UNIVERSIDAD ESTATAL

PENNSULA DE SANTA ELENA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA DE AGROPECUARIA
CARRERA DE INGENIERA AGROPECUARIA
TERCER SEMESTRE
BIOQUMICA
PRCTICA No. 1
ESTUDIANTES: Gnesis Usca Valle
Vctor Pozo Ramrez
Carlos Castillo Melar

PROFESOR: Dra. Nardy Diez.

LA LIBERTAD ECUADOR
Julio de 2014

NDICE GENERAL
1.

INTRODUCCIN.................................................................................................................................... 1
1.1. ANTECEDENTES. ................................................................................................................................ 1
1.2. JUSTIFICACIN. .................................................................................................................................. 1
1.3. OBJETIVOS. ........................................................................................................................................ 2
1.3.1. OBJETIVO GENERAL. ................................................................................................................... 2
1.3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS. ............................................................................................................ 2

2.

REVISIN DE LITERATURA ................................................................................................................... 3

2.1. PROTEINAS. ....................................................................................................................................... 3
2.1.1. Definicin. ................................................................................................................................... 3
2.1.2. Clasificacin de las proteinas...................................................................................................... 3
2.2.3. Estructura de proteinas .................................................................................................................. 4
2.2.3.1. Estrutura primaria. .................................................................................................................. 4
2.2.3.2. Estrutura secundaria. .............................................................................................................. 4
2.2.3.3. Hlice alfa ................................................................................................................................ 4
2.2.3.4.Hlice de colgeno. .................................................................................................................. 5
2.2.3.5 Estructura terciaria. .............................................................................................................................. 5
2.2.3.6. Estructura cuaternaria ............................................................................................................ 5
2.2.4.

Reactivo de Biuret. ..................................................................................................................... 6

2.2.4.1 Definicion . .............................................................................................................................. 6

2.2.4.2 .Identificacion de proteinas de la clasificacion de Biuret ....................................................... 6
3.

MATERIALES Y MTODOS. ................................................................................................................... 7

3.1. LUGAR DE ENSAYO. ........................................................................................................................... 7
3.2. MATERIALES. ..................................................................................................................................... 7
3.3.MTODOS. .................................................................................................................................. 7
3.3.1.

4.

PROTOCOLO DE PROTEINAS ................................................................................................... 7

RESULTADOS. ....................................................................................................................................... 8
4.1 Resultados..8

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES. ..................................................................................................... 9

BIBLIOGRAFA. ........................................................................................................................................... 10
ANEXOS ..........................................................................................................................................................

NDICE DE CUADROS
CUADRO 1. Materiales y reactivos utilizados en la prctica7
CUADRO 2. Datos de absorbancia..8
CUADRO 3. Curva patrn..8

NDICE DE ANEXOS
FIGURA 1 A. SOLUCION DEL REACTIVO DE BIURET MAS EL BUFFER....
FIGURA 2 A. COLOCACION DE LA SOLUCION DE LECHE EN CADA UNO DE LOS TUBOS DE ENSAYOS.

1. INTRODUCCIN
1.1 ANTECEDENTES.
Las protenas son molculas orgnicas ms abundantes en las clulas, estas constituyen ms del
50% en su constitucin del peso de la clula, los aminocidos diferentes estn unidos en cualquier
orden para formar los polipptidos en cientos de aminocidos, donde cada una de ellas tiene un
extraordinario potencial de producir una gran cantidad de variante en su conformacin. La
composicin proteica de las clulas en un determinado momento depende del conjunto de genes
que se estn activando y estn relacionado con las seales que recibe la clula.

El proceso que se va a desarrollar en la prctica es calcular la cantidad total de protena contenida

en una disolucin, utilizaremos tcnicas ya conocidas para desarrollar la cuantificacin de
protenas. Cabe destacar que en este proceso se aade un agente qumico que es un colorante a
una muestra de protena, provocando un cambio de color en la muestra. La mayor concentracin
de protenas determinara un color ms intenso, este cambio la produce el colormetro, que se
basa en analizar la intensidad de calor, y determina el valor correspondiente de absorbancia, de
acuerdo al resultado se proyectara una recta en un esquema donde especificara la cantidad de
protenas que hubo en el agente colorante.

1.2 JUSTIFICACIN
Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven por tanto para su
identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta reaccin la producen los pptidos y las
protenas, pero no los aminocidos ya que se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que
se destruye al liberarse los aminocidos.
El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se
une con los enlaces peptdicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de
color depende de la concentracin de protenas.

1.3 OBJETIVOS.
1.3.1

Objetivo general.

Esta prctica pretende introducir al alumno en dos mtodos para la cuantificacin de protenas: su
fundamento, sus ventajas e inconvenientes. Se pretende utilizar (Biuret y cuantificacin directa a
280nm), para cada uno de ellos se realizar una curva estndar, se determinar el coeficiente de
extincin, el rango de sensibilidad, y se realizar la cuantificacin de al menos dos muestras
problemas.

1.3.2

Objetivos especficos.

Preparar diluciones para curva de calibracin y muestra problema.

Entender los principios qumicos que permiten la determinacin de las protenas.

Realizar una curva de calibracin.

Determinar la concentracin de la muestra problema.

Comparar un mtodo de determinacin por absorcin y uno por ensayo qumico

interpretar la diferencia.

REVISIN DE LITERATURA.

2.1 PROTENAS.

2.2.1 Definicin.
GUILLN M. (2009, lnea) manifiesta que las protenas son biomolculas formadas bsicamente
por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. Pueden adems contener azufre y en algunos tipos
de protenas, fsforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos.

2.2.2. Clasificacin de las protenas.

Segn RIEDEL M. (2005, en lnea) Las protenas se pueden clasificar atendiendo a diversos
criterios: su composicin qumica, su estructura y sensibilidad, su solubilidad una clasificacin
que engloba dichos criterios es

Holoprotenas. -Formadas solamente por aminocidos.

Heteroprotenas.- Formadas por una fraccin protenica y por un grupo no
protenico, que se denomina

2.2.3 Estructura de las protenas.

De acuerdo a GUILLN M. (2009), todas las protenas poseen una misma estructura qumica
central, que consiste en una cadena lineal de aminocidos. Por tanto, podemos distinguir cuatro
niveles de estructuracin en las protenas:
2.2.3.1 Estructura primaria.
La estructura primaria viene determinada por la secuencia de aminocidos en la cadena proteica,
es decir, el nmero de aminocidos presentes y el orden en que estn enlazadas. Las posibilidades
de estructuracin a nivel primario son prcticamente ilimitadas. Como en casi todas las protenas
existen 20 aminocidos diferentes, el nmero de estructuras posibles viene dado por las
variaciones con repeticin de 20 elementos tomados de n en n, siendo n el nmero de
aminocidos que componen la molcula proteica.

2.2.3.2 Estructura secundaria.

La estructura secundaria de las protenas es el plegamiento que la cadena polipeptdica adopta
gracias a la formacin de puentes de hidrgeno entre los tomos que forman el enlace peptdico.
Los puentes de hidrgeno se establecen entre los grupos -CO- y -NH- del enlace peptdico (el
primero como aceptor de H, y el segundo como donador de H). De esta forma, la cadena
polipeptdica es capaz de adoptar conformaciones de menor energa libre, y por tanto, ms
estables.
2.2.3.3 Hlice alfa
En esta estructura la cadena. Esta estructura se mantiene gracias a los enlaces de hidrgeno
intracatenarios formados entre el grupo -NH de un enlace peptdico y el grupo -C=O del cuarto
aminocido que le sigue.

2.2.3.4 Hlice de colgeno.

El colgeno es una importante protena fibrosa presente en tendones y tejido conectivo con
funcin estructural ya que es particularmente rgida. Presenta una secuencia tpica compuesta por
la repeticin peridica de grupos de tres aminocidos. El primer aminocido de cada grupo es Gly,
y los otros dos son Pro (o hidroxiprolina) y un aminocido cualquiera: -(G-P-X)-.

2.2.3.5 Estructura terciaria.

Se llama estructura terciaria a la disposicin tridimensional de todos los tomos que componen la
protena, concepto equiparable al de conformacin absoluta en otras molculas. La estructura
terciaria de una protena es la responsable directa de sus propiedades biolgicas, ya que la
disposicin espacial de los distintos grupos funcionales determina su interaccin con los diversos
ligandos. Para las protenas que constan de una sola cadena polipeptdica (carecen de estructura
cuaternaria), la estructura terciaria es la mxima informacin estructural que se da cuando los
dominios se pliegan por separado a medida que se sintetiza la cadena polipeptdica.

2.2.3.6 Estructura cuaternaria

Cuando una protena consta de ms de una cadena polipeptdica, es decir, cuando se trata de una
protena oligomrica, decimos que tiene estructura cuaternaria, cuando se considerar.
El nmero y la naturaleza de las distintas subunidades o monmeros que integran el
oligmero.
La forma en que se asocian en el espacio para dar lugar al oligmero.
La estructura cuaternaria deriva de la conjuncin de varias cadenas peptdicas que, asociadas,
conforman un multmero, que posee propiedades distintas a la de sus monmeros componentes.

2.2.4 REACTIVO DE BIURET.

2.2.4.1 Definicin.
FERNANDEZ E. GALVAN A. (2006), manifiesta que biuret es un grupo qumico con frmula R2NC(O)
NHC (O) NHR2. Es un producto formado por la reaccin de isocianatos con ureas. Se basa en la
formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en
medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloracin es directamente
proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica,
de manera que pocas sustancias interfieren.
2.2.4.2 Identificacin de protenas de la reaccin el Biuret
De acuerdo a REINALDO (2009) manifiesta que a reaccin de biuret, es una molcula formada a
partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin,
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret, que
contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin
de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los
iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces
peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540 nm.

3 MATERIALES Y MTODOS.
3.1. LUGAR DE ENSAYO.
El presente ensayo de investigacin formativa se realiz en el laboratorio de ciencias qumicas de
la Universidad Estatal Pennsula de Santa Elena, ubicada en La Libertad, va Santa Elena La
Libertad, provincia de Santa Elena.
3.2. MATERIALES.
Cuadro 1. Materiales y reactivos utilizados en la prctica.
MATERIALES

REACTIVOS

Balanza analtica
Capsula
Centrifuga
Gradilla de tubos de ensayo
Mortero
Tubos de Ensayo
Tubo de centrfuga
Varilla de vidrio
Vaso de precipitacin

Agua destilada
Biuret.
Leche.
Frijol.
Lenteja.

3.3 MTODOS.
3.3.1

PROTOCOLO DE PROTEINAS.
Enumerar seis tubos de ensayos.
Prepara una solucin buffer con cido brico (colocando 0.5 g de cido brico, ms 50 ml
de agua destilada).

Colocar 0.5 ml de leche en los tubos de ensayo, excepto el cero.

Aadir 4ml de reactivo de BIURET a todos los tubos.

Mezclar el contenido de cada tubo.

Esperar 5 min para que se desarrolle el color. Medir la absorbancia ajustado a cero con el
(tubo 1 tubo cero)

Colocar en el tubo de los granos de lenteja, mas solucin buffer (0.1 ml) de la solucin
ms 0.9 ml de agua destilada.

Colocar en el tubo de ensayo la solucin de frejol, solucin buffer (0.1 ml) ms 0.9 ml de
agua destilada, ms 0.5 del reactivo de biuret y colocar en el bao de Mara por 15
minutos.

Calibramos el colormetro a cero, colocamos la sustancia obtenida para medir la

absorbancia de cada una de las muestras anotando el resultado obtenido en cada caso.

El mismo procedimiento es para los 5 tubos en el tubo 1 se le puso (0.1 ml de leche y 0.9 ml de
agua) y se toma 0.5 ml de cada uno de los 4 tubos que faltaban para ir mezclando y pasando a
cierto a cada tubo se le puso 0.1ml de leche.

Tomar los respectivos datos de acuerdo al proceso realizado.

RESULTADOS.

4.1 RESULTADOS.
CUADRO 2. DATOS DE ABSORBANCIA.
mg/ml

Asorvancia 1

Asorvancia 2

0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5

0
0,032
0,026
0,142
0,226
0,025

0
0,153
0.223
0,171
0,174
0,236

0
0,0925
0,013
0,1565
0,2
0,1305

CUADRO 3. CURVA PATRN

Curva patrn
0,25

y = 0,032x - 0,0131
R = 0,5631

Absorvancia

0,2
0,15

Series1

0,1

Lineal (Series1)

0,05
0
0

0,1

0,2

0,3

0,4

Valores de concentracion mg/ml

0,5

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
CONCLUSIONES.

Mediante el proceso de investigacin y prctica, determinamos que el reactivo de Biuret

es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos u otros compuestos con dos o
ms enlaces peptdicos.

De acuerdo a los principios qumicos de las protenas determinamos que estn

constituidas por aminocidos, por los cual todo el proceso se basa en el reconocimiento
de aminocidos.

En La cuantificacin de protenas que se basa en el colormetro, concluimos que el color

obtenido ser ms intenso cuanto mayor sea la concentracin de protenas en la muestra,
es decir nos da un valor correspondiente de absorbancia. Pero en este caso no se pudo
obtener los resultados esperados debido a una falla tcnica del colormetro.

En el proceso de reaccin se determin que el color azul se trasforma en violeta por la

presencia de protenas y se torna color rosa cuando se interna con polipptidos de
cadena, lo cual se evidencia en los resultados de acuerdo al proceso realizo en la prcticas.

RECOMENDACIONES.

Al momento de realizar el buffer se debe tener en cuenta la cantidad exacta de cada una
de las soluciones.

Que colormetro presenta problema tcnico, ya que no se puede dar un resultado exacto
de absorbancia.

Basados al proceso de prctica, recomendamos que al realizar el proceso de pipeteo en

cada uno de los tubos de ensayo, se debe tomar toda la sustancia y luego depositarla para
que se d un buen resultado al momento de obtener la absorbancia.

Recomendamos que para llevar un registro de cada una de las sustancia, que stan
colocadas en cada uno de los tubos de ensayo, se enumere para dar un debido proceso en
la prctica.

BIBLIOGRAFA:
RIEDEL M. (2005, en lnea).PROTEINAS. Consultado el 12 de julio del 2014. Disponible en:
http://avdiaz.files.wordpress.com/2008/11/proteinas.pdf
GUILLN M. (2009, en lnea) PROTEINAS. Consultado el 12 de julio del 2014. Disponible en:
http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
Reinaldo (2009) Reaccin de Biuret. Consultado el 11 de julio del 2014. Disponible en:
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
FERNANDEZ E. GALVAN A. (2006), mtodo para la cuantificacin de protenas. Consultado el 13 de
julio
del
2014.
Disponible
en:
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol
mol/pdfs/27%20M%C3%89TODOS%20PARA%20LA%20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE
%C3%8DNAS.pdf

10

ANEXOS

FIGURA 1 A. SOLUCION DEL REACTIVO DE BIURET MAS EL BUFFER

FIGURA 3 A. COLOCACION DE LA SOLUCION DE LECHE EN CADA UNO DE LOS TUBOS

DE ENSAYOS.