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Universidad Autnoma de Baja California

Facultad de Ingeniera

Dinmica

Reporte de laboratorio de
Bioqumica
Prctica # 2
PREPARACIN DE BUFFER DE pH CONOCIDO A PARTIR DE
DISOLUCIONES DE FOSFATOS

Maestro:
Susana Norzagaray Plasencia
Presenta:
Xchitl Carolina Richarte Meza

24/02/2015
Fecha de realizacin

PRCTICA No. 2 PREPARACIN DE BUFFER DE pH CONOCIDO A PARTIR


DE DISOLUCIONES DE FOSFATOS

I.

COMPETENCIA

Habilidad en el manejo del material, equipo y sustancias del laboratorio de


biotecnologa, para evaluar las propiedades de las soluciones amortiguadoras,
mediante la aplicacin de los fundamentos tericos del equilibrio cido-base para
preparar soluciones buffer de pH establecido a partir de disoluciones de fosfatos
de concentracin conocida, atendiendo las normas de seguridad y los
lineamientos para asegurar la sustentabilidad de las actividades experimentales
requeridas.

II.

MARCO TERICO

Una de las propiedades importantes del agua es su pequea tendencia a


ionizarse. El agua pura no est formada slo por H2O, sino tambin por una baja
concentracin de iones hidronio (H3O_) y una concentracin igual de iones
hidrxido (OH_). Los iones hidronio e hidrxido se forman por un ataque
nucleoflico del oxgeno contra uno de los protones en una molcula adyacente de
agua. En esta reaccin se rompe un enlace covalente OH y el par de electrones
de ese enlace queda asociado con el tomo de oxgeno del ion hidrxido.

La reaccin de ionizacin es una reaccin reversible tpica. Las reacciones de


protonacin y desprotonacin son muy rpidas. Los iones hidrxido tienen corta
duracin en el agua, al igual que los iones hidronio. Hasta las mismas molculas
de agua presentan slo una existencia transitoria. Se cree que la molcula
promedio de agua slo existe aproximadamente un milisegundo (10_3 s) antes de
perder un protn para convertirse en ion hidrxido, o ganar un protn para
transformarse en un ion hidronio.

Los iones hidrxido pueden aceptar un protn y convertirse de nuevo en


molculas de agua. A los aceptores de protones se les llama bases. El agua
puede funcionar como un cido o como una base.
La ionizacin del agua se puede analizar cuantitativamente. Recurdese que las
concentraciones de reactivos y productos en una reaccin deben llegar al
equilibrio. La relacin de esas concentraciones define a la constante de equilibrio
(Keq).
Existen varios procesos bioqumicos como el transporte de oxgeno en la
sangre, la catlisis de reacciones con enzimas y la generacin de energa
metablica durante la respiracin o la fotosntesis que estn muy influidos por la
concentracin de protones. Aunque la concentracin de H(o H3O) en las clulas
es pequea en relacin con la concentracin del agua, el intervalo de [H] en
soluciones acuosas es enorme, por lo que conviene usar una cantidad logartmica
llamada pH como medida de la concentracin de H. El pH se define como el
logaritmo negativo de la concentracin de H:

La constante de equilibrio para la disociacin de un protn de un cido en agua se


llama constante de disociacin del cido, Ka. Cuando la reaccin llega al
equilibrio, lo que sucede con mucha rapidez, la constante de disociacin del cido
es igual a la concentracin de los productos dividida entre la concentracin de los
reactivos. Para la reaccin 2.12, la constante de disociacin del cido es

Si el pH de una solucin permanece casi constante cuando se agregan pequeas


cantidades de cido o base fuerte, se dice que la solucin est regulada o
amortiguada. La capacidad de una solucin para resistir cambios de pH se llama
capacidad de amortiguacin.

Al repasar las curvas de titulacin del cido actico (figura 2.16) y del cido
fosfrico se ve que la regulacin ms efectiva, representada por la regin de
pendiente mnima en la curva, se presenta cuando las concentraciones de un
cido dbil y su base conjugada son iguales; en otras palabras, cuando el pH es
igual al pKa. El intervalo efectivo de amortiguacin por una mezcla de cido dbil y
su base conjugada se suele considerar desde una unidad de pH abajo hasta una
unidad de pH arriba del pKa.

La mayor parte de los experimentos bioqumicos in vitro con molculas


purificadas, extractos celulares o clulas intactas se hace en presencia de un
amortiguador (tambin se le llama buffer) adecuado que asegure un pH estable.
Para preparar soluciones amortiguadoras se utilizan varios compuestos sintticos,
con una diversidad de valores de pKa. Por ejemplo, se pueden usar mezclas de
cido actico y acetato de sodio (pKa 4.8) para el intervalo de pH de 4 a 6 y
mezclas de KH2PO4 y K2HPO4 (pKa 7.2) para el intervalo de 6 a 8. Con
frecuencia se usa el aminocido glicina (pKa 9.8) en el intervalo de 9 a 11. En el
ejemplo de clculo 2.2 se ilustra una forma de preparar una solucin
amortiguadora.
Un ejemplo excelente de la capacidad amortiguadora se encuentra en el plasma
sanguneo de los mamferos, que tiene un pH notablemente constante. A
continuacin se revisan los resultados de un experimento donde se compara la
adicin de una alcuota de cido fuerte a un volumen de plasma sanguneo con
una adicin similar de cido fuerte a suero fisiolgico (NaCl 0.15 M) o agua.
Cuando se agrega un mililitro de HCl (cido clorhdrico) 10 M a 1 litro de suero
fisiolgico o de agua cuyo pH inicial es de 7.0 el pH baja a 2.0 (en otras palabras,
la [H] del HCl se diluye a 102 M). Sin embargo, cuando se agrega 1 mililitro de HCl
10 M a 1 litro de plasma sanguneo humano a pH de 7.4 el pH slo baja a 7.2 es
una impresionante prueba de la eficacia de la regulacin fisiolgica.

El pH de la sangre se regula principalmente por el sistema amortiguador de


dixido de carbono-cido carbnico-bicarbonato. En la figura 2.19 se ve una
grfica de los porcentajes de cido carbnico (H2CO3) y de cada una de sus
bases conjugadas en funcin del pH. Ntese que las formas principales del cido
carbnico a pH 7.4 son cido carbnico y el anin bicarbonato (HCO3 ).

III.

MATERIALES
Material y equipo

IV.

7 Matraces volumtricos de 50 mL
2 Pipetas de 10 de 5 mL
1 Pipeta de 1 mL
2 vasos de precipitados de 100 mL
1 Probeta de 50 mL
Potencimetro

KH2PO4 0.1M
Na2HPO4 0.1M
Agua destilada

PROCEDIMIENTO
1. Se realizaron los clculos necesarios para preparar las
disoluciones de molaridad indicada tanto de la base como
del cido.
2. Se pesaron en la balanza analtica las cantidades de
soluto necesario para garantizar la precisin y exactitud,
tanto de KH2PO4 como de Na2HPO4.
3. Una vez pesado el soluto para cada disolucin se
aforo en un matraz volumtrico de 250 ml con
agua destilada, pero antes se mezcl con un
poco de agua en un vaso de precipitado para
acelerar la disolucin) si tardaba demasiado se
agitaba por agitacin magntica.
4. Se prepararon los siete frascos para cada una de
las disoluciones con sus respectivas etiquetas, y
posteriormente

se

les

agreg

el

volumen

indicado segn la tabla 7.1 de la seccin de

datos experimentales utilizando pipetas de 10 ml.


5. Se calibr el potencimetro con las soluciones estndar
correspondientes.
6. Se midi el pH de las 7 disoluciones procurando realizar 3
repeticiones segn lo establecido en la qumica
analtica. El potencimetro se limpiaba entre cada
medicin con agua destilada.
7. Se anotaron los resultados correspondientes en
cada frasco y en la bitcora.

V.

OBSERVACIONES

Se observ que los pH medidos no concordaban con los requeridos, si no que en


todas las disoluciones haba un error de menos 0.6, lo que puede indicar que los
volmenes no eran los correctos o que en todas las soluciones se utiliz reactivos
que no estaban en la concentracin adecuada.
Adems se observ que al calibrar el potencimetro haba una variacin, ya que al
medir el pH de la disolucin estndar de pH 7 este indicaba un pH medido de 7.24,
es decir que haba una discrepancia entre el pH estandarizado y el aparato.

VI.

DATOS EXPERIMENTALES
Tabla 6.1 Preparacin de soluciones amortiguadoras de pH conocido
pH requerido

KH2PO4 0.01M (ml)

Na2HPO4 0.01M (ml)

pH medido

6.2

5.3

44.7

5.54

6.6

11.4

38.6

6.0

7.0

19.9

30.1

6.3

VII.

7.2

30

20

6.65

7.4

33.7

16.3

6.82

7.8

41.7

8.3

7.24

8.2

46.3

3.7

7.69

CLCULOS

Tabla 7.1 Clculos de volumen


pH

X=pH-pKa

Y=pKa-pH

VHA

VA

6.2

-1

0.015

5.3

44.7

6.6

-0.6

0.6

0.38

0.39

11.4

38.6

7.0

-0.2

0.2

0.095

0.16

19.9

30.1

7.2

0.15

0.1

30

20

7.4

0.2

-0.2

0.24

0.063

33.7

16.3

7.8

0.6

-0.6

0.60

0.25

41.7

8.3

8.2

-1

1.5

0.01

46.3

3.7

VIII.

RESULTADOS
Tabla 8.1 Resultados de pH

pH
esperado
pH
medido
Diferencia
de pH

6.20

6.6

7.0

7.2

7.4

7.8

8.2

5.54

6.0

6.30

6.65

6.82

7.24

7.69

0.66

0.6

0.7

0.55

0.58

0.56

0.51

IX.

NALISIS DE RESULTADOS

Todos los pH presentaron una variacin de alrededor de 0.6 lo que puede indicar
que hubo un problema con las concentraciones de las disoluciones, pues son 6
veces ms cidas de lo esperado, indicando que la concentracin del cido no era
la adecuada.

X.

CONCLUSIN

En esta prctica existieron distintas problemticas en cuanto a la obtencin de una


frmula que indicara directamente el volumen necesario para preparar las
disoluciones, lo que llevo a tener datos imprecisos que retrasaron la realizacin de
la prctica. Finalmente se pudo obtener una forma que relacionara directamente
todos los parmetros de las soluciones y que arrojara el volumen, sin embargo al
momento de realizar las mediciones se encontr que no cuadraban los resultados
medidos con los esperados pues todos eran alrededor de 6 veces ms cidos de
lo esperado, es decir tenan una variacin de menos 0.6.

XI.

RECOMENDACIONES

Se recomienda primero disolver el soluto para preparar las disoluciones en un


vaso de precipitado en lugar de verterlo directamente en el matraz volumtrico,
pues este puede solidificarse rpidamente y quedar atascado en la boca del
matraz, dificultando su disolucin.

XII.

BIBLIOGRAFA

Horton; Moran; Laurence; Scrimgeour; Perry; Rawn, Principios de


bioqumica, cuarta edicin, Pearson educacin, Mxico, 2008.

XIII.

ANEXOS