CUANTIFICACIN DE PROTEINAS

Mara Jos Barros, Christian Lpez, Katherine Loyola, Docente: Dra. Diana Astudillo
Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Qumicas, Carrera de bioqumica y farmacia
Asignatura: Bioqumica 1, Cuenca Ecuador, Fecha de entrega: 30-10-2014
1. Presentacin de la prctica
Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas
constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos
biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de molculas
2. Requisitos, precauciones y evaluacin
Requisitos
Lecturas recomendadas: Guas de prcticas bioqumica 1 pgs. 10-12
Precauciones
Prestar atencin a las indicaciones del docente.
Usar mandil y guantes.
Adicionar los reactivos en las concentraciones que se establece en la gua prctica.
Evaluaciones
Aplicar un mtodo colorimtrico para determinar la concentracin de protena en una
muestra problema.
3. Objetivos
Aprender el manejo del espectrofotmetro y su aplicacin en los mtodos
colorimtricos.
Aprender el empleo de una curva patrn para la determinacin de la cantidad de
molculas presentes en una muestra, en este caso de protenas.
Principalmente cuantificar protenas que se encuentran en una solucin.

4. Equipos; instrumentos, materiales y reactivos.

Tabla 1. Tabla de equipos
Descripcin
Espectofotmetro

Marca
Vortex
Mixer

Tabla 2. Tabla de instrumentos

Serie
9501202911

Descripcin
Tubos de ensayo
Gradilla de tubos
Pipetas

Marca

Tabla 3. Tabla de reactivos

Descripcin
Reactivo de Biuret

Serie

Marca

Serie

Suero
fisiolgic
o
Suero
sangune
o
Albmina
bovina
(patrn)
Clara de
huevo

5. Exposicin
Para el estudio de la estructura de una protena de la actividad de un enzima o del
contenido proteico de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la
concentracin de las protenas.
Una de las tcnicas es la cuantificacin de las protenas con el rectivo de Biuret que al
formar el complejo colorido tien un mximo de absorcin de 540nm. Este mtodo es
muy usado por ser cencillo rpido y qconomico. El reactivo de Biuret consiste en una
solucin alcalina de cobre que forma un complejo de color azul purpura, con los enlaces
peptdicos de las protenas.
La reaccin de biuret es una reaccin coloreada (violeta) debida a la formacin de un
complejo de Cu en un medio alcalino en compuestos que poseen ms de un enlace
peptidico, como las proteinas (Cambell et al, 2006):

Figura 1: Reaccin de Biuret.

La curva de patrn es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la
concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie de
elementos de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una relacin en
principio lineal entre un carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques
de espectrofotometra) y la variable a determinar (la concentracin). Para ello, se
efectan diluciones de unas muestras de contenido conocido y se produce su lectura y el
consiguiente establecimiento de una funcin matemtica que relacione ambas; despus,
se lee el mismo carcter en la muestra problema y, mediante la sustitucin de la variable
independiente de esa funcin, se obtiene la concentracin de esta. Se dice pues que la
respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva patrn, se puede
interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la concentracin (Harris,
2003)(2)
La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de
protenas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero). (3)

6. Proceso y procedimiento
6.1Proceso.
CUANTIFICACION
DE PROTEINAS
BIUTRET
Solucin
Patron

Prueba en
blanco
540nm

Sol (Alb+
Glo)

2.5ml de
reactivo
Biuret

Temperatura
ambiente X
30min

Curvas
de
patrn

Medir la
Absorban
cia

Interpolar
con las
concentracio
nes

Figura 1. Proceso para la cuantificacin de protenas

6.2 Procedimiento
Con un patrn de protenas y diluido 1/10 preparar una curva de calibracin.
Tubos
Glo
Patrn de protenas en sol. salina
Solucin salina
Reactivo de Biuret
Concentraciones resultantes
Por dilucin del patrn (g/100ml)

P1

Patrones
P2
P3

P4

0
2.5
2.5

0.5
2
2.5

1
1.5
2.5

2
0.5
2.5

1.5
1.0
2.5

Alb

2.5

Glo

2.5

El suero sanguneo tomamos 0.1 ml y 2.4 ml de solucin salina y procedemos como si

fuera un patrn. De las soluciones de albmina y globulina obtenidas por
fraccionamiento tomamos 2.5 ml + 2.5 ml de reactivo de Biuret .Dejar a temperatura
ambiente, por 30 minutos para el desarrollo de color. Obtener las lecturas de los tubos
patrn contra la prueba en blanco a 540 nm e interpolar con las respectivas
concentraciones. Trazar la curva respectiva (3)

7. Resultados y/o discusin

7.1 Resultados
TUBOS
P1
P2
P3
P4
Albumina
Globulina

RESULTADOS
(nm)
0,089
0,402
0,63
0,825
0,645
0,125

Absorban Concentracion
cia
( mg)
0,089
0,5
0,402
1
0,63
1,5
0,825
2
0,645
0,125

Curva de calibracion
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0.4

0.6

0.8

1.2

1.4

1.6

1.8

2.2

8.1 Conclusin
Efectivamente, aplicando el mtodo Biuret se puede determinar la concentracin de
protena en una o varias muestras problema, que resultan al interpolar los valores de
absorbancia en una curva patrn originada a partir de concentracin de protena
conocida.

Referencias
Harris, D.C. (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H. Freeman.

Astudillo, D. D. (2013). Guias de practicas Bioquimica 1. Universidad de Cuenca,

Cuenca.

Quesada, S. (2007). Captulo 3 protenas. En S. Quesada, Manual de experimentos de

laboratorio para bioqumica (pgs. 26-27). San Jos: Universidad de San Jos,
Costa Rica.