Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Cuautitln

Licenciatura en Bioqumica Diagnstica
Previo: Fraccionamiento celular

HOMOGENIZACIN La homogeneizacin consiste en romper las

clulas y liberar sus organelos usando una variedad de mecanismos
(moler, picar, triturar, cambios de presin, choque osmtico, congelacin

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y descongelacin, homogeneizacin con ultrasonidos). Las clulas se
homogenezan en una solucin isotnica, lo cual previene que se rompa
su membrana por smosis, con el pH regulado y a temperaturas bajas
para prevenir daos enzimticos.
2. La homogeneizacin es un paso muy comn en la preparacin de
muestras biolgicas antes del anlisis de cidos nucleicos y protenas, o
del estudio de clulas, metabolismo, agentes patgenos y otros muchos
objetivos. Como resultado, queda una pasta fina que consiste de las
clulas y sus organelos por separado. Se refiere al rompimiento de las
clulas o el tejido del cual se pretende extraer la organela o la molcula
de inters biolgico.

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL
En la centrifugacin diferencial, el homogenado es centrifugado
repetidas veces a altas velocidades ,sedimentndolo progresivamente
en pequeas partculas. El mtodo est ilustrado en la fig. 2. La
primera centrifugacin es a 600g por 10 minutos, el cual sedimenta la
fraccin nuclear. Este pellet contiene el ncleo, clulas intactas y
tejido..L prxima separacin es el sobrenadante postnuclear
partculas suspendidas en lquido sobre el pellet nuclear, el cual
es tranferido a otro tubo de centrfuga y se centrfuga a 10,000 g por
30 minutos en una centrfuga refrigerada. El material sedimentado se
conoce como fraccin mitocondrial ; ste contiene mitocondria y micro
cuerpos.

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1.

Calcula el RCF utilizando la siguiente frmula: RCF = r w ^

2 / g, donde: RCF = relativo al campo centrfugo, o la relacin de la
aceleracin centrfuga causada por el giro a la aceleracin gravitacional de
la Tierra r = el radio de giro del rotor w = la velocidad angular en radianes
por segundo g = la gravedad de la Tierra (9807 mm/s^2)
2. La RCF es una funcin de velocidad de centrifugacin en
revoluciones por minutos (rpm) y la distancia de partculas desde el
eje de rotacin. Conociendo esta distancia (x) y el (rpm), se puede
determinar el RCF de la ecuacin : RCF = 1.19 x 10-5 (rpm)2x,

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donde x se toma como la distancia (en cm) desde el eje de rotacin
hasta el margen de afuera del tubo de centrfuga.

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PREGUNTA 6 (LA CONTESTE CON MIS PALABRAS PORQUE NO

ENCUENTRO COMO PONERLA)
Si se puede realizar fraccionamiento celular de este orgnulo teniendo
los cuidados necesarios mediante una homogeneizacin mcanica o una
centrifugacin, lo que se puede obtener es el ADN de la clula, este mtodo es
muy sencillo y rpido, los materiales son de uso comn y es de los mtodos
principalmente enseados en el rea de la bioqumica

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Los colorantes vitales permiten observar movilidad, as como algunos de sus

organelos o inclusiones teidas, sin dao aparente; estos se preparan en
soluciones acuosas o alcohlicas muy diluidas. En tanto que los colorantes
supravitales, aun cuando tienen la ventaja de hacer ms evidentes algunos
organelos, presentan el inconveniente de afectar la viabilidad de los
organismos. Estos colorantes varan en su composicin y consisten en mezclas
de reactivos que incluyen el colorante, cidos, aldehdos, alcoholes y agua. Los
primeros se aplican directamente en la muestra, en tanto que para los
supravitales se recomienda aplicar una pequea cantidad del colorante al
portaobjetos y dejar secar y posteriormente colocar la muestra. Para que la
aplicacin del colorante sea uniforme, se recomienda extenderlo con la ayuda
de otro portaobjetos.
En la presente prctica se utiliza el cido carmnico como agente de tincin del material
gentico de clulas vegetales y embriones somticos en sus primeras etapas. Este pigmento

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es necesario utilizarlo en forma precipitada con un metal, que da como origen un carmn,
mismo que al unirlo al cido actico produce acetocarmn. La nueva polaridad de este
compuesto permite que se una con los cidos del ncleo presentes en cromosomas y cabezas
embriognicas. Para determinar la presencia de callo embriognico en diversos experimentos
de induccin de embriognesis somtica, a menudo es necesario llevar a cabo un proceso de
tincin doble o diferencial que permita hacer visible al microscopio las estructuras de inters.
Los embriones somticos pueden ser detectados con facilidad al microscopio si son teidos
diferencialmente, esto es posible gracias a que las clulas embriognicas tienen altas
concentraciones de protenas y cido ribonucleico, pero tambin a la presencia de clulas
basales que poseen material principalmente bsico.