cada
Refractomtrico
ser medidos con una pequea medicin. Debe tenerse un muy
cantidad de muestra y con un buen control de la temperatura a
procedimiento simple, adems 15,56C.A
temperaturas
se obtiene los resultados al diferentes se aplican factores de
momento.
correccin.
Etanol en peso
Determina con precisin la
Se debe tener la precaucin de
densidad de lquidos.
un buen control de peso del
picnmetro y bien calibrado, y
un muy buen control de
temperatura.
El procedimiento propuesto de El mtodo no es para otro tipo
cromatografa de gases es un de alcoholes que pueden estar
Cromatografa de mtodo preciso para evaluar presentes
en menores
gases
etanol y es un mtodo cantidades, est restringido slo
NTC 3952 (1996)
fcilmente
adaptable
para para determinacin de alcohol
evaluar cerveza en proceso.
etlico.

Enzimtico

Es muy especfico, en la
reaccin, la cantidad de NADH
formada equivale a la mitad de
la cantidad de etanol. NADH es
un valor medible y se puede
determinar a 340mm. El equipo
es ms econmico que el
cromatgrafo (Garca, 1990).

El mtodo es muy sensible,

debe tenerse especial cuidado
con el agua empleada que debe
estar libre de etanol. Debe
trabajarse en atmsfera libre de
etanol. Para controlar el mtodo
se recomienda emplear una
solucin patrn de etanol.

CONCLUSION
Es indispensable medir el contenido de alcohol para la elaboracin de bebidas pues
permite normalizar el producto, para ello se utilizan diversos mtodos experimentales
En la determinacin del porcentaje de alcohol de la muestra problema se tuvieron
inconvenientes que impidieron realizar este clculo, posiblemente por errores en la
dilucin
El volumen de Tiosulfato de sodio gastado en la titulacin del blanco debe ser mayor que
el volumen gastado en la muestra a estudiar, porque el porcentaje de etanol debe
expresarse solamente en la escala de los nmeros naturales.

BIBLIOGRAFA
Castillo, B., y Gonzlez, R. Protocolo de validacin de mtodos analticos para la
cuantificacin

de

frmacos.

Rev

Cubana

Farm

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lnea),

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Acceso: 26 Septiembre (2013).
Determinacin

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en

vinos.

http://www.vinodefruta.com/medicion_de_alcohol_marco.htm

Disponible

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Duffau, B., Rojas, F., Guerrero, I., Roa, L., Rodriguez, L., Soto, M., Aguilera, M.,
Sandoval, S. 2010. Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la
medicin.
Garca, J. 1990. Tcnicas analticas para vinos. GAB sistemtica analtica S.L, Barcelona.
Masson, L. 1997. Capitulo 14: Mtodos analticos para la determinacin de humedad,
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Para

La

Agricultura

La

Alimentacin.

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NTC, 3952, Norma tcnica Colombiana sobre los mtodos para determinar el contenido
de alcohol etlico en cerveza, 1-19, Bogot, Colombia (1996)
Sierra, I., Morante, S., Perez, D. 2007. Experimentacin en qumica analtica. Editorial
Dykinson, S.L. Universidad Rey Juan Carlos. Madrid. p121.