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Biuret:El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado

formado por lacondensacin de dos molculas de rea con eliminacin


de amonaco. Esta reaccin est dada
por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos
carbamino (-CO.NH) unidosdirectamente o a travs de un solo tomo de
carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret
contiene Cu2SO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de
NaOH o KOH). Lareaccin se basa en la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los
enlaces peptdicos.Esta ltima reaccin provoca un cambio de
coloracin: violeta prpura o violeta rosado. Debe sealarse que el color
depende de la naturaleza de las protenas; protenas y pptidos dan
uncolor rosado; la gelatina da un color azul.
DISCUSION DE RESULTADOS:
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya
que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se
destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se
forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:Que en
contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin
violeta caracterstica. Entre las reacciones coloreadas especficas de las
protenas, que sirven por tanto para su identificacin, destaca la
reaccin del Biuret.
DESNATURALIZACIN DE PROTENASO COAGULACIN: ALBUMINA
Amarillo, al agregar 0.5 ml de HCL se formo una estructura con forma de
telaraa.
Al calentarse presento una precipitacin de espuma y se solidifico, al
ponerle el papel tornasol se puso de color rojo.
Al agregarle NaOH fue cambiando hasta llevarlo al PH mas cercano a la
neutralidad es decir hasta que el papel tornasol cambio a azul.
CASEINA
Amarillo, al agregar 0.5 ml de NaOH no presento ningn cambio en la
coloracin ni en su estructura solo se presento un poco de burbujas.
Al calentar no paso nada pero al agregar el papel se puso azul.
Al agregar HCl 10 gotas cambio su PH a la neutralidad es decir el papel
tornasol se puso de color rojo.
GELATINA
Polvito, se volvi una mezcla al agregrsele agua.
DISCUSION DE RESULATADOS:
Se pudo observar que todas las muestras se coagularon, debido al gran
tamao de sus molculas forman con el agua soluciones coloidales que
pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a
temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas,
cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso
irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados

que al actuar sobre la protena la desordenan por destruccin de sus


estructuras secundaria y terciaria.
CONCLUSIONES
*Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el
organismo, ya que cumple muchas funciones.
*Las reacciones se utiliza en trabajos analticos, as como en la
visualizacin de las bandas de los aminocidos despus de su
separacin por electroforesis o por cromatografa.
*Las protenas estn constituidos por aminocidos, por los cuales los
mtodos se basan en el reconocimiento de los amincidos.
CONCLUSIONES
Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en
el
organismo, ya que cumple muchas funciones. ..Las protenas estn
constituidos por aminocidos, por los cuales los
mtodos se basan en el reconocimiento de los amincidos. Al realizar
las diferentes pruebas con la albmina, se pudo comprobar
experimentalmente que efectivamente se trata de una protena. ..Las
protena son sensibles con las sales metlicas pesadas (mercurio,
cobre, plomo), formando precitados. .En las reacciones donde se
obtuvo precipitacin se debi a un cambioen el estado fsico de la
protena, mientras que en la coagulacin se ha producido un cambio en
el estado fisico y en la estructura qumica por eso es irreversible.
REACCIN DE MILLN
La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la
molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido
en la posicin 3,5 como latirosina, el fenol y el timol producen resultados
positivos en esta reaccin. De estos compuestos,slo la tirosina est
presente en las protenas, de manera que slo las protenas que tienen
este aminocido ofrecen resultados positivos.
En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido
(cido ntrico delreactivo) se condensan con el grupo fenlico formando
un compuesto de color rojo ladrillo o
rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales
inorgnicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln
es precipitado y se vuelve negativo, raznpor la cual este reactivo no se
usa para medir albmina en orina.Debe tomarse en cuenta que en el
caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina,debe ser
previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en
forma de xidosamarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina
producen un precipitado blanco queprogresivamente por accin del calor
se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente unasolucin de color
rojo. Realizacin de la prueba: se toman y rotulan tres tubos de ensayo
Pyrex diferentes (1, 2 y3). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de
solucin de ovoalbmina 10%, solucin deglicina 0.1 M y agua destilada,
respectivamente. Se aaden 3 4 gotas del reactivo demillny se

colocan los tubos en un bao de Mara a 100 C por 1-2 minutos. Se


observan los cambios. Sino llega a desarrollarse color, pueden aadirse
2 3 gotas ms del reactivode Milln y calentarnuevamente por igual
perodo de tiempo. CUIDADO! Evite el exceso de reactivo ya quepuede
producir un color amarillo que no es indicativo depositividad. Anote los
resultados en latabla No. 1 al final del formato de prctica.
REACCIN DE XANTOPROTEICA
Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Esta reaccin se
debe la presenciade un grupo fenilo en la molcula proteica. Los
complejos de la molcula proteica que son de importancia en esta
reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en
lascondiciones que se realiza en el laboratorio.Para esta prueba se
produce la nitracin delanillo bencnico presente en los
aminocidosobtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se
vuelven anaranjados en mediofuertemente alcalino (formacin de cido
picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reaccin para
identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin
final.Realizacin de la prueba: se toman yrotulan tres tubos de ensayo
Pyrex diferentes (1, 2 y3). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de
solucin de ovoalbmina 10%, solucin deglicina 0.1 M y agua destilada,
respectivamente. Se aade 1mL de HNO3 concentrado.CUIDADO AL
AGREGAR EL CIDO! Se colocan los tubos en un bao de Mara a 100
Cpor 1 minuto. Se observan los cambios. Deje enfriar. Aada
cuidadosamente solucin dehidrxido de amonio concentrado (hidrxido
de sodio concentrado) en exceso. Observe lacoloracin nuevamente.
Anote los resultados en la tabla No. 1 al final del formato de prctica
REACCIN DE NINHIDRINA
Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminocidos
libres. Losaminocidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato
de hicelohidrandeno) cuando soncalentados con un exceso de la misma.
Todos los aminocidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y
forman dixido de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un
tomo de carbono menos que el compuesto original. Esta reaccin da
lugar a la formacin de un producto color azul o prpura (que
posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el aminocido). En el
caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre,
sino un grupo imino, lacoloracin final es amarilla. El amonaco, la
mayora de los polipptidos y las protenas pueden desarrollar coloracin
en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos, no liberan
CO2.Recuerde que la coloracin azulada o violeta ser proporcional a la
concentracin delAminocido
V.- DISCUSIONES:
Algunos cidos grasos poliinsaturados (linoleico, linolnico
yaraquidnico) no pueden ser sintetizados por los animales
superiores(incluido el hombre), y como su funcin biolgica es
fundamental,deben ser suministrados en la dieta.

VI.- CONCLUSIONES:
Durante el experimento en el que utilizamos el reactivo de
Nihidrina,pudimos observar que todos los contenidos de los tubos de
ensayocambiaban su color a uno violeta debido a que stos son aminocidos.. . Gracias a la presencia de la fenolftalena y anaranjado
de metilopudimos confirmar la capacidad anftera que tienen los
aminocidos,ya que con la fenolftalena se comport como base y con
elanaranjado de metilo como cido.. . Confirmamos que el reactivo de
milln detecta restos fenlicos en
aminocidos, el reactivo de cido Gliclico detecta a los restos
indlicos y el acetato de plomo, a los restos azufrados. .En el
experimento de solubilidad de los lpidos, se podr observar queel aceite
se ha disuelto en el ter y no en el agua ya queste subir debido a su
menor densidad.
DESNATURALIZACIN:Es la destruccin de la estructura terciaria de
una protena, en laque pasa de una forma plegada o enroscada a una
formaopuesta, por rompimiento de enlaces de hidrgeno. En la
protenadesnaturalizada ocurren cambios estructurales que afectan
suspropiedades biolgicas, como la hormonal, enzimticas y laactividad
inmunolgica. Es generalmente un proceso irreversible,fuertemente
endotrmico, que produce un desorden del sistema. Los principales
agentes desnaturalizantes son:
a) Altas temperaturas, provocan la coagulacin. Ej. Huevo cocido.
b) Cambios bruscos de pH.
PRUEBA DE LA NINHIDRINA(HIDRATO DE
TRICETOHIDRINDENO).Todas aquellas sustancias que presentan al
menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la
ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparicin de un color
violceo o amarillo. Debido a que las protenas y los aminocidos,
poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para identificarlos. Algunas
soluciones de amonio y aminas, dan la coloracin caracterstica,
aparentemente debido a una oxidacin y reduccin intramolecular de la
ninhidrina en presencia de amonaco. Los aminocidos porina e
hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un
color rojo que pasa rpidamente a amarillo. La reaccin se muestra en la
figura 1
PRUEBA DE BIURET :Es una prueba general para polipptidos y
protenas ya que sirve para reconocer las uniones peptidicas. La
positividad se manifiesta por la aparicin de una coloracin violeta. La
formacin de un complejo de coordinacin entre los cationes cpricos en
medio alcalino con las uniones peptdicas.

1.1.8 Prueba de Hopkins-Cole:Es para identificar el triptfano y las


protenas que lo contienen. La positividad se reconoce por la aparicin
de un anillo color violeta-rojizo.
Prueba de coagulacin:Es una prueba para identificar: albminas,
globulinas, glutelinas y prolaminas. La positividad se manifiesta por la
formacin de un cogulo. No se conoce exactamente el mecanismo de
reaccin, se cree que ocurre cierta deshidratacin de la molcula
proteica.
1.1.4 Prueba de Sulfato de amonio:Las protenas, como otros coloide son
precipitadas por soluciones concentradas de sales de amonio[NaCl.
(NH4)2SO4 y NaSO4 ]. Aparentemente la precipitacin se debe a la
neutralizacin y deshidratacin de la molcula, seguida de agregacin y
precipitacin.
Prueba xantoprotica:Es una reaccin que reconoce los aminocidos que
poseen el grupo bencnico (tirosina, fenilalanina, triptfano). Las
protenas que tienen en su composicin estos aminocidos tambin
darn la reaccin. La positividad se reconoce por la aparicin de un color
amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos.
Prueba de los grupos SH: Es una prueba para identificar aminocidos
azufrados y las protenas que los contiene, se reconocen por la
formacin de una coloracin negra o gris. La figura siguiente muestra
dicha reaccin.La cadena proteinica de aminocidos formada por
enlaces peptidicos constituye la llamada estructura primaria d
elaprotena.Las protenas sufren cambios en su forma, por que la cadena
polipeptidica helicoidal puede sufrir otros dobleces para producir una
forma globular o alargada.

Biologa/sistemas vivientes/Raymond F. oran/ compaa editorial Mxico. S.A.

Protenas son los bloques de construccin d ela materia viviente. Son


importantes para el crecimiento, el mantenimiento y la reparacin de los
organismos vivientes.La mayor parte de los 20 am inoacidos
importantes para los organismos vivientes contienen un atomo de
carbono central al que esta unido un grupo carboxilo (COOH) un atomo
de hidrogeno y un grupo duina (NH2).
Encimas: las reacciones qumicas de las cosas vivientes y de las inertes
en cierta forma son parecidas.
La energa trmica no puede ser la energa de activacin para las
reacciones qumicas en los organismos, la cantidad de calor necesaria
para iniciar la generalidad de las reacciones qumicas.

Desde los descubrimientos de payen y persoz, se han identificado


muchas enzimas. Todas estas enzimas tienen ciertas propiedades. Cada
enzima es especifica.
Las enzimas no se pierden despus de haberse llevado a cabo la
reaccin, muchas de las enzimas son protenas, molculas
complejasformadas de aminocidos.
otras molculas necesitan muxas encimas llamadas Coenzimas para
inicira las reacciones , con frecuencia sirven como agentes de
transferencia de atomos durante una reaccin.
Las coenzimas no son tan especificas como las enzimas.

Biologa/conceptos y relaciones /Campbell mitcheltreece/ tercera edic ion/pag83

Muchas molculas se mueven atraves de una membrana con la yuda de


protenas de transporte presentes en la membrana.
Las protenas transportadoras son especificas para los solutos que
transportan de esta manera, la cantidad y tipos de protenas.
Bioqumica/tercera edicin /tomo 1, lumbertstryer/ pag.15 -17
Transportadoras diferentes embebidas en la membrana afecta su
permeabilidad a los diversos solutos

Las protenas desempean appeles cruciales en prcticamente todos los


Protena (palabra propuesta por Jons J. Berzelius en 1838 para resaltar la
importancia de estas molculas. Proviene de la palabra griegaproteios,
significa <<de primera clase>>

procesos biolgicos. La significacin y enlace de sus funciones pueden


comprenderse .
Catlisis enzimtica: casi todas las reacciones qumicas en los sistemas
biolgicos estn catalizadas por macromolculas especificas
denominadas enzimas. Casi todas las enzimas poseen enorme poder
cataltico.(aumentan las velocidades de reaccin almenos un milln de
veces)

Biologa(per spectiva humana)/tercera edicin / Irvin W.


ChermanViliaga G. Sherman pag 60 -65

DesnaturalizacinPrdida de la estructura tridimensional o


conformacin, y por tanto tambin de la actividad biolgica. Se produce
al variar la temperatura, presin, pH, electronegatividad, etc. Esto
provoca la rotura de los puentes de hidrgeno que mantienen las
estructuras secundaria y terciaria, y las protenas se convierten en fibras
insolubles en agua. Si las condiciones son suaves, el proceso es
reversible, y si el cambio es ms drstico, es irreversibleConsiste en la
prdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman
dicha estructura. Todas las protenas desnaturalizadas tienen la misma
conformacin, muy abierta y con una interaccin mxima con el
disolvente, por lo que una protena soluble en agua cuando se
desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita.
La desnaturalizacin se puede producir por cambios de temperatura,
( huevo cocido o frito ), variaciones del pH. En algunos casos, si las
condiciones se restablecen, una protena desnaturalizada puede volver a
su anterior plegamiento o conformacin, proceso que se denomina
renaturalizacin
Las enzimas
En todos los organismos es preciso sintetizar macromolculas a partir de
molculas sencillas, y para establecer los enlaces entre stas se
necesita energa. Esta energa se consigue rompiendo los enlaces
qumicos internos de otras macromolculas, sustancias de reserva o
alimentos. Todo ello comporta una serie de reacciones coordinadas cuyo
conjunto se denomina metabolismo.
Dado que las sustancias que intervienen en estas reacciones son,
generalmente, muy estables, se requerira una gran cantidad de energa
para que reaccionaran entre s, ya que, si no, la velocidad de reaccin
sera nula o demasiado lenta. Para acelerar la reaccin en un laboratorio
bastara con aumentar la temperatura o bien con aadir un catalizador,
es decir, una sustancia que aumente la velocidad de la reaccin. En los
seres vivos, un aumento de temperatura puede provocar la muerte, por
lo que se opta por la otra posibilidad, es decir, el concurso de
catalizadores biolgicos o biocatalizadores. Las molculas que
desempean esta funcin son las enzimas. Las enzimas son, protenas
globulares capaces de catalizar las reacciones metablicas.
Son solubles en agua y se difunden bien en los lquidos orgnicos.
Pueden actuar a nivel intracelular, es decir, en el interior de la clula
donde se han formado, o a nivel extracelular, en la zona donde se
segregan.

Las enzimas cumplen las dos leyes comunes a todos los catalizadores: la
primera es que durante la reaccin no se alteran, y la segunda es que no
desplazan la constante de equilibrio para que se obtenga ms producto,
sino que simplemente favorecen que la misma cantidad de producto se
obtenga en menos tiempo. Las enzimas, a diferencia de los catalizadores
no biolgicos, presentan una gran especificidad, actan a temperatura
ambiente y consiguen un aumento de la velocidad de reaccin de un
milln a un trilln de veces.
LA CATALASA:
Es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la
descomposicin
del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. El perxido de
hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchosorganismos
vivos y tiene entre otras una funcin protectora contra
microorganismospatgenos, principalmente anaerobios. Esta funcin la
efecta esta enzima quecataliza su descomposicin en agua y oxgeno.
Adems la catalasa se usa en laindustria textil para la eliminacin del
perxido de hidrgeno, as como en menor
medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han
esterilizado enuna solucin de perxido de hidrgeno
Prueba de la Catalasa
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se
encuentra el lamayorade las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas que contienen citocromo. La principalexcepcin es
Streptococcus.
Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los
siguientes gneros:
Streptococcus(-) de Micrococcus(+) y/o Staphylococcus(+).
Bacillus(+) de Clostridium(-).
Lysteriamonocytogenes(+) y/o Corynebacterium(+, con las
excepciones de
C.pyogenesy C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix(-)
Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede
hacerse siguiendo dos
tcnicas:
1. Mtodo del portaobjetos (recomendado):
Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24
horas ycolocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre
elmicroorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua
oxigenada )pueden producirse falsos positivos.
2. Mtodo del tubo de ensayo:

Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en


slantdensamente inoculado.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de
agar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con
el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen
catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo.
Bibliografa
http://www.ellaboratorio.co.cc/practicas/bioquimica/catalasa.pdf
La catalasa en ala leche
La determinacin de presencia de catalasa junto con la reductasa sirve
para conocer el estado de conservacin de la leche, pues con el nmero
de grmenes aumentan tambin las catalasas y reductasas que ellos
producen.
En un catalasmetro apropiado que permite medir el volumen de oxgeno
que se desprende, se colocan 10 ml de leche y 5 ml de agua oxigenada
(3%). Se lleva durante 2 horas a 37C y se mide el volumen gaseoso
que s desprende, expresando el resultado en ml de O2%. En el
catalasmetro de Roeder se usan 5 ml de leche mas 1 ml de agua
oxigenada al 1,670 (obtenida por mezcla de 10 ml de 30% o con 140
ml de agua), adicionada de dibromotimol, indicador de pH cuyo viraje se
reconoce por la coloracin que toma la mezcla (reaccin alcalina: azulverdoso; cida: verde-oliva a amarillo). Aqu el volumen se mide despus
de 30 a 37C. La leche normal cruda desprende hasta 30 ml de %, la
pasteurizada hasta 6 ml y la leche cocida o esterilizada no presenta
desprendimiento. Las leches enfermas, sucias o calostrales desprenden
hasta 10 15 veces mas que una leche normal.
Mtodo de folinlewry para la determinacin de protenas

Soluciones la protena en agua destila


da
,http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp05b.pdf

UNIVERSIDAD CATLICA DE TEMUCO


FACULTAD DE CIENCIAShttp://biblioteca.uct.cl/tesis/luciamedina/tesis.pdf