UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS QUMICAS

FACULTAD DE QUIMICA FARMACUTICO BIOLOGICA

CAMPUS XALAPA

E.E LABORATORIO DE PRODUCTOS NATURALES.

CATEDRTICO: DRA. MA. DEL ROSARIO HERNNDEZ MEDEL.

REPORTE DE TRABAJO

FURANOCUMARINAS PRESENTES EN EXTRACTO

CLOROFRMICO DE RAZ DE Dorstenia contrajerva

JONATAN JOB DORANTES MONTOYA

Furanocumarinas presentes en extracto clorofrmico de raz de Dorstenia

contrajerva
Laboratorio de Productos Naturales

INTRODUCCIN
Dorstenia es un gnero de la familia Moraceae localizado en Centro y
Sudamrica, particularmente rico en furanocumarinas. Dorstenia contrajerva, cuyo
nombre genrico fue nombrado en honor del botnico alemn Theodor Dorsten
(1492 - 1552), es un arbusto nativo del sur de Mxico, Venezuela y Per, aunque
difundido en Puerto Rico, Guatemala y Per, entre otros pases. La planta
completa, incluyendo rizomas y races es utilizada en medicina tradicional como
febrfugo, emenagogo (estimulante de la menstruacin), antidiarreico y como
tratamiento para mordeduras de serpientes. D. contrajerva fue descrita por Carlos
Linneo y publicado en Species Plantarum (Caceres et al, 2001).
Medicina tradicional
En estados del sureste de Mxico (Oaxaca, Quintana Roo, Tabasco,
Veracruz y Yucatn) se ocupa para tratar las mordeduras de vbora o serpiente. En
Quintana Roo, ingieren el rizoma seco y pulverizado. En Tabasco, beben un t
elaborado con las hojas. En Yucatn, preparan la hierba en infusin y la endulzan
con miel de abeja, tomndolo cada dos horas o cada hora, segn el caso; o bien,
toman el cocimiento de la raz y hojas, junto con otras plantas, como contraveneno
para la mordedura de vbora, de perro rabioso o cualquier intoxicacin alimenticia.
En Quintana Roo, para el vmito, toman la infusin de la raz; tambin lo usan
como antiespasmdico y contra la dispepsia, combinando el polvo de la
contrayerba con polvo de Aristolochia maxima, y lo administran oralmente (Cowan,
1983).
Se utiliza la raz como antdoto para las mordeduras de vbora, la rabia y la
intoxicacin por alimentos. El tratamiento consiste en ingerir el rizoma seco o
pulverizado o bien, elaborar un t con las hojas y el tallo; otros usos comunes son
para malestares relacionados con el aparato digestivo tales como bilis, disentera,
vmito, dolor de estmago y mala digestin; as como para tratar las caries. La
raz en cocimiento es utilizada en padecimientos ginecolgicos o venreos. El
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(Dorantes, 2015)

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ltex se aplica de manera externa para la cicatrizacin de las heridas, adems de

emplearse contra la dispela, erisipela y paperas; mientras que por va oral se
utiliza en casos de tos crnica, diabetes, inapetencia y paludismo. Estimulante,
tnica diafortica, recomendada en las fiebres ptricas y adinmicas (Correa et al,
2004).
Metabolitos
Es bien sabido que esta especie presenta furanocumarinas como el
Bergateno, sin embargo el presente trabajo est enfocado a la extraccin y
caracterizacin de un metabolito previamente reportado pero poco investigado: El
contrayerbeno (Terreaux et al, 1995).
MATERAL Y METODOS
Se trabaj con hojas y raz de D. contrajerva previamente recolectada por el
acadmico responsable. Las hojas y raz se pesaron frescos utilizando una
balanza analtica y posteriormente se secaron en estufa a 50 C y fueron pesados
de nuevo para determinar su contenido de agua. Las hojas y la raz se trabajaron
por separado para que la clorofila de las hojas no interfiriera en el extracto de raz.
Preparacin de muestras.
Las hojas secas y la raz fueron separadas, maceradas y depositadas en
viales diferentes, la raz se extrajo por primera vez en cloroformo y posteriormente
en metanol, con el fin de obtener la mayor cantidad de metabolitos de inters.
nicamente se sigui trabajando con el extracto de raz. El extracto de raz se filtr
y fue concentrado en rotavapor a 40rpm/60C, la transferencia del extracto se
realiz con pipeta Pasteur.
Separacin
Una vez realizados los extractos, se utiliz para su separacin
Cromatografa en columna de slica-gel de luz de malla 100 x 200 con 50-60 g de
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(Dorantes, 2015)

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soporte (fase estacionaria) por 1 g de extracto y CHCl3 como eluyente (fase

mvil). Se mont la columna en hmedo con agitacin para prevenir la retencin
de aire. Se obtuvieron aproximadamente 20 ml por fraccin en viales limpios de
vidrio.
Se obtuvieron diversas fracciones y se analizaron mediante TLC
(Cromatografa en capa fina) utilizando Hexano/Acetato de Etilo 1:1. La TLC de las
fracciones 1-3 (Placa 1) mostr la presencia de clorofila (observada como banda
roja en UV/ Verde con CoCl2), carotenos (amarillos en visible) y bergapteno
(banda verde, cristales en forma de aguja en fracciones 2 y 3), adems de bcitosterol (banda roja en CoCl2) por lo que stas fracciones se unieron. La placa 2
(fracciones 4-12) mostr Clorofila y adems una posible furanocumarina pero no
se encontraron molculas de inters y posteriormente fueron apartadas como
residuos. Las fracciones 13-37 mostraron un comportamiento en TLC (Hx/AcOEt
2:8) muy similar por lo que se unieron. Las fracciones 38-46 mostraron adems de
bergapteno, estar menos contaminadas con otros metabolitos, por lo que se
unieron por separado, adems fracciones 47-49 tambin exhibieron el mismo
comportamiento por lo que fueron aadidas. Las fracciones 50-52 mostraron la
presencia de otra posible furanocumarina por lo que se apartaron junto con las
fracciones 52-60 que fueron determinadas como residuos. Para continuar se
unieron las fracciones 38-49 que contenan contrayerbeno, adems de las
fracciones 13-37

que permanecieron separadas ya que estaban ms

contaminadas. Para obtener el bergapteno se usaron las fracciones 1-3.

Purificacin
Se mont una columna en hmedo con 5 g de slica-gel y con CH3Cl como
eluyente para la purificacin del bergapteno (fracciones 1-3) y se obtuvieron 10
fracciones de 20 ml aproximadamente cada una. Las fracciones 1-3 y 8-10 se
desecharon por contener bergapteno contaminado con carotenos o por no
contener bergapteno. Fracciones 4 y 5 mostraron cristales que fueron lavados con
ter para purificarlos, fracciones 6 y 7 fueron regresadas a las aguas madres. El
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extracto A (fracciones 4 y 5 conteniendo bergapteno), el B (aguas madres de

bergapteno) el C (fracciones 13-37 con contrayerbeno) y el D (fracciones 38-49
conteniendo contrayerbeno) fueron colocados en viales limpios, secos y
previamente pesados, una vez en estos se evapor el disolvente y se pesaron
para determinar los correspondientes rendimientos.
RESULTADOS
Tabla 1. Contenido de agua en material biolgico de Dorstenia contrajerva.

Material de D. contrajerva

Hoja
Raz

Fresco

Seco
0.406g

Diferencia de
peso
1.343 g

Porcentaje de
agua
76.79%

1.749
g
7.243
g

1.757 g

5.486 g

75.74%

Tabla 2. Peso del extracto crudo evaporado de Dorstenia contrajerva.

Vial sin
extracto

Vial con extracto

Peso
extracto

68.955 g

69.011 g

0.056 g

Tabla 3. Rendimiento obtenido de Bergapteno procedente de D. contrajerva. Se

muestra solamente la fraccin A debido a que la B contena sustancias diferentes al
metabolito de inters.

BERGAPTENO
Fracci Peso vial
Peso con
n
seco
cristales
A. 4
83.269 g
83.273 g
A. 5
74.815 g
74.824 g
Peso total del extracto
0.056 g
=

Diferenci
a
0.004 g
0.009 g
0.013 g

Rendimie
nto
7.14%
16.07%
23.21%

Tabla 4. Rendimiento obtenido del Contrayerbeno procedente de D. contrajerva.

CONTRAYERBENO
Fracci
n
C. 13-37
D. 38-

Peso vial
seco
70.563 g
90.756 g

Peso con
cristales
70.556 g
90.747 g

Diferenci
a
0.007 g
0.009 g

Rendimie
nto
12.50%
16.07%
1

(Dorantes, 2015)

Furanocumarinas presentes en extracto clorofrmico de raz de Dorstenia

contrajerva
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49
Peso total del extracto
0.056 g

0.016 g

28.57%

Tabla 5. Rendimiento total de la obtencin de metabolitos a partir de raz de D.

contrajerva.

Rendimiento total
Compuesto
Bergapteno
Contrayerb
eno

Peso seco
raz
1.757 g
1.757 g

Peso
metabolito
0.013 g
0.016 g

Rendimiento
0.74%
0.92%
F

Tabla 6. Puntos de fusin para los metabolitos de inters obtenidos de D. contrajerva.

PUNTO DE
FUSIN
Metabolito
Contrayerb
eno
Bergapteno

Reportad
o
145-147
C
190-193
C

Obtenid
o
116-126
C
185198C

B
Prome
dio
121 C

191.5
C

ESPECTROS DE LOS METABOLITOS

Bergapteno
A

Ilustracin2. Espectro de RMN de protn obtenido de simu

Ilustracin 1. Estructura del Bergapteno o 5Metoxipsoraleno

C
D

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(Dorantes, 2015)
Ilustracin 3. Espectro de RMN de protn obtenido de la Dra. Medel para el Bergapteno. Ntese que la seal en

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(Dorantes, 2015)

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contrajerva
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PROPUESTA BASADA EN ARTCULO CIENTFICO.

Ilustracin 4. Estructura propuesta basada en (Terreaux

4-[[3-(4,5-dihydro-5,5-dimethyl-4-oxo-2-furanyl)-bu

D E

Ilustracin 5. Espectro de RMN de protn obtenido de simulador. Estructura basada en (Terreaux et al, 1

F
B
A

C
D

Ilustracin 6. Espectro de RMN de protn obtenido de la Dra. Medel para el Contrayerbeno. Ntese
que la sea
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(Dorantes, 2015)

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PROPUESTA ORIGINAL

C D

Ilustracin 6. Espectro de RMN de protn ob

B
A

C
D

1
Ilustracin 7. Espectro
de RMN
de protn obtenido de la Dra. Medel para el Contrayerbeno, asignado de acuerd
(Dorantes,
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Furanocumarinas presentes en extracto clorofrmico de raz de Dorstenia

contrajerva
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DISCUSION

La separacin del extracto clorofrmico de raz de Dorstenia contrajerva en

columna de slica gel, dio como resultado dos compuestos. Los compuestos
fueron purificados y cristalizados. El compuesto 1 fue identificado como
Bergapteno (5- metoxi-psoraleno) gracias a su espectro de RMN de protn y su
punto de fusin. Sin embargo, el compuesto 2 denominado como Contrayerbeno,
mostr un espectro un tanto diferente al esperado para un compuesto previamente
reportado: el 4-[[3-(4,5-dihidro-5,5-dimethil-4-oxo-2-furanil)-butil]-[oxi]-7H-furo [3,2g] [1] benzopiran-7-ona de acuerdo con Terreaux et al, 1995. Debido a que el
espectro simulado de este compuesto no concord con el obtenido de la Dra.
Medel se procedi a elucidar otra posible estructura para el espectro otorgado,
que se acercara a los deslazamientos qumicos, seales y multiplicidades
observadas: el 5-(1-isopropil-1,6-dien-4,5-dimetil-3-heptanona) psoraleno. Debido
a que no se cuenta con otra tcnica espectroscpica (como RMN 13C, Masas, IR,
etc.) o con la frmula molecular, resulta difcil asegurar la estructura, posteriores
anlisis de la muestra se requeriran para saber con seguridad la estructura del
compuesto 2. Es adems notable que los espectros experimentales muestran
seales que no se observan en el espectro simulado, lo que nos indica que la
muestra estuvo contaminada, factor que pudo haber influenciado en el espectro
generando las ligeras diferencias entre el espectro simulado y el real. Debido a
esta observacin en los espectros y al hecho de que el punto de fusin del
contrayerbeno se encontr muy diferente a la literatura, se sospecha que se debi
haber

purificado

an

ms

el

compuesto

2,

aunque

podra

resultar

contraproducente debido al bajo rendimiento ya obtenido.

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(Dorantes, 2015)

Furanocumarinas presentes en extracto clorofrmico de raz de Dorstenia

contrajerva
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(Dorantes, 2015)

BIBLIOGAFA

1. Caceres A, Rasrelli L, De Simone F, De Martino G, Saturnino C,

Saturnino P, Aquino R. 2001. Furanocumarins from the aerial parts of
Dorstenia contrajerva. Fitoterapia 72, pp, 376-381.
2. CONABIO. 2009. Catlogo taxonmico de especies de Mxico. 1. In
Capital Nat. Mxico. CONABIO, Mexico City.
3. Correa A., M.D., C. Galdames & M. Stapf. 2004. Cat. Pl. Vasc. Panam
1599. Smithsonian Tropical Research Institute, Panama.
4. Cowan, C. P. 1983. Flora de Tabasco. Listados Florst. Mxico 1: 1123.
5. Santa Cruz Biotechnology, Inc. Product Block. Copyright , 2007-2015.
Recuperado

de:

http://www.scbt.com/es/datasheet-207353-

Bergapten.html. Consultado: 13/11/2015.

6. Terreaux C, Maillard M, Stoeckli-Evans H, Gupta M, Kelsey R. Downum,
J. M. E. Quirke and Hostettmann K. 1995. Structure Revision of a
furanocoumarin from Dorstenia contrajerva. Phytochemistry. Vol. 39, No.
3, pp 645-647.ISSN 0031-9422