Fundamentos de espectrofotometra

CUESTIONARIO PREVIO
1.- Cmo se determina el espectro de absorcin de una solucin colorida?
Existen dos mtodos fotomtricos generales:
La fotometra directa: Es el mtodo ms general. Se mide la absorbancia de la
especie a determinar, si es coloreada, o bien el producto de su reaccin de un reactivo
si no presenta color. La absorbancia es proporcional a la concentracin de la
sustancia.
La fotometra indirecta: la sustancia a determinar origina la desaparicin del color que
se aprovecha con fines cuantitativos. La disminucin de absorbancia es proporcional a
la concentracin de la sustancia a determinar.
2.- Cmo se selecciona la longitud de onda apropiada en un espectro para la
aplicacin en la determinacin de concentraciones por espectrofotometra?
La radiacin que incide sobre la muestra absorbente debe de ser lo ms
monocromtica posible, es decir, debe tener slo un pequeo rango de longitudes de
onda, porque:
Cuanto ms monocromtica sea la radiacin, mejor se cumplir la ley de Beer.
Puede aumentarse la selectividad, puesto que las sustancias absorban a otra longitud
de onda no interferirn si el rango es estrecho.
La sensibilidad es mucho mayor si se selecciona la longitud de onda de mxima
absorcin.
3.- Qu establece la ley de Lambert-Beer-Bourger?
Ley de Lambert-Beer-Bourger:
A = -log T
A = log ( I / I0 ) = ( x b) x c
ABSORBANCIA = ( x b) x c
que establece una relacin lineal entre la absorbancia y la concentracin, donde:
.- es la constante de proporcionalidad llamada coeficiente de absorcin molar,

absortividad molar o coeficiente de extincin (M-1 cm-1). Es la caracterstica de una

sustancia que nos dice cunta luz absorbe a una longitud de onda determinada.
b.- es el paso ptico, anchura de la celda que contiene la muestra (cm).
c.- es la concentracin de la especie de la cual estamos midiendo la absorbancia (M).
La ecuacin mencionada es el fundamento de la espectrofotometra. La ley de
Lambert-Beer Bourger se cumple para una radiacin monocromtica que atraviesa
una disolucin diluida ( 0.01M), cuando la especie absorbente no participa en un
equilibrio que dependa de su concentracin.
4.- Qu es, para qu sirve y cmo se construye una curva patrn?
Una curva patrn se construye usando soluciones de concentraciones conocidas de
un compuesto determinado.
Luego de determinar la longitud de onda de mxima absorcin y las condiciones
necesarias para alcanzar excelentes resultados, el siguiente paso es construir la curva
de calibracin utilizando una solucin patrn del analito en cuestin, y a partir de aqu
realizar los anlisis cuantitativos para determinar las concentraciones desconocidas
en disoluciones de las muestras. La curva de calibracin se construye con las parejas
de datos concentracin y absorbancia.
Para alcanzar la exactitud mxima (mnimo error relativo), deben tomarse las medidas
sobre una muestra de concentracin tal, que la transmitancia quede comprendida en
el intervalo de 20% a 60%.
El error no es demasiado grande para valores de transmitancia entre 20% y 60 %.