INTERAO

FRMACO-RECEPTOR

E
MTODOS EM
FARMACOLOGIA
1
Primeiro slide

INTERAO FRMACO-RECEPTOR

AR*

2
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AFINIDADE E DENSIDADE DE RECEPTOR

Estudos com ligantes radioativos
[3H]QNB

tampo

[3H]QNB

tampo

atropina

Membrana
semi-purificada
do tecido

Ligao total

Membrana
semi-purificada
do tecido

Ligao inespecfica

Ligao total - Inespecfica = Ligao especfica

3
Primeiro slide

AFINIDADE E DENSIDADE DE RECEPTOR

100

Ensaio de saturao

50

B/F
(fmol/mg/nM)

B/F
(fmol/mg/nM)

KD e Bmax

100

50

0
0

20
40
60
80
B (fmol/mg protena)

20
40
60
80
B (fmol/mg protena)
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EFICCIA
Estudos funcionais Emax, EC50

ACh

FNF
Primeiro slide

EFICCIA
Estudos funcionais Emax, EC50
Curva Concentrao-efeito do Agonista

Potncia:
afinidade
+
eficcia

% contrao

100

Contro
Contro

Hiperp
50

0
-10

-9

-8

-7

-6

-5

-4

Fenilefrina log [M]

Resposta fisiolgica
no diretamente proprorcional ocupao
6
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AGONISTA TOTAL e PARCIAL

Agonista total: resposta mxima eficcia (a =1)

Agonista parcial: resposta submxima eficcia (a < 1)
7

(com 100% de ocupao)

Primeiro slide

AGONISTA INVERSO

Afinidade pelo receptor em repouso

8
Primeiro slide

ANTAGONISMO ENTRE FRMACOS

Antagonismo qumico: interao em soluo
Antagonismo farmacocintico: alt. absoro, metab...
Antagonismo fisiolgico: efeitos opostos
Antagonismo competitivo: mesmo receptor

reversvel
irreverssvel
Antagonismo no competitivo: stios diferentes

9
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ANTAGONISMO COMPETITIVO
REVERSVEL

No muda o efeito mximo na presena do antagonista

10
Primeiro slide

ANTAGONISMO COMPETITIVO
IRREVERSVEL

o efeito mximo na presena do antagonista

11
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Liga
(

CARACTERIZAO DE SUBTIPOS DE RECEPTOR

Metoctram ina
HHSiD

0
-13

-11

-9

-7

-5

-3

Estudos com ligantes radioativos

Ligao especfica [ H]QNB

(% do controle)

log [M] antagonistas

Ensaio
de
competio

100

75

50
Atropina

25

Metoctram ina

HHSiD

0
-13

-11

-9

-7

-5

-3

log [M] antagonistas

12

pKi = -log IC50

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 Estudos funcionais

13
Primeiro slide

Imunomarcao

M1

Imunohistoqumica

M3

Imunofluorescncia

14
Protena
Primeiro slide

Western Blotting

Protena

M3

15
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Reao da transcriptase reversa - reao em

cadeia da polimerase (RT-PCR)
Extrao do RNA total com CsCl

primers especficos
taq DNA polimerase

tampo
600

Termociclador

RNAm

35 ciclos

16
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m4

m3

m2

dNTPs

m1

cDNA

PM

random primers
RT

GAPDH

Crebro

Ribonuclease Protection Assay (RPA)

sonda
Extrao
32
RNA total + [ P]-RNA

Hibridizao

m2

RNAse
b-actin

[32P]-RNAm

17
Primeiro slide