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alrgenos
ALERT Peanut Allergen
ESPECIFICACIONES DE PRODUCTO
Control previsto: 5 ppm de cacahuate
Tiempo aproximado de la prueba: 30 minutos
Pruebas por kit: 20
ALERT para el cacahuate, est destinado para el anlisis cualitativo de
residuos de protena de cacahuate en los productos alimenticios, en las
superficies ambientales y enjuagues de limpieza.
OBJETIVO
Conocer la presencia de residuos de alrgenos en los enjuagues de limpieza en
las superficies ambientales, as como en el producto terminado.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
ALERT para alrgenos de cacahuate, es un ensayo inmunoenzimtico (SELISA) de captura. La prueba es un ensayo Elisa de sndwich la protena de
cacahuate es extrada de una muestra de campo utilizando una solucin salina
bufferada (PBS) mediante agitacin constante en un bao de agua caliente
seguida por centrifugacin o filtracin. La protena extrada es transferida a
unos pozos recubiertos con anticuerpos de captura, donde la protena se une a
los anticuerpos durante la incubacin.
Cualquier protena que no se uni se elimina con un lavado y se agrega un
segundo anticuerpo (detector), que est ligado a una enzima. El anticuerpo
detector se une a la protena que se ligo previamente. Despus de un segundo
lavado, se agrega el substrato. El color se desarrolla como resultado de la
presencia del anticuerpo del anticuerpo detector ligado. Se agrega una solucin
inhibitoria (STOP) y el color resultante en la solucin es observado. Un color
azul indica muestras fuertemente positiva. Un color rojo indica cacahuate
escaso o ausente.
DEFINICIONES
MATERIALES
Micropozos
Recubiertos
Con
Anticuerpos
Goteros
Vacos No
Etiquetados
Para Muestra
Con Punta
Gotero
Etiqueta
Amarillo
Control
Cacahuate (5
Ppm)
Gotero
Etiqueta Azul
Conjugado De
Anticuerpos
(Con Etiqueta
De Enzima)
Gotero
Etiqueta
Verde
Sustrato KBlue
Gotero
Etiqueta
Roja
Solucin
Inhibitoria
(Red Stop)
Bolsas De
Disolvente
De
Extraccin
De Polvo
Seco (Pbs
De 10 Mm) (1
Bolsa- 1 Litro
Solucin
Extraccin)
Frasco De
Concentrado
De Solucin
Buffer
(tamponado)
De Lavado
(Pbs-Tween
De 10 Mm) (1
Fraso- 1 Litro
Solucin
Buffer De
Lavado)
Muestra De 50
G De Aditivo
De Extraccin
Cuchara
Plstica De
Medicin
PRECAUCIONES
1. Las muestras previstas para probar contenido de cacahuate, se debern
de extraer por separado de las muestras para probar alrgenos de otros
alimentos. Los aditivos de extraccin para cada tipo de prueba, estn
diseados especficamente para el alrgeno del alimento objetivo.
2. Los componentes del kit ALERT para alrgenos de cacahuate, como
son controles y reactivos de extraccin, pueden contener uno o ms de
los siguientes materiales potencialmente alrgicos: leche, protena de
huevo, protena de cacahuate o protena de soya. Si es alrgico a
cualquiera de estos compuestos, tenga precaucin al utilizar ste
producto.
3. Refrigere el kit entre 2-8 C cuando no est en uso. No congele el kit.
4. Antes de su uso, permita que el kit alcance la temperatura ambiente
(18-30 C)
5. No utilice los componentes del kit despus de la fecha de vencimiento.
6. No mezcle los reactivos de un kit con un nmero de lote, con los de otro
nmero de lote.
7. No corra ms de 6 pozos por prueba.
8. Slo utilice los tiempos de incubacin especficos. Otros tiempos pueden
dar resultados poco precisos.
DESARROLLO
PREPARACIN DE SOLUCIONES
1. Solucin de extraccin: Prepare la solucin de extraccin agregando
una bolsa del disolvente de extraccin, 10mM PBS, a 1 L de agua
destilada. Revuelva para mezclar completamente. Cubra y refrigere las
porciones no utilizadas a 2-8 C.
2. Solucin buffer de lavado: Prepare la solucin buffer de lavado,
vertiendo todo el concentrado de bufferado (tamponado) de lavado, en
un frasco vaco de 1 L. Enjuague el recipiente del concentrado de
tamponado con agua destilada, y vierta en el frasco de 1L, para
asegurar que se utilice todo el concentrado. Llene el frasco de 1L con
agua destilada adicional y revuelva para asegurar que quede bien
mezclado. Cubra y refrigere las porciones no utilizadas 2-8 C.
*Nota: Deseche las porciones no utilizadas de la solucin
de extraccin y de tamponado de lavado cuando haya
usado completamente el kit.
5.
6.
7.
8.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Antes de usarlos, permita que el kit y todos los reactivos se lleven a
temperatura a,biente (18-30 C)
1. Retire un pozo para cada muestra que se va a probar, ms 1 poza para
el control y colquelos en una superficie plana.
2. Mezcle cada reactivo revolviendo el gotero antes de usarlo.
3. Aada al primer pozo 3 gotas del gotero control, con etiqueta amarilla.
Aada 3 gotas de cada extracto de muestras a un pozo respectivamente
e identifquelos con el marcador indeleble. Mezcle durante 20 segundos
deslizando hacia adelante y hacia atrs los pozos sobre una superficie
plana.
Control
S1
S2
S3
S4
S5
9. Aada a cada pozo 3 gotas del gotero de sustrato con etiqueta verde.
Mezcle durante 20 segundos deslizando hacia adelante y hacia atrs los
pozos sobre una superficie plana.
10.Incube los micropozos 10 minutos a temperatura ambiente (18-30 C).
11.Aada a cada pozo 3 gotas del gotero de solucin inhibidora con
etiqueta roja. Mezcle durante 20 segundos deslizando hacia adelante y
hacia atrs los pozos sobre una superficie plana. Los resultados estn
listos para ser interpretados.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
Compare visualmente el color de un pozo de muestra (S1, S2, S3, etc.) con el
color del pozo control. Si el pozo de muestras tiene MS COLOR AZUL que el
pozo de control, la muestra resulta POSITIVA para contaminacin de
cacahuate de ms de 5 ppm.
REFERENCIA
http://www.neogen.com/FoodSafety/pdf/ProdInfo/A-Peanut.pdf