GRUPO 5: JUAN CARLOS CORTES BERNAL, ALVARO ANDRES SANDOVAL

PRACTICA No. 5
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

PROCEDIMIENTO

Se prepararon tres cmaras

cromatograficas, con tres
diferentes solventes. Eter de
petrleo, metanol y tolueno.
se cerraron para que la
cmara se saturara del
solvente.

En cada cmara se
introdujeron dos placas. Se
esper unos minutos
mientras el solvente subra
por la placa. Se retitaron y se
tomaron las repectivas
medidas de la distacia
recorrida.

RESULTADOS
Muestra No. 5
Patrones:

Sudan IV
Sudan amarillo
Azobenceno
Orto-nitrofenol

Aparte se prepararon seis

placas en donde ya
seleccionada la mezcla
desconocida y cuatro
patrones se realizaron tres
marcas en la parte inferir de
la placa, una de mezcla y dos
de alguna pareja de
patrones.

Solvente
Tolueno
ter de
petrleo
Metanol

N de

Rf

hRf

Rst 1

Rst 2

placa
1
2
3
4

53,57%
49,15%
27,27%
26,32&

30%
29%
15%
15%

0,83 SA
0,62 O-Nf
3 SA
0.1 O-Nf

0,98 S IV
0,54 Azo
4,29 S IV
0,79 Azo

5
6

94,54%
96,55%

92%
56%

0,96 SA
0,96 O-Nf

1,06 S IV
0,96 Azo

Se realiz una sptima prueba para en la que se us o-Nitrofenol y

Azobenceno, en presencia de Tolueno.
Rf= 85,45

hRf=47%

Rst(O-Nf)=1,15

Rst(Azo)=1
Convenciones:

SA= Sudn amarillo

S IV= Sudn IV
O-Nf= o-Nitrofenol
Azo= Azobenceno

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS

La placa No. 1 presenta coincidencia de color naranja entre el sudan IV y
la muestra, lo que da un indicio de que tal indicador se encuentre
contenido en la muestra.
La placa No. 3 y 4, presentaron 3 colores en el recorrido de la muestra
con tolueno como solvente: amarillo, rojo y naranja, en orden de
aparicin respectivamente. La placa No. 3 no presenta coincidencias de
color entre la muestra y los dems indicadores; por el contrario, la placa
No. 4 presenta coincidencia de color naranja entre el sudan amarillo y la
muestra, segunda coincidencia, lo que permite determinar con precisin
que la muestra presenta sudan amarillo.
En la placa No. 5, la muestra y los indicadores recorrieron la misma
distancia; esta situacin no permite tener claridad de que los indicadores
rojo de metilo y azobenceno estn presenten en la muestra.

 En la placa No. 6, la muestra coincide con el sudan amarillo, lo que

confirma rotundamente que la muestra contiene tal indicador.
El otro indicador presente se trat de determinar con la cromatografa
propuesta por el grupo de trabajo, ya que con las que se realizaron
anteriormente no fue preciso establecerlo. Se us como indicador
tolueno y metanol en una proporcin de 9:1.
Primero se us rojo de metilo y luego azobenceno; el primer indicador no
tuvo recorrido, el segundo present desplazamiento, el cual coincidi en
color con el desplazamiento de la muestra, lo que permite concluir sin
una certeza plena, que el otro indicador presente en la muestra es el
azobenceno.

CUESTIONARIO
i.

Qu ocurre si al introducir la placa en la cmara cromatogrfica, el

nivel del eluyente alcanza el sitio de aplicacin de la mancha?
Posiblemente el solvente diluya la muestra, y no se presente
desplzamiento o el desplazamiento no sea uniforme, y as no sera
posible la realizacin satisfactoria de la cromatografa.

ii.

Cul es el efecto de la polaridad en la cromatografa?

Como una de las principales caractersticas de la cromatografa de
capa fina la cual se basa en la preparacin de una capa uniforme de
un adsorbente mantenido sobre su placa, la fase estacionaria es un
componente polar y el eluyente ser por lo general menos polar que
la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen
con mayor velocidad sern los menos polares. Como regla general,
las polaridades del adsorbente y los solutos han de ser opuestas.

iii.

Cules son las diferencias entre la cromatografa de gases y la

lquida?
La diferencia entre ambas es que mientras en la cromatografa de
gases se volatiliza la muestra para inyectarla en la cabeza de una
columna cromatogrfica. En esta la fase mvil es un gas inerte y no

interacta con las molculas del analito mientras que en la

cromatografa de lquidos la fase mvil es un lquido o una mezcla de
ellos y si interactan con el analito es decir con la mezcla que se va a
separar. El gas portador cumple bsicamente dos propsitos:
Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz
adecuada para el detector.
iv.

Profundizacin sobre fluorescencia para sustancias incoloras.

La fluorescencia es la propiedad de una sustancia para emitir luz
cuando es expuesta a radiaciones del tipo ultravioleta, por eso la
utilizacin de la lmpara de UV se basa en el hecho que muchas
sustancias que son incoloras a la luz ordinaria presentan una fuerte
fluorescencia a la luz ultravioleta. Las sustancias que no presentan
esta fluorescencia se pueden detectar por otros procedimientos. Por
ejemplo, un reactivo con el que los compuestos adsorbidos formen
cierta coloracin pueden servir como revelador. La fluorescencia
aumenta por la paridad molecular que, a su vez, viene a menudo
establecida por la rigidez molecular. Por ejemplo el fenantreno es
fluorescente.

La intensidad de fluorescencia es proporcional a la

absorcin molar. Por esta razn se desea emplear, como radiacin de

excitacin, luz correspondiente al mximo de la banda de absorcin.
Para la excitacin se suele utilizar un haz de radiacin cuya amplitud
comprenda gran numero de longitudes de onda, y se selecciona el
rango de longitud de onda de manera que incluya el mximo de
espectro de excitacin.
v.

Parmetros de la cromatografa lquida de alta eficiencia.

La cromatografa liquida de alta eficiencia es la tcnica de separacin
ms ampliamente utilizada en la actualidad debido a su sensibilidad,
a su adecuacin para realizar determinaciones cuantitativas exactas
y

su

gran

aplicabilidad

(aminocidos,

protenas,

carbohidratos,

frmacos,

diferentes

cidos

tipos

nuclicos,

plaguicidas,

de

sustancias

hidrocarburos,

antibiticos,

especies

organometlicos y sustancias orgnicas). Esta utiliza una presin

elevada para forzar al disolvente a que pase por una columna que

contiene partculas muy finas, consiguiendo as separaciones de gran

resolucin. Los parmetros para llevar a cabo este mtodo son

Dimetro interno: un aspecto crtico que determina la cantidad de
muestra que se puede cargar a la columna y tambin influye en su
sensibilidad. Las columnas de dimetro interno ms grande (>10 mm) se
utilizan normalmente en la purificacin de compuestos para su
utilizacin posterior. En cambio, las columnas de dimetro interno menor
(4-5 mm) se utilizan en el anlisis cuantitativo de las muestras, y se
caracterizan por el aumento la sensibilidad y la minimizacin del
consumo de disolventes que conllevan.

Medida de las partculas Las

partculas pueden tener diferentes

medidas, siendo las de 5\mum de dimetro las ms utilizadas. Partculas

ms pequeas ofrecen una mayor superficie y una mejor separacin,
pero la presin que se requiere por obtener una velocidad lineal ptima
aumenta de forma inversamente proporcional al cubo del dimetro de la
partcula. Esto significa que disminuir la medida de las partculas a la
mitad, aumentara la resolucin de la columna, pero a la vez, aumentara
la presin necesaria en un factor de ocho.

Tamao de poro: Los poros pequeos proporcionan una mayor

superficie mientras que los poros de mayor medida proporcionan una
cintica mejor, especialmente para los compuestos de tamao ms
grande; por ejemplo, una protena que sea ligeramente ms pequea
que el tamao de los poros puede entrar, pero difcilmente saldr con
facilidad.

Presin del sistema La presin puede lograr valores de hasta 40 MPa

(o unas 400 atmsferas). Los aparatos ms modernos de HPLC
incorporan mejoras para poder trabajar a presiones ms altas y, por lo
tanto, poder utilizar partculas de tamao ms pequeo en las columnas
(<

micrometros).

Estos

nuevos

aparatos,

denominados

Ultra

Performance Liquid Chromatography (UPLC) pueden trabajar con valores

de hasta 100 MPa de presin (unas 1000 atmsferas).

CONCLUSIONES
Se pudo separar una muestra problema de colorantes por medio de
cromatografa en capa fina.
La detemrinacin del sudan amarillo en la muestra, se realiz de manera
satisfactoria por la cantidad de coincidencias que se obtuvieron en las
placas 2, 4 Y 6.
La determinacn de la otra sustancia presente en la muestra no
presenta certeza plena, debido a que hay pocas coincidencias en el
desarrollo de la prctica, por eso en la cromatografa personalizada se
tuvo un claro indicio de que la otra sustancia sea azobenceno, que fue la
que coincidi en color con la muestra.
La forma lisa y plana de las placas, problablemente facilite el recorrido
de

las

manchas,

factor

que

se

evidenci

notablemente

en

el

comportamiento uniforme del recorrido de las sustancias.

Es recomendado hacer las manchas a una distancia uniforme entre cada
una de ellas, para que durante el procedimiento no se corra el riesgo de
que se crucen.

BIBLIOGRFA
P. Molina. M. Velasco, A. Tarraga, M. Alajarin. PRACTICAS DE QUIMICA
ORGANICA. UNIVERSIDAD DE MURCIA, 1989. PG 23
K. Connors. CURSO DE ANALISIS FARMACEUTICO: ENSAYO DEL
MEDICAMENTO. Editorial Reverte 1981. Pg 263-264.

M. Baquero. PRINCIPIOS Y APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA DE

GASE. 1ra edicion. Editorial Universidad de Costa Rica, 2006. Pg 1-3.

M. Alfonso. DESARROLLO DE MTODOS PARA EL AISLAMIENTO Y LA

DETECCIN DE TOXINAS MARINAS EN PRODUCTOS DE LA PESCA Y LA
ACUICULTURA. Universidad de Santiago de Compostela. Pg 42

ANEXOS
Placas 1-2

Placas 5-6

Placas 3-4